肺腺癌细胞增殖分化及抗凋亡作用与STAT3的调控效应

目的:探明STAT3在肺腺癌细胞中增殖分化、抗凋亡作用与耐药之间的关系。方法:2003-09/2004-01在第三军医大学,采用浓度梯度递增法诱导A549形成耐药细胞系,免疫组化及蛋白印迹法联合检测A549及耐药株中STAT3,肺耐药蛋白,多药耐药蛋白表达情况。结果:成功诱导了A549/CARP耐药细胞株。免疫组化:A549组,A549/CARP组STAT3阳性细胞数差异无显著性意义(146.53±23.41和166.73±43.06,t=1.519,P>0.05);肺耐药蛋白(119.93±42.10和172.67±44.89,t=3.350)和多药耐药蛋白(112.40±35.07和151.73±33.92,t=3.747)阳性细胞数差异有显著性意义(P<0.01);STAT3,肺耐药蛋白,多药耐药蛋白之间表达均无相关性意义(P>0.05)。蛋白印迹:A549组,A549/CARP组均存在STAT3蛋白的表达,二者差异无显著性意义(P>0.05);STAT3,肺耐药蛋白,多药耐药蛋白之间表达均无相关性(P>0.05)。结论:STAT3参与了肺腺癌的增殖分化和抗凋亡作用,并未参与介导肺腺癌的耐药;肺耐药蛋白和多药耐药蛋白均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;肺耐药蛋白和多药耐药蛋白介导的耐药机制与STAT3信号传导途径无关;可通过破坏STAT3信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖,为肺癌的治疗提供以STAT3为靶向的基因治疗。     

5种蛋白在肠道腺癌中的表达及临床意义

目的探讨肠道腺癌中肺耐药相关蛋白(LRP)、P-糖蛋白(P-gp/P170)、拓扑易构酶(ToPoⅡ)、胸腺嘧啶合成酶(Ts)及谷胱甘肽转移酶(GST)-π的表达水平及其临床意义。方法采用免疫组化法检测96例原发性肠道腺癌及15例正常肠黏膜中Ts、P170、ToPoⅡ、LRP、GST-π的表达情况,并综合分析其与各临床参数和预后的关系。结果 LRP、P170、ToPoⅡ、Ts在肠道腺癌组织中呈高表达状态;5种蛋白在癌组织中的表达水平与年龄、性别无关,但在有淋巴结转移者表达高于无淋巴结转移者,LRP、P170在低分化腺癌组织中的表达明显高于高中分化腺癌,而Ts的表达明显低于高中分化腺癌;浸润肌层及以内的腺癌表达ToPoⅡ明显高于浸润至浆膜者;LRP、P170、Ts阳性表达患者的5年存活率低于阴性表达者。结论 Ts、P170、ToPoⅡ、LRP、GST-π5种耐药蛋白与肠道腺癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及5年存活率均有不同程度的相关性,这在制订肠道腺癌的个性化化疗方案以及患者预后评估上具有重要的临床意义。     

多药耐药基因相关蛋白在原发性肝癌中的表达及意义

目的探讨原发性肝细胞癌中耐药基因相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶-Ⅱ(Topo-Ⅱ)、谷胱苷肽-S-转移酶(GST-π)的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法S-P法检测49例原发性肝癌组织、14例肝硬化组织及13例正常肝组织中P-gp、Topo-II、GST-π的表达。结果肝癌组三者表达均高于肝硬化组及正常组(P<0.05),肝硬化组与正常组之间两者表达差异无统计学意义。P-gp表达与肿瘤Edmondson分级呈负相关;Topo-II表达则与Edmondson分级和转移呈正相关。P-gp、Topo-II表达呈负相关。结论联合检测肝癌耐药基因相关蛋白P-gp、Topo-II、GST-π的表达有助于临床判断肝癌对化疗的敏感性及预后。     

