中国人FⅧ基因内XbaI多态性研究与甲型血友病基因诊断

本文研究了中国人FⅧ基因22内含子中限制酶XbaⅠ的多态性。在83个中国人的79条无遗传关系的X染色体中,该多态性位点出现的频率为0.56,提供的多态性信息量为0.49。利用RFLP法,分析了17个甲型血友病家系,其中14个家系可以用此RFLPs进行基因诊断。认为核RFLPs作为FⅧ基因内的多态性遗传标志,在甲型血友病基因携带者检出和胎儿出生前诊断中具有重要的应用价值。     

甲型血友病基因诊断的研究

甲型血友病是最常见的遗传性凝血系统疾病,由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所致,为X连锁隐性遗传。发病率为1/4,000～10,000新生男婴,占全部遗传性凝血系统疾病总数的3/4。临床表现为频发的关节及软组织出血,重型患者完全丧失劳动能力,甚至死亡。目前尚无根治办法。因此对该病进行有效的遗传控制,防止患儿出生是十分必要的。血液学和免疫生物学检查可以确定甲型血友病患者,但对携带者的确定和高危胎儿出生前     

凝血因子Ⅷ基因内Bcl Ⅰ多态性的研究及其在甲型血友病产前基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最为常见的遗传性凝血疾病,是由于凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所致。以克隆的 FⅧ DNA片段为探针对中国人FⅧ基因内的Bcl Ⅰ多态性及其在甲型血友病基因探测中的应用进行研究。利用这一多态性为遗传标志,成功地进行了1例甲型血友病高危胎儿的产前基因诊断。     

甲型血友病携带者的PCR—RFLP检测

目的 探讨甲型血友病携带者的基因诊断方法。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性酶切片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析技术,对５个甲型血友病家系的２９名成员进行了ＦⅧ基因外显子１８和内含子２２两个多态位点的扩增片段限制酶切长度多态性连锁分析。并对其中的１个家系进行了产前基因诊断。结果 ５个家系中有５名女性被确定为携带者,１个家系的男性胎儿被确定为病人。结论 ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法可对多数甲型血友病进行     

非凝血因子Ⅷ基因内含子22倒位型血友病A家系11例产前诊断

目的:探讨用多态性位点分析进行非凝血因子Ⅷ基因内含子22倒位型血友病A产前诊断.方法:用PCR-琼脂糖电泳、PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳、PCR-限制性酶切片段长度多态性等方法,选择FⅧ基因内BclⅠ位点、XbaⅠ位点、CA-13、CA-22,FⅧ基因旁侧DXS52(ST14)和DXS15位点,对11例非凝血因子Ⅷ基因内含子22倒位型血友病A家系进行产前诊断.结果:11例非凝血因子Ⅷ基因内含子22倒位型血友病A家系均可通过使用6个多态位点进行产前诊断,其中4例家系胎儿为血友病患者的可能性大,选择了引产,另7例家系胎儿为健康个体的可能性大,出生后经诊断均健康.结论:检测FⅧ基因内、外多个多态性位点可对非凝血因子Ⅷ基因内含子22倒位型血友病A家系进行高效、快速的产前诊断.     

中国人St14/Taq I RFLPs及其在产前诊断中的应用

血友病A是人类最常见的遗传性出血性疾病,大约10,000名出生男婴中有一人受累。病因是凝血第Ⅷ因子基因缺陷。我们用与FⅧ基因紧密连锁的一段基因外DNA克隆St14为基因探针对FⅧ基因的TaqⅠ多态性进行了研究。利用这一多态性为遗传标志,成功地进行了一例血友病A高危胎儿的产前基因诊断。     

甲型血友病携带者的PCR-RFLP检测

①目的　探讨甲型血友病携带者的基因诊断方法。②方法　应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）结合限制性酶切片段长度多态（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ）分析技术,对５ 个甲型血友病家系的 ２９ 名成员进行了 ＦⅧ基因外显子 １８ 和内含子 ２２ 两个多态位点的扩增片段限制酶切长度多态性连锁分析。并对其中的１ 个家系进行了产前基因诊断。③结果　５ 个家系中有 ５ 名女性被确定为携带者,１ 个家系的男性胎儿被确定为病人。④结论　 Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ方法可对多数甲型血友病进行基因诊断。     

应用FⅧ基因RFLP对甲型血友病的连锁分析

甲型血友病(hemophiliaA)是先天性凝血障碍中最常见的一种出血性疾病,由凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷所导致的X—连锁隐性遗传病。临床上对甲型血友病的治疗,携带者检测和产前诊断尚无满意方法。现已知FⅧ基因定位于Xq28,国     

