纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与诱导骨髓间充质干细胞体外构建软骨支架复合体

背景：国内外许多研究通过不同的构建方法构建组织工程化软骨支架复合体修复骨软骨联合缺损,且取得了一定的进展,但目前各种方法存在的问题突出表现为组织工程化的软骨和骨组织之间的界面、移植体和宿主骨和软骨之间的界面耦合不够理想。 目的：将体外提纯、扩增的骨髓间充质干细胞诱导成软骨细胞,将其接种于穿“靴”的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架的底部上联合培养,探索其用于组织工程软骨复合体的可行性。 设计、时间及地点：细胞和材料复合的体外观察实验,于2008-03/07在暨南大学附属第一医院中心实验室和暨南大学理工学院材料系实验室完成。 材料：通过原位复合和冷冻干燥结合的方法制备纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架。健康新西兰兔10只由广东省医学实验动物中心提供。 方法：密度梯度离心法提取分离骨髓间充质干细胞,软骨诱导液诱导骨髓间充质干细胞2周后甲苯胺蓝染色检测。把诱导得到的软骨细胞接种于穿“靴”的纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架的底部,将细胞-支架复合物置入成软骨条件培养液中培养2周。 主要观察指标：倒置相差显微镜下观察细胞形态特征,鉴定CD29,CD44,CD34和CD45抗原的表达,观察细胞生长特性,测定细胞活力和生长周期,扫描电镜观察纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架结构和细胞与支架的复合情况。 结果：骨髓间充质干细胞可在体外分离扩增,表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,细胞活力为95.27%,G0~G1期细胞占94.68%。经软骨诱导液诱导后骨髓间充质干细胞转化成软骨细胞;制备的纳米羟基磷灰石/壳聚糖多孔支架孔隙率为90%,平均孔径为150 μｍ,与软骨细胞有较好的黏附性。 结论：初步证实纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架与骨髓间充质干细胞诱导成的软骨细胞复合可以在体外构建组织工程软骨复合体。     

猪骨髓间充质干细胞体外诱导构建组织工程化软骨☆

目的: 如何修复气管缺损是一项医学难题，组织工程技术有望解决这一难题。要构建工程化气管软骨，种子细胞是关键因素之一。探讨利用组织工程方法,将猪骨髓间充质干细胞在体外诱导、培养后，构建软骨组织的可能性。 方法：实验于2006-10/2007-05在北京协和医院中心实验室完成。①实验材料：小型猪6只由中国农业大学提供，雌雄不限，体质量15~20 kg；聚羟基乙酸纤维（Equl.com.美国）。②实验过程及评估：抽取猪的胸骨骨髓, 经密度梯度离心法在体外进行分离、纯化，得到骨髓间充质干细胞, 并在含有转化生长因子β１的特定培养基内进行培养、诱导，免疫组织化学检测诱导细胞Ⅱ型胶原分泌。将诱导分化的骨髓间充质干细胞接种于聚羟基乙酸支架上，将其作为实验组；对照组为未接种细胞的单纯聚羟基乙酸支架；将两组标本环行包裹于直径为0.4 cm的离心管外表面，植入自体猪皮下，进行体内培养，分别于6，8，10周后取材，进行大体观察和组织学检测，评估工程化软骨的形成。 结果：①通过密度梯度离心法可获取骨髓间充质干细胞，对其进行培养扩增后可获得较多的细胞。②猪骨髓间充质干细胞通过特定的诱导后可向软骨细胞分化，诱导细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学检测结果为阳性。③猪骨髓间充质干细胞-聚羟基乙酸复合物经过体内第6，8，10周培养后,标本出现软骨组织外观,进行组织学切片可见软骨陷窝，Ⅱ型胶原蛋白的免疫组织化学检测为阳性。 结论：猪骨髓间充质干细胞在成软骨诱导剂作用下，经体外和体内培养后，可生成组织工程化软骨。     

