罗红霉素和阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的防耐药突变浓度的研究

目的:测定罗红霉素和阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的防耐药突变浓度(MPC),扩增突变选择窗内筛选的耐药突变体的耐药基因.以了解金黄色葡萄球菌对大环内酯类药物耐药的发生机制.方法:肉汤法富集1013CFU/L ATCC29213,采用平板二倍稀释法测定罗红霉素和阿奇霉素对ATCC29213的MIC,MIC99、初测MPC(Provisional MPC,MPCpr)以及MPC.PCR法扩增不同药物筛选出的耐药突变株的耐药基因ermA,ermB和ermC并测序.结果:罗红霉素和阿奇霉素对ATCC29213的MPC分别是0.24 mg/L和0.18 mg/L,细菌耐药选择指数(MPC/MIC99)是106和114.不同药物筛选出的耐药突变株中扩增出ermA和ermC基因.结论:单独使用罗红霉素和阿奇霉素,金黄色葡萄球菌易产生耐药突变株,应与其他抗菌药物联合.     

大环内酯类药物次抑菌浓度诱导沙眼衣原体耐药的实验研究

目的：探讨沙眼衣原体对大环内酯类药物的分子耐药机制。方法：13例沙眼衣原体临床敏感株经红霉素、阿奇霉素、交沙霉素诱导耐药后与未耐药之前的敏感株和标准株E—UW-5／Cx比较,检测基因23SrRNA和核糖体蛋白L4的位点突变。结果：耐药株显现出对红霉素、阿奇霉素和交沙霉素低耐药性,MIC较敏感株分别增加了16、16、8倍。药物敏感性结果显示相对于红霉素、阿奇霉素,沙眼衣原体治疗交沙霉素的易感性最好。敏感株和耐药株的L4的PCR扩增产物的序列均出现G274A、C276T、C339T、C466G位点突变,考虑与大环内酯类药物耐药无关。耐药株的23SrRNA基因PCR扩增产物中出现了A2057G、A2059G和T2611C的突变。结论：沙眼衣原体对大环内酯类药物的耐药分子基础是23SrRNA基因的点突变。     

利奈唑胺与万古霉素对金黄色葡萄球菌耐药突变选择的比较

目的在体外测定利奈唑胺与万古霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最低抑菌浓度(MIC)、防细菌耐药突变体选择浓度(MPC)和突变选择指数(SI),比较其防耐药突变能力。方法 采用肉汤法富集1×1010?CFU/mL金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用平板稀释法测两种药物对金黄色葡萄菌的MIC、MPC以及SI,同时测定万古霉素联合利福平与左氧氟沙星后的MPC、SI。结果利奈唑胺与万古霉素对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC、MPC以及SI分别为1.0、1.0?g/L;6.4、 51.2?g/L;6.4、51.2;万古霉素分别联合利福霉素与左氧氟沙星后的MPC及SI分别为12.8?g/L、25.6;8.0?g/L、16.0。结论利奈唑胺对金黄色葡萄球菌防耐药突变能力强于万古霉素,万古霉素与利福霉素及左氧氟沙星联合后均能降低万古霉素的MPC、SI,提高万古霉素的防耐药突变能力。     

肺炎链球菌对大环内酯类耐药性分析

目的 探索郯城县区肺炎链球菌分离株对大环内酯类耐药性及其治疗情况.方法 收集郯城县社区和临床分离的肺炎链球菌 ,根据CLSI标准,用K-B法、Etest法检测肺炎链球菌对红霉素和克林霉素的耐药性及对红霉素的耐药表型.结果 493株肺炎链球菌中红霉素不敏感菌株489株 ,对克林霉素不敏感菌株482株,其中 ermB基因介导的红霉素耐药菌株482株 ,占98.6% , mefE基因介导的红霉素耐药菌株7株,占1.4%.结论 郯城县区对红霉素和克林霉素近乎全部耐药 ,ermB基因介导的靶位改变是郯城县区肺炎链球菌对大环内酯类抗菌药物的主要耐药机制.     