采用FVⅢ基因内三个多态性标志检测血友病A携带者及其产前诊断

目的 采用FVⅢ基因内BclⅠ（intron18），XbaⅠ（intron22），HindⅢ（intron 19）三个多态性标志对血友病A家系进行连锁分析，对可能携带者进行检测并对血友病A高危胎儿进行产前诊断。方法 通过PCR扩增FVⅢ基因内含BclⅠ（intron 18），XbaⅠ（intron22），Hindm（intron19）位点的相应片段后，分别用限制性内切酶BclⅠ，XbaⅠ，HindⅢ酶解，对7个血友病A家系进行多态性分析。对有多态性意义者进行携带者检测和产前诊断。结果 结合FVⅢ基因内标志BclⅠ（intron18），XbaⅠ（intron22），HindⅢ（intron19）．对7个血友病A家系进行分析，4个家系至少有一个标志以上有意义，从而对5名可能携带者进行了检测．并对3个血友病A的高危胎儿进行了产前诊断。结论 结合三个基因内的多态性标志，对血友病A家系进行分析，是临床上简便及可靠的携带者检测及产前诊断方法。     

应用凝血因子Ⅷ基因多态性产前诊断血友病甲

以凝血因子Ⅷ重组基因克隆 FⅧ_(E18—st14)为探针,用限制性内切酶 Taq I 酶解后所产生的限制性片段长度多态性(RFLP)连锁分析,成功地对1例血友病甲高危胎儿进行了产前基因诊断,排除了血友病甲的可能,使妊娠得以继续进行。另外,对该家系的血友病发病机制进行了分析与探讨。     

Determination of fetal sex by amplification of Y-chromosome-specific DNA

This paper describes a rapid and highly sensitive method for determination of fetal sex. Y-chromosome-specific sequences as well as Alu-specific sequences were amplified with polymerase chain reaction (PCR). Then fetal sex was determined by comparison of the two amplified DNA sequences. Polymerase chain reaction can be performed on lysed amniotic fluid cells or chorionic villus samples or dried blood spots on filter paper blot without prior DNA extraction. The analysis of the amplified DNA was performed immediately by agarose gel electrophoresis without DNA hybridization with radioactive probe. By using this method, determination of sex was performed on 3 fetuses at risk for DMD, and on 2 fetuses at risk for hemophilia, prenatal detection was confirmed by examination of the neonates.     

Gene diagnosis of hemophilia A

Hemophilia A is the most common inherited bleeding disorder in man. The disease is caused by a deficiency in the gene for factor VIII. A genetic marker in the form of RFLP within or tightly linked to the factor VIII gene may serve as a tag for the hemophilia gene, thus allowing both accurate carrier detection and earlier prenatal diagnosis. Five RFLP (BclI/FVIII-e18, XbaI/FVIII-i22, BclI/St14, TaqI/St14 and BglII/DX13), which are related to hemophilia gene, were studied. The frequencies of allele of TaqI/St14 and BglII/DX13 in Chinese are obviously different from those in Caucasian. By the use of RFLP, 21 families with hemophilia A were analysed. The feasibility and strategy of gene diagnosis of hemophilia A by the use of RFLP are discussed.     

Polymorphism of DXS102 locus in Chinese population and its application to gene diagnosis in hemophilia B family

OBJECTIVE: To establish the polymorphism of DXS102 locus from Xq26.3-27.1 in Chinese population for the gene diagnosis in Hemophilia B family. METHODS: DNA was extracted from blood samples obtained from Shanghai unrelated volunteer donors with phenol-chloroform method. A total of 23x chromosomes (154 from females, 80 from males) were studied. A hemophilia B family in which a hemophilia B patient has received gene therapy was analyzed. The polymorphism of DXS102 locus in Chinese population was determined with amplified fragment length polymorphisms assay (Amp-FLP), denaturing polyacrylamide gel electrophoresis, silver stain detection. Short tandem repeats (STRs) linkage analysis was used to conduct gene diagnosis in hemophilia B family. RESULTS: Eight alleles were found at DXS102 locus, of which two alleles were first reported. The repeated number of AC dinucleotide ranges from 13 to 21. And the values of the observed heterozygosity, calculated heterozygosity and polymorphism information content(PIC) were 0.87, 0.80, 0.80 respectively. It was also found that the difference of the allele frequencies of DXS102 in Chinese and European populations was significant. By using the linkage analysis of the DXS102 locus, a family with a hemophilia B patient receiving gene therapy in 1994 was analyzed and meanwhile a carrier in that family was then detected. CONCLUSIONS: The polymorphism of DXS102 locus reveals significant difference between Chinese and European populations. DXS102 locus can be used as a promising marker for gene diagnosis in hemophilia B family.     