体外诱导的人脂肪间充质干细胞源性软骨细胞体内成骨活性☆

目的：目前对间充质干细胞向软骨细胞诱导分化主要包括体内诱导和体外诱导两种方式，前者依靠体内微环境，随机性大且难以进行监控和调整。本实验探讨体外诱导人脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化，以及诱导后细胞在裸鼠体内的成软骨能力。 方法：实验于2006-08/2007-05在中南大学湘雅医院中心实验室完成。①对象与材料：皮下脂肪组织来源于股骨颈骨折手术患者6例，年龄25~64岁，对实验及治疗均签署知情同意书，实验经医院医学伦理委员会批准。清洁级裸鼠5只，体内成软骨实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。离心管容量20 mL，由GeneRay公司生产。②实验方法：将皮下脂肪组织剪碎，I型胶原酶消化法分离培养脂肪间充质干细胞，待细胞铺满瓶底80%时胰酶消化传代。传至第6代时收集 5×106个细胞，用含1%新生牛血清、高糖DMEM、10 μg/L转化生长因子β1、37.5 mg/L维生素C、6.25 mg/L胰岛素、6.25 mg/L转铁蛋白、10-7 mol/L地塞米松的软骨细胞诱导剂重悬于无支架离心管内。③实验评估：诱导过程中观察细胞聚集状态。诱导2周后采用苏木精-伊红染色、RT-PCR、Western blot对细胞形态及功能变化进行检测。将诱导后细胞与纤维蛋白原凝胶混合，植入裸鼠皮下，3周后切取植入组织块，苏木精-伊红染色及II型胶原免疫组化染色观察体内成软骨情况。 结果：①诱导后细胞聚集状态：诱导2 d后脂肪间充质干细胞自行聚集为一条状细胞团，1周后细胞团聚集呈球状。②苏木精-伊红染色结果：未见有软骨陷窝形成。③RT-PCR检测结果：细胞团内Ⅱ型胶原蛋白和Sox9 mRNA均呈阳性表达。④Western blot检测结果：细胞团内有较强的Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan表达。⑤体内成软骨情况：植入裸鼠皮下的组织块内有大量软骨陷窝及II型胶原蛋白形成。 结论：①在无支架离心管内，脂肪间充质干细胞经软骨诱导剂作用后具有典型的软骨细胞表型，但未形成成熟软骨组织所具备的软骨陷窝。②诱导后细胞与凝胶复合种植于裸鼠体内，可形成具有典型软骨特征的组织。     

软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白在骨髓间充质干细胞和软骨细胞中的差异表达

背景：骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化起促进作用的除转化生长因子、成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白、胰岛素样生长因子基因在软骨细胞中高表达外，软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子在软骨细胞中的高表达可能在软骨形成过程中发挥重要作用。 目的：以Western blot检测软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子在大鼠骨髓间充质干细胞、透明软骨细胞及弹性软骨细胞中的差异表达。 设计、时间及地点：以细胞为对象的对比观察性实验，于2007-10/2008-04在大连医科大学附属第一医院中心实验室，大连医科大学生物实验室完成。 材料：2月龄SD大鼠，雌雄不限。 方法：以密度梯度离心法和贴壁培养法提取SD大鼠骨髓间充质干细胞，酶消化法提取肋软骨透明软骨细胞和耳廓弹性软骨细胞，分别培养二三代后提取细胞总蛋白，Western blot检测骨髓间充质干细胞、透明软骨细胞及弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白水平表达，并进行定量分析。 主要观察指标：软骨调节素Ⅰ和结缔组织生长因子蛋白水平。 结果：透明软骨细胞、弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ蛋白表达明显高于骨髓间充质干细胞(P < 0.05)，透明软骨细胞和弹性软骨细胞中软骨调节素Ⅰ蛋白的表达差异无显著性意义(P > 0.05)。透明软骨细胞、弹性软骨细胞中结缔组织生长因子蛋白的表达明显低于骨髓间充质干细胞(P < 0.05)，透明软骨细胞和弹性软骨细胞中结缔组织生长因子蛋白的表达差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：透明软骨细胞和弹性软骨细胞中高表达软骨调节素Ⅰ蛋白，骨髓间充质干细胞高表达结缔组织生长因子蛋白，说明软骨调节素Ⅰ可能在成熟的软骨细胞中发挥着重要作用，提示其可作为定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的重要备选生物因子。     

