LDL诱导THP-1细胞炎性因子FOS、TNF-α、IL-1β的顺序表达

目的探讨LDL诱导THP-1细胞内炎性因子FOS、TNF-α、IL-1β表达及3种炎性因子的关系,为早期诊断动脉粥样硬化提供依据。方法采用实时荧光定量PCR检测LDL刺激的THP-1细胞中FOS、TNF-α、IL-1βm RNA的表达,TNF-α抑制剂刺激THP-1细胞中FOS、TNF-α、IL-1βm RNA的表达及TNF-α抑制剂对LDL诱导的THP-1细胞中FOS、TNF-α、IL-1βm RNA表达影响;采用流式细胞仪检测TNF-α抑制剂刺激的THP-1细胞凋亡情况。结果 LDL刺激THP-1细胞FOS m RNA的表达0.5 h达到高峰(P0.05),TNF-αm RNA的表达1 h开始上升并达到最高(P0.05),IL-1βm RNA的表达1 h开始上升(P0.05);TNF-α抑制剂不促进细胞凋亡,100μg/ml时凋亡率最低。TNF-α抑制剂刺激细胞FOS m RNA 2 h表达下降(P0.05),TNF-αm RNA 1 h表达上升(P0.05),2 h表达下降(P0.05),IL-1βm RNA 1 h表达下降(P0.05);LDL诱导细胞1 h后加入TNF-α抑制剂刺激细胞FOS m RNA 1 h表达下降(P0.05),TNF-αm RNA 0.5 h表达下降(P0.05),IL-1βm RNA 0.5 h表达下降(P0.05)。结论 LDL能够促进THP-1细胞内FOS、TNF-α、IL-1β的表达,且它们之间有一定的表达顺序,TNF-α能促进IL-1β的表达。     

miR-150调控PDCD4对结核分枝杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞的影响

目的:探讨miR-150对结核杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞炎症、细胞增殖及凋亡的影响.方法:结核杆菌H37Rv感染THP-1巨噬细胞24、36和48 h后,ELISA法检测细胞IFN-γ及炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)含量.感染H37Rv的THP-1巨噬细胞转染miR-150 mimic,miR-...     

热休克上调THP-1细胞IL-37表达

目的研究热休克(heat shock,HS)对人单核细胞株THP-1细胞IL-37表达及其对促炎细胞因子产生的影响。方法对THP-1细胞进行42℃热休克处理1 h,然后分别于37℃恢复培养0~6 h,用流式细胞术检测胞内IL-37的表达。对THP-1细胞用热休克处理与脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激,分别收集细胞及其培养上清,用流式细胞术检测各组细胞IL-37表达,ELISA检测各组细胞培养上清中促炎细胞因子的水平。结果流式细胞术检测结果显示,经42℃热休克处理后THP-1细胞于37℃分别恢复培养0、2、4、6 h,细胞IL-37的阳性表达率分别比对照组增高21.1、30.6、34.1、15.1倍,每个细胞表达IL-37的平均荧光强度(Mean Fluorescence Intensity,MFI)分别比对照组增高4.6、7.5、8.3、3.7倍。此外,还发现THP-1细胞单独用热休克处理或LPS刺激后,其IL-37表达水平无显著差异,但热休克处理结合LPS刺激的细胞IL-37表达水平则分别显著高于单独用热休克处理或LPS刺激的细胞,其MFI分别比单独用热休克处理或LPS刺激细胞增高2.0、1.9倍。ELISA结果显示,LPS刺激后THP-1细胞产生炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平分别比对照组高2.9、2.1、3.3倍,而热休克处理结合LPS刺激的细胞的IL-1β、TNF-α与IL-6的水平则比仅用LPS刺激的细胞分别降低了75.1%、69.6%、66.4%。结论热休克能上调THP-1细胞IL-37表达,其上调表达可能参与抑制促炎细胞因子的产生。     

