离体造血干细胞活力维持措施研究

目的:探索离体造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)活力维持的相关措施,为超远距离转运非血缘HSC提供技术支持。方法:外周血造血干细胞(peripheral blood hematopoietic stem cell,PBHSC)采集物按不同分组要求给予相应处理后,于4℃冰箱保存,并分别于0、24、48和72 h检测CD34+细胞比例、相对细胞活性、相对细胞增殖率、相对集落形成率、氧分压以及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS),另设未经处理的PBHSC作为正常对照组。结果:CD34+细胞比例在72 h内未检测到变化。对照组随着保存时间的延长,相对细胞活性、相对细胞增殖率和相对集落形成率均逐渐下降(r=-0. 796、r=-0. 883和r=-0. 815)。血浆稀释、抗氧化剂和充氧均能在一定程度上提高相对细胞活性和相对细胞增殖率,但充氧可降低相对集落形成率。2种或3种因素联合显示出更强的保护作用。细胞内ROS水平随着保存时间的延长而逐渐下降,充氧在提高氧分压的同时,也增加细胞内ROS水平,加入抗氧化剂可降低ROS水平。结论:CD34+细胞百分比不能作为细胞活力观察指标。血浆稀释、充氧和抗氧化剂可提高PBHSC存活和活力,但充氧可增加细胞内ROS水平,不利于PBHSC集落形成能力维持。多因素联合可更好地维持细胞活力。     

保存72小时浓缩血小板的临床评价

作者对延长浓缩血小板(PCs)保存期进行了多中心协作研究,比较20-24℃下保存72小时和48小时PCs的多项参数。该组23例严重血小板减少患者包括各种类型白血病15例,再障贫血6例,骨髓增生异常综合征1例及何杰金病1例。共输注PCs56次(48小时的PCs25次,72小时PCs31次)。保存48小时和72小时的PCs其血小板数分别为140±12和142±16×10~4/μl(n=20)。一般每次输注20个单位(以200 ml全血制备的PC为1单位)。同一病例原则上采用保存48、72小时PCs交叉输注。输注保存48、72小时PCs后立即测定血小板回收率,分别为59.1±37.9%、52.3±32.7%,t测验两PCs间无显著性差异。输注后24小时血小板回收率分别为     

25Gy γ射线辐照对手工富集人血小板CD62p表达的影响

本研究观察25Gyγ射线照射对22℃保存条件下的手工富集血小板悬液不同保存期CD62p、血小板计数及平均血小板体积(MPV)的影响。将富浆法分离的16袋血小板,每袋平均分为两份,其中1袋经25Gy137铯γ射线辐照,另1份不辐照,然后按美国血库协会(AABB)标准保存72小时。经辐照的血小板作为观察组,未辐照的血小板作为对照组。流式细胞术检测两组血小板辐照前及保存24和72小时后P选择蛋白的表达水平;同时用血细胞计数仪检测血小板数和平均血小板体积(MPV)。结果表明:辐照组与对照组血小板表达CD62p百分率均随保存时间的延长而增高;保存24小时与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05),保存72小时与保存24小时比较有非常显著性差异(p(0.01)。在保存24、72小时后,两组血小板CD62p表达率、血小板计数无显著差异(p0.05);但两组血小板在保存72小时后MPV与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05)。结论:γ射线照射不影响血小板的数量和质量,但手工血小板液态储存时间应尽可能缩短。     

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）热灭活咽拭子及热灭活后提取核酸样本在 4℃保存的稳定性研究