Mucin-3和MDR3在胆固醇结石形成中的作用

目的探讨黏蛋白Mucin-3基因和多重耐药因子3（MDR3）在胆固醇结石形成中的作用及其相互关系。方法应用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,检测Mucin-3和MDR3在36例胆囊结石（结石组）、20例胆囊炎（炎症组）和12例正常胆囊（对照组）的胆囊黏膜和肝组织中的表达。结果结石组和炎症组胆囊黏膜Mucin-3表达阳性率分别为30.1%（11/36）和35.0%（7/20）,显著低于对照组75.0%（9/12）（2χ=12.74、13.46,P〈0.01）;结石组与炎症组之间比较,差异无显著性（χ2=0.21,P〉0.05）。结石组的肝组织中MDR3 mRNA的表达量低于炎症组和对照组,差异有显著性（F=19.785,q=8.432-10.037,P〈0.01）;炎症组肝组织MDR3 mRNA的表达量与对照组比较差异无显著性（P〉0.05）。结石组胆囊黏膜中Mucin-3蛋白阳性表达者肝组织中的MDR3 mRNA的表达量与Mucin-3蛋白阴性表达者比较,差异有显著意义（t=3.142,P〈0.05）。结论 Mucin-3基因参与了胆囊结石形成的全过程。在胆囊结石形成的后期阶段,MDR3与Mucin-3基因相互作用,共同影响胆囊结石的形成。     

肺腺癌细胞STAT5信号传导途径的初步研究

目的探讨STATS在肺腺癌细胞中增殖分化,抗凋亡作用与耐药之间的关系。方法采用浓度递增法诱导A549细胞株形成耐药细胞系,免疫组检测A549及耐药株（A549／CARP）中STATS．LRP、MRP蛋白表达情况。结果成功诱导了A549／CARP耐药细胞株。免疫组化显示A549组、A549／CARP组STATS阳性细胞数差异无统计学意义（P〉0．05）;LRP、MRP阳性细胞数差异有统计学意义（P〈0．01）STATS、LRP、MRP之间均无相关性（P〉0．05）。结论STATS参与了肺腺癌细胞的增殖分化和抗凋亡作用,并没参与介导肺腺癌的耐药;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌细胞的耐药,但二者之间无相关性;LRP、MRP介导的耐药机制与STATS信号传导途径无关;可通过破坏STAT5信号传导来控制肿瘤细胞的生长和繁殖。STATS可能成为肺癌基因治疗的新靶点。     

非小细胞肺癌肺耐药相关蛋白和多药耐药相关蛋白表达与化疗疗效关系的探讨

化疗是治疗晚期非小细胞肺癌的主要手段之一。目前研究发现,化疗失败的主要原因是由于多药耐药（multi—drug resistance,MDR）现象的产生,即肿瘤细胞对多种化疗药物产生的耐药,而肿瘤的这种多药耐药的产生是多途径、多基因共同参与的过程。肺耐药相关蛋白（LRP）是人类的主要穹隆蛋白,多药耐药相关蛋白（MRP）是ABC家族成员之一的跨膜蛋白,二者在MDR中发挥着重要作用。我们应用免疫组化技术检测LRP和MRP在112例非小细胞肺癌支气管镜活检组织中的表达水平,并探讨其与化疗疗效的关系。     

多药耐药基因在大肠癌组织中的表达及其体视学测定研究

目的:探讨两种多药耐药基因在大肠癌组织中的表达及对其肿瘤细胞进行体视学分析。方法:采用微波EnVision免疫组化法联合检测63例大肠癌患者癌组织中P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达水平。运用图像分析系统在显微镜下测量肿瘤细胞的体视学参数,依据有关体视学公式计算出参数核的体密度(Vvn)、核的表面积密度(Svn)、核的平均体积(V)、核的平均表面积(S)、核的平均自由程(")、核的数密度(Nv)、核的平均曲度密度(Kv),比较这些参数在不同分化肿瘤中的差异。结果:P-gp和MRP在大肠癌组织中的阳性表达率分别为54%和30%。参数Vvn、Svn、V、S依高、中、低分化的顺序增加,Kv,Nv、λ依高、中、低分化的顺序减小,Vvn、Svn参数的比较差异有显著性(P<0.05)。结论:大肠癌组织表达多种耐药因子,各耐药因子间共表达具有明显相关性。所有的多药耐药因子表达均与大肠癌分化程度有密切关系,肿瘤细胞Vvn、Svn参数是肿瘤细胞分化的重要指标,且为临床形态学诊断提供了依据。     

