缺氧诱导因子-1α及下游因子在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺内的表达研究

目的 通过了解缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、内皮素-1（ET-1）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA及蛋白质在缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺组织中的表达以及和肺动脉压力的关系,探讨三种因子在HPH发病机制中的作用.方法 建立HPH新生大鼠模型;分别在缺氧3、5、7、10、14、21天检测平均肺动脉压力（mPAP）;通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法分别对肺组织中上述三种因子的mRNA、蛋白质表达强度及蛋白质表达量进行分析;进行三因子和肺动脉压力的相关性分析.结果 缺氧3、5、7、10天HIF-1 αmRNA及蛋白质表达强度均明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧5、7天其蛋白质表达量明显高于对照组（P＜0.05）.缺氧3天ET-1mRNA表达明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧3、5、7天ET-1蛋白质表达强度及蛋白质表达量均高于对照组（P＜0.05）,缺氧10天其蛋白质表达量仍高于对照组（P＜0.05）.缺氧3、5、7天iNOSmRNA及蛋白质表达均高于对照组（P＜0.05）.缺氧组在缺氧21天内HIF-1α表达总体与mPAP变化呈正相关（P ＜0.001）;缺氧7天内ET-1、iNOS表达总体与mPAP变化呈正相关（P＜0.05）.结论 HIF-1α、ET-1和iNOS在HPH新生大鼠肺组织中表达增加,与肺动脉压力呈正相关,三种因子在该病发病机制中可能具有重要作用.     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织小G蛋白Rho相关激酶1的表达及其干预作用

目的观察缺氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺组织中小G蛋白Rho相关激酶1(Rock1)表达情况,探讨其抑制剂法舒地尔(fasudil)的干预作用。方法30只雄性SD大鼠,随机分为对照组、缺氧组、缺氧 1、51、5 mg/(kg.d)法舒地尔组。测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)、右心肥厚指数(RVHI);半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)分别从基因和蛋白水平检测肺组织Rock1的表达。结果与对照组比较,缺氧组mPAP、RVHI、肺组织Rock1 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(F=328.87,304.27,218.89,370.37 P均<0.01);与缺氧组比较,法舒地尔组上述指标均明显下降(F=52.86,48.10,104.94,174.0 P均<0.01),且呈剂量依赖关系;各组间mCAP差异无显著性(F=1.10 P>0.05)。结论Rock1在HPH大鼠肺组织中表达上调,其抑制剂法舒地尔能显著降低mPAP,减轻右心室肥厚,有望用于肺动脉高压的治疗。     

缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管重塑与肺血管HIF-1α、ET-1、iNOS表达的相关性研究

目的：了解缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺血管重塑与肺血管HIF-1α、ET-1、iNOS表达的相关性。方法：建立HPH新生大鼠模型,检测平均肺动脉压力（mPAP）;并计算肺小动脉中层壁厚占肺小动脉的外径百分比（MT%）、肺小动脉管壁中层横截面积占肺小动脉总横截面积的百分比（MA%）作为肺血管重塑指标;免疫组化法检测新生大鼠肺组织中HIF-1α、ET-1、iNOS反应强度及mRNA表达;进行肺血管重塑与HIF-1α、ET-1、iNOS mRNA相关性分析。结果：缺氧3、5、7、10、14、21 d,新生大鼠mPAP持续增高,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。缺氧7 d后MT%、MA%明显高于对照组（P<0.05）。肺组织中HIF-1α表达在缺氧3、5、7、10 d时显著高于对照组（P＜0.05）,其mRNA表达在3、5、7 d高于对照组（P＜0.05）;ET-1表达在缺氧3、5、7 d时显著高于对照组（P＜0.05）,其mRNA表达在缺氧3 d时高于对照组（P＜0.05）;iNOS蛋白及mRNA表达在缺氧3、5、7 d 时均显著高于对照组（P＜0.05）。MT%和MA%与HIF-1α mRNA呈正相关（r分别为 0.835、0.850,P<0.05）。结论：新生大鼠缺氧7 d后肺血管出现重塑;HIF-1α、ET-1及iNOS共同参与了新生大鼠HPH的发生及发展。     

