多重PCR扩增乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长序列

目的 建立乳腺癌克隆性T细胞TCRβ链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法 根据Gen Bank现有TCR序列设计扩增TCRβ链24个亚家族上游引物24条,下游引物2条。对Mg2+、d NTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行TCRβ链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果 扩增出乳腺癌转移淋巴结中的TCRβ链全长编码序列并成功构建重组质粒,5例患者共获得24个阳性克隆。结论 建立的TCRβ链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,为研究乳腺癌克隆性T细胞的特点提供了帮助。     

T细胞受体基因工程T细胞治疗的现状与未来

免疫治疗为肿瘤的治疗带来了新的契机和希望,其中免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、肿瘤疫苗、免疫调节剂、过继细胞治疗等显著改善了肿瘤患者的预后,部分晚期肿瘤患者获得了长期生存。T细胞受体基因工程T细胞（T cell receptor-engineered T cell,TCR-T）治疗是将识别肿瘤抗原的T细胞受体（T cell receptor,TCR）导入到患者的外周T细胞中,制备能够特异性识别肿瘤抗原的T细胞,然后将这些基因工程T细胞回输患者的治疗方法。该疗法采用天然的TCR信号,具有更高的治疗潜力和更低的毒性或副作用,并且TCR能够识别更多的肿瘤抗原,因此具有广泛的应用前景。目前,多项TCR-T治疗的临床研究正在开展,现有结果表明TCR-T具有较好的治疗效果,但也存在副作用等问题亟需解决。综述TCR-T治疗的临床研究进展、目前面临的挑战以及未来发展的方向。     

T细胞受体工程化T细胞的临床应用及肿瘤特异性抗原和T细胞受体的筛选策略

利用靶向具有免疫原性的肿瘤抗原的T细胞受体工程化T细胞（T cell receptor-engineered T cells,TCR-T）进行过继性细胞免疫治疗,可有效清除肿瘤且无明显副作用,实现令人欣喜的治疗效果。但该治疗领域还处在起步阶段,如何筛选肿瘤特异性抗原及其对应的T细胞受体（T cell receptor,TCR）极具挑战性。综述TCR-T临床试验项目研究进展,总结神经网络计算机学习在辅助发现潜在抗原和候选TCR方面的发展情况,并介绍近年来基于多学科综合搭建的针对肿瘤特异性抗原及其对应TCR的不同筛选平台,以期为TCR-T应用范围的扩展提供新思路。     

系统性红斑狼疮T细胞受体BV亚家族基因克隆谱型分析

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中T细胞受体β链可变区(TCRBV)亚家族互补决定区3(CDR3)基因表达谱型及对增殖的T细胞克隆进行序列分析,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫病的相关性.方法 应用RT-PCR的方法扩增8例SLE患者外周血的TCRBV 24个家族的基因序列,分析TCRBV CDR3基因表达情况.对增生的T细胞克隆的TCRBV进行序列分析,通过生物信息学分析,了解TCRBV基因与自身免疫病的相关性.结果 8例SLE患者TCRBV CDR3谱型图均出现异常,表现为CDR3多态性降低,BV家族寡克隆增生.在TCR BV13.1基因家族有4例患者均出现寡克隆增生;在BV8、BV9、BV18家族中有3例出现寡克隆增生.未发现SLE的TCRBV的CDR3区有共同的氨基酸基序,但与基因库中的其他自身免疫病的T细胞克隆有较高的一致性.结论 SLE患者T细胞出现寡克隆增生,CDR3多态性降低,可能与自身免疫病发病有关.     

