牵张负荷对豚鼠膀胱ICCs细胞内钙波的影响

目的 探讨牵张负荷对豚鼠膀胱起搏细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)兴奋性的影响.方法 胶原酶消化豚鼠膀胱,于特制的牵张培养皿中体外培养膀胱起搏细胞,激光共聚焦技术检测Fluo-4负载的起搏细胞在牵张负荷下Ca2 信号的变化.结果 以豚鼠膀胱组织铺片及体外培养细胞中观察到c-kit染色阳性及长梭形有突起的细胞鉴定为膀胱起搏细胞,即ICCs细胞.细胞于牵张膜上培养4～5 d后,予Fluo-4钙负载染色,激光共聚焦下检测,无应力状态时,ICCs细胞可观察到周期性的"钙波",且其平均荧光强度显著强于平滑肌细胞(P＜0.05).当牵张膜被动拉伸延长20%时,ICCs细胞先于平滑肌细胞发生钙波增强现象.结论 静息状态下ICCs细胞可出现周期性钙波,牵张负荷可兴奋ICCs细胞.     

牵张负荷对大鼠膀胱Cajal间质细胞超微形态及c-kit基因表达影响

目的 通过研究膀胱Cajal间质细胞(Interstitial cells of cajal,ICCs)超微形态及c-kit基因水平变化,阐明牵张负荷对膀胱Cajal细胞兴奋性的调控作用.方法 结扎膀胱颈,构建大鼠膀胱出口部分梗阻致逼尿肌过度活动模型,通过扫描电镜方法观察牵张负荷条件下逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞超微形态变化,观察牵张负荷条件下逼尿肌稳定组和逼尿肌过度活动组与正常对照组膀胱ICCs细胞酪氨酸激酶受体(c-kit)在基因水平表达差异.结果 逼尿肌过度活动组ICCs细胞形态和c-kit基因水平表达最较正常对照组有明显改变(P＜0.01).结论 牵张负荷对ICCs细胞有调控作用,可能的作用机制在于改变ICCs细胞形态及上调c-kit表达.     

豚鼠膀胱组织ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin 43表达意义

目的 探讨体外培养豚鼠膀胱组织ICCs细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)间隙连接蛋白Connexin 43的表达.方法 胶原酶消化法进行豚鼠膀胱组织ICCs细胞的原代培养, 对照为原代培养膀胱平滑肌细胞,免疫荧光法进行两种细胞的特征性蛋白c-kit及平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)染色观察,免疫荧光法及Western blot法进行培养细胞Connexin43的检测.结果 豚鼠膀胱ICCs细胞特征性蛋白c-kit染色阳性,SMA染色阴性.豚鼠膀胱ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin 43表达水平较高,显著高于膀胱平滑肌细胞.结论 豚鼠离体膀胱ICCs细胞间隙连接蛋白Connexin43高表达可能是其信号传递的重要物质基础.     

成年豚鼠膀胱ICCs细胞起搏电流的鉴定

目的 确定成年豚鼠膀胱卡哈尔间质细胞(interstitial cells of cajal,ICCs)细胞是否具有起搏电流.方法 采用胶原酶消化法,得到原代培养的成年豚鼠膀胱ICCs细胞.采用膜片钳技术,在全细胞记录模式下,记录其超级化激活的内向电流(hyperrepolarization-activated inward current,Ih).结果 原代培养的ICCs细胞和逼尿肌细胞的静息膜电位、膜电容存在明显差异;ICCs细胞可记录到起搏细胞特征电流Ih,而在逼尿肌细胞则记录不到.结论 记录到成年豚鼠膀胱ICCs细胞具有起搏细胞的特征电流Ih,提示ICCs细胞在膀胱具有起搏作用.     