新生大鼠缺氧缺血后海马caspase-3 mRNA的表达及硫酸镁的神经保护机制研究

目的　探讨caspase 3mRNA在新生大鼠缺氧缺血后海马中的表达 ,研究硫酸镁对脑损伤可能的保护机制。方法　制作新生大鼠缺氧缺血模型 ,按治疗方式不同随机分为 :①正常对照组(n =4) ;②假手术组 (n =4) ;③缺氧缺血组 (n =4) ;④生理盐水对照组 (n =4) ;⑤硫酸镁预防组(n =4) ;⑥硫酸镁治疗组 (n =4)。预防组和治疗组分别在缺氧缺血前或后 0 5h腹腔注射 5 %硫酸镁5 0 0mg/kg。半定量RT PCR法测定缺氧缺血后 2 4h海马组织caspase 3mRNA的表达 ,比较两个硫酸镁干预组与对照组的差异。结果　正常对照组新生大鼠海马组织中caspase 3mRNA相对表达量为0 97± 0 46,缺氧缺血组海马组织中caspase 3mRNA表达量增高至 1 88± 0 3 6,与正常组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ;硫酸镁预防组与治疗组表达量分别是 1 5 4± 0 49和 1 65± 0 48,与缺氧缺血组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,硫酸镁干预抑制了缺氧缺血后海马组织中caspase 3mRNA的表达。结论　新生大鼠缺氧缺血后 2 4hcaspase 3mRNA在海马中的表达明显增高 ,硫酸镁对缺氧缺血脑组织的保护作用可能与抑制海马caspase 3mRNA表达有关     

热休克蛋白70对新生大鼠缺氧性肺动脉高压的保护作用

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)在新生大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)中的保护作用。方法 将128只新生大鼠随机分为空白对照组、HPH模型组、空病毒对照组和HSP70组(n=32)。建立HPH模型前分别向空白对照组和HPH模型组大鼠通过尾静脉注射5μL无菌盐水,向空病毒对照组大鼠通过尾静脉注射5μL Ad-GFP(1 010 PFU/m L),向HSP70组大鼠通过尾静脉注射5μL Ad-HSP70(1 010 PFU/m L),转染后除空白对照组外,其余3组建立HPH模型。分别于建模后3、7、10、14 d,采用多导生理记录仪记录各组平均肺动脉压力(m PAP),光学及电子显微镜观察肺血管组织结构及重塑指标,Western blot法检测各组新生大鼠肺组织中HSP70、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缩血管因子内皮素-1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。结果 HPH模型组与空病毒对照组在3、7、10、14 d时的m PAP水平高于空白对照组(P0.05)。缺氧7、10 d时,空白对照组及HSP70组MA%、MT%低于HPH模型组和空病毒对照组(P0.01);缺氧14 d时,HPH模型组、空病毒对照组和HSP70组MA%、MT%比较差异无统计学意义(P0.05),但高于空白对照组(P0.01)。缺氧3、7、10 d时,HSP70组HSP70的蛋白表达水平高于HPH模型组、空病毒对照组和空白对照组(P0.01);HSP70组HIF-1α、ET-1和i NOS表达水平低于HPH模型组和空病毒对照组(P0.05),而与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 转染HSP70可以提高HPH新生大鼠肺组织HSP70表达,下调HIF-1α、ET-1、i NOS表达,减轻肺血管重塑,降低肺动脉压力,可能成为治疗新生儿HPH的一种新策略。     

