缺氧诱导胃癌多药耐药的机制研究

目的研究缺氧对化疗药物敏感性的影响及药物转运蛋白和凋亡相关蛋白的变化,探讨缺氧条件下胃癌细胞发生多药耐药的机制。方法通过MTT比色法检测胃癌细胞SGC7901在缺氧和常氧状态下对化疗药物敏感性的差异;利用Annexin V/PI染色法检测缺氧对化疗药物诱导的凋亡的影响;利用阿霉素的蓄积和潴留实验检测缺氧与常氧条件下胃癌细胞SGC7901阿霉素的潴留和蓄积的差异;利用Western blot和RT-PCR方法检测不同时间缺氧处理胃癌细胞SGC7901中药物转运蛋白p-gp和MRP的变化以及凋亡相关分子Bcl-2和Bax的变化。结果缺氧能够显著降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性,并能够降低化疗药物诱导的凋亡和药物在细胞内的潴留和蓄积;缺氧能够显著上调MDR1和MRP1基因的表达以及增加其产物p-gp和MRP的蛋白水平;缺氧能够显著增加抗凋亡分子Bcl-2 mRNA和蛋白水平以及降低促凋亡分子Bax的表达。结论缺氧加剧胃癌细胞的多药耐药表型,其主要是通过上调药物转运蛋白的表达及增加抗凋亡分子Bcl-2/Bax的比例实现的。     

人大肠癌LOVO细胞5-Fu多药耐药细胞株的建立及耐药机制探讨

０　引言ｌｏｖｏ／５Ｆｕ多药耐药细胞株建立及耐药机制的探讨．１　方法大肠癌ｌｏｖｏ细胞,置３７℃,５％ＣＯ２饱和湿度细胞培养箱中无菌培养,对数生长时,０－２５％的胰蛋白酶消化传代,恒定浓度５Ｆｕ周期作用方式反复诱导处理ｌｏｖｏ细胞,历时６ｍｏ,建立ｌｏｖｏ／５Ｆｕ耐药细胞株,耐药细胞在恒定的５Ｆｕ培养液中继续生长,ＭＴＴ法测定亲代细胞和耐药细胞的药物敏感性．从形态学观察不同药物浓度的细胞凋亡情况,ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳观察两种细胞的凋亡情况．免疫组化ＳＰ法检测抗凋亡蛋白ｂｃｌ２在两种细胞…     

胃癌多药耐药相关基因的研究现状

目前化疗仍是中、晚期胃癌患者的主要治疗方法,影响疗效的关键问题之一是肿瘤的多药耐药性。对瘤组织而言,多药耐药是化疗失败的主要原因。此文就近年来有关胃癌多药耐药相关基因产物的临床研究作一综述。     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其耐药机制探讨

目的 为探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇(TAX)耐药细胞株SKOV3/TAX.方法 选用卵巢癌细胞株SKOV3,以浓度为300ug/ml的TAX反复大剂量冲击用药,培养8个月后建立TAX耐药细胞株,命名为SKOV3/TAX.该细胞已反复传代3个月以上.结果 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,耐药指数(RI)为10.57.除对紫杉醇耐药外,对环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、足叶乙甙(VP-16)有明显的交叉耐药,与亲本细胞相比,细胞倍增时间明显缓慢(P<0.01),G2/M期明显高于亲本细胞,S期比例明显降低(P<0.05),细胞内P糖蛋白(P-gp)表达增加.产生耐药的机制可能与细胞周期改变、细胞凋亡及P-gp的表达增加,导致细胞内TAX聚集量减少有关.结论 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,具有典型的多药耐药表型.     

鬼臼乙叉甙(VP-16)治疗急性白血病

16例急性白血病患者接受鬼臼乙叉甙(VP-16)、阿糖胞苷(Ara-C)的治疗。10例为初治的M_4或M_5患者。5例有效,其中4例为CR,1例PR。另外6例是难治性白血病,包括1例慢粒急变,1例M_6(红-单细胞性),4例第一次或第二次复发者。他们之中仅三例获PR。鬼臼乙叉甙的副作用是骨髓抑制。     

一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制

本采用大剂量阿霉素诱导出一株对阿霉素耐药的胃癌细胞系SGC7901／Adr。SGC7901／Adr对长春新碱、丝裂霉素C有交叉耐药性，其中对长春新碱耐药性最高，但对5-Fu依然存在敏感性，应用流式细胞术检测细胞阿霉索荧光强度，发现SCG7901／Adr细胞内阿霉索浓度明显低于SGC7901，提示细胞内药物蓄积减少是导致SGC7901／Adr产生多药耐药性的主要原因。     

