转化生长因子β1和波形蛋白及结蛋白在糖尿病大鼠肾皮质中早期表达的研究

目的:探讨糖尿病大鼠早期不同阶段转化生长因子β1(TGF-β1)和波形蛋白(vimentin)、结蛋白(desmin)在大鼠肾皮质中表达的变化规律及其相互关系.方法:建立STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型;用RT-PCR法半定量检测早期各观察时点糖尿病大鼠肾皮质中TGF-β1和vimentin、desmin mRNA的表达水平.结果:①随着糖尿病病情的进展,TGF-β1和vimentin mRNA的表达量分别从模型建立后第7 d和第14 d起逐渐增多(P=0.001),desmin mRNA表达从第14 d起却逐渐减少(P＜0.05).②糖尿病组的TGF-β1与vimentin的mRNA表达呈正相关(r＝0.740,P=0.000),desmin与TGF-β1的mRNA表达呈负相关(r＝-0.695,P=0.000),desmin与vimentin的mRNA表达也呈负相关(r＝-0.591,P=0.002).结论:糖尿病大鼠早期肾皮质中TGF-β1和vimentin的表达逐渐增多,desmin的表达却逐渐减少,提示TGF-β1可能促进小管上皮细胞向成纤维细胞转化.     

糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶活性变化对TGF-β1 mRNA表达的影响

目的探讨糖尿病大鼠肾脏AR活性变化对TGF-β1 mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(C组);糖尿病组(D组)和糖尿病+维生素C治疗组(DT组).实验第9周检测肾脏皮质AR活性,原位杂交和图像分析系统检测肾脏皮质TGF-β1 mRNA表达水平.结果与正常对照组比较,糖尿病组肾脏皮质AR活性明显升高, TGF-β1 mRNA表达显著增加(P<0.01).糖尿病+维生素C治疗组8周后肾脏皮质AR活性较糖尿病组明显降低,肾脏TGF-β1 mRNA表达显著下降.结论糖尿病时肾脏TGF-β1 mRNA表达与AR活性变化有关.     

糖尿病大鼠肾脏蛋白聚糖Ⅱ和转化生长因子-β1mRNA的动态变化

目的了解糖尿病大鼠肾皮质中蛋白聚糖Ⅱ(PGⅡ)mRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA随时间的变化及相互关系.方法用链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病模型,在造模成功后第3、7、14、30、60、90天分别用免疫组化法检测糖尿病组和对照组肾脏Ⅳ型胶原分布,半定量RT-PCR法检测肾皮质PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA的含量.结果与对照组相比,糖尿病组肾脏Ⅳ型胶原含量增加(除第3、7天,其余时点均P<0.05),TGF-β1mRNA从第7天起升高(P<0.05),PGⅡmRNA后期升高(第60天P<0.05;第90天P=0.01).PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA呈正相关关系(r=0.7,P<0.01).结论STZ诱导的糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1mRNA和PGⅡmRNA先后升高,TGF-β1mRNA可能是引起PGⅡmRNA升高的原因之一.     

糖尿病大鼠肾脏蛋白聚糖Ⅱ和转化生长因子-β1mRNA的动态变化

目的了解糖尿病大鼠肾皮质中蛋白聚糖Ⅱ(PGⅡ)mRNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA随时间的变化及相互关系.方法用链脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病模型,在造模成功后第3、7、14、30、60、90天分别用免疫组化法检测糖尿病组和对照组肾脏Ⅳ型胶原分布,半定量RT-PCR法检测肾皮质PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA的含量.结果与对照组相比,糖尿病组肾脏Ⅳ型胶原含量增加(除第3、7天,其余时点均P<0.05),TGF-β1mRNA从第7天起升高(P<0.05),PGⅡmRNA后期升高(第60天P<0.05;第90天P=0.01).PGⅡmRNA和TGF-β1mRNA呈正相关关系(r=0.7,P<0.01).结论STZ诱导的糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1mRNA和PGⅡmRNA先后升高,TGF-β1mRNA可能是引起PGⅡmRNA升高的原因之一.     

