分子探针法快速发现半边旗中迈克尔反应受体分子

目的：快速发现半边旗中的迈克尔反应受体分子,为该类活性成分的进一步研究奠定基础.方法：以乙醇钠为催化剂,将半边旗提取液与紫外分子探针对硝基苯甲酰乙酸乙酯进行柱前衍生迈克尔加成反应.反应完毕后,加入乙酸中和催化剂终止反应得反应液.将反应液与半边旗原提取液在相同条件下进行HPLC对比分析.发生加成反应的迈克尔反应受体分子色谱峰面积将相应减小,并产生迈克尔加成产物的新色谱峰.综合保留时间、色谱峰形和DAD紫外光谱图确定原提取液和反应液HPLC图谱中的迈克尔反应受体分子.结果：从半边旗提取液HPLC图谱上鉴定出迈克尔反应受体分子8个,其中2个色谱峰化合物进行迈克尔加成反应速度较快,基本反应完全.根据半边旗化学成分及其DAD紫外光谱特征判断,这些迈克尔反应受体分子可能为对映贝壳杉烯二萜成分.结论：首次采用对硝基苯甲酰乙酸乙酯分子探针法快速发现了半边旗中迈克尔反应受体分子.     

半边旗中二萜类化合物的超临界CO2萃取及HPLC-MS分析

目的　建立一种高效准确的提取和分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法　以超临界 CO2 与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类化合物 ,采用正交设计法优化萃取条件 ;建立了 HPL C-大气压化学电离源(APCI) - MS联用的分析方法 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行含量测定 ,以选择离子峰面积与总离子流峰面积的比值优选改性剂。主要的二萜类化合物 5 F的准分子离子为 [M- H]- 1。采用 [M- H]- 1为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果　超临界流体萃取最佳条件 :2 5 MPa、6 0℃、15 %甲醇、流量 3.0 m L /min;分析条件 :Diamonsil ODS色谱柱 (15 0 mm× 4 .6 mm,5 μm) ,流动相为 CH3CN- 2 mm ol/ L NH4 AC(35∶ 6 5 ) ,流速 1.0 m L / m in,进样 5μL ,线性范围为 0 .0 5～ 2 .5μg,检出限达 0 .4 ng。 5 F的加样回收率为 97.8% (n=3)。结论　本法提取效率高、检测灵敏度高、选择性好 ,可应用于半边旗中二萜类抗癌化合物的深入研究和质量标准的制定。     

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS益智仁中倍半萜类物质的分析与鉴定

目的建立中药复杂体系快速、准确鉴定的分析方法,系统阐明益智仁(益智Alpinia oxyphylla的干燥成熟果实)中倍半萜类物质的化学组成。方法采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,在优化倍半萜类物质提取工艺的基础上,通过质谱全扫描捕捉未知化合物的精确相对分子质量及二级碎片离子信息,同时与对照品的相对保留时间和质谱数据进行比对,并结合相关参考文献及数据库,实现对益智仁中倍半萜类未知化合物的准确快速鉴定。结果共鉴定出24种倍半萜类化合物,根据骨架结构将其归为4类,其中9个桉叶烷型、6个杜松烷型、8个艾里莫芬烷型、1个刺参酮型。结论利用所建立的分析方法,实现对益智仁中多种倍半萜类成分的快速、准确鉴定,为益智仁药效物质基础及质量控制研究提供理论依据。     

基于HPLC-Q-TOF/MS的六经头痛片化学成分分析

目的运用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(HPLC-Q-TOF/MS),对六经头痛片中的化学成分进行分析鉴定。方法采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6μm,5μm)反相HPLC梯度洗脱法分离各主要成分,电喷雾电离源正负离子模式下对色谱流出物进行高分辨四级杆飞行时间串联质谱检测,对各主要色谱峰进行归属;同时结合化合物准确相对分子质量、质谱碎片离子信息及相关文献数据分析鉴定化合物。结果通过质谱裂解规律结合自建的8味组方药材的化学成分库信息,共鉴定出95个化合物,主要包括异黄酮类、香豆素类、环烯醚萜类和苯酞类等成分,并对化合物的药材来源进行了归属。结论采用HPLC-Q-TOF/MS联用技术比较全面地阐明了六经头痛片的化学组成,为其药效物质基础研究和质量控制提供了参考。     

