GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响

目的:观察三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响。方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P<0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P<0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P<0.01)。结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用。     

低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响

目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响。方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度。结果:LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1μg/μlLPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1μg/μl组明显(P<0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05μg/μl组,P<0.05;0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025~0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1μg/μl组,P<0.01),钙离子未见明显变化(P>0.05)。结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受。     

脂多糖对PC12细胞环氧合酶-2表达的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对PC12细胞环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法:采用LPS(200 μg/L)刺激培养的PC12细胞(0.5、1、2、4 h)后,以免疫细胞化学染色分别检测0.5、1、2、4 h各时间点COX-2的免疫反应活性,进一步选择COX-2免疫反应活性表达最高时间点进行Western blot检测.结果:在正常培养的PC12细胞中,细胞无或呈浅棕黄色染色;LPS刺激培养的PC12细胞后,0.5 h检测到COX-2的免疫反应活性,1 h后免疫反应活性增强,2 h时达到高峰,4 h时开始降低;Western blot结果分析COX-2免疫反应活性的最高点(2 h),与对照组相比较,经LPS刺激2 h,PC12细胞COX-2 Western blot分析的阳性信号明显增强(P<0.01).结论:LPS可诱导培养的PC12细胞中COX-2一过性高表达.     

缺糖损伤的PC12细胞中grp75基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时应激基因葡萄糖调节蛋白(grp75)的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR、Western blot 和细胞免疫化学法分析缺糖损伤时grp75的表达情况.结果 RT-PCR结果显示细胞缺糖损伤3h起grp75基因转录水平已显著增高,并在缺糖后3～24h间持续上升;蛋白印迹法和细胞免疫化学法证实grp75在细胞缺糖过程中蛋白水平的表达明显高于对照组,且随着缺糖时间推延而进一步升高.结论缺糖损伤时,细胞中的应激基因grp75特异性上调表达.     

Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase-3活力检测等方法，了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF、和RPMI1640作对照。结果 培养细胞的突起生长数量和长度、M1TT微量比色的A值、AnnexinV—PE／7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标，在NRF组和NGF组问无明显差异；而与窄白对照组间差异有显著性意义。结论 神经再生素对低血清培养下PCI2细朐的凋亡有抑制作用。     

PC12细胞缺糖损伤过程中凋亡相关基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时凋亡相关基因bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR法分析PC12细胞有糖和无糖条件下bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达情况.结果细胞缺糖损伤6-16hbcl-2基因、bcl-xl基因、c-myc基因表达量显著增高,此后表达量逐渐下降.结论缺糖损伤早期,凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xl、c-myc上调表达产生细胞应激保护效应.     

吗啡抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)增殖

目的：探讨吗啡对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞增殖的影响及作用机制。方法: 应用MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期。RT-PCR及免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果: 10 μmol/L吗啡对PC12细胞的增殖有抑制作用,G₁期细胞增多，S期细胞减少。24 h PCNA mRNA表达开始低于对照组(P<0.05),48 h和72 h明显降低(P<0.01)。免疫细胞化学也显示PCNA表达量降低(P<0.05)。纳洛酮具有逆转吗啡降低PCNA表达的作用。结论:吗啡可能通过μ受体降低PC12细胞PCNA表达，进而抑制细胞增殖。     

肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组：正常对照组;损伤组;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠;肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等。结果表明：在保护组,MTT的测定结果高于损伤组,LDH低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。     

星形神经胶质细胞对PC12细胞生长发育的影响

在神经系统的生长发育过程中 ,星形胶质细胞对神经元生长发育的作用是一项重要的研究课题。本文以体外培养的 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞与 PC12神经元按不同细胞数目比例 ( 5 0∶ 1～ 1∶ 1)共同培养 ,并用其制备的条件培养液培养 PC12细胞 ,用快速灵敏的 MTT比色法测定 PC12神经元的细胞活力 ,用光学相差显微镜观察 PC12细胞形态学变化。结果显示 ,星形胶质细胞条件培养液可增强 PC12细胞活力 ( MTT测定的 OD值由 0 .2 5 5± 0 .0 12提高到 0 .5 10± 0 .0 3 6,P<0 .0 0 1,且细胞折光性较对照组强 ) ,却不能促使 PC12神经元突起的生出。将星形胶质细胞与 PC12细胞按 3 0∶ 1～ 1∶ 1的比例共同培养时 ,既可提高 PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长 ;如按 5 0∶ 1～ 40∶ 1的比例共同培养时 ,只观察到提高 PC12细胞折光性和光晕 ,而无促使其突起生长发育的作用。本文结果提示 ,PC12神经元细胞活力的提高与星形胶质细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关 ,而 PC12神经元突起生长发育可能是和与星形胶质细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关。     

RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的:探讨RANTES对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用MPP~+处理PC12细胞建立帕金森细胞模型,并分别转染RANTES siRNA和pcRANTES,MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blot检测总Akt(t-Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果:RANTES siRNA显著抑制RNATES的表达,而pc DNA RANTES成功使RNATES过表达;过表达RNATES可显著上调MPP~+处理的PC12细胞增殖(P0.05),并抑制MPP~+诱导的PC12细胞凋亡(P0.05),下调cleasved caspase-3蛋白表达水平(P0.05)。此外,过表达RANTES可显著促进p-Akt/t-Akt蛋白表达水平(P0.05),且PI3K/Akt通路抑制剂LY294002显著抑制RNATES对PC细胞增殖的促进作用和凋亡的抑制作用(P0.05)。结论:RANTES可通过PI3K/Akt信号通路促进MPP~+处理的PC12细胞的增殖并抑制细胞的凋亡。     

促血小板生成素对化学性缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究促血小板生成素(TPO)对化学性缺氧诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的影响及保护作用。方法:将PC12细胞进行相应实验处理,分为对照组、氯化钴(Co Cl2)处理组、Co Cl2+TPO组及TPO对照组。检测各组PC12细胞的存活率并用Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测细胞凋亡率,线粒体膜电位的变化及细胞内活性氧簇的变化。结果:化学性缺氧模拟剂Co Cl2可以明显抑制PC12细胞的生长(P0.01);与对照组比较,Co Cl2组的细胞凋亡率明显升高(P0.05),而Co Cl2+TPO组的细胞凋亡率显著低于Co Cl2组(P0.05);TPO能减少细胞内活性氧簇生成以及抑制细胞线粒体膜电位的降低(P0.01)。结论:TPO能对抗Co Cl2缺氧所致的细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,发挥细胞保护作用。     

红藻氨酸诱导PC12细胞凋亡及阿魏酸对神经元的保护作用

 目的： 探讨阿魏酸(ferulic acid, FA)对红藻氨酸(kainic acid, KA)诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用50 μmol/L KA诱导PC12细胞凋亡建立阿尔茨海默病神经细胞模型,然后将处理后的PC12细胞分为KA模型组和KA＋FA (25、50和100 μmol/L)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常对照组。采用MTT比色法检测PC12细胞的存活率;采用免疫细胞化学法观察PC12细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和细胞色素C (Cyt C)的表达;annexin Ⅴ+PI双染流式细胞术检测PC12的细胞凋亡率;蛋白免疫印记技术检测PC12细胞中Bcl-2、Bax和Cyt C的表达水平。结果：MTT法和免疫细胞化学检测显示,与正常组相比,模型组PC12细胞的存活率明显下降,且细胞中Bcl-2表达减少(P<0.01),而Bax和Cyt C表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),流式细胞术检测细胞的凋亡率显示,模型组细胞的凋亡率显著上升(P<0.01)。蛋白印迹术检测显示,模型组细胞中Bcl-2表达量减少,Bax和Cyt C表达量升高,与正常组比较差异显著(均P<0.01)。当采用FA干预后,与模型组相比,25、50和100 μmol/L组细胞的存活率明显上升,细胞凋亡率减少,而且能增加Bcl-2阳性百分率和表达水平,明显减少Bax和Cyt C阳性百分率和表达水平,使Bcl-2/Bax比值增加 (P<0.05或P<0.01)。结论：KA在50 μmol/L时可明显诱导PC12发生凋亡,FA在25～100 μmol/L时能显著抑制KA诱导的PC12细胞凋亡,其神经保护机制可能是通过抑制Bax和Cyt C的表达,升高Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路而提高神经细胞的存活率。     

p-Nonylphenol induces endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosis in neuronally differentiated PC12 cells

Endocrine disrupting chemicals (EDCs) induce estrogenic phenotypes in sexual organs and cells by chronic stimulation through binding to estrogen receptors. Although cell death may be induced instead of phenotypic change by EDCs in germ cells, the mechanism of the effect of EDCs in neuronal cells is still obscure. Here we report that p-nonylphenol, one of the EDCs, induced apoptosis with up-regulation of glucose-regulated protein 78 (GRP78) expression and activation of caspase-12, which are involved in endoplasmic reticulum (ER) stress specific phenomena, in NGF-treated neuronally differentiated PC12 cells. Moreover, we observed that p-nonylphenol increased the intracellular Ca(2+) concentration and p-nonylphenol-induced apoptosis was prevented when BAPTA-AM, a membrane-permeable Ca(2+) chelator, was added. Intriguingly, we also discovered that decreased phosphorylation of ERK1/2 was induced by p-nonylphenol in the presence of NGF, whereas p-nonylphenol alone did not induce phosphorylation of ERK1/2. These lines of evidence suggest that p-nonylphenol can induce ER stress-mediated apoptosis via increased intracellular Ca(2+) concentration, and can reduce ERK1/2 phosphorylation to attenuate the cell survival effect of NGF, in neuronally differentiated PC12 cells.     

二苯乙烯苷通过抑制ROS减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测...