中药复方糖肾康对实验性糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方糖肾康胶囊对早期糖尿病肾病的肾脏保护机制.方法:大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、糖脉康治疗组(C组)、伊那普里治疗组(D组)、糖肾康治疗组(E组),每组12只.观察56 d后,用RT-PCR检测各组肾皮质TGF-β1 mRNA的表达.检测体重、血溏、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、肾重指数.结果:B组56 d后出现体重显著降低(P＜0.01);血糖、肾重指数、血BUN与Cr水平显著升高(P＜0.01);肾皮质TGF-β1 mRNA的表达明显增高(P＜0.01).经过糖肾康56 d的治疗后,体重显著回升(P＜0.01);血糖、肾重指数、UAER显著降低(P＜0.01);肾皮质TGF-β1 mRNA的表达明显降低(P＜0.01).结论:糖肾康对早期糖尿病肾病的肾脏具有保护作用.其机制可能为糖肾康下调TGF-β系统的表达,后者有抑制细胞肥大、减少细胞外基质成分的合成的作用.     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TSP1表达的影响

目的 探讨噻唑烷二酮类(thiazolidinediones,TZD)药物吡格列酮对1型糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾组织中血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP1)及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组(NC)、模型组(DM,链脲佐菌素单次腹腔注射)、吡格列酮治疗组(DP)、给药对照组(NP).干预后10周末,检测各组24 h尿蛋白定量、血肌酐(serum creatinine,Scr)及肾脏肥大指数;RT-PCR法观察肾组织TSP1和TGF-β1 mRNA表达水平;免疫组化法观察肾组织内TSP1和TGF-β1蛋白表达水平.结果 DP组与DM组比较,血糖水平差异无统计学意义(P>0.05),但24 h尿蛋白和肾脏肥大指数明显降低(P<0.05).与Nc和NP组相比,DM及DP组TSPl和TGF-β1表达显著增高(P<0.01);与DM组相比,DP组TSP1和TGF-β1表达明显降低(P<0.05).结论 吡格列酮对DM大鼠具有直接肾脏保护作用,其机制不依赖于胰岛增敏(降糖),可能与降低肾组织TSP1和TGF-β1表达有关.     

复方红景天对肝纤维化大鼠肝组织Na+/Ca2+泵、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的: 探索复方红景天抗实验性大鼠肝纤维化的疗效与可能的分子机制. 方法: 用CCl4皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型,同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗,观察大鼠血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸含量及肝组织Na /Ca2 泵、TGF-β1,Ⅰ型前胶原α1 mRNA表达水平、肝组织病理学变化. 结果: 与模型组相比,复方红景天可明显降低大鼠血清PCⅢ(μg/L)(164.25±45.68 vs 265.54±98.21), CⅣ(96.73±14.68 vs 159.67±29.64), HA(289.35±75.68 vs 455.79±113.55)水平,(q=4.26,4.94,3.68,均为P<0.05);复方红景天可抑制NCX,TGF-β1,α1(Ⅰ) mRNA表达(半定量积分分别为1.50±0.19 vs 2.45±0.31,1.06±0.12 vs 2.47±0.37, 1.26±0.17 vs 2.50±0.40,q值分别为3.52,3.93,4.04,均为P<0.05). 肝组织纤维沉积明显减少(肝纤维化积分为2.43±0.70 vs 3.53±0.68,q=3.69,P<0.05). NCX, TGF-β1 mRNA表达与PCⅢ, CⅣ, HA, α1(Ⅰ) mRNA及肝组织的纤维化积分呈正相关,相关系数r分别为0.52, 0.49, 0.56, 0.48, 0.60及0.47, 0.61, 0.56, 0.49, 0.51(均为P<0.05). 结论: 复方红景天良好的抗肝纤维化作用,其分子机制可能与抑制NCX及TGF-β1 mRNA表达从而减少胶原纤维合成有关.     