体外培养豚鼠膀胱ICCs细胞表达NSE及nNOS

目的 探讨体外培养豚鼠膀胱组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)神经元特异性烯醇酶(neurone specific enolase,NSE)及神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的表达.方法 胶原酶消化法进行豚鼠膀胱组织ICCs细胞的原代培养,对照组为原代培养的膀胱平滑肌细胞,免疫荧光法进行c-kit及平滑肌肌动蛋白(SMA)染色,RT-PCR和Western blot法进行细胞培养后1、3 d和5 d的NSE及nNOS转录水平及蛋白水平的检测.结果 豚鼠膀胱ICCs细胞c-kit染色阳性,SMA染色阴性.豚鼠膀胱ICCs细胞NSE及nNOS转录及蛋白水平较高,膀胱平滑肌细胞不表达NSE及nNOS.结论 豚鼠膀胱ICCs培养细胞表达神经细胞特异性物质,提示豚鼠膀胱ICCs细胞参与膀胱功能调控.     

ICCs细胞在正常大鼠膀胱中的分布及对逼尿肌收缩的影响

目的 研究正常SD大鼠膀胱不同部位ICCs细胞(interstitial ceils of Cajal,ICCs)的分布及其对局部逼尿肌收缩的影响.方法 分别于正常SD大鼠膀胱顶部、体部、底部及三角区取3 into×4 mm逼尿肌组织进行免疫荧光组织化学法检测c-kit阳性细胞的表达情况;再于上述部位取2 mm×7 mm肌条进行张力测定实验,比较各部位肌条频率及幅度的变化,分析其与ICCs密度变化的相关性.结果 正常膀胱中存在ICCs,三角区及顶部的ICCs密度较体部和基底部明显增加,差异显著(P＜0.05);三角区和顶部以及体部和基底部的ICCs密度均没有显著区别(P＞0.05);各部位肌条收缩频率和幅度不同,但顶部和三角区的肌条收缩频率和幅度较体部和基底部明显增大,差异显著(P＜0.05),顶部和三角区以及体部和基底部的肌条之间则没有显著区别(P＞0.05).相关性分析结果表明逼尿肌肌条收缩频率和幅度与局部ICCs密度呈显著正相关性(P＜0.05).结论 大鼠膀胱中存在ICCs,膀胱各部位ICCs的分布有显著差异,其与膀胱局部肌条收缩有密切关系.     

黄芪甲苷对特发性胃瘫大鼠c-kit蛋白表达及Cajal间质细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对特发性胃瘫(IG)大鼠胃组织内c-kit表达量及Cajal间质细胞(ICC)的影响.方法:将24只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组,黄芪甲苷低剂量组、高剂量组,每组6只.模型组与各黄芪甲苷剂量组予10 mg/kg洛派丁胺灌胃构建IG模型,建模5 d后黄芪甲苷低剂量组、高剂量组分别予浓度为32 ...     

高糖环境下豚鼠膀胱ICCs细胞形态的改变

目的观察高糖环境下豚鼠膀胱ICCs细胞长度的改变,探讨糖尿病膀胱（DCP）是否与逼尿肌中ICCs细胞形态异常有关。方法胶原酶V消化豚鼠膀胱,分别在5、10、15mmol/L糖浓度下分别培养24、72h,激光共聚焦技术记录Fluo-4AM负载的ICCs细胞,观察在不同浓度、不同培养时间后其细胞长度的变化。结果非高糖组细胞无明显变化,高糖组遂培养时间延长及糖浓度增高细胞明显变小变短。结论高糖环境使ICCs细胞长度缩短,体积变小,导致其结构异常,起搏及传导功能下降,最终导致逼尿肌功能障碍发生DCP。     

豚鼠空肠吻合术后ICCs的再生及细胞网络再形成研究

目的探讨豚鼠空肠壁内ICCs再生及细胞网络重新形成过程.方法利用手术切断的方法,制造ICCs损伤丢失、网络断裂动物模型,冰冻切片和全层铺片免疫细胞化学染色观察.结果术后30～50 d,断端KIT阳性细胞开始增多;术后70 d左右,KIT阳性细胞在断端形成以正常肠壁为底面,顶端向吻合部位的三角形增生区域,在该区域中部KIT阳性细胞的数量较多,且排列不规则,呈团状,突起较短,胞浆丰富,细胞核较大;而靠近三角形底部的KIT阳性细胞逐渐与肌间神经丛周围和深肌丛附近的ICCs相延续.在术后6个月,近端和远端的肠壁已逐渐恢复延续性,肠壁各层结构基本正常,此时KIT阳性细胞亦趋于恢复正常细胞网络分布模式.结论当肠壁内ICCs及其网络损伤后,ICCs可通过再生恢复正常的细胞网络和分布模式.     

