蛇床子素对卵巢组织氧化应激损伤的作用

目的 探讨蛇床子素(OST)对卵巢氧化损伤的保护作用。方法 体外培养小鼠卵巢组织,用过氧化氢(H_2O_2)构建卵巢组织氧化损伤模型(模型组);药物组以20μg/mL、40μg/mL和80μg/mL 3种不同浓度OST预处理卵巢组织后再加入H_2O_2;同时设对照组。在显微镜下计数卵巢组织内卵泡总数和生长卵泡数,计算生长卵泡率;化学发光法检测培养液中雌二醇(E2)的水平,WST-1法检测卵巢组织中SOD活性,TBA法检测卵巢组织中MDA含量。结果 与对照组相比,H_2O_2损伤模型组卵巢生长卵泡数、卵泡总数和生长卵泡率均明显下降,培养第4天的培养液中E2浓度明显下降,组织内SOD活性显著下降(P0.01),MDA含量明显升高(P0.01)。40μg/mL和80μg/mL两个浓度的OST预处理后,卵巢组织中的生长卵泡数、卵泡总数和生长卵泡率、第4天培养液中的E2浓度、组织内SOD活性均较模型组有不同程度的上升,MDA含量下降(P0.01)。20μg/mL OST组仅在第4天培养液中的E2浓度上明显高于模型组,其他相关指标相对于模型组均无显著性差异。结论 一定浓度的蛇床子素预处理可减轻H_2O_2对卵巢组织的氧化应激损伤。     

表面活性蛋白A在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及炎症调节作用

目的探讨表面活性蛋白A (SPA)在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及其炎症调节作用。方法分别采用免疫荧光双染和免疫组织化学染色法检测SPA在健康大鼠脑组织的星形胶质细胞、体外培养的星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况。采用不同浓度(1、5、10μg/mL)脂多糖(LPS)培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞24 h,10μg/mL LPS培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞2、4、8、16、24 h,采用Western blotting检测细胞中SPA的表达情况。将人星形胶质细胞及小胶质细胞随机各分为LPS组(含有5μg/mL LPS的培养液)、LPS+SPA组(含有5μg/mL LPS和0.5μg/mL SPA的培养液)、SPA组(含有0.5μg/mL SPA的培养液)和对照组(未加入任何处理因素的培养基)。各组细胞培养8 h,采用Western blotting检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65蛋白表达;ELISA法检测各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 SPA在大鼠脑组织的星形胶质细胞中表达,在体外培养的人星形胶质细胞和...     

小鼠窦前卵泡的体外培养

目的 观察性成熟前小鼠的窦前卵泡体外培养的形态学改变,同时评价激素及生长因子等添加物对窦前卵泡体外发育的影响。方法 机械法分离性成熟前小鼠卵巢中的窦前卵泡,分2组培养于20μL培养液滴内。(1)Gn组:α-MEM 10％FCS 100 mU/mL rFSH±ITS(5 μg/mL insulin,5 μg/mL transferrine,5 ng/mLselenium)±10 mU/mL rLH,第12天移入 α-MEM 1.5 U/mL rHCG 5 ng/mL rEGF 10％ FCS。(2)nGn组:α-MEM 10％ FCS。每天换液观察,记录GC增生、窦形成等形态学改变和卵母细胞成熟情况。结果 激素组窦前卵泡增长明显,92.92％存活,28.65％形成窦,培养14d后40.35％排出成熟卵;而无激素组窦前卵泡生长缓慢,生存6d后开始萎缩、变黑,存活率仅10.91％,无窦卵泡形成,仅11.11％排出成熟卵,差异有显著意义(P<0.01)。激素组在添加ITS、LH后,窦前卵泡的窦形成率和排出成熟卵母细胞率均显著上升(P<0.05)。结论 α-MEM可作为窦前卵泡体外培养液,但必须添加rLH/rFSH、ITS、rHCG/rEGF以促进膜细胞黏附、颗粒细胞增生和卵母细胞成熟。     

灵芝酸对痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平的影响

目的：探讨灵芝酸对癫痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平的影响。方法：以24h内新生Wistar大鼠为细胞源,用Neurobasal培养液培养海马神经元。①应用激光共聚焦显微镜检测培养神经元的纯度及其鉴定。②应用MTT法测灵芝酸的最适无毒浓度。③在研究最大无毒浓度的灵芝酸对痫样放电海马神经元ERK1/2磷酸化水平影响的实验中,将细胞随机分为：①正常对照组：将培养至第9天的海马神经元全液换成正常细胞外液处理3h,然后恢复正常培养3h后取材;②模型组：将培养至第9天的海马神经元全液换成无镁细胞外液处理3h,然后恢复正常培养3h后取材;③治疗组：将培养至第9天的海马神经元根据灵芝酸浓度不同,分为低、中、高三个浓度组（浓度分别为20μg/mL、80μg/mL、320μg/mL）,将各组的维持培养液全液换成无镁细胞外液处理3h,然后全液换成维持培养液配制不同浓度灵芝酸混悬液处理3h后取材。ELISA方法检测ERK1/2磷酸化水平的表达。结果：成功离体培养海马神经元,并用酶联免疫分析ERK1/2磷酸化水平的表达。各实验组中均有ERK1/2的表达并且各治疗组均能降低ERK1/2磷酸化水平,浓度为80μg/mL时结果最明显。结论：海马神经元癫痫样放电后ERK1/2被激活,在有效浓度的灵芝酸能显著抑制此反应中ERK1/2的磷酸化水平。     

