蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响.结果 在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖,改变Hela细胞的细胞周期,使细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡.结论 蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡,从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用.     

铁筷子多糖诱导小鼠S180细胞凋亡的实验研究

目的:观察铁筷子多糖(HFPS)诱导小鼠S180细胞凋亡的作用.方法:MTT比色法检测HFPS对小鼠原代腹水型S180肉瘤细胞的生长抑制效应,应用光镜、激光共聚焦显微镜、DNA凝胶电泳和流式细胞术研究HFPS诱导S180细胞凋亡的作用.结果:MTT检测结果显示HFPS可以有效抑制S180细胞生长,作用呈时间和剂量依赖性.光镜、激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞的形态学变化,表现为核固缩、碎裂、染色质边集、凋亡小体形成等.DNA凝胶电泳可见以180bp倍数裂解的DNA梯形电泳带出现,同时随药物浓度的升高,细胞周期S期比例下降,G0/G1期比例上升,PI增殖指数下降.结论:铁筷子多糖可诱导S180肿瘤细胞凋亡.     

人参多糖体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究人参多糖体外对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的作用。方法应用MTT法、流式细胞仪、Annexin V-PI双标、Hoechest荧光染色、TUNEL法等多种方法,体外研究人参多糖对A549细胞的凋亡作用；采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2表达的变化。结果人参多糖对A549细胞生长具有抑制作用,并有促凋亡效应；对细胞周期的影响表现为G_0/G_1期的阻滞,未见bcl-2表达的下调。电镜和Hoechst、TUNEL法都可观察到凋亡形态学的改变。结论人参多糖可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,这有可能是人参多糖抗肿瘤作用机制之一,其凋亡的发生与bcl-2的表达无明显关系。     

复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的研究复合螺旋藻多糖对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的抑制作用及其机制。方法将螺旋藻多糖(PSP)与银杏叶提取物(GBE)按一定比例复合,用不同浓度的复合制剂分别对细胞作用后,在显微镜下观察细胞形态学变化、用MTT法测其生长抑制率、PI及AnnexinV-FITC/PI染色后,流式细胞仪测细胞周期及凋亡率。结果不同比例和浓度的复合螺旋藻多糖对人结肠癌HT-29细胞均有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,抑制作用高于单一成分组;细胞阻滞于S期,凋亡细胞增加。结论复合螺旋藻多糖通过阻断细胞周期而抑制体外培养人结肠癌HT-29细胞的生长,并能够促进细胞凋亡,具有较好的抑肿瘤活性。     

青龙衣多糖对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:从磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路方面探讨青龙衣多糖对结肠癌HCT-116细胞增殖、凋亡的影响。方法:青龙衣多糖(10,20,50,100 mg·L-1)处理处于对数生长期的HCT-116细胞,另设空白组,MTS法检测24,48,72,96 h后的细胞增殖抑制率,PI单染法,Annexin-FITC/PI双染法分别检测48 h后细胞周期及细胞凋亡情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测48 h后Akt及p-Akt蛋白表达水平。结果:青龙衣多糖对HCT-116细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应;与空白组比较,各处理组G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降,且各质量浓度间的差异具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,除10 mg·L-1组外,其余组早期凋亡率均有显著性增加,而各剂量组的晚期凋亡率及总凋亡率均明显升高,且各质量浓度间的凋亡率均具有统计学意义(P0.05);与空白组比较,各给药组p-Akt/Akt明显降低,且各质量浓度间p-Akt/Akt差异具有统计学意义(P0.05)。结论:青龙衣多糖在体外可直接抑制或杀伤人结肠癌HCT-116细胞,具有较强的增殖抑制及诱导凋亡能力,其抗肿瘤机制可能与PI3K/Akt信号通路相关。     

硒酸酯多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的:探索硒酸酯多糖(KSC)在体外对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法:以KSC为实验药物,通过MTT法检测细胞活力,荧光显微镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期等,研究其对HepG-2细胞的诱导凋亡作用。结果:随着作用时间及药物浓度的增加,KSC对HepG-2细胞生长的抑制作用就越明显。120mg.L-1KSC作用72 h,细胞生长抑制率达69.31%,IC50为43.92 mg.L-1。形态学观察可见早期和晚期凋亡细胞及凋亡小体,细胞周期主要受阻于S期。结论:KSC可在体外诱导人肝癌细胞凋亡。     

羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)对人白血病HL-60细胞系增殖抑制和凋亡诱导作用。方法MTT法检测SFPS对HL-60细胞增殖的抑制作用;扫描电镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系;药物浓度为300 mg/L和500 mg/L作用HL-60细胞后,观察到典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳呈现梯状条带;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2/M期细胞比例增多。结论SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞有关。     

罗勒多糖对紫杉醇抑制肺腺癌A549细胞增殖作用的影响

目的:探讨罗勒多糖对紫杉醇体外抑制人肺腺癌A549细胞增殖作用的影响。方法:采用MTT法测定罗勒多糖对紫杉醇抑制A549细胞增殖作用的影响,倒置相差显微镜下观察罗勒多糖联合紫杉醇导致的A549细胞形态学变化,并采用Hoechst 33342/PI荧光双染法分析罗勒多糖与紫杉醇联合应用所引起的A549细胞死亡方式。结果 :MTT检测和形态学观察表明罗勒多糖对紫杉醇抑制A549细胞增殖具有明显的增效作用,其增效作用呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33342/PI检测显示紫杉醇及紫杉醇联合罗勒多糖作用48 h后可见凋亡细胞。结论:罗勒多糖能增强紫杉醇对人肺腺癌A549细胞株增殖的抑制作用,具有化疗增效作用,这种增效作用以诱导细胞凋亡为主要方式,呈浓度和时间依赖性。     

余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌BEL-7404细胞株凋亡的影响

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的影响.方法:采用MTT法测定余甘子叶化学成分没食子酸在体外对BEL-7404细胞增殖的影响;普通光学显微镜、倒置相差显微镜和荧光显微镜观察余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞后的形态学变化;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测余甘子叶化学成分没食子酸诱导BEL-7404细胞早期细胞凋亡的情况;Tunel法检测BEL-7404细胞的晚期凋亡情况及其凋亡率.结果:MTT法和显微镜观察显示余甘子叶化学成分没食子酸能不同程度抑制BEL-7404细胞的增殖,可致细胞形态学改变,出现典型的凋亡特征;AnnexinV/PI双标记法检测显示早期凋亡细胞随作用时间的延长而增加,Tunel法检测晚期凋亡细胞,其凋亡率亦随作用时间的延长而增大.结论:余甘子叶化学成分没食子酸能抑制BEL-7404细胞的增殖并诱导其产生凋亡,其对BEL-7404细胞的凋亡影响呈时间依赖性.     

镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究

目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.     

齐墩果酸诱导人肝癌Bel-7402细胞G2/M期阻滞及凋亡的机制研究

该研究旨在探讨齐墩果酸在诱导Bel-7402肿瘤细胞凋亡过程中,细胞周期分布的变化及其相关的分子机制。采用MTT法、台盼蓝拒染试验检测齐墩果酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;PI单染检测细胞周期;Annexin V-FITC双染法观察细胞凋亡;Western blot法检测周期调控蛋白以及凋亡相关蛋白表达的变化。结果显示齐墩果酸能显著抑制Bel-7402肝癌细胞株增殖,G₂/M期的细胞比例显著升高,而G₁期细胞明显减少,明显增加细胞凋亡率;同时下调细胞周期蛋白cyclin B1,使蛋白磷酸酶Cdc25C(Ser216)磷酸化而失去活性、引起Cdk1(Tyr15)以及蛋白激酶Chk1的磷酸化水平升高。OA也可上调p21水平导致细胞周期阻滞在G₂/M期;此外Bcl-2表达减少,Bax,Cyt c表达增加,cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白表达增加。以上结果提示齐墩果酸能明显抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,可能是通过激活凋亡线粒体信号通路而实现的。     

告达庭诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用

目的：观察Caudatin体外对人肝癌细胞SMMC7721的作用。方法：采用MTT法测定不同浓度的Caudatin作用于SMMC7721细胞24，48和72h对其生长的抑制作用。用流式细胞仪以PI单染检测细胞周期、以Annexin V／PI双染检测细胞凋亡，比色法测定Caspase-3酶活力。结果：Caudatin体外能抑制人肝癌细胞SMMC7721的增殖并呈明显的时间和剂量依赖性。Caudatin体外能诱导SMMC7721细胞凋亡，并使细胞周期阻滞于G0／G1期。Caspase-3的酶活力随着Caudatin体外作用时间的延长先升高并于8h达到最大，再随时间的变化而降低。结论：Caudatin体外能显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长，其抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期于G0／G1期，并通过激活Caspase-3诱导肿癌细胞凋亡有关。     