内源性一氧化碳对缺氧性肺动脉高压与肺血管结构调节的研究

目的 研究内源性一氧化碳（CO）对缺氧性肺动脉高压（PH）和肺血管结构的调节作用。方法 将18只Wistar大鼠随机分为对照组、低氧组、低氧＋ZnPP组。均以右心导管法测定肺动脉压力；对肺组织进行弹力纤维染色，测定肌型动脉百分比，以及肺中、小动脉的相对中膜面积（RMA）、厚度（RMT）；采用免疫组织化学法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达，核酸原位杂交法检测肺动脉Ⅲ型前胶原[Pro－α1（Ⅲ）胶原]mRNA表达。结果 鼠肌型动脉百分比和肺中、小型动脉RNA及PTM均明显增高；ZnPP促使低氧上述肺血管结构重建指标增高更加显著（P均＜0．01）。低氧大鼠肺动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及Pro－α1（Ⅲ）胶原mRNA表达均显著增高，ZnPP促使低氧大鼠动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及Pro－α1（Ⅲ）胶原mRNA表达更加明显（P均＜0．01）。结论 内源性CO在缺氧性PH和肺血管结构重建形成中发挥着重要的保护作用，其机制至少部分与CO对低氧大鼠肺动脉胶原蛋白合成的调节有关。     

先天性心脏病肺动脉高压患儿肺组织内皮素-1与胶原合成关系的研究

目的研究左向右分流先心病肺动脉高压(肺高压)患儿肺组织内皮素-1(ET-1)与肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的关系,探讨左向右分流先心病患儿肺高压形成的机理。方法选择左向右分流先心病患儿18例,根据肺动脉收缩压分为肺高压组(n=10),非肺高压组(n=8)。所有患儿在外科手术体外循环开始前,取右肺中叶组织(1cm×1cm×1cm),放射免疫法测定患儿血浆及肺组织ET-1含量;RT-PCR法检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果先心病肺高压患儿血浆及肺组织ET-1含量明显高于肺动脉压正常者(P<0.01)。肺高压患儿肺组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达与肺动脉压正常者相比明显增加(P<0.05)。结论ET-1可能通过刺激肺动脉平滑肌细胞胶原合成增加参与肺高压的形成。     

急性缺氧性肺动脉高压兔心肌细胞凋亡和相关基因的表达

目的探讨急性缺氧性肺动脉高压(PAH)兔模型心肌组织的细胞凋亡,以及基因bcl-2、Bax、Fas、FasL和Caspase-3在左室心肌细胞中的表达。方法采用呼吸机建立急性缺氧肺动脉高压兔模型,分为对照组(n=10)和缺氧PAH组(n=20),采用TUNEL标记法检测兔模型心肌组织中的凋亡细胞,并运用免疫组化及原位分子杂交技术研究基因bcl-2、Bax、Fas、FasL和Caspase-3在左室心肌细胞中的表达。结果缺氧PAH组左室心肌细胞凋亡指数为(17±3),明显高于对照组(2±0.3);缺氧PAH组左室心肌Bax、Fas、FasL和Caspase-3蛋白和mRNA表达显著上调,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01),缺氧PAH组左室心肌bcl-2蛋白和mRNA表达呈弱阳性。结论细胞凋亡参与了急性缺氧肺动脉高压的发生及发展,急性缺氧性PAH发生后,促凋亡基因和抑制凋亡基因的表达在左心室的平衡被打破。     