甲型血友病产前基因诊断

本文报告16例有甲型血友病患儿生育史或家族史的孕妇及其胎儿的基因连锁分析结果。16位孕妇中2人经基因诊断不携带血友病基因;1人不排除携带状态,但其女性胎儿可诊断为正常。其余13例胎儿中女性7例,4例为携带者,3例正常;男性6例,3例患儿,3例正常。     

胎儿有核红细胞在DMD产前基因诊断中的应用

目的探讨胎儿有核红细胞（FNRBCs）在DMD产前基因诊断中的可行性。方法对6例进行性肌营养不良症携带者孕妇（孕12～18周）抽取外周血进行密度梯度离心，富集胎儿细胞，在显微操作下吸取胎儿有核红细胞。对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别。将其应用于DMD产前诊断中，并与用羊水进行产前诊断比较。结果SRY片段经PCR后，3例男性胎儿可见特异性条带，3例女性胎儿未见此电泳条带。母体外周血FNRBCs的DNA产前诊断中，2例为女性正常胎儿，1例为女性携带者，2例为正常男性胎儿，1例为DMD患儿，结果与用羊水进行产前诊断和产后个体性别证实一致。结论密度梯度离心结合显微操作方法分离FNRBCs能用于性别鉴定和遗传病的产前诊断。     

应用PCR-SSCP分析技术检测苯丙氨酸羟化酶基因突变和多态

应用聚合酶链式反应—单链构象多态分析(PCR-SSCP分析)技术检测苯丙酮尿症患者和正常人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7。在9例苯丙酮尿症患者中检出3例为突变纯合子,在正常人和苯丙酮尿症患者中均检出DNA多态。研究结果对苯丙酮尿症的基因诊断和突变基因分析有重要应用价值。     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的 建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法 对30例孕7～41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应,特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点,扩增片段的大小为149bp。30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板,进行聚合酶链反应。结果 20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带,检出率为85.0％。10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带,无假阳性结果。本研究中早、中、晚孕期性别符合率分别为80％,80％,90％,总符合率为85.0％。结论 用酚氯仿法提取血浆中的DNA,可以提高模板的浓度和纯度,可改善PCR条件,提高结果的准确性。     

联合运用四种技术进行血友病A的基因诊断

目的：最大限度地提高血友病A（HA）患者及家系成员的基因诊断、携带者检出及产前诊断的可诊断率。方法：对于26例HA患者和家系的女性家属首先采用长距离DNA扩增（LD-PCR）技术,直接检测是否为FⅧ基因倒位及其携带者;对于非倒位的HA家系依次采用Bcl I PCR/RFLP分析技术、基因内含子13（CA）n、内含子22（GT）n(AG)n二核苷酸重复序列多态性分析技术以及与FⅧ基因紧密连锁的可变串联重复序列多态性分析技术（St14 VNTR/PCR)进行间接诊断。结果：在26个HA家系的16个重型家系中查出7个基因倒位,占重型HA的43.8%。19个非倒位HA家系,用上述三种间接诊断技术分别有16、13及17个HA家系可以作出诊断,可诊断率分别为84.2%、68.4%和89.5%,联合上述四种技术,对26个HA家系全部作出了诊断。结论：联合采用四种基因诊断技术,几乎可以为所有有家庭史的HA家系作出基因诊断及携带者检出。     

从母血细胞和血浆提取胎儿DNA效率的比较研究

目的:通过比较全血和血浆中提取的胎儿DNA对诊断结果的影响,寻找最适的非创伤性产前诊断的方法。方法:取28例13-40孕周的孕妇外周血4 ml,等量分装于2个不同的采血管内,分别从两种不同的途径制备模板DNA,采用改良的聚合酶链反应(PCR)技术,对胎儿DYZ-1基因进行产前检测。以出生后直接观察结果作为对照。结果:23例孕育男性胎儿孕妇,从全血和孕妇血浆中提取DNA的DYZ-1基因检出率分别为65%和96%,5例孕育女性胎儿孕妇,没有1例出现假阳性结果。结论:血浆游离DNA直接分析法的检出率相对高于外周血细胞DNA模板制备法,血浆中游离DNA是极为适合的材料来源。     

用微卫星DNA多态性进行血友病甲基因诊断的研究

目的 :研究FⅧ基因 13内含子 (CA)n重复序列 (CA 13)、2 2内含子 (CA)n重复序列 (CA 2 2 )及基因旁微卫星DNADXS15位点的多态性在血友病甲基因诊断中的应用价值。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(测序胶 )的方法 ,检测了三个血友病甲家系共 12名成员X染色体CA 13、CA 2 2、DXS15的长度变化 ,并进行连锁分析结果 :三个家系均得到诊断 ,并检出一名携带者。结论 :用微卫星多态性进行血友病甲基因诊断 ,方法简便可行 ,有望成为血友病甲基因诊断的新方法