人肝癌多药耐药细胞株的建立及超声波诱导凋亡的研究

目的 建立人肝癌细胞系HepG2多药耐药模型并探讨低频脉冲式超声对其凋亡的影响及其机制。 方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立人肝癌细胞多药耐药模型(简称HepG2/ADM)。将研究对象分为HepG2/ADM、HepG2/ADM ADM、HepG2/ADM 超声波、HepG2/ADM ADM 超声波4组,以频率为0.8 MHz,声强为0.5 w/cm2,时间10 min的脉冲式超声波作用于研究对象。荧光显微镜观察细胞变化;DNA片段化分析检测染色体断裂情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果 HepG2/ADM细胞对多种化疗药耐药,对阿霉素的耐药倍数为26,其耐药性与P-糖蛋白(P-GP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)及谷胱甘肽转移酶(GST)的过表达相关。实验组经超声波作用10 min后,HepG2/ADM细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征;HepG2/ADM ADM和HepG2/ADM 超声波组细胞凋亡率分别为3.47％和12.23％;HepG2/ADM ADM 超声波联合治疗能显著增加细胞凋亡率,为18.81％,与对照组比较差异有显著性,t值分别为1.46、2.67、5.36,P<0.01。结论 人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM具有多药耐药特性;低频脉冲式超声可诱导人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡,联合化疗药物治疗,可显著增加细胞凋亡比例。     

胃癌多药耐药研究新进展

胃癌为一常见肿瘤,在我国及日本发病率极高,危害着人民的生命。早期胃癌以手术为主,辅以化疗药物。晚期肿瘤则以化疗为主要手段。但由于耐药的产生,疗效往往不佳。因而促使人们对胃癌多药耐药性(ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＭＤＲ)问题进行深入研究。目前研究发现的与耐药有关的机制可归纳为以下几个方面:1.发生在细胞膜水平的药物摄取减少和外排增多,引起细胞内药物的绝对浓度降低,如由Ｐｇｐ引起的耐药;2.发生在细胞质和细胞器水平的药物亚细胞分布的改变,使药物无法接近其作用靶点,引起药物有效浓度降低,如由多药耐药相关蛋…     

胃癌多药耐药机制的研究进展

胃癌为临床最常见肿瘤之一，据统计占我国消化道恶性肿瘤的第1位。胃癌化疗迄今仍是重要的临床治疗方法，而胃癌化疗有效率只有20％～30％，2年内复发和转移率高达60％，多数学者认为肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药现象(MDR)是化疗失败的主要原因之一，因而促使人们对胃癌MDR机制进行深入研究。现将国外的近期研究情况作一综述。     

胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制

目的:研究多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)的相互作用蛋白及其对肿瘤耐药性的影响.方法:采用免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定MRP的相互作用蛋白,并对其中的耐药相关蛋白之一Annexin A5进行功能研究,Western blot及siRNA干扰技术分析MRP、Annexin A5蛋白表达的变化、相关性及胃癌SGC-7901细胞的耐药性变化.结果:经免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定发现了14个MRP的相互作用蛋白,其中AnnexinA5为其中得分最高的蛋白;Westernblot检测显示耐药细胞株SGC-7901/DDP中MRP、AnnexinA5蛋白表达均高于SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP,siRNA干扰AnnexinA5表达后,siRNA-SGC-7901/DDP中MRP蛋白表达下调,MRP、AnnexinA5蛋白在SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP之间表达无明显差异;MTT法结果显示经siRNA干扰SGC-7901/DDP后,顺铂、5-Fu和紫杉醇作用后的IC50值明显减少,对其的敏感性分别增加了36倍、17倍和4倍.结论...     