环丙沙星联合妥布霉素对兔铜绿假单胞菌环丙沙星耐药突变选择窗的影响

目的 以兔组织笼感染模型观察环丙沙星联合妥布霉素,能否缩小环丙沙星对铜绿假单胞菌的耐药突变选择窗.方法 体外测定环丙沙星与妥布霉素对铜绿假单胞菌标准菌株ATCC27853的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药突变浓度(MPC)、突变选择窗(MSW,MPC～MIC)、突变选择指数(SI,MPC/M1C),同时棋盘格法测定联合后的MIC.建立兔组织笼模型6只,高效液相色谱法测定环丙沙星在兔组织液中药代动力学参数.兔组织笼感染模型55只,随机平均分为11组,1组为牛理盐水组(对照组),5组单用环丙沙星(环丙沙星组),5组为环丙沙星联合妥布霉素(联合组).环丙沙星10次/d给药,每次给药间隔2 h,使兔组织液环丙沙星稳态浓度分别达到0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L,即5个亚组;妥布霉素2.0 mg·kg～·d-1,其组织液峰浓度达到2.0 mg/L左右.3 d后抽取组织液,涂布于含有0.25 ms/L浓度环丙沙星的琼脂平板,有细菌生长者为耐药突变体.结果 体外环丙沙星与妥布霉素对铜绿假单胞菌的MIC、MPC、S1分别为0.25 mg/L、4.0 mg/L、16与0.25 mg/L、8.0 mg/L、32.环丙沙星组中环丙沙星浓度0.25、0.5、1.0及2.0 mg/L亚组组织液中均有耐药突变体生长,4.0 mg/L亚组无耐药突变体牛长;即体内环丙沙星MPC与体外相同,SI为16.联合组中环丙沙星浓度0.25 mg/L业组有耐药突变体生长,0.5、1.O、2.0及4.0 mg/L亚组无耐药突变体生长;即联合妥布霉素后环丙沙星的MPC为0.5 mg/L,MIC为0.125 mg/L,因此SI为4.结论 环丙沙星联合妥布霉素可缩小环丙沙星对铜绿假单胞菌的耐药突变选择窗,减少耐药突变体的产生,有利于减少细菌耐药.

Abstract：

Objective To observe whether the mutant selective windows(MSW)of ciprofloxacin would be reduced after its combination against Pseudomonas aeruginosa in rabbits. Methods Firstly the minimal inhibitory concentration(MIC),mutant prevention concentration(MPC),mutant selective windows (MSW,MPC-MIC)and selective indices(SI,MPC/MIC)of ciprofloxacin and tobramycin were measured in vitro respectively with standard strain ATCC27853. And the MIC was detected for the combination of ciprofloxacin and tobramycin. The rabbit tissue cage model was constructed to determine the pharmacokinetic parameters of ciprofloxacin by HPLC(high performance liquid chromatography). Fifty-five rabbits were randomly divided by a random number table into 11 groups:physiological saline in 1 group,ciprofloxacin alone in 5 groups and ciprofloxacin plus tobramycin in another 5 groups. The rabbits received ciprofloxacin 10 times a day at a 2-hour dosing interval. In 2 dosing groups. the steady state concentrations of ciprofloxacin reached to 0. 25,0. 5,1. 0,2. 0 and 4. 0 me,/L respectively. The dose of tobramycin was 2. 0 mg·kg-1·d-1and its peak concentration reached around 2.0 mg/L. At Day 3,the tissue juice was extracted, diluted and coated on agar plates with ciprofloxacin at a concentration of 0. 25 ms/L so as toobserve the growing condition of mutants. Results Against Pseudomonas aeruginosa,the values of MIC,MPC and SI of ciprofloxacin were 0. 25 mr,/L,4. 0 mg/L and 16 while 0. 25 mg/L,8. 0 mg/L and 32 for tobramycin respectively. Single groups:the mutants were found in 0. 25,0. 5,1. 0 and 2. 0 mg/L groups,but none in 4. 0 mg/L group. The MPC of cipmfloxacin was the same for in vivo and in vitro. Both were at 16. Combination groups: the mutants were only found in the group with a concentration of ciprofloxacin at 0. 25 mg/L while no mutants in the other groups. And MPC was 0. 5 mg/L and MIC 0. 125 mg/L for ciprofloxacin plus tobramycin. And the value of SI was 4. Conclusion The combined use of ciprofloxacin and tobramycin may reduce the mutant selective windows of ciprofloxacin against P. aeruginosa in rabbits so as to reduce the occurrence of mutants to control its drug resistance.     