活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和HGF表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)和肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)表达的影响.方法:雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组(NC),糖尿病模型组(DM),活性维生素D3治疗组(DC),每组10只.12周后,观测肾组织形态学和肾功能变化,尿白蛋白排泄率等指标的变化,用免疫组化法检测肾脏TGF-β1表达水平的变化,RT-PCR法检测肾皮质TGF-β1mRNA、HGFmRNA表达水平的变化.结果:与NC组比较,第12周末DM组大鼠肾脏肥大指数(KW/BW)、平均肾小球体积(MGV)、系膜面积比(FMA)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)均明显升高(P＜0.05),肾组织TGF-1mRNA及蛋白表达水平也显著升高(P＜0.05),同时肾皮质HGFmRNA表达也有所增加(P＜0.05).DC组HGFmRNA的表达水平较DM组显著升高(P＜0.05),而上述其他指标与DM组比较,则有明显的降低(P＜0.05).结论:活性维生素D3对于糖尿病肾脏病变至少具有部分保护作用,其机制可能为通过抑制糖尿病大鼠肾脏TGF-β1的过度表达,而上调HGF的表达,从而对糖尿病大鼠肾脏起保护作用.     

吡咯列酮对单肾切除的糖尿病大鼠肾脏纤维化的作用

目的 观察盐酸吡咯列酮对单肾切除的糖尿病大鼠肾脏纤维化的影响,并从纤维化相关基因表达改变的角度探讨其机制。方法 采用PAS、Northern blot和Western blot方法,检测口服吡咯列酮[3mg/(kg·d)]治疗对单肾切除的SIZ(35mg/kg)诱导性糖尿病大鼠模型的肾小球 ECM积聚情况,肾皮质中TGF-β1和TIMP-1的mRNA水平,以及PAI-1蛋白表达水平的作用。结果 与CTR和CTR+P组相比,DM的血糖、血脂、SBP和左肾/体重比均明显升高,肾小球ECM积聚程度明显增加,肾皮质中TGF-β1和TIMP-1的mRNA水平明显增加,PAI-1的蛋白含量也明显增加;与DM组相比,DM+P组的血糖、血脂和SBP无明显改变,但24h尿蛋白量、左肾/体重比和肾小球ECM积聚程度明显降低,肾皮质中TGF-β1和TIMP-1的mRNA水平明显降低,PAI-1的蛋白含量也明显降低。结论 吡咯列酮在不影响代谢的情况下能延缓单肾切除的糖尿病大鼠肾脏纤维化的进展。其作用机制可能与吡咯列酮能够抑制肾皮质中TGF-β1、TIMP-1和PAI-1的基因表达水平有关。     

