应用PCR—SSP对异基因骨髓移植供受者HLA—DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ１位点的纯合体和杂合体     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA－DQA_1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ＿１等位基因，以ＤＱＡ＿１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＿１＊０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未检出的等位基因有ＤＱＡ＿１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１等位基因频率分布除与中国南方人相似外，尚有其特点。序列特异引物ＰＣＲ方法不需要放射性同位素，简便快速、准确可靠的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１基因分型新方法。     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

HLA的PCR—SSP分型技术

ＰＣＲ－ＳＳＰ是采用ＰＣＲ技术，针对被检基因设计一系列具有等位基因多态性的序列特异上物扩增被检标本，分析ＰＣＲ产物判定ＨＬＡ型别，ＨＬＡ－ＤＲＩ￣ＤＲ１８可以采用１９对引物检定，采用两步法以７９对引物可以检定ＤＲ全部基因型。ＨＬＡ－ＤＱ采用２０条引物不同组合，陈检定与血清学型别一致的特异性还可分析部份基因型；以２２对引物则可检定ＤＱＢ１全部基因型。ＰＣＲ－ＳＳＰ技术比ＰＣＲ－ＳＳＯＰ及ＰＣＲ－ＲＥ     

HLA-DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应－单链构象多态性配型的比较

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植配型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行了特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法检测杂交信号，确定待测标本的基因型。对２０对异基因骨髓移植的供、受者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ位点的基因分型，并与多聚酶链反应－单链构象多态性配型作比较。结果表明，２０对供、受者的多聚酶链反应－单链构象多态性配型结果与该反相杂交法基因分型结果一致。多聚酶链反应－单链构象多态性方法是一种骨髓移植的供、受者配型，快速可靠的方法     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了５个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法，包括最早采用的血清学方法，近几年发展起来的分子生物学方法：ＤＮＡ序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交（ＰＣＲ－ＡＳＯ）、聚合酶链反应－限制性片断长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）及聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ），其中重点介绍了ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的可靠性及实用性。     

HLA—DQB1基因分型技术

报告了简便、快速的ＨＬＡ－ＤＱＢ１聚合酶链反应一序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）基因分型技术。比较了基因分型与血清学分型技术的结果，其中３３份标本中６份血清型结果（１８．２％）与基因型不吻合。还讨论了基因分型的意义     

用序列特异性引物的PCR方法分析慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者…

慢性淋巴细胞性甲状腺炎（ＣＬＴ）是一种器官特异性自身免疫性疾病，其遗传易感性与ＨＬＡ－Ⅱ类基因具有相关性，本研究用序列特异性引物的ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，分析２６名由病理证实的ＣＬＴ及正常对照２０例外周血白细胞基因组ＤＮＡ的ＭＨＣ－ＤＱＡ１位点的基因多态性分布，发现两组间有明显不同，其中ＤＱＡ１＊０３０１的等位基因频率显著高于对照组（Ｐｃ小于０．０５）ＤＱＡ１＊０３０１／０３０１的纯合子频率     

A new PCR-SSP method for HLA DR-DQ risk assessment for celiac disease

BackgroundSusceptibility to celiac disease is essentially restricted to carriers of specific HLA DQA1 and DQB1 alleles. We have developed a semi-automated sequence specific primer (SSP) PCR method for clinical HLA typing and compared the test results with those from a commercial method.MethodsPrimers for each DQA1 and DQB1 allele group were included in our PCR-SSP reaction to allow differentiation of homozygous from heterozygous carriers of risk alleles. Primers detecting the tightly linked DRB1*04, *03, *07 and *09 alleles were included to resolve potentially ambiguous results. Fluorescently labeled PCR products of 119 clinical samples were analyzed by capillary electrophoresis, and results were compared to those previously obtained from the DELFIA® Type 1 Diabetes Genetic Predisposition assay.ResultsThe risk assessment derived from the two methods was 100% concordant. One previously unreported haplotype was detected and haplotype assignments in two of the 119 samples were improved from previous reports.ConclusionsThe use of three PCR reactions and a single electrophoretic step for DQA1, DQB1 and DRB1 typing provides distinction of celiac disease associated alleles and their homo- or heterozygous status. This multiplex analysis reduces reagent costs, personnel and instrument time, while enabling improved allelic assignment through HLA-DR-DQ haplotype association.     