肺炎链球菌临床菌株Tn1545和Tn917介导的大环内酯类耐药性研究

目的探讨上海地区大环内酯类耐药肺炎链球菌ermB基因表达及传播特性。方法收集上海地区对红霉素耐药的肺炎链球菌共86株，用E试验和K—B纸片扩散法检测其对12种抗生素的敏感性；用双纸片法（D试验）确定大环内酯类耐药表型；用PCR扩增检测耐药基因ermB、mefE和Tn1545、Tn917中ermB基因调控序列，经测序、BLAST比对分析调控序列多态性并按菌株携带Tn1545和Tn917的不同分为Tn1545组和Tn917组，分析二者介导的耐药表型的不同；用BOX—PCR分析不同菌株遗传背景。结果（1）86株红霉素耐药肺炎链球菌中ermB、mefE、Tn1545、Tn917检出率分别为94％、46％、87％、7％，基因型为ermB^- mefE^＋的5个菌株未检出Tn1545和Tn917。（2）Tn1545组和Tn917组Sp大多对红霉素高度耐药（最低抑菌浓度MIC50 256μg／ml），Tn917组对β内酰胺类抗生素的MIC低于Tn1545组，对四环素、复方磺胺及左氧氟沙星耐药率前者亦低于后者。（3）Tn917组中三株菌发生ermB基因启动子区194bp片段的删除和前导肽N末端TAAA认插入，可能导致ermB基因由诱导型转变成组成型表达；Tn1545组菌株主要表现为cMLSB表型。（4）BOX—PCR图谱呈散发性，未发现单一的耐药克隆株流行。结论上海地区大环内酯类耐药肺炎链球菌主要是由ermB基因介导的高水平、组成型耐药，ermB基因大多由Tn1545携带并水平转移传播。     

人型支原体对五种大环内酯类药物敏感性研究

目的检测人型支原体（Mh）对14环（红霉素、罗红霉素和克拉霉素）、15环（阿奇霉素）和16环（交沙霉素）大环内酯类药物的敏感性，为临床合理用药提供参考依据。方法采用微量肉汤稀释法检测了5种大环内酯类药物对106株Mh的最低抑菌浓度（MIC）。结果在5种药物中，交沙霉素抗Mh活性最强，MIC50为0、125mg/L，MIC90为0．5mg／L，较弱的为罗红霉素、克拉霉素和阿奇霉素，其MIC50分别为4mg／L、32mg／L和64mg/L，MIC90分别为32mg／L、128mg／L和512mg／L，最弱的为红霉素，MIC50为64mg／L，MIC。为512mg／L，结论Mh对大环内酯类药物存在不同程度的耐药，16环大环内酯类药物交沙霉素，抗Mh活性强于14环和15环大环内酯类药物。     

阿奇霉素耐药淋球菌菌株的耐药机制分析和分子流行病学特征

目的 探讨阿奇霉素耐药淋球菌菌株的分子流行病学特征,分析耐阿奇霉素淋球菌的耐药机制.方法 对36株耐阿奇霉素淋球菌[最小抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L]的核糖体23SrRNA、mtrR基因及核糖体蛋白L4/L22基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,比较耐药基因突变在中度耐药组(MIC 1~64 mg/L)和高度耐药组(MIC ≥256 mg/L)间的差异.采用NG-MAST对基因序列进行分型,获得阿奇霉素耐药菌株的基因型别及分布特征.结果 高度耐药淋球菌菌株核糖体23SrRNA的4个等位基因均有A2143G的突变,中度耐药菌株中有3株(8 mg/L≤MIC≤32 mg/L)核糖体23SrRNA 4个等位基因为C2599T突变.36株阿奇霉素耐药菌株中鉴定出28个不同的序列型别(ST),其中16个为新发现的ST,2个未分型.结论 淋球菌核糖体23SrRNA基因不同位点突变可能与阿奇霉素不同程度的耐药相关,A2143G突变可能导致高度耐药,C2599T可能与中度耐药有关,mtrR基因G45D的突变可能参与阿奇霉素耐药.通过NG-MAST分型显示阿奇耐药菌株的基因型具有多样性,且覆盖范围也较为广泛;经过系统进化树推断por581基因型有较大可能影响阿奇霉素高度耐药.     