宽叶缬草中1个新的环烯醚萜类化合物

目的研究缬草属植物宽叶缬草Valeriana officinalis var.latiofolia的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、反相柱色谱、Sephadex LH-20、薄层制备色谱等色谱法对宽叶缬草根中的化学成分进行分离纯化,应用质谱、核磁等波谱技术和化学方法鉴定化合物的结构。结果从宽叶缬草95%乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到6个化合物,分别鉴定为环烯醚萜类化合物valeriridoid P(1),马榄烷型倍半萜类化合物dihydroxymaaliane(2)、madolin F(3),双环吉玛烷型倍半萜类化合物madolin A(4)、volvalerenal B(5)、kissoone A(6)。结论化合物1为罕见的含有2个氧桥的环烯醚萜类新化合物,化合物2~4为该属植物中首次分得,化合物6为该植物中首次分得。     

坤泰胶囊化学成分的LC-ESI-MS/MS分析

目的:建立坤泰胶囊中化学成分的高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS/MS)并对其化学成分进行初步鉴定。方法:采用LC-ESI-MS/MS对坤泰胶囊进行成分分析与鉴定,选用C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min~(-1),柱温30℃。质谱使用电喷雾(ESI)离子源,正离子模式采集数据。质量扫描范围为m/z 50~1 500。对各色谱峰质谱图进行分析,根据准分子离子峰判断相对分子质量,进一步根据各主要碎片离子、紫外光谱、保留时间等信息,与文献数据进行比较推测化合物的结构。结果:从坤泰胶囊中鉴定了21个化合物,主要为黄酮类化合物和生物碱类化合物,并对化合物的药材来源进行了归属。其中,主要有来自黄芩的黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等,来自黄连的巴马汀、小檗碱、黄连碱、药根碱、非洲防己碱、木兰花碱等,来自白芍的芍药苷等。结论:采用LC-ESIMS/MS能够对坤泰胶囊中主要成分进行快速分析与鉴定,为坤泰胶囊进一步开展指纹图谱、质量控制、药物代谢研究和谱效关系研究奠定了基础。     

UPLC-ESI-TOF/MS应用于黄芩化学成分的快速分析

目的:建立黄芩的超高效液相色谱-电喷雾-飞行时间质谱(UPLC-ESI-TOF/MS)分析方法,研究黄芩的化学成分。方法:分别采集UPLC-TOF/MS全扫描质量色谱图和源内裂解的UPLC-TOF/MS色谱图,通过分子离子精确质量和同位素拟合度的分析确定分子式,在数据库中检索匹配的化合物,进而解析源内裂解的质谱图,从而对各峰进行鉴定或结构表征。结果:共鉴定或表征了黄芩药材中31个成分,均为黄酮类化合物。结论:该方法快速、灵敏、准确,可用于黄芩化学成分的分析,也为其它中药的成分分析提供了思路。     

高效液相色谱-电喷雾-飞行时间串联质谱分析泽兰水提物

目的 采用高效液相色谱-电喷雾-飞行时间串联质谱法(HPLC-ESI-TOF-MS/MS)对泽兰水提物的主要成分进行分析鉴定.方法 超声法制备泽兰水提物,TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)反相HPLC梯度洗脱法分离各主要成分;电喷雾电离源正离子模式和负离子模式对色谱流出物进行离子化,四级杆飞行时间串联质谱法对各主要色谱峰进行归属.结果 通过二级高分辨质谱分析结合对照品数据及相关文献共鉴定22个化合物的结构,其主要结构类型为氨基酸类、酚酸类、萜类、黄酮及黄酮苷类、甾醇类和脂肪酸类.结论 HPLC-ESI-TOF-MS/MS可从保留时间、紫外吸收光谱、精确相对分子质量、分子式和二级结构碎片等方面对泽兰的主要成分进行定性分析,为中药药效物质基础研究提供一种快速准确的分析方法.     