目的　研究 56℃ 30 min 热灭活后的新型冠状病毒肺炎 (COVID-19) 咽拭子及提取的核酸在 4℃保存的稳定性。方法　采用多重荧光定量 PCR 方法对一例 COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后进行 COVID-19 双靶点(ORF1ab 和 N 基因 ) 核酸检测，把原始咽拭子样本及提取的核酸保存在 4℃，分别于 24，48，72 和 96h 再次检测咽拭子样本及提取核酸中新冠病毒核酸的含量（Ct 值），分析热灭活后咽拭子样本及提取核酸在 4℃保存的稳定性。结果COVID-19 患者的咽拭子样本，56℃ 30 min 热灭活后核酸检测结果为 ORF1ab 和 N 基因双阳性，Ct 值分别为 31.27 和30.64，咽拭子样本 4℃保存 24，48，72 和 96h 后再次检测 ORF1ab 和 N 基因的结果为 24h (31.41 和 30.68)，48h (34.13和 34.28)，72h (34.06 和 34.11) 和 96h (36.22 和 40.02)。 提取的核酸 4℃保存 24，48，72 和 96h 后的检测结果为 24h (31.64和 30.06)，48h (31.62 和 29.95)，72h (31.72 和 29.75) 和 96h (31.36 和 30.09)。56℃ 30 min 热灭活的咽拭子样本在 4℃保存 24h 后，对 COVID-19 核酸的检测无明显影响 ( 偏倚 <1%)，但 4℃保存 48~72h，ORF1ab 基因核酸降解约 7 倍，N 基因降解约 11 倍，4℃保存 96h, ORF1ab 和 N 基因核酸分别降解 30.91 倍和 666.29 倍。但是提取的核酸 4℃保存 24~96h 后，对核酸的检测结果无明显影响 ( 偏倚均小于 3%)。结论　研究结果表明 56℃ 30 min 热灭活后提取的核酸的稳定性比原始咽拭子样本好，热灭活后的咽拭子样本可在 4℃保存 24h。     

新鲜冰冻血浆融化后不同保存时间及温度对凝血功能的影响

目的:探讨新鲜冰冻血浆融化后不同保存时间及温度下凝血功能的变化,为临床合理有效输注新鲜冰冻血浆提供理论依据。方法:留取新鲜冰冻血浆40例,在融浆机37℃25 min融化后均分为2份,1份于(4±2)℃条件下保存,另1份于(25±2)℃条件下保存,所有样本在融化后0、4、24、48和72 h分别进行血栓弹力图检测,同时进行凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ活性以及APTT和PT检测,并对每份样本进行需氧菌和厌氧菌血培养。结果:新鲜冰冻血浆融化后在4℃和25℃保存72 h后均能形成稳定血凝块,且无细菌生长,反应凝血因子活性及血凝块特性的ACT和TMA在保存4、24、48和72 h时间点与0 h相比均存在显著差异(P0.05),但同一保存时间点的两个不同温度间无差异。新鲜冰冻血浆融化后保存48和72 h时凝血因子Ⅴ活性水平在4℃与25℃之间存在显著差异(P0.05),25℃温度保存时活性衰减比4℃温度保存时快。结论:新鲜冰冻血浆融化后保存72 h时虽然有部分凝血因子活性的衰减,但仍能形成稳定血凝块,临床血浆输注过程中融化后保存72 h的血浆可用于临床患者凝血因子的补充,尽量避免血液成分的浪费。     

血样保存时间对CD4+T淋巴细胞检测的影响分析

目的 了解保存不同时间对全血样品定量检测T淋巴细胞的影响情况。 方法 收集12份HIV感染者的抗凝全血,于4~8℃条件下保存,采用流式细胞仪、四色荧光抗体试剂和计数微球,在采血当日和采血后5 d每隔24 h定期检测CD4+T淋巴细胞绝对值,并用SPSS 13.0软件分析数据。 结果 与采血当日CD4+T淋巴细胞定量检测结果比较,采血后24、48、72、96、120 h的检测结果平均下降了14.583、22.083、49、53.417、88个/l,其中采血后24 h的结果与采血当日比较差异无统计学意义(P=0.09),其他差异均有统计学意义(P0.05)。 结论 在4~8℃保存条件下,进行T淋巴细胞定量检测的全血样品最好在采血后24 h内完成检测,检测结果较为可靠,最迟不要超过48 h,保存时间越长, CD4+T淋巴细胞值下降得越多。     