卵巢上皮癌组织TLR4和P—gP表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体4（TLR4）、P糖蛋白（P-gp）在卵巢上皮癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法,检测50例卵巢上皮癌（化疗敏感组25例,化疗耐药组25例）组织和10例正常卵巢组织中TLR4、P—gP的表达。结果卵巢上皮癌组织中TLR4和P—gP的阳性表达率分别为62％和46％,明显高于正常卵巢组织的20％和10％（χ^2=5．939、4．500,P〈0．05）。卵巢上皮癌化疗耐药组TLR4和P—gP阳性表达率明显高于化疗敏感组（χ^2=6．876、6．522,P（0．05）。卵巢上皮癌组织TLR4的表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性（χ^2=6．848、6．376、5．433,P〈0．05）,P—gP表达与病理分级、淋巴结转移具有相关性（χ^2=9．071、6．402,P〈0．05）;TLR4、P—gP蛋白表达具有正相关性（r=0．392,P〈0．05）。结论TLR4和P-gP的高表达及其相关性与卯巢上皮癌的化疗耐药及预后关系密切。     

原发性卵巢癌组织中肺耐药相关蛋白的表达及其临床价值

目的 研究肺耐药相关蛋白（LRP）在原发性卵巢癌组织中的表达状况，探讨其在卵巢癌化学治疗耐药中的作用机制，以及与临床病理生物学特征间的相关性。方法 应用免疫组织化学技术对52例原发性卵巢癌、12例卵巢良性肿瘤和10例正常卵巢组织中肺耐药相关蛋白表达状况进行测定。结果 肺耐药相关蛋白（LRP）在卵巢癌组织中阳性表达率均显著高于良性肿瘤和正常组织对照组。LRP阳性表达与卵巢癌组织类型、肿瘤分化程度无关，但与临床病理分期及化疗敏感性相关显著，Ⅲ、Ⅳ期组织中LRP阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期。结论 LRP在原发性卵巢癌中存在较稳定的表达。检测LRP对前瞻性预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有一定的临床指导价值。     

As2O3对人胃癌多药耐药细胞模型的逆转耐药作用

目的体外建立人胃癌细胞多药耐药模型,研究多药耐药机制及三氧化二砷（As2O3）对其逆转耐药作用。方法采用阿霉素（ADM）浓度梯度递增法诱导建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADM,MTT法检测SGC7901/ADM细胞对ADM、长春新碱（VCR）、紫杉醇（TAX）的敏感性及As2O3对其逆转耐药倍数,免疫细胞化学法（PV法）检测细胞P-糖蛋白（P-gp）、Caspase3表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SGC7901/ADM细胞对ADM、VCR和TAX均耐药,耐药倍数分别是7.49、7.56及5.33。在As2O3作用48h后,3种抗癌药物对SGC7901/ADM细胞生长抑制50%时的浓度（IC50）明显降低,差异有显著性（F=169.766-1 199.812,q=6.86-70.40,P〈0.01）;耐药细胞经As2O3及环孢素A（CsA）作用后,P-gp表达明显下调,差异有显著性（F=42.870,q=7.70-21.50,P〈0.01）;As2O3高浓度组细胞中Caspase3表达上调,差异有显著性（F=7.220,q=6.63,P〈0.05）。As2O3作用组SGC7901/ADM细胞凋亡率随As2O3浓度增加而增加（F=1 986.63,q=21.23-95.08,P〈0.05）。结论 SGC7901/ADM细胞具有多药耐药性,As2O3可逆转其耐药,并呈剂量依赖性。     

14—3—3Sigma蛋白质在肺腺癌中的表达及意义

【目的】探讨14—3—3Sigma蛋白质在肺腺癌组织中的表达及意义。【方法】采用免疫组化方法检测正常肺组织、炎性假瘤、肺腺癌组织和转移淋巴结标本中14—3—3Sigma蛋白质的表达,分析其临床意义。【结果】14—3—3Sigma蛋白的表达主要定位于细胞膜,部分位于胞浆,14—3—3Sigma蛋白在正常肺组织和炎性假瘤不表达或存在弱阳性表达,而在肺腺癌组织和转移淋巴结中存在中到强阳性表达,14—3—3Sigma蛋白在正常肺组织、炎性假瘤、肺腺癌组织和转移淋巴结中表达有显著差异性（PdO．05）,但14—3—3Sigma蛋白在正常肺组织和炎性假瘤比较无统计学意义（P〉O．05）。【结论]14—3—3Sigma蛋白质可能与肺腺癌的发生、发展和转移有关。     