UPLC-Q-TOF-MS/MS技术研究了哥王水提物中的化学成分

该研究应用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对了哥王水提物中化学成分进行定性分析。采用AcclaimTMRSLC 120-C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,2. 2μm);以0. 2%甲酸铵缓冲盐溶液(A)-0. 2%甲酸铵缓冲盐甲醇溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;柱温30℃;采用电喷雾离子源,正、负离子全扫描模式采集数据。通过二级高分辨质谱分析结合对照品数据及相关文献,从了哥王水提物中共鉴定出52个化合物,包括11个香豆素类、13个黄酮类、10个木脂素类、2个酰胺类、4个酚酸类、6个倍半萜类和6个其他类化合物,并首次从了哥王中发现indicanone同分异构体、β-hydroxypropiovanillone和epiprocurcumenol 3个化合物。此外,该研究对一些化合物的质谱裂解规律进行推断总结,并首次阐述愈创木烷型倍半萜类化合物的裂解规律,为研究类似化学成分的质谱裂解途径提供参考。该研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,为鉴定中药复杂化学成分提供了简单快速的方法,为进一步研究了哥王化学成分奠定基础。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的短管兔耳草化学成分快速识别研究

采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术快速分析鉴别短管兔耳草的化学成分,为其临床应用提供参考依据,试验采用UPLC-Q-TOF-MS/MS仪器,YMC-Triart C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以乙腈-0.2%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在负离子模式下采集数据,通过保留时间、精确分子离子峰和二级质谱裂解碎片,并结合参考文献,对短管兔耳草成分进行鉴定,该实验共鉴别出22个化合物,其中黄酮类化合物11个,苯乙醇苷类化合物6个,环烯醚萜类化合物1个,有机酸类化合物4个。UPLC-Q-TOF-MS/MS方法能快速鉴别短管兔耳草中的各类化学成分,方法简单,快速,可为短管兔耳草的临床应用提供物质依据。     

半边旗二萜类活性成分的提取分离研究

 目的　建立一种高效的提取和富集分离半边旗中二萜类活性成分的方法。方法 用超临界CO₂与改性剂乙醇组成的复合流体萃取半边旗中二萜类活性成分,采用正交实验法优化萃取条件;采用D101大孔吸附树脂吸附、乙醇阶梯洗脱的方法分离富集半边旗中二萜类活性成分;以高效液相色谱(HPLC)-大气压化学电离源(APCI)-质谱(MS)联用的分析方法跟踪检测,以主要的二萜类活性成分5F为监测目标,采用准分子离子[M-H]^-1为选择离子监测离子,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量。结果 超临界流体萃取的最佳条件为25MPa,60℃,15％甲醇,流量3.0mL·min^-1;采用35％乙醇洗脱D101大孔吸附树脂可除极性杂质,45％～55％乙醇洗脱流份可富集分离半边旗中二萜类活性成分。结论　采用超临界CO₂萃取与大孔吸附树脂吸附分离相结合,提取分离半边旗中二萜类活性成分,具有效率高、不使用有毒有害溶剂、环境污染程度低的特点,该方法易于工业化。     

半边旗中抗肿瘤成分6F的分离纯化

目的:分离纯化半边旗中抗肿瘤活性成分6F(即7β,9-二羟基-15-氧-对映-贝壳杉烷-16-烯-19,6β-内酯)。方法:采用二氧化碳超临界萃取、结晶与重结晶、硅胶柱层析方法进行分离、纯化6F;采用HPLC-MS、HPLC和TLC检测6F的纯度。结果:经HPLC和TLC检测,可以得到6F的纯化合物。结论:采用结晶与重结晶、硅胶柱层析方法,可有效纯化半边旗中抗肿瘤成分6F。     

半边旗提取物5F影响高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞周期的影响及其作用机制.方法:以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot法分析NF-κB(P65)、FAK的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平.结果:不同浓度的5F分别处理细胞24 h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞术分析表明5F使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;同时,5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并降低FAK酪氨酸磷酸化水平.结论:5F对HO-8910PM细胞周期的影响与NF-κB(P65)表达下调及FAK的表达上调有关.     