血液分析仪SE-9000检测外周造血干细胞的影响因素探讨

目的探讨不同条件下保存的血液对外周血造血干细胞检测的影响。方法以SE-9000型血液分析仪检测不同温度、不同时间保存的血液外周造血干细胞的数量和百分率。结果4℃条件下保存12h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;20℃条件下保存8 h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;而30℃条件下保存6 h内造血干细胞的数量和百分率无明显变化,8 h开始结果逐渐降低。结论血液样本在4~30℃条件下保存6 h对血液分析仪SE-9000检测外周造血干细胞均无影响。     

机采血小板悬液在保存过程中凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化

为了研究机采血小板悬液22℃振荡保存不同时间的凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化,采用SYSMEXCA-1500型全自动血凝仪对用CS-3000plus血细胞分离机采集的18份血小板悬液于22℃振荡保存条件下,测定0、12、24、48、72、96、120小时7个时间段的FⅧ∶C和FⅨ∶C的活性。结果表明:机采血小板FⅧ∶C在0时活性为(100.51±44.02)%,保存12-120小时,其活性衰减了10%-40%;FⅨ∶C在0时活性为(120.93±20.50)%,保存24-120小时,其活性衰减了10%-35%。结论:机采血小板悬液于22℃振荡保存时凝血因子Ⅷ、Ⅸ仍保持有较高的生物学活性。     

不同保存温度对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞稳定性的影响

目的探讨不同条件下保存的血液对外周造血干细胞检测的影响。方法以SE-9000型血液分析仪检测不同温度、不同时间保存的血液外周造血干细胞的数量和百分率。结果4℃条件下保存12h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化；20℃条件下保存8h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化；而30℃条件下保存6h内造血干细胞的数量和百分率无明显变化。结论血液样本在4～30℃条件下保存6h对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞无影响。     

样品放置时间对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的影响

目的了解样本不同的保存时间和温度对G6PD活性的影响。方法用速率法测定20份全血标本及溶血液制备后放置各时间段的G6PD活性。结果ACD抗凝的全血标本放置室温及4℃冰箱48小时内G6PD活性与即刻测定的结果比较无显著性差异(P>0.05),而放置72小时G6PD活性均明显下降(P<0.01,P<0.05)。溶血液4℃冰箱放置2小时结果与放置15分钟时的结果比较无显著性差异(P>0.05),4小时结果明显偏低(P<0.05)。结论G6PD活性测定时,溶血液制备后4℃冰箱放置不能超过2小时,全血标本应在48小时内完成检测。     

采集血液标本放置时间对转氨酶活性的影响

血液标本放置时间对转氨酶活性的影响。方法：取初检后献血者40人份全血标本和血清标本，采用速率法分别测定其24、48、72h的ALT活性。结果：立即检测ALT结果与4℃血清24h检测值差异无显著性，与4℃血清48、72h及未分离的全血24、48、72h检测值差异均有显著性。结论：如果标本要贮存，最好将血清尽早分离，然后贮存在4℃冰箱内，时间不要超过两天。     

氟化钠抗凝管与分离胶真空采血管在血糖中的应用评价

目的 探讨氟化钠抗凝管与分离胶真空采血管对保存标本血糖检测的稳定性.方法 同一体检者分别抽取氟化钠抗凝管与分离胶真空采血管静脉血各1支,连续测定即时及24、48、72、96、120、144 h血糖浓度,观察两种采血管保存标本不同时间段血糖浓度的变化.结果 检测即时及24、48、72、96、120、144 h氟化钠抗凝管与分离胶真空采血管中血糖浓度,两种采血管之间结果差异无统计学意义(P>0.05);同时分别对两种采血管即时与144 h血糖浓度进行比较,结果显示两者差异无统计学意义(P>0.05).结论 以氟化钠抗凝管与分离胶真空采血管保存的血液标本血糖浓度具有较好的稳定性.     

