胚胎肝发育相关基因-1在氯高铁血红素诱导分化的红白血病细胞中的表达

目的　研究胚胎肝发育相关基因 1(EDAG 1)在红系肿瘤分化中的表达及意义。方法　用细胞生物学、RT PCR及Northern杂交法。结果　含 4 0× 10 -5mol·L-1氯高铁血红素 (Hemin)的RPMI 16 40培养K5 6 2细胞 5天 ,可使70 %～ 80 %细胞呈现正常红系特征 ;EDAG 1、c fos表达降低。结论　Hemin可诱导红白血病细胞分化 ;EDAG 1、c fos表达下调可能与其有关。     

AQP1在维甲酸诱导红白血病细胞红系分化中的作用

目的建立稳定抑制水通道蛋白1（AQP1）表达的K562细胞株,探讨AQP1在维甲酸（RA）诱导红白血病细胞红系分化中
的作用。方法RA处理K562细胞,通过real-time PCR法检测γ-珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白的含量研究RA对K562
细胞红系分化的影响。Real-time PCR法、蛋白质印迹法检测RA诱导后K562细胞AQP1转录和蛋白表达水平的变化。设计特
异AQP1shRNA序列,构建pSUPER-retro-puro重组质粒转染K562细胞,筛选建立稳定抑制AQP1基因表达的K562细胞株
（K562-shAQP1）;通过比较K562-shAQP1细胞株与对照组细胞在维甲酸诱导后γ-珠蛋白和血红蛋白的表达,研究AQP1在维甲
酸诱导K562细胞红系分化中的作用。结果RA处理K562细胞后红系分化指标γ-珠蛋白和血红蛋白的表达均明显增加,同时
AQP1mRNA及蛋白表达随RA作用时间显著增加（P<0.01）。pSUPER-retro-puro-shAQP1干扰载体转染K562细胞后AQP1基
因在转录和蛋白水平上的表达均被抑制,差异有统计学意义（P<0.01）;K562-shAQP1细胞与对照K562细胞相比,在RA诱导后
γ-珠蛋白和血红蛋白表达受到不同程度的抑制,差异有统计学意义（P<0.01）。结论RA诱导K562细胞红系分化后AQP1表达
显著增加,而抑制AQP1基因的表达可部分阻断RA诱导红系分化的作用,说明AQP1在RA诱导K562细胞红系分化过程中发
挥重要作用。
     

小鼠红白血病细胞在体外的诱导分化

小鼠红白血病细胞(Murine Erythroleukemia Cell,简称MELC)在体外的诱导分化是近十年来国外在肿瘤细胞生物学和分子生物学领域内的重要课题之一。MELC体外诱导分化的研究为探讨肿瘤细胞发生过程中增殖和分化之间的关系、肿瘤细胞中特定基因表达的调控以及其他生化改变等提供了     

血红素加氧酶-1基因在三氧化二砷诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达

目的:检测三氧化二砷(As2O3)诱导食管癌EC9706细胞凋亡过程中血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,探讨HO-1的表达与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的内在联系。方法:以食管癌EC9706细胞系作为研究模型,3μmol/L AS2O3作用于EC9706细胞,镜下观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;以RT-PCR方法检测HO-1mRNA的表达。结果:As2O3作用于EC9706细胞4 h即可检测到HO-1基因表达升高,12 h表达水平升至最高,24 h回落到正常水平。结论:As203诱导EC9706细胞凋亡过程中,HO-1基因表达升高,呈时间依赖性变化,可能起到短暂的对抗氧化应激作用。     

发育相关基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的:探讨发育相关基因在儿童急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblasticleukemia,ALL)患者中的表达及其与临床特征的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR方法检测125例初发ALL患儿(ALL组)骨髓样本中Notch1、Wnt3a和β-catenin的mRNA表达量,并与临床特征进行相关分析.对...     