西地那非抑制高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管重构和上调肺血管Kv1.5mRNA表达

目的 观察高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管结构重建和肺血管电压依从钾通道Kv1.5mRNA表达变化,探讨口服西地那非对高肺血流肺动脉高压大鼠肺血管重构及肺血管电压依从钾通道Kv1.5mRNA表达的影响.方法 将27只雄性SD大鼠随机分为对照组(n=9)、分流组(n=9)、分流+西地那非组(n=9).后两组大鼠通过腹主动脉一下腔静脉分流术建立高肺血流肺动脉高压动物模型.对分流+西地那非组大鼠每天灌胃枸橼酸西地那非10 mg·kg-1·d-1,对照组和分流组每天灌胃等量生理盐水.11周后,测定肺动脉平均压(mPAP)及肺动脉收缩压(sPAP);观察右室肥厚程度,计算右室重量/(左室+室间隔)重量比值,以[RV/(LV+S)]表示;计算肺中、小血管肌型动脉相对中膜厚度(RMT);采用实时荧光RT-PCR定量法观察大鼠肺血管电压依从钾通道Kv1.5mRNA表达.结果 与对照组比较,分流组大鼠mPAP、sPAP、RV/(Lv+S)比值显著增高(P<0.01),RMT显著增加(P<0.01),肺血管Kv1.5mRNA表达水平显著降低(P<0.01).与分流组相比,分流+西地那非组mPAP、sPAP、RV/(LV+S)比值显著低于分流组(P<0.01),RMT显著降低(P<0.01),肺血管Kv1.5mRNA表达水平显著升高(P<0.01).分流+西地那非组mPAP、sPAP、RV/(Lv+S)比值和RMT与对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05);两组大鼠Kv1.5 mRNA表达水平也无显著性差异(P>0.05).结论 高肺血流肺高压大鼠肺血管发生重构并且其肺血管Kv1.5mRNA表达下降,而口服枸橼酸西地那非抑制高肺血流肺高压大鼠肺血管重构和上调肺血管Kv1.5mRNA表达.     

先天性心脏病合并肺动脉高压患儿肺血管中维甲酸受体表达的变化

目的 通过观察不同肺血流和(或)肺动脉压力情况下先天性心脏病(先心病)患儿手术时活检肺组织中肺血管维甲酸受体(RARα、β、γ亚型)的表达情况,探讨其在先心病合并肺动脉高压发病机制中的可能作用.方法 收集先心病及非先心病患儿开胸手术病例共31例,其中无高肺血流及肺动脉高压的非先心病手术对照组病例6例;左向右分流先心病高肺血流组7例;左向右分流先心病肺动脉高压组18例.手术时取右下肺组织,连续切片后采用小鼠抗人RARα、β、γ亚型单克隆抗体进行免疫组化显色,图像分析观察三种血型相对表达面积,同时分析其与肺高压组肺动脉压力、HE病理分级的相关性.结果 肺动脉高压组肺动脉中RAR α、β、γ亚型阳性表达面积均较对照组及高肺血流组明显减少(P均<0.01),而对照组与高肺血流组之间差别无统计学意义(P>0.05);肺高压组RAR各亚型相对表达面积与肺动脉压力无相关性(r=0.03～0.42,P均>0.05);RARα、β表达与HE病理分级有相关性(r=0.59、0.52,P均<0.01),RARγ与HE病理分组无相关性(r=0.21,P>0.05).结论 先心病合并肺动脉高压时肺动脉中RAR各亚型表达均有减少,且RARα、β表达减少随肺血管病变程度加重而愈加明显,提示RAR可能参与了先心病肺动脉高压的肺血管重建过程.     

高肺血流对大鼠肺动脉结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨高肺血流对大鼠肺动脉结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF) 表达的影响.方法 雄性SD大鼠32只,随机分为分流组(n=16)和对照组(n=16),对分流组大鼠行腹主动脉-下腔静脉穿刺术建立高肺血流动物模型.分别在分流术后4周、11周2个时间点处死大鼠(每组8只)留取肺组织标本.制作肺组织石蜡切片,观察肺动脉相对中膜厚度(relative median thickness,RMT)的改变;以免疫组织化学方法检测肺动脉胶原Ⅰ及CTGF表达的变化.结果 分流术后11周,分流组大鼠肺动脉RMT较对照组明显增加(P＜0.05);分流后4周、11周大鼠肺动脉胶原Ⅰ及CTGF表达较对照组明显增强(P均＜0.05).结论 高肺血流上调大鼠肺动脉CTGF表达,该作用可能参与介导高肺血流所致肺血管结构重建的机制.     