肾移植术后巨细胞病毒感染对受者远期肾功能的影响

目的 观察肾移植术后外周血单个核细胞(PBMC)转化生长因子β_1,(TGF-β_1)mRNA表达,探讨巨细胞病毒(CMV)感染对远期肾功能的影响和可能机制.方法 选择2000年3月至2005年12月期间手术受者为研究对象,根据术后CMV感染与发病情况,将完成3年随访的96例受者分成3组:A组为有症状的活动性感染(n=33),B组为无症状的活动感染(n=33),C组为无活动性感染(n=30).分析CMV感染、PBMC内TGF-β_1,mRNA表达和血清肌酐(Scr)三者之间关系,对6例肾功能异常者实施移植肾活检术.结果 术后6月3组Scr水平无明显差异(P>0.05),有症状的A组PBMC的TGF-β_1,mRNA表达水平明显较无症状的B组和C组高(均P<0.01),而术后3年A组Scr水平明显较其它两组高(P<0.01),A组有10例(10/33)出现肾功能异常,发生率较B组(3/33)和C组(3/30)显著增高(均P<0.05).3组肾功能异常者(16例)在术后6月PBMC的TGF-β_1,mRNA表达水平较肾功能正常者(80例)明显增高(P<0.01).肾功能异常患者组织病理提示以间质纤维化、肾小管萎缩改变为主,符合慢性移植肾肾病(CAN)的病理改变.结论 肾移植术后有症状CMV感染是诱发CAN的重要因素,TGF-β_1可能介导了移植肾的损伤,早期监测PBMC内TGF-β_1 mRNA表达对防治CAN发生、发展有一定的临床意义.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of cytomegalovirus (CMV) infection following kidney transplantation on long-term renal function and its mechanism. Methods Ninety-six patients undergoing kidney transplantation between March 2000 and December 2005, who completed a 3-year follow-up investigation, were divided into 3 groups according CMV-pp65 antigenemia and clinical symptoms. Group A consisted of 33 recipients with symptomatic active CMV infection, group B included 33 with asymptomatic active CMV infection and group C included 30 with inactive infection. The relation of CMV infection, transforming growth factor-β_1 (TGF-β_1) mRNA in the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and serum creatinine (Scr) were analyzed, and the grafts in 6 cases with renal dysfunction were biopsied. Results The expression of TGF-(β_1 mRNA in PBMCs was significantly higher in group A than in the other two groups 6 months after the transplantation (P<0.01), while Scr levels showed no significant difference between the 3 groups(P>0.05). Three years later, Scr levels in group A were significantly increased as compared with those in the other two groups (P<0.01), and the rate of renal dysfunction in group A (10/33) was significantly higher than those in group B (3/33) and C(3/30) (P<0.05). In the 16 with renal dysfunction, the expression of TGF-β_1 mRNA in PBMCs significantly higher than that in the other 80 patients with normal renal function (P<0.01). Renal allograft biopsies demonstrated mild or severe interstitial fibrosis, tubular atrophy and mononuclear cell infiltration in the 6 patients with renal graft dysfunction, supporting the diagnosis of chronic allograft nephropathy (CAN). Conclusion Symptomatic active CMV infection in renal allograft recipients is an important factor contributing to the occurrence of CAN. Monitoring of TGF-β_1 mRNA expression in PBMCs proves useful in identifying patients at risk of CAN.     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨灯盏花素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾皮质RAGE表达水平的影响。方法雄性SD大鼠27只,随机分为3组。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,糖尿病灯盏花素治疗组(DD组)每日给予灯盏花素[20mg/(kg.d)]灌胃,8周后取肾脏组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA的表达水平,与正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)比较。结果成模8周时,糖尿病大鼠的体重、血糖与正常组相比有显著性差异(P<0.01),DD组与D组的血糖及体重无显著性差异(P>0.05);DD组、D组和C组的RAGE OD值/β-actin OD值分别为0.452±0.208,0.769±0.104,0.218±0.032,各组间RAGE表达有显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。灯盏花素能下调肾皮质RAGE的表达水平,对糖尿病肾病具有一定治疗作用。     

罗格列酮保护糖尿病大鼠肾损害及对肾组织MCP-1表达的影响

目的观察罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏组织的保护作用及其对尿单核细胞趋化蛋白-1(UMCP-1)排泄和肾组织MCP-1表达的影响。方法第2、4、8周检测糖尿病大鼠及罗格列酮治疗大鼠正常对照大鼠的尾外周血糖和糖化血红蛋白(HbA1c),第8周时测12h尿白蛋白排泄率(UAER)、尿视黄醇结合蛋白(URBP)和UMCP-1排泄率,处死大鼠后留取肾脏标本用于逆转录聚合酶链反应半定量测定MCP-1mRNA的含量。结果①与正常对照组(C组)比较,与糖尿病组(D组)、与罗格列酮治疗组(R组)第2、4、8周血糖及HbA1c水平均明显升高(P<0.01),而两组间无统计学差异;②第8周,D、R组UAER及URBP、UMCP-1排泄率和肾脏肥大指数均高于C组(P<0.01),R组4项指标较D组明显降低(P<0.01),且UMCP-1排泄率与UAER、URBP排泄率及肾脏肥大指数呈正相关;③与C组相比,D组大鼠肾脏MCP-1mRNA表达明显上调(P<0.01),R组MCP-1mRNA表达也增加(P<0.05)但明显低于D组(P<0.05)。结论罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏具有确切的保护作用,部分可能与其抑制肾脏MCP-1过度表达和排泄有关。     