40001/间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学研究

背景：大块软骨损伤目前临床上尚无方法治疗,干细胞技术出现后为解决这一难题提供了理论支持。采用新型的支架材料“壳聚糖-胶原蛋白”结合干细胞诱导分化移植给动物模型是一种较新的尝试。 目的：观察壳聚糖-胶原凝胶复合骨髓间充质干细胞修复兔关节软骨缺损的组织学变化。 方法：体外培养扩增兔骨髓间充质干细胞。采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导。同时制备“壳聚糖-胶原蛋白”支架和兔关节软骨缺损模型。缺损用含有骨髓间充质干细胞的壳聚糖-胶原凝胶填充,另一条关节用没有细胞的支架或不做处理。其中12个关节作为实验组(接受骨髓间充质干细胞+支架),8个关节作为空白对照组(不做处理),8个关节作为单纯支架组(未植入细胞)。造模后于2,4,8,16周进行组织学评分并处死动物行组织学染色。 结果与结论：造模后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞,大部分软骨缺损区被新生软骨修复,组织学评分实验组关节修复良好。提示应用骨髓间充质干细胞结合“壳聚糖-胶原蛋白”复合物可以修复关节软骨缺损。 关键词：壳聚糖-胶原凝胶;兔;骨髓间充质干细胞;软骨缺损;组织学变化 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.006     

三维支架中骨髓间充质干细胞及软骨细胞和脂肪源性成熟基质细胞的成软骨效应

背景：软骨修复的关键是种子细胞在三维支架中的定向分化,但细胞放入三维支架中很难有透明软骨表现。 目的：考察3种种子骨髓间充质干细胞,软骨细胞和脂肪源性成熟基质细胞在支架中的成软骨特性。 方法：抽取羊骨髓,胰酶消化后获得原代骨髓间充质干细胞细胞、软骨细胞和脂肪源性成熟基质细胞,单层培养扩增。取P1骨髓间充质干细胞,P3软骨细胞和P3脂肪源性成熟基质细胞种植入不同比例(10%,20%,50%,80%,100%)的胶原/透明质酸支架中, 在无血清培养液中三维培养。2周后,用SO染色和免疫组织化学染色分析,观察硫酸软骨素和Ⅱ型胶原合成情况。 结果与结论：种子细胞在三维支架中特定条件下有成软骨效应,骨髓间充质干细胞在含20%透明质酸的胶原/透明质酸支架扩增少于3代有成软骨效应,软骨细胞传代数更高仍然有成软骨效应,但脂肪源性成熟基质细胞成软骨效应能力较弱。结果提示,在同样条件下骨髓间充质干细胞、软骨细胞较脂肪源性成熟基质细胞有更好的成软骨性能。 关键词：骨髓间充质干细胞;软骨细胞;组织工程;软骨;脂肪干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.004     

人脐带Wharton胶中间充质干细胞体外无支架组织工程软骨的构建

背景：构建组织工程软骨的方法多为自体种子细胞复合天然或合成物支架,目前多存在种子细胞来源有限、支架安全性和生物相容性、以及细胞在支架中分布不均的问题。 目的：探讨人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导分化并体外构建无支架组织工程软骨的可行性。 方法：分离培养人脐带Wharton胶中的间充质干细胞,进行流式细胞学鉴定。对软骨诱导前后的细胞进行组织学和免疫组织化学染色,对其表达的葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原进行定量研究,并应用RT-PCR检测软骨诱导前后Ⅱ型胶原和Sox-9 mRNA的表达。采用密集诱导培养→离心管培养→生物反应器培养,进行体外构建无支架软骨组织。 结果与结论：人脐带Wharton胶富含干细胞,流式细胞仪检测结果显示这些细胞不表达造血干细胞标志,表达CD44,CD105、CD271等间充质干细胞表面标志;HLA-ABC阳性表达,HLA-DPDQDR阴性表达。未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志,诱导后葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原显著增高。RT-PCR结果显示人脐带Wharton胶间充质干细胞诱导前后均表达Sox-9、Ⅱ型胶原mRNA。说明人脐带Wharton胶间充质干细胞具有前软骨细胞的特性。采用密集诱导培养结合生物反应器培养,不用支架,体外可以构建成大块组织工程软骨。表明人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种良好的构建组织工程软骨的种子细胞。     