心肌营养素-1在大鼠缺血再灌注心肌中的表达及神经调节蛋白-1对其表达的促进作用

目的研究大鼠缺血再灌注心肌中心肌营养素-1(CT-1)的表达及神经调节蛋白-1(NRG-1)对其表达的影响。方法制备大鼠缺血再灌注心肌模型,分为模型组(n=8),NRG-1预处理组(n=9),假手术组(n=8)和正常对照组(n=10)。利用RT-PCR技术检测各组CT-1 mRNA表达,计算CT-1 mRNA相对量,并作统计学处理。结果模型组CT-1 mRNA结果(63.96±9.34)高于假手术组(36.16±5.43)和正常对照组(36.84±4.64),三者比较差异有显著性(F=47.37 P<0.01);NRG-1预处理组(89.49±6.99)高于模型组,差异有显著性(t=6.43 P<0.01)。结论大鼠心肌缺血再灌注后CT-1 mRNA表达升高,其原因可能是缺血再灌注激活机体内源性保护机制,NRG-1预处理对心肌的保护作用可能与提高心肌细胞中CT-1的表达有关。实用儿科临床杂志,2006,21(1):29     

HIF-1α在青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应机制中的作用

目的 探讨慢性缺氧对先天性心脏病患儿心脏缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响.方法 收集非青紫型先天性心脏病患儿16例、青紫型先天性心脏病患儿12例,体外循环前留取右心耳组织,采用半定量RT-PCR方法 检测右心耳组织中HIF-1α mRNA水平,用免疫组织化学方法 检测右心耳组织中HIF-1α蛋白的表达.结果 青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α mRNA相对表达量与非青紫组比较差异无统计学意义(P>0.05),青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达量与非青紫组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 慢性缺氧上调先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达,该作用可能参与介导青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应的分子机制.     

Prohibitin1和Prohibitin2在缺氧性肾小管上皮细胞损伤中的表达及作用

目的探讨Prohibitn1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)在缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC)损伤中的表达和作用。方法以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为对象,NRK-52E细胞置于50 mL.L-1二氧化碳(CO2),37℃培养箱中孵育至80%,传代后随机分为正常组和模型组。正常组细胞继续培养,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器抽尽残余空气,充以配好的缺氧气体(950 mL.L-1氮气和50 mL.L-1CO2)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,分别于造模第12、24、36小时采用实时荧光定量PCR检测PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达,Western blot检测PHB1、PHB2蛋白表达。结果 1.与正常组比较,模型组各时间点NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及其mRNA表达均降低(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越低;NRK-52E细胞的TGF-β1 mRNA表达均增高(Pa<0.05),缺氧时间越长,表达量越高。2.相关性分析:模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2 mRNA表达与TGF-β1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.97、-0.99,Pa<0.05)。结论缺氧所致NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及mRNA表达均降低,缺氧时间越长,表达量越低,NRK-52E细胞损伤越重。PHB1、PHB2可能参与RTEC损伤的发生发展。     

二氧化硫对低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉内皮细胞炎性反应的影响

目的 探讨外源性及内源性二氧化硫(SO2)对低氧性肺动脉高压(HPH)模型中炎性反应的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为4组:对照组(n＝8)、低氧组(n＝8)、低氧加SO2组(n＝10,予外源性SO2供体Na2SO3/NaHSO3)和低氧加天冬氨酸异羟肟酸(HDX)组(n=10,予内源性SO2生成酶抑制剂HDX).对低氧组、低氧加SO2组和低氧加HDX组大鼠予低氧处理21 d,对照组大鼠置常氧环境.检测各组大鼠肺动脉平均压、肺组织匀浆中SO2水平,免疫组织化学法检测其肺小动脉内皮细胞核转录因子(NF)-κB 和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达情况.结果 与对照组比较,低氧组大鼠肺动脉平均压升高127.13%(P<0.01),其肺组织匀浆中SO2水平降低42.64%(P<0.01),肺小动脉内皮细胞NF-κB表达阳性百分比升高303.47%(P<0.01),ICAM-1表达升高119.25%(P<0.01);与低氧组比较,低氧加 SO2组大鼠肺动脉平均压降低15.09% (P<0.05),肺组织匀浆中SO2水平升高40.54%(P<0.01),内皮细胞NF-κB表达阳性百分比降低37.71%(P<0.01),ICAM-1表达降低13.65%(P<0.01);与低氧组比较,低氧加HDX组大鼠肺动脉平均压升高13.58% (P<0.01),肺组织匀浆中SO2水平降低40.54%(P<0.01),内皮细胞NF-κB表达阳性百分比升高22.18%(P<0.01),ICAM-1表达升高11.92%(P<0.01).结论 SO2在HPH炎性反应形成过程中发挥重要的保护性调节作用.     