南方汉族HLA-DQA1基因与糖尿病视网膜病变相关性的研究

目的研究南方汉族HLA-DQA1基因与糖尿病视网膜病变的相关性。方法实验组收集60名临床诊断为糖尿病视网膜病变(DRP)患者的血样,对照组为52名健康的志愿捐血者血样,采用rSSOHLA流式磁珠分型并辅以PCR-SSP方法进行HLA-DQA1基因定型,统计实验组和对照组HLA-DQA1的基因频率,采用Woolf法计算相对危险度值。结果在糖尿病视网膜病变的实验组和对照组中,均检出了10种DQA1等位基因,检出的等位基因频率最高的为DQA1*0102;实验组DQA1*0501的基因频率显著高于正常对照组,计算RR值为2.73。结论南方汉族中DQA1*0501的基因可能为DRP的易感性标志。     

中国汉族Rh血型基因多态性观察

为了观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系Rh血型的基因多态性,采用聚合酶链反应一序列特异性引物(PCR—SSF)扩增技术,扩增Rh血型C／E基因,D基因外显子,内含子2和10,插入片段以及RhBox,检测160例Rh阳性个体,71例Rh阴性个体及7个先证为Rh阴性的家系的血样品。研究结果显示,带有C抗原的RhD阴性个体D基因结构具有多态性,D基因外显子有完整的、部分缺失和完全缺失的3种形式;先证为RhD阴性的家系中,大部分成员均出现插入片段和RhBox,且在遗传上符合孟德尔遗传定律,插入片段或RhBox并未影响D基因的表达;全部RhD阴性和阳性个体中没有发现“正常的”RhD外显子4。结论：中国人带C抗原的RhD阴性的基因结构具有多态性,具有完全缺失、部分缺失和不缺失3种情况,并可能存在特殊的D(nf)Ce单体型;本组样本不能确定插入片段和RhBox与D基因表达有关,插入片段和RhBox的生物学功能尚需进一步研究;中国汉族的Rh血型基因序列不同于白种人,应建立本民族的Rh基因库。     

银屑病患者白介素-20基因多态性和临床表型研究

目的：研究银屑病患者中自介素-20（IL-20）基因启动子区-1679位点单核苷酸多态性与上呼吸道感染（URI）间的相关性。方法：采用序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）检测上海周边地区340例汉族银屑病患者及193名正常对照者的IL-20基因多态性。并将银屑病患者按是否与URI相关分组，其中以URI为诱发或加重因素者为106例；不以URI为诱发或加重因素者234例，2组分别与对照组进行比较。结果：①银屑病患者与正常对照者间启动子区-1679位点的基因型和等位基因组成差异有统计学意义（分别为P〈0．05，P〈0．01）。（爹以UR]为诱发或加重因素的银屑病患者与正常对照者间在此位点的基因型和等位基因的分布差异亦均有统计学意义（分别是P〈0．05，P〈0．01）；而与URI无关的银屑病患者与对照者间在此位点的基因型和等位基因的分布差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：①上海周边地区汉族人群中，IL-20基因-1679位点的C等位基因可能具阻止银屑病发生的作用，而G等位基因可能增加其银屑病易感性。与URI相关的银屑病患者与正常对照者相比，G等位基因的频率明显增加，提示G等位基因可能使正常人在微生物感染后更易诱发银屑病或使银屑病患者原有疾病加重。     

深圳献血人群Duffy血型基因多态性的研究

目的建立Duffy血型的分子生物学检测方法,研究深圳献血人群Duffy血型基因多态性。方法在2011年8～11月本中心900名无血源关系献血者标本中,用卡式微柱凝胶抗球蛋白方法鉴定Duffy血型表现型,建立Duffy血型的基因分型方法 PCR-SSP法及PCR产物直接测序法,对900例标本DNA进行PCR-SSP法检测,其中50例做Duffy血型基因编码区域序列测定。结果血清学结果为Fy(a+b-)855例,Fy(a+b+)43例,Fy(a-b+)2例,Fy(a-b-)0例。900例Duffy血型PCR-SSP法基因分型结果与血清学表现型完全一致。50例FY基因编码序列部分测序结果与血清学、PCR-SSP法吻合,表现型FY(a+b-)标本测序结果可见FY基因第2外显子第125位核苷酸碱基为纯合子G;表现型FY(a-b+)标本测序结果为第125位核苷酸碱基为纯合子A。结论 Duffy血型PCR-SSP基因分型方法及PCR产物直接测序法可以正确地鉴定Duffy基因型,适用于Duffy血型基因多态性的研究。深圳地区Fya的基因频率为0.973 9,Fyb的基因频率为0.026 1。     