磷酰胺氮芥对大鼠卵巢功能损伤的体外实验研究

[摘要] 目的：研究磷酰胺氮芥（Glyciphosphoramide ,PM）引起体外培养大鼠卵巢结构和内分泌功能损伤的最低剂量。方法：实验分为4组,每组12个卵巢,来源于出生8周的Wistar大鼠。实验1、2、3组培养基中加入浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的PM,培养48h后均隔天全量更换不含PM的培养基。正常对照组培养基中不含PM。在PM加入前及加入后2d（48h）、6d时更换的培养基中用放射免疫法测定其雌二醇（E2）浓度。在加入PM6d时取出大鼠卵巢,称湿重,HE染色,显微镜下观察各期卵泡形态并计数总卵泡数量。结果：加入PM后2d及6d的3个实验组的E2浓度均低于正常对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且3个实验组间两两比较差异也均有统计学意义。加入PM6d,3个实验组分别与正常对照组比较,卵泡数差异均有统计学意义;3个实验组间两两比较,卵泡数量差异亦均有统计学意义。结论：PM浓度为10μg/mL时已能引起体外培养大鼠卵巢结构及功能的损伤。     

姜黄素对乳腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的 探讨姜黄素(curcumin)对乳腺癌细胞中顺铂(Cisplatin,CDDP)治疗敏感性的影响及其可能机制.方法 CCK-8检测、Hoechst染色观察CDDP、姜黄素单独及联合用药48 h对MCF7细胞增殖抑制和细胞凋亡的影响;Western blot分析MCF7细胞在CDDP(0、1.25、2.5、5、10、20 μg/mL)、姜黄素(0、1、5、20、30、50、100 μmol/L)单独及联合处理后FEN1(flap endonuclease 1)表达水平的变化;CCK-8检测沉默FEN1对MCF7细胞中CDDP敏感性的影响.结果 CDDP、姜黄素均可以剂量依赖方式抑制MCF7细胞增殖,其IC50分别为5、30 μmol/L;与单独2μg/mLCDDP处理组比较,2μg/mL CDDP联合20-μmol/L姜黄素、30 μmol/L姜黄素处理组对细胞增殖的抑制效应明显增强[分别为(84.1±0.8)％、(51.1±0.5)％、(29.4±0.3)％,P＜0.05];与单独20μmol/L姜黄素处理组比较,20 μmol/L姜黄素联合2μg/mL CDDP、5μg/mL CDDP处理组对细胞增殖的抑制效应也明显增强[分别为(76.9±0.7)％、(42.4±0.3)％、(31.6±0.4)％,P＜0.05];2μg/mL CDDP联合20 μmol/L姜黄素组的细胞凋亡明显增强(P＜0.05);与Control siRNA组比较,FEN1 siRNA+CDDP组可显著增强CDDP抑制MCF7细胞增殖的敏感性[(25.4±0.3)％vs(18.7±0.2)％,P＜0.05];CDDP增殖抑制无效浓度或低浓度时,FEN1蛋白的表达随CDDP的处理剂量依赖性上调,而姜黄素可剂量依赖性下调FEN1蛋白表达;与单独CDDP和姜黄素处理组比较,2μg/mL CDDP联合20 μmol/L姜黄素组可显著降低FEN1蛋白表达(P＜0.05).结论 姜黄素可增强CDDP对乳腺癌细胞的敏感性,其机制与降低细胞FEN1的表达有关.     