肺高压肺血管重建大鼠基质金属蛋白酶1基因表达

目的：　探讨基质金属蛋白酶1(MMP1)基因表达与肺高压形成的关系。方法：　利用野百合碱(monocrotalineMCT)诱导的大鼠肺高压动物模型,经导管介入测定大鼠肺动脉平均压力,逆转录定量聚合酶链反应(RT PCR)检测不同时间点大鼠肺组织MMP 1mRNA相对表达水平。结果：　实验第3周肺动脉压力已明显升高,以第4周为最高,而大鼠肺组织MMP 1mRNA表达水平以实验第2周最为明显,第3,4周表达水平下调,但仍高于第1周。结论：　MMP1早期基因表达升高参与细胞外基质屏障的降解,对肺血管重建可能起了触发作用,实验后期表达水平下调可能是导致细胞外基质积聚的重要原因之一。     

全反式维A酸对缺氧性肾小管上皮细胞Prohibitin1和Prohibitin2表达的影响

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)对缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC) Prohibitin1(PHB1)和Prohibitin2(PHB2)表达的影响.方法 购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E,采用混有胎牛血清和双抗的培养基(100 mL培养基中加5 mL胎牛血清和1 mL双抗)在37℃、50 mL/L二氧化碳的培养箱中培养.传代3次后分为正常组、模型组和ATRA干预组.正常组细胞不做任何处理,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器吸尽残余空气,充人缺氧气体(950 mL/L氮气和50 mL/L二氧化碳)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,ATRA干预组细胞中加入0.1 μmol/L ATRA后参照模型组的方法进行缺氧.于缺氧24 h、36 h采用实时荧光定量PCR法测定各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA表达,Western blot法检测各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、TGF-β1的蛋白表达.结果 1.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越低；与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05).2.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越高；与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05).结论 ATRA可显著增强缺氧性RTEC中PHB1和PHB2蛋白表达量及其mRNA表达量,可能对缺氧性RTEC有保护作用.     

缺氧及肺动脉高压患儿左心室心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的表达

目的研究慢性缺氧性疾病及肺动脉高压(PAH)患儿左心室心肌细胞凋亡及相关基因的表达。方法以因缺氧性疾病而死亡的新生儿为研究对象,以交通意外死亡儿童为正常对照组。慢性缺氧性疾病患儿入院后多普勒超声测肺动脉收缩压(PASP)和肺动脉平均压,根据PASP分为单纯缺氧组和缺氧-PAH组(PASP>4.0 kPa为PAH)。患儿死亡后取左心室心肌组织采用Tunnel末端标记法检测细胞凋亡指数,用原位杂交法及SP免疫组化法测定Fas、FasL、bax、bcl-2、caspase-3凋亡相关基因的mRNA和蛋白表达。结果(1)单纯缺氧组和缺氧-PAH组心肌细胞凋亡指数高于正常对照组(P<0.01),但单纯缺氧组和缺氧-PAH组之间无差异;(2)缺氧组和缺氧-PAH组心肌细胞Fas、FasL、bax、caspase-3的mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P均<0.01),bcl-2的mRNA和蛋白表达稍高于对照组,但无统计学意义;各基因mRNA和蛋白表达在单纯缺氧组和缺氧-PAH组之间无差异;(3)缺氧-PAH组PASP与心肌细胞凋亡指数呈正相关(r=0.478,P<0.05)。结论各种小儿疾病所致缺氧可致左心室心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达改变,PAH可致凋亡加重。     