一株胃癌耐药细胞系的建立及其耐药的可能机制

本文采用大剂量阿霉素诱导出一株对阿霉素耐药的胃癌细胞系 SGC7901/Adr。SGC7901/Adr 对长春新碱、丝裂霉素 C 交叉耐药性,其中对长春新碱耐药性最高,但对5-Fu 依然存在敏感性。应用流式细胞术检测细胞阿霉素荧光强度,发现 SCG7901/Adr 细胞内阿霉素浓度明显低于 SGC7901,提示细胞内药物蓄积减少是导致SGC7901/Adr 产生多药耐药性的主要原因。     

胃癌细胞系SGC7901耐阿霉素和顺铂细胞系的建立及其耐药可持续性的质控研究

目的建立胃癌耐药细胞模型，并进行耐药细胞耐药可持续性研究。方法以脉冲式诱导方法诱导胃癌耐阿霉素细胞SGC7901／ADR和胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP。检测细胞的生长曲线和群体倍增时间，电镜观察细胞的超微结构，并进行了体外药物敏感性实验和细胞药物转运实验，Western blot检测耐药细胞内P—gP和MRP的表达，尤其是进行了耐药细胞的耐药可持续性的质控研究。结果耐药细胞的增殖能力比药敏细胞强（P〈0．05）；电镜下耐药细胞较药敏细胞表现为更多的核大核畸形及细胞膜间突触样联系和细胞间小管结构；体外药物敏感性实验和细胞药物转运实验显示耐药细胞的耐药性明显增强；而且耐药细胞中MRP和P—gP的表达均比药敏细胞SGC7901高；耐药可持续性的质控研究表明在不给与抗肿瘤药维持状况下细胞自第ll代耐药性明显下降。结论成功构建了胃癌耐阿霉素细胞系SGC7901／ADR和耐顺铂细胞系SGC7901／DDP；对实验用耐药细胞系建议质控在9代以内以保证耐药细胞的耐药稳定性。     

小细胞肺癌多药耐药机制研究进展

小细胞肺癌对多种化疗药物产生的多药耐药特性是造成化疗失败的主要原因.小细胞肺癌产生多药耐药的机制涉及膜糖蛋白介导的药物外排机制、细胞内pH、ROS、HIF-1、GSH的改变,以及DNA损伤修复机制异常等.系统性分析小细胞肺癌多药耐药产生的机制,将有助于指导临床用药及为耐药逆转的新药研发提供理论依据.     

新疆某医院多重耐药菌及耐药性分析

目的回顾性分析2015年新疆医院临床分离多重耐药菌(multidrug-resistant organism,MDRO)的分布、类型及耐药性,为临床控制MDRO医院感染提供有效依据,为临床合理选用抗生素提供参考依据。方法 2015年1月至2015年11月期间对我院住院患者标本培养的多重耐药菌株,对其耐药菌类型与耐药性进行分析,并对高危因素进行分析与探讨。结果共检出、共分离出4560株细菌,其中多重耐药菌1210株。鲍曼不动杆菌344株,占28.40%,大肠埃希菌288株,占23.80%,铜绿假单胞菌201株,占16.60%,肺炎克雷伯菌150株,占12.40%,金黄色葡萄球菌100株,占8.30%,耐药性:鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药性为62.30%,多耐药肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素保持高度的敏感性(100%敏感),革兰氏阳性细菌主要为金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)占65%,只对万古霉素敏感,未发现耐万古霉素、耐利奈唑胺菌株。结论该院分离的多重耐药菌种类多,耐药性严重,临床医师应重视病原学检查,并严格按照药物敏感试验结果选取合理抗生素,以减少细菌耐药性的发生,降低医疗费用,降低临床病死率。     

MRP、LRP和MDR1基因在胃癌中的表达及其意义

目的:探讨MRP基因、LRP基因和MDR1基因在胃癌中的表达及其与疾病发生发展相关性的研究.方法:应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)分别检测47例胃癌标本和17例正常胃组织对照标本的MRP基因、LRP基因和MDR1基因表达,分析其与病情发生发展以及转归的关系.结果:MRP基因、LRP基因和MDR1基因在胃癌组织中的表达均高于正常标本,MRP在早期胃癌中显著高于进展期胃癌(P<0.05),高、中分化腺癌显著高于低、未分化腺癌(P<0.05);LRP基因表达无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组(P<0.05).MRP在病情恶化患者中上调30%.结论:MRP基因、LRP基因和MDR1在胃癌组织中均有较高的表达,三者可能具有协同作用,检测3种基因的表达有利于制定更合理的治疗方案.     

