α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞株U937细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞U937细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting检测cyclinA2和cyclinD1蛋白质表达。结果α-干扰素和(或)脂多糖组较对照组能显著地抑制U937细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05);α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素、脂多糖组能显著抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05),能够显著下调CyclinA2蛋白质表达、上调CyclinD1蛋白质表达(P<0.05)。结论α-干扰素与脂多糖对U937细胞的增殖抑制、细胞凋亡和G1期细胞的比例有协同增强作用,其机制可能与细胞周期素Cy-clinA2、CyclinD1蛋白的调节有关。     

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对HL-60细胞caspase-3基因表达的影响

目的　观察胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对HL 60细胞caspase 3基因表达的影响 ,进一步探讨其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制。方法　 4、8、16μmol/LLOV处理HL 60细胞 1～ 4d后 ,MTT比色法及生长曲线测定检测细胞增殖效应 ,流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率 ,DNA梯形带检测观察细胞的凋亡效应 ,RT PCR及Westernblot方法分别分析LOV对HL 60细胞caspase 3mRNA、caspase 3蛋白表达的影响。结果　LOV能显著抑制HL 60细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,细胞凋亡率增加 ,有凋亡特征性的DNA梯形带出现 ;LOV能上调HL 60细胞cas pase 3蛋白表达 ,但对caspase 3mRNA表达无明显影响 ,该作用呈剂量 效应和时间依赖关系。结论　LOV对HL 60细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用 ,LOV能上调HL 60细胞caspase 3蛋白表达 ,推测这可能是LOV抑制HL 60细胞增殖并诱导其凋亡的重要分子机制。     

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡的影响.方法 采用流式细胞计数检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制作用.结果 随着2-甲氧雌二醇的浓度增高,HL60白血病细胞的增殖受到抑制,对照组凋亡率为(1.2±0.3)%,实验组2-ME2 10μmol/L为(9.7±2.1)%,2-ME2 30μmol/L为(11.6±3.0)%,2-ME2 50μmol/L为(15.8±2.9)%.白血病细胞凋亡明显增加.结论 2-ME对IK60细胞增殖有抑制及促凋亡作用.     

三氧化二砷增强ST1571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨ST1571联合三氧化二砷(arsenie trioxide，ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察ST1571和ATO对CMI，细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 ST1571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡，并使细胞阻滞于G2／M期；当两药物联合运用时，明显增强对K562细胞增殖的抑制作用，细胞凋亡率也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强ST1571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2／M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

干扰素对U937细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨干扰素α对白血病U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的U937细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR—ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 干扰素α可显的降低U937细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论 干扰素α能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

苦参碱抑制U937细胞增殖与诱导凋亡的体外实验研究

目的 探讨苦参碱对U937细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 U937细胞培养:在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中传代培养,细胞处于对数生长期时加药;通过细胞生长曲线、细胞形态、MTT实验、细胞周期测定、乳酸脱氢酶(LDH)活性测定方法观察苦参碱对U937细胞的诱导凋亡与增殖的影响.结果 与对照组相比,0.2～1.0 mg/mL的苦参碱均显著抑制U937细胞的生长(P＜0.01),且苦参碱对U937细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性,苦参碱作用U937细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.4 mg/mL;随细胞增殖LDH比活性相应上升,与对照组相比,0.2、0.3 mg/mL苦参碱组LDH比活性均明显降低(P均＜0.01),苦参碱作用浓度越高,LDH比活性降低越明显;0.2～1.0 mg/mL苦参碱可使U937细胞发生S期阻滞,且随苦参碱浓度增加,G0/G1期细胞减少和S期细胞增多越明显(P＜0.01).结论 0.2～1.0 mg/mL苦参碱对U937细胞具有诱导凋亡与增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖关系.     

姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞增殖的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞系KG-1α增殖的影响及其可能机制。方法 姜黄素和阿扎胞苷单独或联合处理KG-1α细胞,CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白以及p-AKT蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,单用姜黄素和阿扎胞苷均对KG-1α细胞增殖有抑制作用,呈时间浓度依赖性,联合用药组细胞增殖抑制率明显增加;流式细胞术结果显示,联合用药组细胞明显阻滞于S期,凋亡率明显高于对照组和各单药组（P<0.05）;Western blot结果显示,与对照组相比,联合用药组p-AKT、CDK2蛋白表达水平显著降低,p27 KIP1、Caspase-3和γH2A.X蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论 姜黄素联合阿扎胞苷可明显抑制KG-1α细胞增殖,其机制可能与下调AKT磷酸化水平有关     

苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

中药厚朴提取物对人白血病细胞作用初探

目的:研究中药厚朴提取物和厚朴酚与厚朴酚对白血病细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:用MTT、Annex-inV、凋亡DNA Ladder等实验,观察和厚朴酚与厚朴酚对白血病K562、HL-60和U937细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用。结果:和厚朴酚实验组对K562、HL-60和U937有增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖性,且对K562、HL-60和U937有诱导凋亡作用;厚朴酚对HL-60有增殖抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,但与和厚朴酚联合用药无协同作用。结论:和厚朴酚与厚朴酚对白血病细胞株均有增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,但二者之间无联合协同作用。     