山东淄博地区汉族人群HLA-A、B、DRB1基因频率调查

目的 调查山东淄博地区汉族人群HLA基因多态性的分布。方法 采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）方法,对HLA-A、B、DR位点进行低分辨基因分型;用直接计数法进行抗原频率和基因频率计算。结果 得到一组抗原频率和基因频率资料。结论 山东淄博地区汉族人群HLA基因具有多态性,PCR-SSP方法进行HLA分型的结果准确可靠。     

由HLA-B位点SSP的异常格局发现HLA-C位点新等位基因

目的鉴定HLA-C位点的新等位基因。方法采用PCR-SSP进行HLA低分辨分型,引用DNA亚克隆加DNA序列分析,鉴定HLA-C位点的新等位基因。结果 PCR-SSP常规进行临床患者的HLA基因分型,发现1名患者B位点反应格局异常,但序列分析表明B位点2个等位基因无异常。进一步分析出现在B位点SSP异常反应格局中的额外特异性扩增片段,其碱基序列同源于C位点基因序列。测序分析发现该病例C位点存在1个新等位基因,比对分析表明新等位基因序列与Cw*031101相比较,第97位碱基由T→G,第105位由T→C,相应编码的第9位氨基酸由酪氨酸(Y)→天门冬氨酸(D)。但相应编码第11位氨基酸的无变化。结论 DNA测序表明被测标本含有HLA-C新等位基因,被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-Cw*0339。     

聚合酶链反应-序列特异性引物在精神疾病大样本多基因分型检测中的应用

背景聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析不适合临床的快速检测应用,也不适合对精神疾病候选基因作大样本量、多个基因的检测分析,而聚合酶链反应-序列特异性引物可能弥补其不足之处.目的建立多个基因多态性分型的聚合酶链反应-序列特异性引物,认识其在精神疾病分子研究水平中的应用.设计观察实验.单位新乡医学院分子生物研究室和病理生理教研室.材料实验于2005-12/2006-10在新乡医学院分子生物研究室完成.精神疾病患者血样200份,0.5 mL/份,由新乡医学院第二附属医院提供.患者对本实验均知情同意.方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物的方法分析以下基因的多态性TNFα-308A/G和-238G/A变异,IL-6-174G/C变异,CYP2D6*10B外显子第188位的C/T变异,COMT基因的第472位编码序列的G/A变异,MAOA基因位于第8外显子CDNA顺序的第941位点的G/T变异.主要观察指标聚合酶链反应-序列特异性引物分析患者血样的基因多态性.结果TNFα-308A/G位点可检测到的基因型有G/G和A/GTNFα-238G/A位点可检测到的基因型有G/A,G/G和A/A;IL-6-174G/C变异位点可检测到的基因型均为G/G纯合子;CYP2D6 *10B外显子第188位的C/T位点可检测到的基因型为C/C,C/T和T/T;COMT基因的第472位编码序列的G/A变异位点可检测到的基因型为A/G,A/A和G/G;MAOA基因位于第8外显子CDNA顺序的第941位点的G/T变异可检测到的基因型为T/G,T/T和G/G.结论聚合酶链反应-序列特异性引物适合对大样本、多个基因的单核苷酸位点变异进行多态性分析,成本低、快速、准确,可用于精神疾病分子水平的研究.     

上海地区汉族人群红细胞稀有血型系统抗原基因的多态性研究

目的研究上海地区汉族临床输血人群8个红细胞稀有血型系统19种抗原基因多态性分布,提高配合性输注的能力。方法应用PCR-SSP方法进行血型抗原基因分型。结果Diego,Dombrock,Duffy血型系统抗原基因频率分别为：Di^a=0.0351,Di^b=0.9649;Do^a=0.0614,Do^b=0.9386;Fy^a=0.9649,Fy^b=0.0351,Fy=0;均具有多态性。而Kell,Yt,Scianna,L-W,Colton血型系统抗原基因频率分布为单态性。经χ2检验,均符合Hardy-weinberg遗传定律。结论上海地区汉族临床输血人群Diego、Dombrock、Duffy血型系统抗原基因频率具有多态性,随机临床输血抗原不合率分别是0.0654、0.1086、0.0654,应引起高度重视。