抑制消减杂交技术筛选肺炎链球菌多耐药相关DNA片段

目的筛选肺炎链球菌多耐药相关DNA片段,探索肺炎链球菌多耐药的分子机制。方法提取多耐药菌株09062407与标准菌株ATCC49619基因组DNA,应用抑制性消减杂交技术得到富含差异DNA片段的消减混合物,与pEASY-T3克隆载体连接并转化到TP10感受态细胞中,构建多耐药肺炎链球菌差异DNA消减文库。结果耐药株与敏感株间差异片段大量富集,得到大小200～1 500 bp弥散状DNA条带;将这些差异DNA片段富集后构建成消减文库,随机挑取192个白色克隆,经PCR扩增,155个克隆插入有200～800 bp大小片段。结论抑制消减杂交技术能有效筛选肺炎链球菌多耐药株与敏感株间差异DNA片段,可进一步通过克隆鉴定等生物信息学方法寻找与肺炎链球菌多耐药相关基因。     

南宁地区解脲支原体对4种抗菌药物敏感性分析

目的:为了了解南宁地区Uu的耐药情况,对本地区支原体耐药情况进行监测,指导临床用药.方法:对南宁地区NGU患者分离出的35株Uu,采用肉汤倍比稀释法测定4种抗生素的MIC值.结果:克拉霉素的MIC≤1μg/ml有17株Uu(71%),MIC50、MIC90分别为1μg/ml、16μg/ml;阿奇霉素的MIC≤4μg/ml有17株Uu(71%),MIC50、MIC90分别为4μg/ml、16μg/ml.美满霉素的MIC≤4μg/m1有11株Uu(占45%),MIC50、MIC90分别为8μg/ml、32μg/ml.氟罗沙星的MIC≤2μg/ml仅有6株Uu(25%)MIC≥8μg/ml的有23株Uu,MIC50、MIC90分别为8μg/ml、16μg/ml.结论:南宁地区的Uu对大环内酯类药物较为敏感,其中克拉霉素优于阿奇霉素.四环素类药物的敏感性较低,喹诺酮类药的敏感性最差.对四环素类药物高度耐药者,71%菌株对其它药物的MIC值较低(17/24).提示临床应警惕三类药物均耐药的情况.     

2009～2011年武汉大学人民医院感染肺炎链球菌的耐药性分析

目的监测武汉大学人民医院肺炎链球菌的耐药趋势,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法采用K-B法和E-test法对137株肺炎链球菌进行药敏试验,用K-B法测定耐红霉素菌株的耐药表型,并分析药敏结果。结果 137株肺炎链球菌对红霉素、复方磺胺甲口恶唑的耐药率较高,分别为94.2%(129/137)和74.5%(102/137),且有逐年升高的趋势。129株红霉素耐药株中,内在型耐药(cMLSB)占70.5%,诱导型耐药(iMLSB)占19.4%,M型耐药占10.1%。红霉素耐药株对克林霉素、复方磺胺甲口恶唑共同耐药率及多重耐药率分别为66.7%、74.4%、60.5%,显著高于红霉素敏感组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2009～2011年武汉大学人民医院分离的肺炎链球菌对红霉素耐药率较高,对克林霉素及复方磺胺甲口恶唑的耐药率呈逐年上升趋势,尤其是儿童对这两种抗菌药物的耐药性明显高于成人,耐药表型以cMLSB为主,且多重耐药现象严重。     

武汉地区肺炎链球菌的红霉素耐药性分析及血清分型研究

目的 研究武汉地区肺炎链球菌的红霉素耐药率、耐药表型及肺炎链球菌血清分型分布情况.方法 以琼脂稀释法测定红霉素、青霉素及其他大环内酯类等抗菌药物对304株肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC),采用荚膜肿胀试验进行血清分型,以双纸片法测定红霉素耐药菌株的耐药表型.结果 304株肺炎链球菌红霉素耐药率高达84.21%(256/304).红霉素耐药菌株中,cMLSB型耐药占98.44%(252/256),M型耐药仅占1.56%(4/256).血清分型涉及20个血清型、群,主要集中在19、23、6、15和14血清群,其中PNSSP集中分布在6、19、23和未分型血清群.结论 武汉地区红霉素不敏感肺炎链球菌的发生率较高,其耐药表型以cMLSB型为主,双纸片法对此耐药表型的检测有很好的预见性.血清分型,尤其多重耐药菌株以6、19和23血清群为主,推荐采用疫苗免疫预防肺炎链球菌感染.     