不同类型异基因造血干细胞移植后的急性白血病患者骨髓形态学比较

目的观察单体型相合造血干细胞移植及全相合异基因造血干细胞移植后骨髓形态学差异及造血重建情况。方法在235名实施异基因造血干细胞移植患者中,单体型相合120名,采用外周血造血干细胞联合骨髓移植;115名全相合的患者,采用单纯的外周血造血干细胞移植。在造血干细胞移植成功出层流室+30 d行骨髓穿刺抽吸涂片观察骨髓形态学差异,并观察造血重建情况。结果 235名患者均成功重建造血。全相合患者白细胞及血小板重建的时间分别14.7 d(12～26 d)及20.6 d(13～32 d);单体型相合造血干细胞移植患者白细胞及血小板重建的时间分别12 d(10～21 d)及18 d(15～30 d);2者之间的差异具有统计学意义(P0.05)。2组患者造血干细胞移植后骨髓全部完全缓解。在骨髓增生程度、粒红比例和细胞形态等方面有差异,但差异无统计学意义(P0.05)。结论单体型相合造血干细胞移植较全相合移植造血重建早,移植后骨髓形态学有差异,但差异无统计学意义。     

样本收集和保存对降钙素原检测结果的影响

目的研究样本收集和保存对降钙素原(PCT)检测结果的影响,从而评估PCT在样本中的稳定性。方法抽取严重全身细菌感染或脓毒血症患者血液,同时注入3种真空采血管分别为血清管、含有EDTA或枸橼酸钠血浆管。分别在样本收集和保存后的2h之内、4℃保存24、48及72h,采用罗氏cobase411电化学发光仪检测PCT水平。结果研究显示抽血2h内PCT在血清中水平比血浆高;当血清/血浆分离后4℃保存,72h内PCT水平比较差异无统计学意义(P0.05);4℃保存全血,48h和72h血清PCT水平低于2h,而血浆72h内差异仍无统计学意义(P0.05);PCT在血浆或血清中具有强烈的相关性。结论血液抽取后2h内分离血清/血浆4℃可保存72h,如24h内检测PCT可不分离血清。     

施他宁治疗食管静脉曲张破裂出血的临床观察

目的:观察施他宁治疗食管静脉曲张破裂出血的疗效。方法:首剂250μg静脉推注后续以250μg/h的速度静脉维泵维持24小时,48小时,72小时,最长至96小时,用药后24小时、48小时、72小时,最长至96小时观察止血情况。结果:用药后24、48、72、96小时止血率分别为75.5％、77.5％、81.2％、87.3％,停药后再出血率为10.5％,病人均无明显不良反应。结论:施他宁是治疗食管静脉曲张破裂大出血高效而安全的药物。     

血液保存条件与SE-9000分析仪检测外周造血干细胞的稳定性

选择40例第四军医大学西京医院1998/2005期间住院患者,作为干细胞移植受者。其中脐带血干细胞移植受者20例,男11例,女9例;骨髓干细胞移植受者20例,男13例,女7例。干细胞移植后第25天,抽取干细胞移植受者外周血液40mL,注入含60mgEDTA-K2的三角烧瓶中充分混匀,即刻(0h)在血液分析仪上进行检测,后将血液样本分装在27支试管中,并分成3组,每组9支,各组分别放置于4℃、20℃、30℃条件下保存。在取血后的1,2,4,6,8,12,24,48,72h从各组(4℃、20℃、30℃)中分别取出1支在血液分析仪上对其造血干细胞数量及其所占百分率进行检测,并记录结果。结果显示,4℃条件下保存12h造血干细胞的数量和百分率无明显变化,20℃条件下保存8h造血干细胞的数量和百分率无明显变化,30℃条件下保存6h造血干细胞的数量和百分率无明显变化,8h开始结果逐渐降低。     

血标本放置方法及时间对血清葡萄糖浓度检测结果的影响

目的探讨血标本放置方法及时间对血清葡萄糖浓度检测结果的影响。方法取40例门诊患者标本于普通真空采血管内,分别在离心后即刻及离心后放置4℃冰箱,2、4、6、8、12、24、48、72、96h测定普通采血管内(测至24h)及吸出血清管内葡萄糖浓度,观察放置时间对血清葡萄糖浓度检测结果的影响。结果普通采血管4℃冰箱放置8h后,血清葡萄糖浓度明显降低,放置12h后,差异有统计学意义(P0.05),血清管4℃冰箱放置96h血清葡萄糖浓度没有明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论血标本及吸出血清后放置4℃冰箱2h、48h内测定葡萄糖浓度可不影响检测结果 。     