E20通过上调Sirt1介导顺铂损伤人卵巢颗粒细胞的保护作用

目的：研究新型螺杂环查尔酮衍生物E20对顺铂（CDDP）所致人卵巢颗粒细胞（KGN）损伤的保护作用及其分子机制。方法：体外培养KGN细胞系中加入不同浓度E20后通过MTT法筛选出E20的安全浓度;选择浓度为5μg/mL的CDDP单独作用或与不同浓度的E20联合作用KGN细胞,MTT法检测细胞活力的变化;选择不同浓度的CDDP单独作用或与E20联合作用卵巢癌细胞ES-2,MTT法检测细胞活力并计算出半数抑制率（IC50）;倒置显微镜观察不同处理后KGN细胞形态变化;流式细胞术测定KGN细胞凋亡变化;ELISA法测定KGN细胞上清液中雌二醇（E2）水平变化;蛋白质印迹（Western blot）法检测KGN细胞Sirt1和凋亡分子Bax、Bcl-2蛋白表达变化;Sirt1-siRNA转染KGN细胞后用Western blot法验证沉默效果,并用MTT法检测Sirt1下调后E20对KGN细胞活力的影响。结果：E20对KGN细胞的安全浓度在20μmol/L以下;CDDP能使KGN细胞和ES-2细胞活力下降,E20能减轻CDDP对KGN细胞的损伤且不会降低CDDP对ES-2细胞的抗增殖能力。CD...     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞病变的影响

目的分析槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞(OMFb)微丝骨架及胶原吞噬的影响。方法取正常人口腔黏膜,行组织块法培养,取第6代细胞行不同浓度槟榔碱(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)干预,检测12h、24h、48h后细胞增殖情况;分析24h后胶原吞噬率变化情况;观察24h后细胞微丝骨架变化情况。结果槟榔碱干预12h后,不同槟榔碱浓度OMFb增殖情况差异无统计学意义(P0.05);24h后,10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb增殖率上升,且20μg/mL浓度组增殖率10μg/mL浓度组;30μg/mL、40μg/mL浓度组OMFb无增殖;48h后,各浓度槟榔碱均对OMFb增殖存在抑制效用。10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb胶原吞噬能力存在明显改善,而30μg/mL、40μg/mL浓度组胶原吞噬能力被抑制。此外,10μg/mL、20μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架表现为粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强,且10μg/mL浓度组变化情况高于20μg/mL浓度组;而40μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架明显减少,30μg/mL浓度组次之,细胞皮层出现大量染色聚集物质。结论低浓度槟榔碱在增强OMFb活性、胶原吞噬能力等方面具有显著促进作用,但高浓度则具有抑制作用。此外,低浓度的槟榔碱还可增强OMFb细胞微丝骨架聚合,而高浓度槟榔碱则可以抑制OMFb细胞微丝骨架聚合,这可能是口腔黏膜下纤维性变的主要发病机制之一。     

去甲斑蝥素对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期的FRO细胞,分别加入终浓度为0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的NCTD,分别干预12 h、24 h、48 h后,检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。取对数生长期的FRO细胞,分为0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、40μg/mL组,加入相应浓度的NCTD,干预24 h后检测细胞凋亡情况、B淋巴细胞肿瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)凋亡相关因子mRNA表达情况、线粒体膜电位;干预2周后克隆形成实验检测细胞克隆率。结果随着NCTD浓度增大、干预时间延长,FRO细胞增殖抑制率增加(P<0.05)。10μg/mL组、20μg/mL组、 40μg/mL组均出现细胞凋亡,且浓度越高凋亡现象越明显。0μg/mL组、10μg/mL组、20μg/mL组、 40μg/mL组细胞克隆形成率、细胞线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达水平依次降低,Bax mRNA表达水平依次升高(均P<0.05)。结...     

miRNA765高表达对胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响

目的 观察miRNA765高表达对胃癌顺铂(CDDP)耐药细胞株BGC-823/CDDP耐药性的影响.方法 将PCR扩增的包含miRNA765前体的基因序列克隆至真核表达载体,构建miRNA重组表达载体;阳离子脂质体转染重组质粒到BGC-823/CDDP细胞.转染后48 h,Real-Time PCR和Western blotting法分别检测细胞中miRNA765和细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)蛋白的相对表达量;采用不同浓度CDDP处理转染后48 h的BGC-823/CDDP细胞,24和48 h后MTT法检测细胞活性并计算细胞对于CDDP的半抑制浓度(IC50).采用终质量浓度为1μg/mL的CDDP处理基因干预后的BGC-823/CDDP细胞,双染法检测细胞凋亡率.结果 BGC-823/CDDP细胞内miRNA765的相对表达量明显低于其亲本细胞BGC-823,CIAPIN1蛋白相对表达量则明显高于其亲本细胞株(均P＜0.01).在BGC-823/CDDP细胞内高表达miRNA765可明显抑制CIAPIN1蛋白的表达,转染后48 h的CIAPIN1蛋白表达量明显低于未转染组(P＜0.01);miRNA765高表达可明显降低BGC-823/CDDP细胞的耐药能力,48 h后IC50值从(18.27 ±3.92) μg/mL降至(1.50 ±0.43) μg/mL(P ＜0.05).转染48 h后,BGC-823/CDDP细胞的凋亡率从(10.1±1.7)％上升至(53.4±7.9)％(P＜0.01).结论 miRNA765高表达可以明显降低胃癌耐药细胞株BGC-823/CDDP的耐药能力.