靶向肿瘤驱动抗原的T细胞受体工程化T细胞治疗策略

肿瘤临床治疗手段日新月异,除临床手术、放射治疗、化学药物治疗和靶向药物治疗外,近年来肿瘤免疫疗法也显示出强大的抗肿瘤疗效,成为肿瘤临床研究的热点之一。基于最近对肿瘤突变抗原的深入研究,一些关键性肿瘤驱动突变抗原以及靶向这些抗原的T细胞得以发现。同时,这些肿瘤驱动突变抗原特异性T细胞高效诱导了抗肿瘤应答,提示了以T细胞-肿瘤驱动突变抗原识别为基础的T细胞受体工程化T细胞（T cell receptor-engineered T cells,TCR-T）肿瘤免疫疗法在肿瘤免疫治疗中的巨大潜力。对近年肿瘤驱动突变抗原与TCR-T肿瘤治疗的研究进展和方法进行综述,以期为TCR-T肿瘤免疫治疗的临床研究提供理论基础。     

T细胞受体信号转导机制

T细胞作为机体适应性免疫的主力军,可以攻击病原体感染细胞和肿瘤细胞,在维持机体稳态中发挥作用。其表面存在的T细胞受体（T cell receptor,TCR）能够识别主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）呈递的抗原多肽,并将抗原结合信号转换为胞内酪氨酸磷酸化信号,引发下游信号通路来激活T细胞。在临床上,T细胞受体工程化T细胞（T cell receptor-engineered T cell,TCR-T）疗法有望在实体瘤的治疗中取得突破。简要阐述TCR的信号转导机制及其与嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）的异同,以便更好地理解TCR-T的工作原理,从而为设计更好的T细胞治疗产品提出新的策略,以求其在实体瘤临床治疗中得到进一步应用。     

T细胞受体信号转导通路的动力学分析

目的:建立T细胞受体信号转导途径的动力学模型,通过模型仿真揭示T细胞受体信号途径各分子间的动态调控过程,简要分析模型的动力学特性。方法:根据数据库KEGG及相关中英文文献,提取T细胞受体信号转导各条通路相关分子作用的方式及数量关系,利用Matlab7.0的Simulink工具箱构建信号途径的动力学模型并仿真。结果:模型仿真结果与文献符合得较好,能够从数量上反映T细胞受体信号转导途径中各分子间复杂的调控关系,并能通过模型仿真发现和验证该信号途径中的关键节点分子。结论:模型基本反映了T细胞受体信号转导途径的动力学特征,可以作为后续的精确定量关系研究的基础。     

趋化因子受体5及其配体促进乳腺癌细胞的趋化和侵袭的研究

目的探讨趋化因子受体5（CCR5）及其配体（RANTES）对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的促进作用。方法用反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法测定乳腺癌细胞株MCF-7的CCR5mRNA及蛋白水平,RANTES的作用下,以无血清RPMI1640培养液作为阴性对照组,含乳腺癌细胞的无血清RPMI1640培养液为对照组,加有CCRSmAb的乳腺癌细胞无血清RPMI1640为实验组,通过趋化小室法检测MCF-7细胞的趋化活性和侵袭活性,并与CCR5的封闭进行对照研究。结果迁移至多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组,实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（73．0±9．8）、（7．6±1．5）个／HP,差异有统计学意义（t=11．85,P〈0．01）;穿透Matrigel基质胶到达多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组,实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（19．7±4．0）、（2．3±-0．6）个／HP,差异有统计学意义（t=7．37,P〈0．01）。乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5mRNA及蛋白质的表达,其配体RANTES对MCF-7细胞有明显的趋化活性和侵袭活性,CCR5的封闭也能抑制MCF-7细胞的这种趋化活性和侵袭活性。结论乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5的表达,且其表达能够促进MCF-7细胞的趋化和侵袭。     

肿瘤浸润B细胞对T细胞的调节在肿瘤免疫中的进展

肿瘤浸润B细胞(Tumor-infiltrating B cells, TIBs)主要游离于肿瘤组织中或浸润在肿瘤组织内部的三级淋巴结构内,通过分泌细胞因子以及表面膜识别受体来发挥对肿瘤细胞的杀伤或局部免疫系统的调节作用。文章综述了近期TIBs在肿瘤组织中对T细胞调控方面的研究进展,期冀为利用TIBs作为可能的肿瘤生物标志物和潜在的肿瘤治疗靶点提供一些新的思路。     