98株肺炎链球菌耐药性调查

目的了解本院住院患者鼻咽部链球菌耐药性。方法对本院2008年1—12月分离的98株肺炎链球菌进行药敏试验。结果青霉素耐药率8．2％,苯唑西林耐药率77．6％,耐苯唑西林同时也耐红霉素、林可霉素。结论肺炎链球菌耐药性上升迅速,且耐药程度高。加强对肺炎链球菌耐药性监测,采取合理有效的用药措施,减小耐药株的产生,是细菌检验工作与医院感染监测工作的重要内容。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究.方法采用长臂同源多聚酶链式反应( long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm...     

广西玉林市住院患者肺炎链球菌的血清型分布及耐药性分析

目的 分析住院患者肺炎链球菌分离株的血清型分布、耐药率及耐药基因携带,评估疫苗对本地区肺炎链球菌血清型的覆盖率,为临床合理使用抗菌药物提供参考。方法 收集2015年1月—2019年12月广西玉林市第一人民医院住院患者送检标本分离的非重复肺炎链球菌150株,进行血清分型及抗菌药物敏感性试验。用PCR方法检测pbp2b、ermB、tetM三种耐药基因的携带率。结果 150株肺炎链球菌经PCR技术分型率为93.1%,经荚膜肿胀试验分型率为100%,共分出19种血清型,以19F和6B为主。儿童血清型以19F、6B和15A为主;成人血清型以19F、14和23F为主。PCV7、PCV10、PCV13和PPV23疫苗的覆盖率依次分别为36.8%、42.1%、57.9%和68.4%。血清型为19F、6B、3和23F的菌株对抗菌药物的耐药率较高。肺炎链球菌对青霉素的敏感率大于96.0%。侵袭性与非侵袭性菌株中耐药率有显著差异的抗菌药物为青霉素、莫西沙星和左氧氟沙星。菌株同时携带ermB和tetM两种耐药基因占96.0%,pbp2b、ermB、tetM三种耐药基因与耐药表型的一致率>98.0%。共检...     

Evaluation of coamoxiclav and other antibiotics against S pneumoniae and H influenae from paediatric cases of acute respiratory infections

Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae are most important respiratory pathogens with increasing antimicrobial resistance among the key pathogens responsible for community-acquired respiratory tract infections and have the potential to limit the effectiveness of antibiotics available to treat these infections. In the present study, a total of 18 isolates of Streptococcus pneumoniae and 9 isolates of Haemophilus influenzae were characterised from specimens obtained from patients of acute respiratory tract infections including otitis media, tonsillitis, bronchitis, pneumonia and sinusitis. In the present study, all the Streptococcus pneumoniae isolates were sensitive to coamoxiclav and to cefixime, while they showed variable resistance to the other antibiotics screened. The degree of resistance to various antibiotics was as follows: Streptococcus pneumoniae showed resistance to cotrimoxazole (66.7%), azithromycin (55.6%), erythromycin (16.7%), chloramphenicol (16.7%), clindamycin (11.1%) and penicillin (11.1%). Haemophilus influenzae showed resistance to cefixime 100%, chloramphenicol 88.9%, penicillin 77.8%, erythromycin 77.8%, cefuroxime 77.8%, azithromycin 77.8%, and clindamycin 11.1%. The present study showed the emergence of variable resistance to penicillin, cotrimoxazole and other antibiotics.     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪快速鉴别青霉素耐药及敏感的肺炎链球菌的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪（matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速鉴别青霉素耐药及青霉素敏感的肺炎链球菌的可行性。方法 收集2017年1月到2019年12月广州市番禺区中心医院青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP）10株及青霉素敏感的肺炎链球菌（PSSP）30株。其中31株肺炎链球菌分离自呼吸道标本,占77.5%,18株肺炎链球菌分离自儿科,占45.0%。年龄分布,60岁以上15株,12岁以下18株。用MALDI-TOF MS进行菌株鉴定,用VITEK 2 Compact的药敏卡AST-GP68进行耐药性检测,用VITEK MS的Launch pad软件对MALDI-TOF MS鉴定的肺炎链球菌所产生的质谱峰图进行分析。结果 质谱峰m/z的3992、4419为肺炎链球菌的特征峰,质谱峰m/z的 3853、4218、4619是用于区分PRSP及PSSP最主要的特征峰,不同菌株质谱峰略有不同。164株肺炎链球菌青霉素的耐药率为8.5%,万古霉素﹑利奈唑胺﹑厄他培南的敏感率均为100.0%。90株PSSP及64株PRSP对15种抗生素的药敏结果显示,PSSP的阿莫西林及青霉素的敏感率分别为100.0%,而PRSP的阿莫西林及青霉素的敏感率为0。结论 MALDI-TOF MS可快速准确鉴别PRSP及PSSP,具有耗时短,灵敏度高,特异性好等特点。     