胃肠道起搏细胞ICCs在豚鼠泌尿道分布研究

目的研究胃肠道起搏细胞-Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)在豚鼠泌尿道的分布情况.方法取8只豚鼠肾盂、输尿管、膀胱和尿道组织,经铺片处理后,行ICCs特异性标志物KIT免疫细胞化学染色.结果KIT染色阳性,形态与胃肠道起搏细胞ICCs相似的细胞(ICCs样细胞)存在于豚鼠全泌尿道的黏膜下层和肌层.结论在豚鼠全泌尿道存在有ICCs样细胞分布,豚鼠可作为研究人泌尿道ICCs样细胞功能的理想动物模型.     

P2X嘌呤受体在大鼠膀胱ICCs细胞中的表达

目的 探讨P2X嘌呤受体各亚型在大鼠膀胱ICCs细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的表达及意义.方法 制备SD大鼠膀胱组织铺片及冰冻切片,通过免疫荧光法检测大鼠膀胱组织内ICCs细胞分布情况,并进一步采用免疫荧光双标法检测ICCs细胞上P2X嘌呤受体各亚型的表达.结果 SD大鼠膀胱中的ICCs细胞主要集中于黏膜下层、肌束边缘以及肌束间,并相互连接呈网络状分布.在7种P2X嘌呤受体亚型中,ICCs细胞上可检测到P2X2和P2X5两种亚型表达.结论 大鼠膀胱ICCs细胞可表达P2X2和P2X5两种嘌呤受体亚型,从功能学上证实嘌呤能信号对ICCs细胞功能有影响.     

SCL基因重组慢病毒上调高糖环境下Cajal间质细胞中c-kit蛋白表达

目的：探讨含人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因重组慢病毒对高糖环境下受损Cajal间质细胞 (interstitial cells of Cajal,ICC)中酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达的影响。方法：分离ICC,培养24 h贴壁,经倒置显 微镜、免疫荧光鉴定后,将ICC细胞分为对照组、高糖组,对照组加入含5 mmol/L葡萄糖的培养基,高糖组加入含 20 mmol/L葡萄糖的培养基,培养48 h后;对照组不变,高糖组分成空白组、空慢病毒组和实验组3个亚组,3组分别 加入PBS、空慢病毒和含SCL基因重组慢病毒5 mmol/L葡萄糖的培养基,继续培养24和48 h,采用Western印迹法检测 两个时段各组中ICC中c-kit 蛋白表达情况。结果：24或48 h后,空白组、空慢病毒组中ICC的c-kit蛋白表达水平均明显 低于对照组,实验组中ICC中c-kit蛋白的表达水平明显均高于空白组和空慢病毒组,但是仍低于对照组(均P<0.05)。 结论：SCL基因重组慢病毒可以上调高糖环境下功能受损ICC中c-kit蛋白表达量。     

Balb/c小鼠小肠Cajal间质细胞形态学特征及慢波活动的研究

目的 观察未成年Balb/c小鼠小肠Cajal间质细胞(ICC)的形态及分布,并测定其慢波活动情况,以进一步认识ICC的发育.方法 首先,通过免疫组织化学方法观察10天大小Balb/c小鼠小肠ICC的分布及形态特征,采用电镜观察ICC的超微结构;再分别测定10d大小Balb/c小鼠及成年Balb/c小鼠小肠在体慢波活动情况.结果 ICC主要分布于小肠环肌层与纵肌层间区(称之为ICC-MY),以及环形肌的内薄层与外厚层间(称之为ICC-DMP).ICC-MY呈现为连续性分布特点.电镜结果显示ICC有2个以上长突起,胞浆内含有大量的线粒体,而中间丝很少见.成年小鼠小肠慢波活动表现为近似正弦波样曲线,频率为(17.78±1.52)次/min,振幅为(0.16±0.02)mV,10 d大小Balb/c小鼠小肠慢波活动类似于成年小鼠,但其频率为(14.00±0.98)次/分,振幅为(0.09±0.02)mV,均明显低于成年小鼠(P＜0.01).结论 Balb/c小鼠小肠主要分布着ICC-MY及ICC-DMP两类ICC,为双极或多极细胞,ICC-MY相互连接成网络状;未完全发育好的ICC表现出不成熟的慢波活动.     