丝素蛋白/羟基磷灰石材料复合骨髓间充质干细胞构建组织工程化软骨

背景：随着组织工程的兴起,软骨损伤的修复可能性显著地提高,但单一的支架材料均不能符合理想支架,有一定的局限性。 目的：观察骨髓间充质干细胞复合丝素蛋白/羟基磷灰石构建组织工程化软骨的可行性。 方法：体外分离培养骨髓间充质干细胞,并定向诱导成软骨细胞,与丝素蛋白/羟基磷灰石复合培养,构建膝关节胫骨平台全层关节软骨缺损。54只大白兔单侧膝关节全层软骨缺损模型后随机抽签法分为3组,复合组植入细胞-丝素蛋白/羟基磷灰石复合物;材料组植入单纯丝素蛋白/羟基磷灰石,对照组不行任何植入。植入后8,12周CT检查及组织学检查观察软骨缺损修复情况。 结果与结论：植入后8周,复合组关节面不平整,关节间隙增大,形成新生类软骨细胞,基质丰富。材料组关节面塌陷,软骨细胞少量增殖。植入后12周,复合组关节面平整,关节间隙如常。大量软骨细胞出现,与周边软骨色泽一样,支架材料完全降解。材料组关节面不平整,软骨细胞不完全充填,支架材料部分降解。对照组未见修复。提示用骨髓间充质干细胞复合丝素蛋白/羟基磷灰石可形成透明软骨修复动物膝关节全层软骨缺损,显示了丝素蛋白/羟基磷灰石材料作为关节软骨组织工程支架材料的良好生物相容性。     

软骨源形态发生蛋白基因转染自体骨髓间充质细胞修复关节软骨缺损

背景：以支架或干细胞在一定程度上能够修复软骨缺损,但是研究中发现较大块的缺损修复效果还达不到令人满意的程度。基因转染后的干细胞能够不断的释放生长因子有可能够为软骨缺损研究带来突破。 目的：进一步验证软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞是否会促进体内兔软骨修复。 方法：从兔骨髓内分离获得骨髓间充质干细胞,脂质体感染的方法将软骨源形态发生蛋白基因转染到骨髓间充质干细胞中。实验组移植转染后的细胞;单纯骨髓间充质干细胞组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白对照组缺损区不移植细胞。术后行组织学检测及组织学评分分析修复情况。 结果与结论：体内修复过程中,软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞促进了软骨再生。透明软骨填充了软骨缺损区,并且深部区域显示了软骨下成骨。透明软骨的重建区域优于单纯骨髓间充质干细胞移植组。组织学评分实验组高于骨髓间充质干细胞对照组和空白组。提示转染软骨源形态发生蛋白基因的骨髓间充质干细胞能够促进和提高关节软骨的改建和修复。     

动物源性骨软骨支架复合骨髓间充质干细胞/软骨细胞修复兔膝关节骨软骨复合缺损

摘要 背景：以往支架材料修复骨软骨的实验大都存在骨软骨耦合界面修复不良的情况。 目的：观察骨髓间充质干细胞/软骨细胞复合动物源性骨软骨支架修复兔膝关节骨软骨复合缺损的可行性。 方法：将新西兰大白兔随机抽签分为实验组、对照组、空白组,制作单侧膝关节骨软骨复合缺损后,实验组于骨缺损处植入自体骨髓间充质干细胞/诱导分化的软骨细胞与同种异体动物源性骨软骨复合支架,对照组于骨缺损处植入同种异体动物源性骨软骨支架、空白组未植入任何材料。术后4,8,12周行大体观察、苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色。 结果与结论：实验组大体观察见复合缺损区完全修复,局部无凹陷,新生组织和周围组织融合,苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色见软骨缺损区由新生的透明软骨样组织修复,细胞柱状排列,极性好,软骨陷窝明显,骨缺损区由骨样组织修复,新生软骨和软骨下骨以及宿主骨界面耦合良好,甲苯胺蓝染色阳性率和组织学评分优于对照组、空白组(P < 0.05)。说明诱导分化的自体软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养复合动物源性骨软骨支架所构建的细胞-支架复合体能成功修复兔膝关节软骨和软骨下骨的复合缺损,是一种理想的骨软骨复合缺损修复方法。 关键词：动物源性;支架;骨髓间充质干细胞;软骨细胞;修复;缺损 中国组织工程研究与临床康复, 2011,15 (12): 2265-2269.     