幽门螺杆菌VacA通过激活NF-kB诱导巨噬细胞分泌及凋亡

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)空泡毒素(VacA)单一毒力决定簇对THP-1巨噬细胞分泌和凋亡的影响,以及核因子KB(nuclear factor KB,NF-KB)在调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞功能中的作用.方法 将pDsRed-Monomer-Cl/vacA转染THP-1巨噬细胞,ELISA法检测巨噬细胞培养上清IL-1β、TNF-α含量;Griess试剂分析培养上清的一氧化氮(NO)水平;荧光探针DCFH-DA检测培养上清的活性氧(ROS);流式细胞仪检测细胞的凋亡率;凝胶阻滞试验(electro-phoretic mobility gel shift assay,EMSA)检测NF-kB的核转位.结果 重组质粒转染后6 h,重组质粒组培养上清中TNF-α、IL-1β含量明显高于阴性对照组(P<0.05);且分别于转染后6 h或24 h到达峰值;转染后6 h或12 h,重组质粒组培养上清中NO、ROS含量明显高于阴性对照组(P<0.05),且于转染后24 h达到高峰.转染后16 h,重组质粒组的凋亡率明显升高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).重组质粒组加NF-kB的特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)后,IL-1β、TNF-α、NO、ROS的分泌量和细胞的凋亡率明显降低,与重组质粒组相比差异有统计学意义(P<0.05).EMSA试验显示,转染后3h细胞核内有活化的NF-kB,且于转染后12h活性最强.结论 VacA蛋白瞬时高表达上调THP-1巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO和ROS;VacA蛋白瞬时高表达诱导THP-1巨噬细胞凋亡;NF-kB可能参与调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞的分泌和凋亡.     

肺炎嗜衣原体Cpn0810重组蛋白诱导THP-1细胞产生促炎因子和凋亡的研究

目的:在E.coliBL21中表达肺炎嗜衣原体Cpn0810,并研究该蛋白能否诱导人单核细胞( THP-1)产生TNF-α和IL-6等促炎因子和细胞凋亡.方法:PCR扩增Cpn0810蛋白编码基因,构建pGEX6p-2/Cpn0810重组质粒,在E.coliBL21中诱导表达,经ToxinEraser纯化柱纯化后,用不同浓度的GST-Cpn0810作用THP-1细胞,ELISA法检测TNF-α和IL-6的水平,Hoechst33258荧光染色、AnnexinV-F1TC-PI染色法检测细胞凋亡情况.结果:构建了重组质粒pGEX6p-2/Cpn0810,并在E.coliBL21菌中高效表达.该蛋白能诱导THP-1细胞以时间、剂量依赖方式表达TNF-α和IL-6;当10mg/L GST-Cpn08 10处理THP-1细胞24h后,形态学上,细胞表现为皱缩、核碎裂、细胞起泡及凋亡小体等凋亡特征.结论:表达并纯化的Cpn0810蛋白能诱导THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6等促炎因子和诱导其发生凋亡.     

金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞TLR2和IL-1β、TNF-α以及NF-kB表达的影响

目的 观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞Toll样受体2(TLR2)的表达以及对促炎性细胞因子、核因子κB (NF-κB)的影响.方法 用金黄色葡萄球菌处理Bcap-37细胞,采用RT-PCR检测TLR2 mRNA的表达,流式细胞术检测TLR2蛋白的表达,ELISA分别检测IL-1 β和TNF-α的分泌,Western blot检测NF-κB的表达变化.结果 金黄色葡萄球菌作用于Bcap-37细胞后,TLR2 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰,之后又逐渐下降(P＜0.05).IL-1β、TNF-α的表达呈现明显的时间依赖性增高(P＜0.05),IL-1β在12 h到达峰值后下降,TNF-α在16 h表达仍然很高.NF-κB的表达随着刺激时间的延长也呈现时间依赖性增高,在12 h时表达量最高,14 h开始下降.结论 金黄色葡萄球菌能上调Bcap-37细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,激活Bcap-37细胞NF-κB的表达,促进IL-1β和TNF-α的分泌.     

CPSIT_p7通过激活JNK/ERK信号通路诱导宿主细胞炎症

目的初步探讨鹦鹉热嗜衣原体蛋白CPSIT_p7对宿主细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法佛波酯(PMA)处理THP-1细胞过夜,诱导其分化为贴壁的巨噬细胞,之后用CPSIT_p7蛋白刺激贴壁细胞,或先用30μmol/L ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB202190分别预处理贴壁细胞,再用CPSIT_p7蛋白处理贴壁细胞;Western blot检测ERK、JNK和p38磷酸化水平,ELISA检测各种炎症因子的表达水平。结果 0~10μg/ml CPSIT_p7蛋白刺激PMA诱导的THP-1细胞24 h后,随着CPSIT_p7质量浓度升高,IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的含量呈剂量依赖性增加;10μg/ml的CPSIT_p7处理细胞0、6、12、24和36 h,在24 h时IL-6、IL-8及IL-1β表达水平达到高峰,而TNF-α在12 h就达到高峰;CPSIT_p7蛋白处理细胞后其ERK和JNK磷酸化水平显著升高,p38磷酸化水平改变不明显;JNK和ERK抑制剂能明显降低CPSIT_p7蛋白诱导的IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α表达。结论 CPSIT_p7通过JNK/MAPKs和ERK/MAPKs信号传导途径诱导THP-1产生IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α炎症因子,与p38/MAPKs信号传导通路无关。     