信号转导子与转录激活子3和缺氧诱导因子-1α在神经母细胞瘤中的表达及其意义

目的检测信号转导子与转录激活子3(STAT3)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因在神经母细胞瘤(NB)中的表达,探讨STAT3 mRNA及HIF-1αmRNA的表达与NB的发生、发展及预后的关系。方法收集30例行手术切除的NB患儿的瘤体组织(研究组)及瘤旁组织(对照组)。其中预后不良型(UFH)20例,预后良好型(FH)10例。应用反转录PCR法,检测STAT3 mRNA、HIF-1αmRNA在瘤体组织及相应的瘤旁组织中的表达情况。结果 STAT3 mRNA水平在对照组、FH组和UFH组的表达分别为0.114±0.002、0.267±0.073、0.529±0.325,3组间比较差异有统计学意义(F=22.00,P=0.001);HIF-1αmRNA水平在对照组、FH组和UFH组的表达分别为0.519±0.251、0.673±0.124、0.779±0.145,3组间比较差异有统计学意义(F=111.82,P=0.001)。且FH组和UFH组STAT3 mRNA和HIF-1αmRNA表达水平分别与对照组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05),FH组与UFH组比较差异亦有统计学意义(Pa<0.05)。研究组STAT3 mRNA、HIF-1αmRNA相对表达水平分别为0.530±0.051、0.489±0.032,二者表达呈正相关(r=0.497,P<0.05)。结论 STAT3与HIF-1α在NB中过量表达,NB患者预后较差,STAT3与HIF-1α可相互作用促进肿瘤的发生发展。PCR技术可检测NB中STAT3 mRNA及HIF-1αmRNA表达水平,判断其生物学行为,用于指导临床。     

高氧对新生大鼠肺血管发育及肺组织血管生成素1表达的影响

目的 观察持续吸入85％氧气对新生大鼠肺血管发育和肺组织血管生成素1(Ang-1)表达的影响,探讨高氧肺损伤新生大鼠的肺血管发育情况及可能的发生机制.方法 将96只新生SD大鼠在生后6h内,随机分为高氧组和空气组,高氧组将大鼠置于自制密闭氧箱,FiO2=0.85.在实验3、7、14d每组各随机取16只处死,采集标本.采用HE染色进行肺组织形态学分析,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,肺动脉钡剂造影及肺动脉密度检测评价肺血管的发育,免疫组织化学法检测肺组织Ang-1的表达,荧光定量PCR和Western blot技术检测肺组织Ang-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)新生大鼠高氧暴露14 d,肺组织的病理表现与早产儿支气管肺发育不良(BPD)的病理表现相似.(2)高氧组7 d RAC值显著低于空气组[(10.55±0.13):(11.74 ±0.19),P＜0.05],在14d时差异更显著[(12.47±0.05):( 15.03±0.16),P＜0.01].(3)肺动脉钡剂造影显示,高氧组14 d大鼠肺动脉主干变细,肺小动脉显影减少,肺动脉密度显著低于空气组[(3.55±0.09):(6.03±0.16),P＜0.05].(4)免疫组化染色显示,高氧组7d和14 d,肺组织Ang-1的表达均显著低于同时间点空气组[ (4.27±0.34):(3.10 ±0.29),P＜0.05,(5.65±0.49)∶(3.21±0.28),P＜0.01].(5)荧光定量PCR及Western blot结果显示,高氧组7d和14 d,Ang-1的mRNA水平显著低于空气组[(0.85±0.14)∶(0.44±0.21),P＜0.05,(0.87±0.24)∶(0.24±0.05),P＜0.01],Ang-1的蛋白水平也显著低于空气组[(0.88±0.31)∶(0.41 ±0.12),P＜0.05,(0.90 ±0.29):(0.21 ±0.06),P＜0.01].结论 持续吸入高浓度氧导致新生大鼠的肺血管发育障碍,Ang-1的表达下调可能参与了早产儿BPD血管发育受阻的发生机制.