葛根素对慢性酒精中毒小鼠结肠组织Cajal间质细胞和C-kit蛋白表达的影响

目的:通过检测慢性酒精中毒及葛根素预处理后的小鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)形态、数量以及C-kit蛋白表达的变化,探讨葛根素对酒精中毒小鼠结肠组织的保护作用。方法:选取健康雄性BALB/C小鼠24只,随机分为盐水对照组、慢性酒精中毒组和葛根素预处理组,每组8只。慢性酒精中毒组和葛根素预处理组小鼠建立慢性酒精中毒动物模型。通过测量印度墨汁推进长度测定肠道传输速率,应用免疫荧光和透射电镜技术检测ICC分布、数量以及超微结构的改变,采用Western blotting方法分析C-kit蛋白的表达。结果:葛根素预处理组肠道传输速率较慢性酒精中毒组明显增加(P<0.05),但仍低于盐水对照组(P<0.05);葛根素预处理组结肠内ICC的数量较慢性酒精中毒组增多(P<0.05),与盐水对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与盐水对照组比较,慢性酒精中毒组小鼠结肠ICC的超微结构发生明显改变,线粒体等细胞器明显减少,葛根素预处理组小鼠结肠ICC的超微结构基本恢复正常,线粒体等细胞器明显增加;葛根素预处理组小鼠结肠组织中C-kit蛋白表达水平明显高于慢性酒精中毒组(P<0.05),与盐水对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:葛根素干预对酒精造成的Cajal间质细胞数量、超微结构及C-kit表达的改变有一定的修复或逆转作用。     

ICC样细胞在正常豚鼠上尿路的分布及对平滑肌收缩的影响

目的 研究正常豚鼠上尿路不同部位起搏细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的分布及其对局部平滑肌收缩的影响.方法 取10只豚鼠分别取肾盂输尿管交界处、上、中、下段输尿管组织,经全层铺片处理后,行ICCs特异性标志物KIT免疫荧光染色,对各段组织进行细胞计数,单因素方差分析各段ICCs的分布及其差异;再于上述部位(除输尿管壁内段外)分别剪取2 mm×6 mm肌条进行张力测定实验,比较各部位肌条收缩频率及幅度的变化,分析其与ICCs密度变化的相关性.结果 KIT染色阳性、形态与胃肠道起搏细胞ICCs相似的细胞(ICCs样细胞)存在于豚鼠上尿路的各段中,上尿路ICC样细胞密度在肾盂肾盏交界处、输尿管上、中、下段分别为(5.20±0.98)、(3.90±0.98)、(3.03±0.98)、(2.50±0.81)个/视野;各部位肌条收缩频率及幅度不同,但肾盂输尿管交界处、输尿管上段的肌条收缩频率及幅度较输尿管中段和下段明显增大,差异显著(P<0.05),输尿管中段和下段之间没有显著区别(P>0.05);相关性分析结果表明局部平滑肌肌条收缩频率和幅度与ICCs密度呈显著正相关性(P<0.05).结论 豚鼠上尿路平滑肌中存在ICCs,肾盂输尿管各部位ICCs的分布有显著差异,其与上尿路平滑肌局部肌条收缩有密切关系.     

豚鼠膀胱Cajal样间质细胞肌层分布及相关功能分析

目的：研究豚鼠膀胱Cajal样间质细胞分布、超微结构特点并探讨其功能。方法：选择健康豚鼠10只,利用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察膀胱Cajal样间质细胞在肌层的分布和结构特点。结果：豚鼠膀胱肌层Cajal样间质细胞形成网状和平行状两种不同的分布。超微结构核大、具有丰富的细胞器。结论：膀胱Cajal样间质细胞分布和超微结构与胃肠道的ICCs相似,具有起搏细胞特征。