武汉地区健康儿童肺炎链球菌带菌状况及耐药性研究

目的 研究武汉地区健康儿童肺炎链球菌带菌状况及药物敏感性。方法 收集武汉地区某大型幼儿园297名健康儿童的鼻咽拭子标本，分离鉴定肺炎链球茼，琼脂稀释法测定9种抗菌药物对肺炎链球菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果 297份鼻咽拭子标本共分离出78株肺炎链球菌，分离率为26．3％。其中，青霉素敏感率为48．7％，红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明的敏感率分别为14.1％、14．1％、14．1％、10．3％，头孢克洛和头孢曲松的敏感率分别为34．6％和89．7％。未发现左氧氟沙星耐药株。结论 武汉地区健康儿童肺炎链球菌的携带率高，耐药性亦较高，且多为多重耐药菌株，除左氧氟沙星、头孢曲松和氯霉素外，大多数口服抗菌药物对肺炎链球菌的敏感性差。     

91例肺炎链球菌药敏分析

目的:研究某地区肺炎链球菌的耐药情况,以指导抗菌药物的合理应用。方法:用琼脂稀释法以及折点法测定12种抗菌药物,对91例肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果:91例肺炎链球菌对12种抗生素的敏感率依次为:万古霉素(100.0%)、利福平(97.8%)、氧氟沙星(96.7%)、亚胺培南(93.4%)、左氧氟沙星(92.3%)、头孢噻肟(74.7%)、氯霉素(69.2%)、阿莫西林(68.1%)、青霉素(68.1%)、四环素(12.1%)、红霉素(9.9%)、复方新诺明(8.8%)。结论:肺炎链球菌对大多数抗菌素有不同程度的耐药性(万古霉素除外),同时亦存在交叉耐药现象。     

肺炎链球菌毒力蛋白DNA疫苗优势抗原组合筛选及鉴定

目的 探讨肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原联合免疫的优势抗原组合方式.方法 分子克隆肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)N端及肺炎链球菌溶血素(Ply)基因序列,构建重组质粒pcDNA3.1-PspA'和pcDNA3.1-PBD(PBD为Ply 点突变减毒体),免疫印迹(Western blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达(包括前期工作中构建的重组质粒pcDNA3.1-PsaA).将3种重组基因疫苗以不同方式组合肌肉注射免疫150只BALB/c小鼠(B组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA',C组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PBD,D组:pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD,E组:pcDNA3.1-PsaA+pcDNA3.1-PspA'+pcDNA3.1-PBD),检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,观察免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌D39携带改变和D39腹腔攻击小鼠21 d生存情况.结果 成功构建3种重组真核表达载体,ELISA检测结果显示B组小鼠血清特异性IgG抗体水平与E组相似(P>0.05),均明显高于A、C、D组[A组:对照空质粒组pcDNA3.1(+)]小鼠(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部D39携带菌落计数提示B组小鼠相似于E组小鼠(P>0.05),并明显少于C、D组和阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01),并且D39腹腔攻击小鼠21 d生存时间分析亦提示其中位生存时间明显长于C组及阴性对照组(A组和PBS组,P<0.01).结论 PspA'联合PsaA的抗原组合方式具有高效的协同保护效能,可作为肺炎链球菌DNA疫苗的优势候选抗原组合.