STAT3与SOCS3在子宫内膜腺癌中的表达及生物学行为相关性分析

目的探讨STAT3、SOCS3基因蛋白在子宫内膜腺癌中的表达及意义,以期了解这两种蛋白在子宫内膜腺癌癌变过程中的作用。方法收集46例手术切除的子宫内膜腺癌组织标本,同时取30例正常子宫内膜组织作为对照,运用组织芯片技术以及免疫组织化学的方法检测子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中STAT3、SOCS3蛋白的表达。结果 46例子宫内膜癌组织中STAT3的阳性表达率为76.1%,SOCS3的阳性表达率为19.6%,两者在子宫内膜腺癌与正常子宫内膜组织之间的阳性率表达差异有显著的统计学意义(P<0.05)。二者的阳性表达与子宫内膜腺癌患者的肿瘤分化程度有关,与手术病理分期、肌层浸润及绝经情况等临床特征无相关性(P>0.05)。子宫内膜腺癌中STAT3与SOCS3呈负相关。结论子宫内膜腺癌中STAT3呈高表达,SOCS3呈低表达,提示STAT3促进了子宫内膜腺癌的发生发展,而SOCS3抑制子宫内膜腺癌癌变的作用。     

急性髓性白血病的多药耐药基因-1 C3435T基因多态性与P—gp表达的相关性研究

目的:研究急性髓性白血病(acute myeloid leukaemia,AML)患者的多药耐药基因(muhidmg resistance,MDR)-1 C3435T基因多态性和P-gp(permeability-glycoprotein)蛋白表达的相关性.方法:采用流式细胞仪测定P-gp表达水平,限制性内切酶多型性-聚合酶链反应测定MDR-1 C3435T多态性,并统计其相关性.结果:中国AML患者中MDR-1 3435基因座上的多态性有自己的分布特点,MDR-1 3435TT和低P-gP表达显著相关.结论:黄种人AML患者中MDR-1 3435基因座上的多态性有与白种人不同的分布特点,可能为不同种族的AML患者对相同的化疗药物有效率却不同的原因之一;MDR-1 3435TY有望预测AML患者化疗敏感程度较其他携带者高,可能可以作为良性预后因素之一.     

肺腺癌多药耐药基因的检测及临床应用研究

肿瘤细胞产主耐药性是肿瘤化疗难以取得预期效果的重要因素之一。在非P—gp(p糖蛋白)介导的肿瘤耐药细胞中，发现有多药耐药基因(MRD—1)的过度表达，我们检测了32例肺腺癌病人的外周血中MDR—1基因和多药耐药蛋白(P—170)的表达水平与临床耐药的相关性，现将结果报告如下。     

肺鳞癌及腺癌中NGAL表达的免疫组化研究

目的：探讨中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）在肺鳞癌及腺癌组织及远癌组织中的表达及与临床病理因素的关系。方法应用免疫组织化学方法检测 NGAL在35例肺鳞癌、30例肺腺癌组织及相应42例癌旁肺组织中的表达,分析其与病变类型的关系及其在癌组织的表达率与临床病理特征的联系。结果 NGAL在肺腺癌组织中的阳性表达率明显高于肺鳞癌组织;而二类癌组织中的阳性表达率又明显高于相应的癌旁组织,淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。阳性表达与患者年龄、性别、吸烟情况、病理类型、分化程度无关（P＆gt;0.05）。结论 NGAL在肺鳞癌及腺癌肿瘤组织内的高表达,且与肿瘤类型有关,有可能成为预测肺鳞癌及腺癌发生发展的肿瘤标志物。     

霍奇金淋巴瘤细胞STAT3的活化对bcl-2蛋白表达的调控作用

【目的】探讨霍奇金淋巴瘤(HL) 细胞信号转导物与转录激活剂3(STAT3) 的活化对bcl2 蛋白表达的调控作用。【方法】采用SP免疫组织化学方法检测了40 例不同亚型HL 之RS/H 细胞及13 例反应性增生淋巴结(RH) 的STAT3 和抗凋亡基因蛋白bcl2 的表达。【结果】STAT3 及bcl2 蛋白在HL 不同亚型的RS/H 细胞中均呈过度表达( 阳性率分别为65 % 和67 .5 % ) ,且两者的阳性率呈明显的正相关( P < 0 .05) 。【结论】STAT3 的活化可能通过介导抗凋亡基因bcl2 的过度表达而使RS/H 细胞呈持续性增殖,并在HL 之RS/H 细胞恶性转化及演进中起重要作用。     