半边旗药材超声提取工艺的研究

目的优选半边旗的超声提取工艺。方法采用L9(34)正交实验,考察乙醇浓度(A)、提取时间(B)、提取次数(C)和料液比(D)4个影响因素,以5 F含量为评价指标,并采用薄层扫描法进行测定。结果半边旗超声提取的最佳工艺为A2B2C3D3,即加10倍量70%乙醇,超声提取3次,30 min/次。结论优选得到的工艺稳定可行。     

薄层色谱扫描法测定不同来源半边旗中5F的含量

目的：测定10批不同来源半边旗中5F的含量.方法：采用薄层扫描法测定半边旗中5F含量.结果：该方法的线性范围为0.504～2.520μg,平均回收率为96.68%,RSD=1.24%（n=5）.结论：该方法可行,重复性好,样品处理简单,便于检测.     

半边旗活性成分5F对C26结肠癌细胞cAMP水平的影响

目的:探讨半边旗活性成分Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对C26结肠癌细胞环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响。方法:以不同时间、不同浓度5F处理C26细胞,放免法测定cAMP含量。磷酸二酯酶抑制剂3-Isobutyl-1-methylxanthine(IBMX)预先孵育后再与5F联合应用,放免法检测cAMP含量,MTT法检测C26细胞活力。结果:5F可以显著增加cAMP含量,具有时间和剂量依赖性;5F对cAMP含量的作用不受IBMX影响,IBMX可以增强5F对cAMP的促进作用和对C26细胞增殖的抑制作用。结论:5F可能通过激活腺苷酸环化酶(AC)增加C26细胞cAMP含量,这可能是5F抗肿瘤的作用机制之一,5F与IBMX联合应用具有协同效应。     

半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。     

柔茎香茶菜中的二萜化合物

香茶菜属植物富含结构多样、新奇的对映,贝壳杉烷二萜及其衍生物,前期对柔茎香茶菜Rabdosia flexicaulis的化学成分研究尚不够系统,仅从中发现3个这类化合物.为了寻找结构新颖、活性显著的二萜化合物,采集了四川省道孚县的柔茎香茶菜地上部分,采用多种柱色谱法和波谱分析手段,从乙酸乙酯部位中分离并鉴定出6个二萜化...     

半边旗提取物5F抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察半边旗提取物5F体外、体内抗肿瘤活性及其毒性。方法:用MTT法观察5F注射液对SPCA-1,K562瘤株的体外抗肿瘤作用;采用荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率检测提取物5F对小鼠移植性肿瘤S180抑制作用;观察5F对荷艾氏腹水癌小鼠的生命延长率;胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数、白细胞数等指标观察5F对免疫器官的影响。结果:5F注射液对SPCA-1、K562瘤株有显著的体外抗肿瘤作用;对小鼠肉瘤S180也有抗肿瘤活性;对荷艾氏腹水癌的小鼠生命有延长作用;同时对免疫系统有一定抑制作用。结论:半边旗有效成分5F有一定的体内、体外抗肿瘤活性;对荷瘤小鼠功能有抑制作用。     

狼毒大戟根中的萜类成分研究

目的:研究狼毒大戟Euphorbia fischeriana根中的萜类成分。方法:利用硅胶、MCI、ODS、Sephadex LH-20柱色谱及半制备高效液相色谱法(HPLC)等分离手段对狼毒大戟根中的萜类成分进行分离纯化,根据理化性质、波谱学数据分析鉴定化合物结构。结果:从狼毒大戟根的80%丙酮提取物中分离鉴定了7个萜类化合物,包括5个二萜类化合物和2个三萜类化合物,分别鉴定为7-羰基脱氢松香酸(1)、trogopteroid F(2)、陶塔二酚(3)、18-羟基弥罗松酚(4)、19-羟基弥罗松酚(5)、环木波罗-22-烯-3β,25-二醇(6)和羽扇豆醇(7)。结论:除了化合物6和7,其余化合物均为首次从狼毒大戟中分离得到。