热休克蛋白27高表达与肝细胞癌耐药相关

目的应用蛋白质组学技术从蛋白质水平寻找肝癌耐药相关的蛋白质分子。方法以长春新碱（VCR）诱导HepG2细胞建立的耐药肝癌细胞HepG2／VCR为研究对象,用二维电泳技术分离两种细胞的总蛋白,对差异表达的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾串联质谱进行分析鉴定。再用反义核酸抑制该差异蛋白质表达以研究其与耐药的关系。结果鉴定出一个在肝癌耐药细胞株HepG2／VCR中高丰度表达的蛋白质为热休克蛋白27（HSP27）,反义核酸抑制HSP27的表达后增强了HepG2／VCR对VCR的化疗敏感性（P〈0．05）。结论HSP27可能是与肝癌细胞株HepG2／VCR耐药密切相关的蛋白质。     

Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用

目的 研究凋亡相关基因Ｂax对胃癌多药耐药细胞的多药耐药性的逆转作用。方法 构建含有人Ｂax cＤＮＡ全长的真核表达载体pＢＫ－Ｂax,经脂质体导入缺乏Ｂax蛋白表达的人 胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１/ＶＣＲ中。Ｗestern印迹观察Ｂax基因在转导细胞中的表达,ＭＴＴ法检测Ｂax转导细胞与空载体转导细胞对化疗药物的敏感性。结果 成功构建了Ｂax的真核表达载体,Ｂav转导细胞能稳定表达Ｂax蛋白,与空载体转导细胞相比。Ｂ     

Reversal of multidrug resistance in vincristine-resistant human gastric cancer cell line SGC7901/VCR by LY980503

AIM： To investigate the reversal effect of LY980503, a benflumetol derivative, on multidrug resistance in vincristine （VCR） -resistant human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR.
METHODS： Cells of a human gastric cancer cell line, SGC7901, and its VCR-resistant variant, SGC7901/VCR, were cultivated with LY980503 and/or doxorubicin （DOX）. The cytotoxicity of drugs in vitro was assayed by M-IF method. Based on the flow cytometric technology, the uptake of DOX was detected in these cells by measuring DOX -associated mean fluorescence intensity （MFI）.
RESULTS： SGC7901/VCR cells were 23.5 times more resistant to DOX in comparison with 5GC7901 cells. LY980503 at the concentrations of 2.0 μmol/L -10 μmol/ L had no obvious cytotoxicity to SGC7901 and SGC7901/ VCR cells. After simultaneous treatment with LY980503 at the concentrations of 2.0, 4.0 and 10 μmol/L, the ICso of DOX to SGC7901/VCR cells decreased from 1.6 ± 0.12 μmol/L to 0.55 ± 0.024, 0.25 ± 0.032 and 0.11 ± 0.015 μmol/L, respectively, thus, increasing the DOX sensitivity by 2.9-fold （P 〈 0. 05）, 6.4-fold （P 〈 0. 01） and 14.5-fold （P 〈 0. 01）, respectively. In the uptake study of DOX, simultaneous incubation of SGC7901/VCR cells with LY980503 significantly increased the DOX -associated MFI in SGC7901/VCR cells. No such results were found in parental SGC7901 cells.
CONCLUSION： LY980503 at non-cytotoxic concentrations can effectively circumvent resistance of SGC7901/VCR cells to DOX by increasing intracellular DOX accumulation.     

高温对SGC7901/ADM细胞多药耐药蛋白表达的影响和意义

目的:研究高温43℃对多药耐药基因表达产物P-gp、MRP、LRP在蛋白水平上的影响及其生物学意义,更深入地了解热效应逆转耐药的机制.方法:采用免疫细胞化学染色法、RT-PCR以及Western blot方法,检测在不同温度和不同药物作用下,人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM和对照的人胃癌敏感细胞SGC7901株中,与人胃癌多药耐药相关的分子MDR1、P-gp、MRP、LRP在蛋白水平上的表达差异.结果:采用免疫细胞化学染色法检测人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞,发现高温43℃60 min处理可使P-gp蛋白表达下调率(down-regulated rate,DRR)31.78%(P=0.016),而MRP表达DRR为20.22%(P=0.037),差异有统计学意义,LRP未表达.采用Western blot法在SGC7901细胞中未检测出P-gp蛋白表达,而SGC7901/ADM细胞中P-gp高表达;在ADM和CDDP处理组细胞中,高温43℃时P-gp的表达量较37℃时DRR分别为45.65%(P=0.007)、17.95%(P=0.021),差异有显著学意义;TAX处理组DRR为11.90%,差异无显著学意义(P=0.065).结论:高温43℃的短期处理对人胃癌SGC7901/ADM细胞中P-gp和MRP多药耐药蛋白的表达有一定的抑制作用,可能是逆转耐药的机制之一.