正常人骨髓成纤维样基质细胞系对白血病细胞U937增殖的影响

目的 :观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病细胞U937增殖的影响 .方法 :采用免疫组化对HFCL细胞进行鉴定 .建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;HE染色和瑞氏 吉姆萨染色后进行分裂指数 (MI)测定 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期的变化 ;WesternBlot检测增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 .结果 :与单独U937细胞培养相比 ,与HFCL细胞共培养后 ,U937细胞生长受抑 ,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用transwell组 .其分裂指数单独白血病细胞组 >用transwell组 >与HFCL直接接触组 .细胞周期分析发现U937细胞与HFCL细胞共培养后 ,G1期细胞增高 ,S期细胞减少 ,以直接接触组为甚 .与HFCL细胞共培养后 ,U937细胞的PCNA表达下调 ;而与U937细胞共培养 ,HFCL细胞生长和细胞周期无明显变化 .结论 :正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病细胞U937的增殖 ,阻止U937细胞细胞周期的运行 ,而U937细胞对HFCL细胞的生物学特性影响不大     

半胱氨酸蛋白酶在EPA和DHA抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的探讨ω3多不饱和脂肪酸抑制HL60细胞增殖与半胱氨酸蛋白酶(caspases)之间的关系。方法用6.0×10-5mol/L二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸处理HL60细胞,运用MTT比色法、流式细胞仪分析ω3脂肪酸对HL60细胞增殖能力和凋亡的影响,RTPCR和免疫印迹技术分析细胞caspase3、caspase8基因的表达变化,激酶活性分析检测caspase8活性。并观察caspases特异性抑制剂对ω3脂肪酸引起的HL60细胞生长抑制的拮抗作用。结果HL60细胞经ω3多不饱和脂肪酸处理后,细胞增殖能力减弱,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,并检测到约6%的凋亡率,caspase3、caspase8基因表达增加,caspase8活性升高。caspases抑制剂可以部分拮抗ω3脂肪酸对HL60细胞的增殖抑制作用。结论ω3脂肪酸可以抑制HL60细胞增殖,并诱导细胞凋亡,而上调caspases的表达和/或活性可能在此过程中发挥重要作用。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞株增殖的影响

目的　研究二烯丙基二硫 (DADS)对人白血病细胞HL - 60的作用并探讨其作用机理。方法　采用MTT法、生长曲线绘制、流式细胞仪、免疫组化等方法 ,观察DADS对体外培养的HL - 60细胞的生长抑制、细胞周期分布以及PCNA表达的影响。结果　DADS对HL - 60细胞具有明显的生长抑制效应且呈剂量 -效应依赖关系 ,当 2 0mg·L- 1 DADS作用HL - 60细胞 72h ,增殖抑制率达 70 .5 %。流式细胞仪检测结果提示 :DADS处理后的HL - 60细胞主要停滞于S +G2 /M期 ,同时出现亚G1 峰 ;免疫组化结果显示 :DADS处理后的HL - 60细胞PCNA表达下降。结论　DADS对体外培养的HL - 60细胞具有明显的增殖抑制作用 ,DADS抑制HL - 60细胞增殖与细胞周期S +G2 /M期阻滞和促进凋亡有关     

2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡以及bcl-2表达的影响

目的探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法运用MTT法和流式细胞术检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制及促凋亡作用,应用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达。结果随着2-ME浓度的升高,各项指标与对照组相比较的差异均有统计学意义（P〈0．01）;HL60细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当2-ME浓度为50μmol／L时,细胞凋亡率达65．8％;30μM2-甲氧雌二醇作用72h后的细胞,bcl-2蛋白的表达较对照组显著减少。结论2-甲氧雌二醇具有对HL60白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用,bel-2蛋白表达下调在此过程中可能发挥着重要的作用．     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期.     

PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期.     

伯舒替尼诱导急性髓系白血病细胞分化和细胞凋亡

目的 探讨伯舒替尼对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、THP-1和U937细胞分化和凋亡的影响及其作用机制.方法 伯舒替尼0～20 μmol/L处理HL-60、THP-l和U937细胞48 h,MTT法检测细胞增殖;伯舒替尼0～5 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,流式细胞仪检测细胞CDllb表达;伯舒替尼O～10 μmol/L处理HL-60、THP-1和U937细胞72 h,胱天蛋白酶(caspase)广谱抑制剂benzyloxy-carbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethyl-ketone (Z-VAD-FMK)预处理lh后加入伯舒替尼处理U937细胞48 h,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;不同浓度伯舒替尼(0～5 μmol/L)分别处理HL-60和U937细胞24 h后,Western印迹法检测细胞分化相关转录因子C/EBPβ、P21和c-Myc以及凋亡相关分子Mcl-1、Bax和Caspase 3蛋白表达的改变.结果 伯舒替尼剂量依赖性抑制AML细胞增殖.与空白对照组相比,不同浓度伯舒替尼处理AML细胞72 h后,细胞CDllb表达和细胞凋亡率均明显增加(P＜0.05或P＜0.01).伯舒替尼处理HL-60细胞有效上调C/EBPβ和P21的蛋白表达水平,引起U937细胞Mcl-1表达降低和Bax表达增强,并激活caspase 3,而Z-VAD-FMK预处理U937细胞显著抑制伯舒替尼诱导的细胞凋亡.结论 伯舒替尼可有效抑制AML细胞增殖,诱导细胞分化和促进其凋亡,可作为有效治疗AML的潜在药物.