分化抑制因子Id1基因在白血病细胞中的表达及意义

目的:研究分化抑制因子-1(inhibitors of differentiation,Id1)在白血病白细胞中的表达,探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性,为白血病的诊断、治疗提供参考.方法:应用KT-PCR.方法,检测Id1在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况.结果:与健康自愿者相比,Id1基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低,有统计学意义(P<0.05),而后两者比较无统计学意义.结论:Id1在白血病细胞中的表达明显降低,与白血病的发病有一定相关性.     

SHP1基因诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及红系分化

目的探讨SHP1基因在诱导K562细胞凋亡及红系分化中的作用。方法应用RT-PCR法克隆SHP1基因全长cDNA序列并克隆于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体转染使其基因在K562细胞中过表达。Hoechst33258染色和FACS(AnnexinⅤ-PI双标)分析检测转基因后K562细胞凋亡;联苯胺蓝染色和血型糖蛋白A(GPA)表达检测分析细胞分化情况。结果 pcDNA3-SHP1转染K562细胞,RT-PCR、蛋白免疫印迹分析证实SHP1在K562细胞中表达。转染48h后,K562细胞出现凋亡,AnnexinⅤ-PI双标FACS分析细胞凋亡率为16.84%,与转染空载体pcDNA3.0(6.23%)相比差异有统计学意义(P=0.000)。联苯胺蓝染色细胞阳性率14.67%,GPA表达率19.38%,与转染空载体组比较差异也有统计学意义(P=0.005)。结论 SHP1能有效地诱导K562细胞凋亡与红系分化。     

WT1基因在髓细胞白血病中的表达

WT1基因(Wilms′tumorgene)是Wilms′瘤的易感基因,染色体定位于11p13。WT1基因长约50kb,含10个外显子;其中第5、9外显子是可随机组合的剪接外显子。由于剪接方式不同,WT1基因可转录4种转录本,编码相对分子质量为52000～54000的蛋白质。研究表明WT1基因并非一单纯的抑癌基...     

NOMO1基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达

目的:检测NOMO1基因在SD大鼠胚胎心脏发育过程中mRNA表达变化及定位,并探讨其在胚胎心脏发育的意义?方法:24只孕鼠随机分为6组,每组4只,分别于妊娠12 d(D12)?15 d(D15)?16 d(D16)?17 d(D17)?19 d(D19)?21 d(D21)时取出胎鼠,取其心脏,采用实时定量PCR(real-time PCR)技术检测心脏组织中NOMO1基因mRNA的表达丰度,并应用荧光原位杂交(FISH)的方法对其进行定位分析?结果:在妊娠D12?D15?D16?D17?D19?D21的胚胎心脏中NOMO1基因mRNA均有表达,且呈由弱到强再减弱趋势,表达高峰出现在D16;该基因主要表达于心外膜中,而在心肌层?心内膜?心瓣膜等处未见表达?结论:NOMO1基因的表达随大鼠胚胎的心脏发育呈动态表达,可能与心脏发育相关?     

不同发育时期胚胎肝Cx基因的表达

为探索不同分化阶段胚胎肝中细胞连接蛋白（Ｃｘ）基因表达的时间顺序、规律及其与细胞分化的关系，本文采用Ｃｘ基因系列作为分子探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，研究了不同发育时期胚胎肝中Ｃｘ基因表达状态。结果发现：①Ｃｘ基因表达有器官特异性，肝脏中Ｃｘ２６，Ｃｘ３２及Ｃｘ４３表达；其它基因不表达；②在胚胎不同发育阶段的胚胎肝中基因Ｃｘ２６，Ｃｘ３２和Ｃｘ４３呈不同的表达状态；③Ｃｘ４３在出生后健康人肝脏中不表达，仅在胚胎肝中表达，可能与胚胎期血发生有关。提示Ｃｘ基因可能是调节细胞分化和器官发育过程中某些分化方面的关键性候选基因     