Mental illness in England,in Scotland and in Scots living in England

Summary Beginning from the observation that Scots living in England have much higher rates of mental hospital admission than do the English, several hypotheses are proposed to account for this. Much of the excess in rates of mental illness is accounted for by those diagnosed as having alcohol-related disorders and behaviour and personality problems. The results of an examination of offical statistics in the two countries enabled some explanations to be offered. It was found that rates of admissions to mental hospitals are higher in Scotland than in England but not as high as those found among Scots migrants who have a much higher rate of readmission to hospitals than either of the other groups. In fact, if first admissions only are considered the rates of admission in Scotland are not only higher than rates for English natives but also higher than for Scottish migrants. It seems that Scots living in England are somewhat less likely to become mental patients than Scots in Scotland but that once they do achieve this status they are very much more likely to be readmitted on subsequent occasions. It was concluded that there might be two fairly distinct groups of migrants from Scotland to England who have different backgrounds, different reasons for migrating and different psychological characteristics. On the one hand there are stable, economically motivated migrants who move south for definite employment related reasons and who show few psychological symptoms. While on the other hand there is a group of migrants who perhaps have psychological problems and who move more in hope than expectation without definite prospects and who account for the high rates of mental hospital admission found in Scottish migrants.     

Prostacyclin release in the coronary circulation during sustained stimulation in in vitro and in in vivo experimental systems

Prostacyclin release from rat isolated perfused hearts and from dog coronary circulation was studied by measuring immunoreactive 6-keto-PGF1 alpha (6-keto-PGF1a) in heart perfusate and in plasma obtained from the great cardiac vein respectively. Continuous infusion of arachidonic acid at constant concentration in isolated perfused hearts induced an increased prostacyclin release. This release showed a rapid peak within 10 min and a subsequent decrease. Low-flow ischemia induced an increased perfusate concentration of 6-keto-PGF1a but, considering the decreased flow, prostacyclin release was actually reduced. During the whole period of ischemia (60 min) prostacyclin release was constant. In open-chest anesthetized dogs 6-keto-PGF1a concentration in the great cardiac vein was increased after ligation of the left anterior descending coronary artery. A prolonged period of coronary occlusion (4.5 hours) resulted in a progressive rise of prostacyclin release. 6-keto-PGF1a determinations in the femoral vein and in the aorta did not show relevant variations during the observation period.     

癫痫与抑郁关系的研究进展

抑郁是癫痫患者中常见的精神障碍,严重地影响了患者的生活质量。传统的观点认为癫痫患者因为存在着诸多社会学问题易出现抑郁倾向,癫痫和抑郁是单向的联系,但大量的研究已经证明癫痫和抑郁之间存在双向的联系,一种异常状态的存在可能易转化为另一种异常状态的发展。癫痫和抑郁存在着共同的发病机制。本文主要就癫痫和抑郁的双向联系以及抗抑郁药物在癫痫患者中的应用进行阐述。     

神经介入：回眸2022

<正>2022年,国际上公布了多项大型神经介入领域的随机对照试验（randomized controlled trial,RCT）结果,在血管内治疗（endovascular treatment,EVT）急性大血管闭塞（large vessel occlusion,LVO）适应证的扩展、药物治疗、管理,症状性颅内动脉粥样硬化性狭窄（symptomatic intracranial atherosclerotic stenosis,sICAS）治疗,无症状性颈动脉狭窄治疗,     

Neuroimaging in epilepsy in tropics

Epilepsy is a major public health problem in many tropical countries. Also, some of the tropical diseases are major contributors to the higher prevalence of epilepsy in these countries. The etiologic factors responsible for epilepsy in these countries are quite different from those in the developed world. This article discusses the etiologic factors and neuroimaging of epilepsy in light of the conditions in these tropical countries.