糖尿病大鼠肾小球基质金属蛋白酶2和9的表达

目的:对糖尿病大鼠模型的肾组织中的基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达进行定量和定位研究,探讨糖尿病肾病的发病机理.方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(70 mg/kg)诱发糖尿病,肾标本行常规病理检查,用MMP-2 、MMP-9、C-Ⅳ单克隆抗体及TGF-β1多克隆抗体标记进行免疫组织化学染色、图象分析仪分析.结果:正常大鼠MMP-2、MMP-9主要表达在肾小球系膜细胞、内皮细胞、包曼氏囊壁层上皮细胞、肾小管上皮细胞,偶见浸润的巨噬细胞和中性粒细胞表达.造模后2、4、8周时糖尿病组大鼠肾小球MMP-2较对照组明显下降(P<0.05),而TGF-β1和C-Ⅳ则均较对照组明显上升(P<0.05),且MMP-2与TGF-β1、C-Ⅳ均呈负相关(r=-0.45、-0.69, P<0.05).肾小球MMP-9在三组各时点均未显示显著性差异,糖尿病组肾小球MMP-9较正常对照组似有升高趋势,但无统计学差异(P>0.05).结论:糖尿病时伴有肾小球MMP-2表达水平的下降可能与TGF-β1水平的升高有关,MMP-2的减少导致C-Ⅳ降解减少,可能是引起细胞外基质积聚的原因之一.     

褪黑素对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用

目的 探讨褪黑素对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法 将实验动物随机分为正常对照组（C组）、糖尿病组（D组）及糖尿病褪黑素治疗组（M组）。给予褪黑素治疗4周。检测血糖、血肌酐、肾脏肥大指数（肾重／体重），放免法测定24h尿白蛋白排泄量，对肾脏标本进行光镜观察，用图像分析仪测量各组大鼠平均肾小球面积、平均肾小球体积。同时用实时荧光定量RT-PCR法对糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达进行半定量分析。结果 褪黑素治疗组较糖尿病组24h尿白蛋白排泄量、肾脏肥大指数均明显下降（P〈0.05）。实时荧光定量RT-PCR检测糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1 mRNA表达明显高于正常对照组，为C组的9．2倍，给予褪黑素治疗后，糖尿病大鼠TGF-β1 mRNA表达水平下降3．95倍，但仍明显高于正常对照组（P〈0.01）。肾小球平均面积、平均肾小球体积M组显著低于D组（P〈0.01）。结论 褪黑素可抑制糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1mRNA表达，减少糖尿病大鼠的尿白蛋白，减轻及延缓肾小球硬化，发挥保护肾脏的作用。     

活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏BMP-7及TGF-β1表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏骨形成蛋白-7(BMP-7)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠,按随机数字表法分3组:正常对照(NC)组,糖尿病模型(DM)组,活性维生素D3(DC)组(制备糖尿病模型后用骨化三醇灌胃),每组10只。12周后,检测大鼠24 h尿蛋白定量及血生化指标,采用PAS及Masson染色观察大鼠肾脏病理改变,免疫组化法检测肾组织中BMP-7及TGF-β1蛋白的表达,RT-PCR法检测肾组织中BMP-7、TGF-β1 mRNA的表达。结果:与NC组比较,DM组大鼠肾脏肥大指数、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、胱抑素C水平均明显升高(P<0.05);同时肾组织中TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平也明显升高(P<0.05),而BMP-7 mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与DM组比较,DC组肾组织中BMP-7 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),余上述指标明显下降(P<0.05),病理改变明显减轻。结论:活性维生素D3可能通过上调BMP-7、下调TGF-β1的表达,发挥其肾脏保护作用。     

青藤碱对糖尿病大鼠肾脏TGF-β_1表达的影响

目的研究青藤碱对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,以探讨青藤碱对DN大鼠的治疗作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠45只随机分为3组：正常对照组（N组）、DN组（D组）及青藤碱治疗组（S组）,每组15只。S组在成模后皮下注射青藤碱20mg/（kg.d）;D组给予等量生理盐水皮下注射,共给药6周。每2周观察大鼠体质量、血糖及24h尿蛋白排泄量的变化;每组每2周随机处死3只大鼠,取血标本测肌酐（Scr）;取肾组织光镜观察病理改变,RT-PCR法检测肾组织中TGF-β1mRNA的表达。结果随着病程的延长,D组大鼠体质量增长慢、24h尿蛋白排泄量大、Scr水平高、TGF-β1mRNA表达水平高,与N组比较差异有显著性（P〈0.05）;S组大鼠体质量、24h尿蛋白排泄量及TGF-β1mRNA表达水平与D组比较明显改善,差异有显著性（P〈0.05）,Scr水平及光镜下病理改变有所好转,但差异无显著性意义（P〉0.05）。大鼠肾组织TGF-β1mRNA表达水平与24h尿蛋白排泄量及Scr水平呈正相关（r=0.892,P〈0.01;r=0.845,P〈0.01）。结论青藤碱可通过下调肾组织TGF-β1的表达水平,对DN大鼠的肾脏起保护作用。     