皮肤T细胞淋巴瘤皮损和外周血T细胞受体γ基因重排的研究

为探讨T细胞受体γ基因重排在皮肤T细胞淋巴瘤皮损及外周血中的存在情况及与疾病的相关性。采用巢式聚合酶链反应技术对14例蕈样肉芽肿、(MF)17例可疑蕈样肉芽肿、8例神经性皮炎、8例湿疹、2例淋巴瘤样丘疹病、1例红皮病患者皮损及外周血进行T细胞受体γ基因重排的检测,同时取5例正常皮损及健康人血作为对照。结果:MF患者皮损TCR-γ基因重排总阳性率为78.6%;外周血总阳性率为35.7%;MF患者皮损和血液中有3例患者同时出现TCR-γ基因重排,2例在皮损中无基因重排的情况下血液单独出现TCR-γ基因重排。可疑MF皮损总阳性率为41.2%,血液总阳性率为17.6%。神经性皮炎、湿疹、淋巴瘤样丘疹病、红皮病患者皮损和外周血及正常皮损和健康人血中无TCR-γ基因重排。结论:皮损TCR-γ基因重排可作为辅助诊断的手段之一,血液中的TCR-γ基因重排与MF疾病进展关系有待于进一步研究。     

T细胞受体基因修饰在过继免疫治疗中的应用

T细胞过继性转移可以增强免疫系统介导的对肿瘤细胞的消除,是近年来获得较高关注的一种特异性、无毒性的癌症新疗法,此方法对于治疗血液性和实体恶性肿瘤具有一定效果。对T细胞进行基因修饰能够增强其免疫能力,保持T细胞的持久活性,同时也可以克服肿瘤自身的免疫逃避机制,潜在提高免疫治疗应用于多种肿瘤疾病的成功率。在T细胞过继转移中,T细胞受体(TCR)基因转移作为一种发展迅速的免疫治疗方法,可以在体外产生大量的具有已知抗原特异性和功能亲和性的T细胞,应用于病毒感染或病毒相关恶性肿瘤的过继细胞免疫治疗。TCR基因转移利用逆转录病毒或慢病毒作为载体,其中包含了从所需抗体特异性T细胞群中克隆得到的TCR-α和TCR-β链基因序列,然后应用TCR编码载体转导体外的原始T细胞。为产生带有所需功能特异性的转导T细胞,引入的TCR-α和TCR-β链必须形成异源二聚体,与CD3复合体结合从而在T细胞表面稳定表达。     

聚合酶链反应检测急性淋巴细胞白血病T细胞受体基因重排分析

应用聚合酶链反应（PCR)扩增T细胞受体(TCR）δ基因重排，检测3例急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓与骨髓涂片标本．其中1例初发和1例未完全缓解的标本检测出基因重排，1例完全缓解的标本未检测出基因重排。对照标本均未检测出基因重排。     

雌孕激素受体、生长因子受体在乳腺癌中的表达及意义

目的 探讨雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、生长因子受体（HER-2）、P-糖蛋白（P—gp）和谷胱甘肽-S转移酶（GST-π）在乳腺癌中的表达与临床意义。方法 应用免疫组织化学技术，检测85例乳腺癌患者中ER、PR、HER-2和P—gp、GST-π多药耐药的表达。结果85例乳腺癌患者中ER阳性率为52％，PR阳性率为51％，HER-2阴性率为54％，P-gp检测为（-）～（＋）占85％，GST-π检测为（-）～（＋）占69％，与乳腺癌临床化疗有相关性。结论 ER、PR、HER．2、P—gp联合表达与乳腺癌化疗密切相关，检测ER、PR、HER-2、P-gp和GST-π对乳腺癌化疗方案的制定具有重要的意义。     