Kaempferitrin induces apoptosis via intrinsic pathway in HeLa cells and exerts antitumor effects

Ethnopharmacological relevance

Justicia spicigera is used for the empirical treatment of cervical cancer in Mexico. Recently, we showed that Justicia spicigera extracts exerted cytotoxic and antitumoral effects and the major component of this extract was kaempferitrin (KM).

Materials and methods

The cytotoxic and apoptotic effect of KM on human cancer cells and human nontumorigenic cells were evaluated using MTT and TUNEL assays, and Annexin V/Propidium iodide detection by flow cytometry. The effect of KM on cell cycle was analyzed by flow cytometry with propidium iodide. The apoptotic and cell cycle effects were also evaluated by western blot analysis. Also, different doses of KM were injected intraperitoneally daily into athymic mice bearing tumors of HeLa cells during 32 days. The growth and weight of tumors were measured.

Results

KM induces high cytotoxic effects in vitro and in vivo against HeLa cells. The general mechanisms by which KM induces cytotoxic effects include: cell cycle arrest in G1 phase and apoptosis via intrinsic pathway in a caspase dependent pathway. Also, KM exerts chemopreventive and antitumor effects.

Conclusion

KM exerts cytotoxic and antitumor effects against HeLa cells.     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用

目的 研究狗舌草提取物对U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用.方法 U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI.结果 狗舌草总提取物影响266细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡细胞增加,用AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系.结论 狗舌草提取物对U266细胞有诱导细胞凋亡作用.     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用

目的 研究狗舌草提取物对U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用.方法 U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI.结果 狗舌草总提取物影响266细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡细胞增加,用AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系.结论 狗舌草提取物对U266细胞有诱导细胞凋亡作用.     

狗舌草提取物对多发性骨髓瘤U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用

目的 研究狗舌草提取物对U266细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI的作用.方法 U266细胞株与狗舌草提取物共同培养,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡标志物AnnexinV/PI.结果 狗舌草总提取物影响266细胞周期,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,凋亡细胞增加,用AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测,均显示细胞凋亡与狗舌草提取物有剂量依赖关系.结论 狗舌草提取物对U266细胞有诱导细胞凋亡作用.     

莪术提取物诱导人脑恶性胶质瘤CHG-5细胞凋亡的实验研究

目的观察莪术提取物（莪术醇）对人脑恶性胶质瘤CHG-5细胞的生长抑制作用,探讨莪术提取物诱导人脑恶性胶质瘤细胞凋亡、影响细胞增殖的机制。方法应用人工培养CHG-5细胞,配制不同质量浓度的莪术提取物作用于该细胞;经过一定时间后,利用倒置显微镜观察CHG-5细胞的生长状态及形态学变化情况;采用MTT法检测莪术提取物对CHG-5细胞的生长抑制作用;丫啶橙染色观察药物作用下对细胞形态的改变及对凋亡的影响;采用AnnexinV—FITC／PI双染色法检测凋亡,而细胞周期进程的变化及凋亡率则采用流式细胞仪技术检测。根据实验及统计分析结果分析莪术提取物与其原癌细胞株CHG-5之间的关系及临床意义。结果莪术醇对人脑恶性胶质瘤CHG-5细胞增殖表现抑制效应,显示为浓度依赖性与时间依赖性（P均〈0．05）;莪术醇的浓度可以影响人脑恶性胶质瘤CHG-5细胞密度、形态;莪术醇可以增加人脑恶性胶质瘤CHG-5细胞的凋亡,显示出浓度依赖性（P〈0．05）。蛄论莪术提取物对CHG-5细胞的生长具有抑制作用,其强度与药物浓度和作用时间呈正相关。莪术提取物对CHG-5细胞的凋亡具有诱导作用,随着时间和剂量的增加,凋亡率也随之增加。莪术提取物影响CHG-5细胞的周期分布,于G1／s期阻滞细胞周期的进程,这可能是莪术提取物影响肿瘤的发生及发展机制。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。