不同发育时期胚胎肝Cx基因的表达

为探索不同分化阶段胚胎肝中细胞连接蛋白（Ｃｘ）基因表达的时间顺序，规律及其与细胞分化的关系，本文采用Ｃｘ基因系列作为分子探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，研究了不同发育时胚胎肝中Ｃｘ基因表达状态。     

DLK1在急性白血病中的表达及其在K562细胞红系分化中的作用

目的:探讨急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓单个核细胞DLK1基因的表达水平及其在K562细胞红系分化中的作用.方法:采用RT-PCR对65例AL患者及34例正常骨髓对照进行DLK1mRNA水平的检测,对其中20例AL患者及13例正常骨髓用Western 印迹法检测DLK1蛋白表达水平.培养K562细胞,用氯化高铁血红素(hemin)诱导其分化,观察DLK1在红系分化中的变化.结果:在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中DLK1基因均存在明确表达.DLK1mRNA的表达水平AL组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.018),但在ALL和ANLL之间DLK1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),且DLK1mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关.对部分样品检测DLK1蛋白的表达,发现AL患者DLK1蛋白阳性表达率高于对照组,与mRNA表达趋势一致.在hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,DLK1mRNA的表达水平逐渐下降.结论:DLK1基因可能参与了AL的发病过程,但DLK1mRNA的表达水平与AL患者某些临床特征无相关性.DLK1基因可能抑制K562细胞向红系分化.     

Nodal信号通路相关基因NOMO1在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

目的:研究斑马鱼NOMO1基因在早期胚胎发育过程中的时空表达情况?方法:首先克隆斑马鱼NOMO1同源基因全长cDNA,然后运用半定量RT－PCR技术初步检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎的表达情况,最后通过原位杂交技术检测NOMO1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的时空表达情况?结果:通过半定量RT－PCR及原位杂交技术显示NOMO1从受精卵时期开始即有表达,在24 hpf(受精后24 h)之前,NOMO1基因表达广泛,并主要集中在中?内胚层?从24 hpf开始其表达主要集中于神经系统如前脑?中脑?小脑?脊索前板?眼和耳囊等处?在心脏处也有少量表达?结论:NOMO1基因对斑马鱼早期胚胎发育具有一定的作用,推测NOMO1基因影响早期心脏发育?     

分化抑制因子Idl基因在白血病细胞中的表达及意义

目的：研究分化抑制因子-1（inhibitors of differentiation，Idl）在白血病白细胞中的表达，探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性，为白血病的诊断、治疗提供参考。方法：应用1KT—PCR方法，检测Idl在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况。结果：与健康自愿者相比，Idl基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低，有统计学意义（P〈0．05），而后两者比较无统计学意义。结论：Idl在白血病细胞中的表达明显降低，与白血病的发病有一定相关性。     

白血病分化相关基因dif14的原核表达

目的 :构建 pGEX dif14原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达dif14蛋白片段以获得其抗原 .方法 :采用N末端融合谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)的 pGEX 4T 1载体 ,根据dif14基因开放读框N端 5 2氨基酸序列设计引物PCR扩增并购建原核表达载体 ,测序证实 .在大肠杆菌DH5α中进行表达 .结果 :测序证实dif14原核表达载体构建正确 ,含 pGEX dif14表达质粒的大肠杆菌经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导后能够表达约Mr35× 10 3 的融合蛋白 .结论 :成功地构建了原核表达质粒 pGEX dif14 ,并在大肠杆菌得到表达 ,为研究dif14的功能奠定了一定的基础     