乳腺癌中Foxp3~+调节性T细胞浸润的意义

目的探讨乳腺癌中Foxp3+调节性T细胞浸润的意义。方法免疫组织化学方法检测46例浸润性乳腺癌癌组织中Foxp3+调节性T细胞和CD8+细胞毒性T细胞的浸润。每个病例分别计数5个高倍视野中浸润细胞的数量并计算平均值,以中位数区分高密度和低密度浸润并比较与临床病理特征之间的关系。结果多数病例中两型T细胞以瘤周浸润为特点。每个高倍视野,Foxp3+T细胞中位数为24.7个,CD8+T细胞为67.4个。Foxp3+T细胞浸润数量与乳腺癌病理组织学分级显著相关(P<0.01),而CD8+T细胞浸润数量与各临床病理参数无关。结论肿瘤浸润性Foxp3+T细胞的数量为乳腺癌潜在的预后指标。     

乳癌外周血T细胞亚群及激素受体状态的相关性

本文拟以乳癌患者为研究对象，设计了乳癌患者外周血T细胞亚群计数和激素受体状态的配对研究，以期找到其内在关系。材料和方法一、研究对象乳癌患者13例（Ⅰ期1例，Ⅱ期8例，Ⅲ期4例），年龄41～61岁，进行外周血T细胞亚群和ER、PR配对检查。10例良性乳腺病（乳腺纤维瘤8例，小叶增生2例），10例健康女性均进行外周血T细胞亚群检查，年龄分别是21～51岁和24～50岁。二、试剂1．T细胞亚群检测试剂盒由北京军事医学科学院生物制剂发展中心提供。2．激素受体状态测定试剂主要包括二甲苯PBS液，他和小鼠肝细胞粉液，雌二醇、孕酮、兔抗雌…     

儿童急性淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链和T细胞受体δ基因分析

目的　研究儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)中免疫球蛋白重链 (IgH)基因、T细胞受体δ(TCRδ)基因重排的发生率及其临床特征。方法　 88例儿童ALL采用套式聚合酶链反应 (PCR)技术检测IgH、TCRδ 重排 ,结合流式细胞仪 (FCM )检测免疫表型和细胞形态学FAB分型。结果　IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 31 81% ;TCRδ 基因重排 31例 ,阳性率 35 2 3%。两者均表达者 10例 ,阳性率 11 36 %。在 73例B系ALL中IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 38 36 % ,TCRδ 表达 2 5例 ,阳性率 34 2 5 % ,两者均表达者 10例 ,阳性率 5 6 8%。在 15例T系ALL中未检出IgH基因重排 ,仅 5例为单纯表达TCRδ 基因重排 ,阳性率 33 33%。在B系ALL中IgH表达高水平与T系ALL中IgH未表达相比 ,( χ2 =13 74 ,P <0 0 0 5 ) ,有显著性差异。 88例儿童ALL中的 85例获完全缓解 (CR) ,缓解率 96 6 % ,对其中 5例患儿IgH基因重排PCR动态观察 ,结果分别在完全缓解 (CR) 15个月、18个月、2 0个月、2 4个月时转阴。结论　 ( 1)TCRδ 基因重排在儿童ALL中为高表达 ,在B系与T系ALL中表达相比 ,( χ2 =1 0 7,P >0 0 5 ) ,无显著性差异。 ( 2 )IgH、TCRδ 基因重排是儿童急性淋巴细胞白血病的特异性基因重排 ,该项检测有助于ALL克隆性诊断和基因分型。 ( 3)监     

靶向T细胞发育药物研究进展

T细胞是适应性免疫系统的主要组成部分,其发育和成熟在胸腺内完成。T细胞受体多样性是T细胞识别和应答多种抗原的重要基础,但胸腺在衰老过程中发生萎缩导致胸腺功能受损,初始T细胞输出减少。综述目前临床上使用的促进胸腺T细胞发育的药物的研究进展,以期为免疫功能受损患者恢复适应性免疫提供参考。     

桥本甲状腺炎与辅助性T细胞的偏移

自身免疫性甲状腺疾病包括桥本甲状腺炎(Hashmoto'Sthy roiditis,HT)、Graves病及粘液性水肿,其中HT又名慢性淋巴细胞性甲状腺炎或自身免疫性甲状腺炎,根据促甲状腺素(TSH)水平及抗体情况又可分为Ⅰ型(TSH正常)、Ⅱ型(TSH增高)、Ⅲ型(存在TSH受体抗体)三型HT。近年来众多学者研