糖尿病大鼠肾脏胱硫醚-β-合成酶和胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达初步研究

目的研究糖尿病大鼠肾脏内源性硫化氢(H2S)的两种合成酶胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase CSE)mRNA表达.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病模型,大鼠随机分为两组:正常对照组(C组)和糖尿病组(D组).建模后第8周,测定24 h尿蛋白、血糖及肌酐清除率[1],应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质CBS、CSE mRNA表达.结果糖尿病组大鼠尿蛋白、血糖及肌酐清除率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),但肾皮质CBS、CSE mRNA表达较正常对照组无显著性差异(P＞0.05).结论CBS、CSE/H2S系统不能通过两种合成酶mRNA水平的改变而参与糖尿病肾病中血流动力学紊乱发生,其作用通路中的其他环节改变是否参与糖尿病肾病的发生发展尚需进一步证实.     

两肾一夹大鼠高血压模型肾组织可溶性表氧化物水解酶表达及作用

目的:初步探讨可溶性表氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)在肾血管性高血压肾组织中的表达及其作用。方法:采用两肾一夹高血压大鼠模型,雄性SD大鼠分为两组,假手术(sham)组(n=8)和两肾一夹(two kidney one clip,2K1C)组(n=8),术前及术后每10天测定大鼠血压并收集24 h尿液,观察40 d,用自动生化分析仪测定血钠、肌酐及尿蛋白,用放射免疫法测定血浆和肾组织内肾素活性和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)含量,免疫组织化学染色和Western blotting的方法检测肾组织的sEH、过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxi-some proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)表达情况,六铵银染色观察肾形态学变化。结果:2K1C组大鼠术后10d血压(124.04±6.79)mmHg(1 mmHg=0.133kPa),比sham组(106.70±7.71)mmHg显著升高,P<0.001;术后30 d尿蛋白排泄量(292.33±20.53)mg/d,显著高于同期sham组(206.81±37.61)mg/d,P=0.005,这种差异并一直持续到观察结束;术后40 d,2K1C组与sham组比较的具体值为:肾素活性在血浆为(132.90±31.22)vs.(50.00±13.66)ng/(L.h),P=0.03,在钳夹(左)肾组织为(324.90±56.66)vs.(128.40±36.88)ng/(g.h),P=0.01,右肾为(345.10±42.68)vs.(103.00±19.87)ng/(g.h),P<0.001;AngⅡ浓度在血浆为(10 470.00±1 760.00)vs.(4 810.00±1 164.00)ng/L,P=0.02,在钳夹(左)肾组织为(2 094.00±372.20)vs.(735.90±154.40)ng/g,P=0.005,右肾(1 774.00±206.60)vs.(648.10±217.90)ng/g,P=0.002;Western blotting示肾皮质sEH表达量(sEH/β-actin)左肾为(1.73±0.12)vs.(0.33±0.08),P<0.001,右肾为(0.70±0.05)vs.(0.43±0.09),P=0.04;肾皮质内PPARγ的表达量(PPARγ/β-actin)左肾为(0.89±0.11)vs.(0.17±0.05),P=0.002,右肾为(0.56±0.07)vs.(0.27±0.07),P=0.04。免疫组织化学染色定量分析2K1C皮质光密度高于sham组,sham组和2K1C组髓质的平均光密度都分别高于皮质。肾病理显示钳夹肾出现局灶肾小球硬化和肾小管萎缩,对侧肾出现代偿性肾小球肥大和肾小管扩张。结论:sEH可能在肾血管性高血压的发生发展中发挥重要作用,其作用机制可能与肾素-血管紧张素-醛固酮系统以及PPARγ有关。     