GSIS相关基因在大鼠胚胎胰腺发育后期表达模式

目的探讨大鼠胚胎发育晚期胰腺13细胞GSIS功能相关基因的表达趋势。方法利用显微分离方法分离胚胎15．5d（E15．5）和胚胎18．5d（E18．5）胰腺组织，提取RNA并与大鼠基因组芯片杂交。数据处理后，获得E15．5和E18．5胰腺组织基因表达谱。进而利用RT—PCR对芯片结果进行验证。结果在E15．5至E18．5，肝核因子（hepatocyte nuclear factor，Hnf）1α及4α特异表达，其下游基因胰岛素1（Insl），葡萄糖转运体2（Glut-2）、L型丙酮酸激酶（L—PK）和醛缩酶B（Aldolase B）表达上调，而葡萄糖激酶（GCK）无表达。RT-PCR方法进一步验证，Hnflα及Hnf4α在E18．5特异表达，至初生时，Hnflα表达下调，Hnf4α无表达，GCK明显表达。结论Hnflα及Hnf4α及其下游基因在大鼠胚胎胰腺发育后期出现高表达。     

大鼠血红素加氧酶-1基因在乳酸乳球菌中的表达

目的:在乳酸乳球菌中表达大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)基因。方法:采用RT-PCR技术从大鼠脾总RNA中分离扩增血红素加氧酶HO-1基因,将该基因克隆进pGEM-Teasy质粒中,转化大肠杆菌DH5α提取质粒,鉴定HO-1基因。酶切后与pSEC质粒连接,经电击转化,将重组质粒转入乳酸乳球菌NZ9000中,转化子在含有氯霉素的脑心浸液培养基上培养。用nisin诱导HO-1表达,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表达产物,并采用分光光度法测定HO-1活性。结果:表达产物相对分子量约为32kU,表达量约为7.0mg/L,HO-1活性为2.386U/(mg·h)。结论:乳酸乳球菌能够表达具有生物活性的大鼠HO-1。     

红细胞分化相关因子1对人红白血病细胞珠蛋白表达的影响

目的：探讨红细胞分化相关因子（EDRF）1基因在人红白血病（HEL）细胞中珠蛋白表达的影响。方法：构建EDRF1真核正义和反义表达载体,转染HEL细胞并筛选稳定表达细胞克隆。然后利用Northern blot和逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）的方法观察红系标志基因表达水平的改变,应用凝胶阻滞电泳（EMSA）的方法观察红系转录因子DNA结合活性的改变。结果：与对照组相比, EDRF1过表达的HEL细胞中α－珠蛋白合成明显增加,EDRF1反义表达载体转染的HEL细胞中的α-、γ－珠蛋白合成下调,而红细胞生成素（EPOR）表达水平没有明显改变。红细胞特异的转录因子GATA－1和NFE2mRNA的表达在转染前后没有明显改变。GATA－1转录因子的DNA结合活性在反义表达载体染的HEL细胞中受到明显的抑制,而红系核因子（NF－E）2的转录活性则没有明显的改变。结论;EDRF1下调珠蛋白的合成是通过抑制红系特异的转录因子GATA－1的DNA结合活性实现的。     

血红素加氧酶1基因在小鼠肾足细胞中的表达及抗炎作用

目的 构建血红素加氧酶1基因(HO-1)真核双表达载体pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp,并在小鼠肾足细胞MPC5中过表达,研究HO-1在脂代谢紊乱模型下的抗炎作用。方法 取生长良好的人胚胎肾细胞HEK293t,提取总RNA反转录得到cDNA文库,扩增得到HO-1基因目的片段。将目的片段和载体进行双酶切,超滤管回收后T4-ligase连接,得到真核表达质粒命名为pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp。将载体进行菌液PCR、双酶切和测序鉴定后,转染小鼠肾足细胞MPC5,通过荧光显微镜和Western blot检测HO-1以及炎性因子表达情况。结果 以HEK293t为来源扩增得到的目的片段凝胶电泳位置正确;筛选得到的载体菌液PCR、双酶切凝胶电泳以及测序结果正确;转染细胞后,荧光显微镜和Western blot结果显示质粒转染成功,并且减少了炎性因子IL-18、IL-1β表达。结论 成功构建pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp双表达质粒,为糖尿病脂代谢紊乱细胞模型后续相关实验奠定基础。