22℃保存的血小板浓缩液的输注经验

血小板浓缩液的输注降低了血小板减少症的发病率和死亡率。早有学者指出:在22℃下保存时间超过24小时的血小板不仅有不同程度止血效果的丧失,而且血小板的新陈代谢、膜蛋白以及对ADP的聚集反应也有改变。然而,据认为上述改变在体内是可逆的,所以目前主张血小板在22℃的液态保存可达72小时,甚至有学者提出96小时仍有临床效果。但多数学者认为保存48和72小时后临床效果显著降低。本文作者认为:为达到理想的临床效果,在22℃下血小板浓缩液的保存以不超过24小时为佳。为此作了一系列有关的试验。首先,体外试验表明:随着保存时间的延长,保     

胃癌术后早期肠内营养对患者胰岛素抵抗的影响

目的探讨胃癌手术后肠内营养对胰岛素抵抗的影响。方法50例非糖尿病胃癌患者按手术时间分为两组,观察组30铡术后给予早觌肠内营养,对照组20铡给予全胃肠外营养。比较两组术后7d内空腹血糖、血清胰岛素浓度和胰岛素敏感性的变化。结果两组术后第48小时的空腹血糖均高于正常,但差异无统计学意义（P=0.89）;术后第72小时、第96小时血糖值两组患者均下降,观察组低于对照组．差异有统计学意义（P=0.00）;术后第168小时血糖值两组差异无统计学意义（P=0.63）：两组术后第48小时血清胰岛素浓度差异无统计学意义（P=0.56）;术后第72小时、第96小时两组均下降,观察组低于对照组,差异有统计学意义（P=0.02,P=0101）;术后第168小时丽组差异无统计学意义（P=0．29）、术后第48小时对照组和观察组的姨岛素敏感性差异无统计学意义（P=0．92）,术后第72小时、第96小时两组均上升．观察组高于对照组,差异有统计学意义（P=0.02,P=0.01）;术后第168小时两组差异有统计学意义（P=0.01）。结论胃癌手术后患者存在胰岛素抵抗,早期肠内营养能提升胰岛素敏感性,降低胰岛素抵抗、     

不同储存条件和时间对HCV RNA检测结果的影响

目的评估无偿献血者核酸检测标本的反复冻融和在4℃保存不同时间间隔对HCV-RNA检测的影响。方法选取1份定量检测HCV RNA浓度低于102IU/m L的血浆标本作为本次研究的目标标本。将该标本分为2管,每管50 m L,分别在4℃保存和-20℃保存。并于保存第24 h、48 h、72 h、7 d、14 d每组同时重复取5个标本,用Cobas s 201 Config D核酸自动检测系统检测HCV RNA定量值。结果几乎所有检测结果都为阳性;反复冻融标本核酸定量值(IU/m L)随时间延长有逐步下降趋势,在4 h、24 h、48 h、72 h、7 d和14 d检测值分别为:36.9;62.6,89.4,58.8,88.1,68.8;68.0,67.6,40.2,57.9,61.6;15.0,19.3,69.9,37.5,56.8;16.9,21.6,15.0,37.7,15.0;26.4,30.8,49.4,15.0,42.7,第4次、第5次和第6次冻融循环中都有1个检测结果低于检测限(15.0)。4℃保存7 d内定量检测结果稳定,d14检测结果显著下降(P0.05),出现了3个低于检测限(15.0)的结果,在4 h、24 h、48 h、72 h,7 d和14 d时,核酸定量检测结果(IU/m L)分别为36.9;38.0,32.3,40.4,31.5;26.7,43.8,50.8,59.9,44.3;37.9,25.3,63.4,55.5,74.6;50.5,19.2,31.8,95.6,17.1;39.8,30.7,15.0,15.0,15.0。结论血浆标本储存在4℃中小于7 d,冻融循环不超过3次对HCV RNA检测结果无明显影响。