阿魏酸钠对肾大部切除大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨阿魏酸钠对5/6肾切除大鼠肾脏病变的保护作用.方法大鼠随机分为4组,假手术组(Sham组),肾切除组(NX组),NX+阿魏酸钠组(SF组),NX+依那普利(E组).8周后检测大鼠血压、24h尿蛋白定量、血肌酐、BUN,肾皮质内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)等,观察肾组织病理改变,并应用RT-PCR的方法检测肾皮质内TGF-β1 mRNA的表达;Western蛋白印迹方法检测TGF-β1蛋白质的表达.结果术后大鼠出现明显的尿蛋白[(201.2±4.1)mg/24h,肾皮质ET-1含量显著升高,且有明显的肾小球硬化,而阿魏酸钠和依那普利均能减少尿蛋白[阿魏酸钠(78.1±3.1)mg/24h,依那普利(65.9±6.3)mg/24h,与假手术组比,P＜0.01],减少肾皮质ET-1含量和肾小球硬化指数.肾大部切除后肾皮质TGF-β1mRNA及其蛋白的表达明显升高,用药组上述指标明显降低(SF组和E组与NX组相比,P＜0.01).结论在5/6肾大部切除模型中,阿魏酸钠对5/6肾大部切除大鼠肾脏有明显的保护作用,其机制可能其减少肾脏ET-1的生成,抑制TGF-β1的表达有关.     

转化生长因子β基因转染抑制环孢素A肾毒性细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨转化生长因子βⅡ型受体免疫球蛋白(Ig)G重链Fc段(TGFβRⅡ/IgG Fc)嵌合蛋白基因转染改善小鼠环孢素A(CsA)肾毒性细胞凋亡的作用.方法 雌性美国癌症研究所(ICR)小鼠予低钠饮食,CsA组和干预组每日皮下注射CsA.在给药的第1天和第7天,CsA组在胫骨肌处注射携带lacZ基因的质粒(pCAGGS-lacZ),干预组注射pCAGGS-TGFkβRⅡ/IgGFc,给药2或3周后处死.血浆和肾组织中转化生长因子(TGF)-β1蛋白水平由酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学法测得.肾组织中TGF-β1 mRNA水平用Northern印迹法测定.利用过碘酸雪夫反应(PAS)和Masson三色染色半定量评分评估肾小管损害和肾间质纤维化程度.采用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL法)检测肾小管问质细胞凋亡.结果 CsA给药2周后.血浆、肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平均达到最高,显著高于对照组(P值分别<0.05、0.01);小管间质病变也逐渐出现,PAS染色半定量评分和Masson套染计算肾皮质胶原容积均显著高于对照组(P值均<0.01);小管间质凋亡细胞百分比显著高于对照组(P<0.01).CsA给药3周后,血浆TGF-β1表达降至正常,肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平虽有所下降,但仍显著高于对照组(P值分别<0.01、0.05);小管间质病变较2周时明显加重(P<0.01);而小管间质凋亡细胞表达进一步升高(P<0.01).干预2周组小鼠的血浆及肾组织TGF-β1表达均较CsA 2周组显著下降(P值分别<0.01、0.05),而TGF-β1 mRNA水平无明显改变;Masson套染计算肾皮质胶原容积显著低于CsA 2周组(P<0.05);小管问质凋亡细胞百分比显著低于CsA 2周组(P<0.01).干预3周组的血浆、肾脏TGF-β1表达及其mRNA水平与CsA 3周组的差异均无统计学意义(P值均>0.05);小管间质病变持续减轻,PAS染色半定量评分和Mason套染计算肾皮质胶原容积显著低于CsA 3周组(P值均<0.01);小管问质凋亡细胞百分比显著低于CsA 3周组(P<0.01).小管间质损伤程度和间质纤维化程度均与凋亡细胞百分比呈正相关(r=0.804、0.906.P值均<0.01).结论 TGFβRⅡ/IgG Fc基因转染有效抑制了CsA引起的小管间质病变.细胞过度凋亡参与了慢性CsA肾病的发病,且与小管间质损伤及纤维化程度密切相关.TGF-β1在这一过程中发挥了重要作用,TGFβR Ⅱ/IgG Fc的干预治疗可有效抑制上述改变.