原发性卵巢癌组织中肺耐药相关蛋白的表达及其临床价值

目的研究肺耐药相关蛋白(LRP)在原发性卵巢癌组织中的表达状况,探讨其在卵巢癌化学治疗耐药中的作用机制,以及与临床病理生物学特征间的相关性。方法应用免疫组织化学技术对52例原发性卵巢癌、12例卵巢良性肿瘤和10例正常卵巢组织中肺耐药相关蛋白表达状况进行测定。结果肺耐药相关蛋白(LRP)在卵巢癌组织中阳性表达率均显著高于良性肿瘤和正常组织对照组。LRP阳性表达与卵巢癌组织类型、肿瘤分化程度无关,但与临床病理分期及化疗敏感性相关显著,Ⅲ、Ⅳ期组织中LRP阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期。结论LRP在原发性卵巢癌中存在较稳定的表达。检测LRP对前瞻性预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有一定的临床指导价值。     

STAT3反义寡核苷酸对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的研究

目的：探讨STAT3反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的影响,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的思路和方法。方法建立裸鼠体内肺腺癌移植瘤动物模型,待瘤体直径＞0.5 cm后,瘤内多点注射STAT3 ASODN,给药剂量：15 mg/kg,1次/d,连续2周,给药后2 h联合γ射线局部照射总剂量20 Gy,每次2 Gy,每周5次,连续2周,照射剂量率0.75 Gy/min,定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;测量肿瘤质量,计算抑瘤率;记录存活情况,估算生存率,绘制生存曲线,计算总生存期;免疫组化检测肿瘤组织细胞内STAT3蛋白表达变化情况;Western Blot 检测肿瘤组织内 P-STAT3、Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达情况。结果反义（antisense,AS）＋照射（irradiation,IR）组肿瘤体积治疗第8天开始明显小于其余各组肿瘤体积（P＜0.05）;AS＋IR组的抑瘤率为68.4%,高于IR组与AS组的之和;AS＋IR组的平均总生存期为（28.38±0.96）d,明显高于IR组及无义（nonsense,NS）＋IR组（P＜0.005）;STAT3蛋白及其下游Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达变化明显下降, STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 STAT3反义寡核酸能够增强肺腺癌裸鼠移植瘤的辐射敏感性,具有良好的放疗增敏剂临床应用开发前景。     

非那雄胺对老年良性前列腺增生患者骨代谢及骨密度的影响分析

目的 探讨非那雄胺对老年良性前列腺增生患者骨代谢指标及骨密度的影响.方法 回顾性分析我科住院老年良性前列腺增生患者的临床资料,按是否服用非那雄胺分为非那雄胺组及未服用非那雄胺组(对照组).其中非那雄胺组168例,对照组176例.采集两组患者下述临床资料:身高,体质量,计算体质量指数(BMI),血清钙(Ca),血清磷(P),甲状旁腺激素(PTH),25羟维生素D3(25(OH) VD3),骨代谢指标包括:总骨1型前胶原氨基端延长肽(TP1 NP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)、骨钙素(OC).骨密度(g/cm2)包括:腰椎(L1～4),股骨颈,股骨大粗隆,股骨全部.结果 ①与对照组比较,非那雄胺组在骨代谢指标,骨密度方面差异无统计学意义(P＞0.05).②非那雄胺组中,按年龄分组,各亚组中骨代谢指标、骨密度差异无统计学意义(P＞0.05).③非那雄胺组中,按应用非那雄胺时间分组,各亚组中骨代谢指标、骨密度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 非那雄胺对于老年良性前列腺增生患者骨代谢及骨密度影响与对照组比较差异无统计学意义,且高龄患者及长期服用非那雄胺对骨代谢及骨密度亦没有影响.     

卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及作用

目的探讨在卵巢癌细胞多药耐药中miR-193a-3p的表达及其作用。方法采用MTT法分析卵巢癌细胞系A2780、SKOV-3、HO8910和ES-2对5种化疗药物的敏感性,确定其半数抑制浓度(IC_(50))值;用定量实时PCR(qRT-PCR)方法检测miR-193a-3p;转染miR-193a-3p mimic于最低表达miR-193a-3p的相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中,用qRT-PCR方法检测转染效率;用MTT方法在转染后相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中检测其对上述化疗药物敏感性的差异。结果在相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中miR-193a-3p的表达最低,而在相对多药最耐药的卵巢癌细胞系SKOV-3中miR-193a-3p的表达最高(P0.01);转染miR-193a-3p mimic于相对多药最敏感的卵巢癌细胞系ES-2中后,使其增加对(紫杉醇,卡铂,多西他赛)化疗药物的耐受性(P0.01)。结论卵巢癌细胞多药耐药的调控中可能有miR-193a-3p的参与。