STAT3抑制剂Stattic激活ERK通路诱导THP-1细胞IL-8的产生及细胞凋亡

目的观察信号转导子与转录激活子3(STAT3)抑制剂Stattic对THP-1细胞产生白细胞介素8(IL-8)和细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用(0、 1、 5、 10、 15、 20)μmol/L Stattic处理THP-1细胞0、 1、 3、 6、 12、 24h,实时荧光定量PCR检测细胞IL-8、 IL-6、 IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平, ELISA检测细胞培养上清液IL-8蛋白水平,流式细胞术检测THP-1细胞的凋亡, Western blot法检测细胞STAT3、细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白磷酸化水平;采用(0、 1、 5、 10)μmol/L的ERK通路选择性抑制剂U0126预处理THP-1细胞,反转录PCR检测U0126对Stattic诱导THP-1细胞表达IL-8 mRNA水平的影响。结果 (10～20)μmol/LStattic显著上调IL-8在THP-1细胞中的mRNA和蛋白表达,仅(15、 20)μmol/LStattic能诱导THP-1细胞凋亡; Stattic处理THP-1细胞1、 3、 6、 12、 24 h,均显著上调IL-8的mRNA水平,以3 h时最为明显,在6 h以后呈时间依赖性上调IL-8的蛋白水平并诱导THP-1细胞凋亡;Stattic呈浓度和时间依赖性抑制STAT3磷酸化,时间依赖性地诱导ERK磷酸化,在(1、 5、 10、 15、 20)μmol/L时均显著诱导ERK磷酸化。另外, U0126显著抑制Stattic诱导的IL-8 mRNA表达。结论 STAT3抑制剂Stattic通过激活ERK信号通路诱导THP-1细胞凋亡和IL-8产生。     

卡氏肺大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化

目的探讨卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocysitis carinii pneumonia,PCP)大鼠肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的变化。方法采用AM体外培养技术,应用RT-PCR法分别测定脂多糖(LPS)诱导的AM中TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达的动态变化。结果肺泡巨噬细胞受LPS刺激后,PCP模型大鼠TNF-αmRNA在1、4 h表达高于正常组(P<0.05),IL-1βmRNA表达在4、8 h时表达高于正常组(P<0.01),IL-6mRNA表达在8 h时PCP高于正常(P<0.05),表达峰值都提前,并且在4 h达到峰值。结论LPS刺激后,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在早期可能更易分泌TNF-α、IL-1β、IL-6作为免疫分子,起免疫防御和免疫损伤作用。     

IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平

目的探讨白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的白细胞介素18受体β(IL-18Rβ)表达的影响。方法采用反转录PCR和Western blot法检测不同浓度IL-18、TNF-α处理后3T3-L1脂肪细胞、RAW264.7巨噬细胞的IL-18RβmRNA及蛋白的表达。结果 10 ng/m L、100 ng/m L TNF-α显著增加3T3-L1脂肪细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达,10 ng/m L、100 ng/m L IL-18显著增加RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的mRNA及蛋白表达。结论IL-18、TNF-α可能通过促进巨噬细胞、脂肪细胞IL-18R的表达参与糖尿病和肥胖的脂肪组织慢性炎症过程。     

姜黄素对肺炎链球菌诱导BEAS-2B细胞SLPI、TNF-α和IL-1β表达的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)及其衍生物Y20和6B对肺炎链球菌(SP)诱导的BEAS-2B细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的调节及可能机制。方法:建立体外SP感染模型,采用q PCR检测对照组、感染组以及Cur、Y20和6B处理组在感染1、3、6和9 h SLPI及感染3、6和9 h TNF-α和IL-1β的mRNA水平,ELISA法检测TNF-α和IL-1β的蛋白分泌水平,Western blot实验检测各时点Toll样受体2(TLR2)和磷酸化核因子κB(NF-κB)p65的蛋白水平。结果:q PCR结果显示,Cur、Y20和6B药物处理组SLPI的mRNA表达较SP感染组增加(P0.05),TNF-α和IL-1β的mRNA表达较SP感染组明显下降(P0.05);ELISA结果显示,感染不同时点的TNF-α和IL-1β含量在药物处理组中均下降(P0.05);Western blot结果显示,SP感染3、6和9 h在药物处理组中TLR2和p-NF-κB p65的蛋白水平较感染组下降(P0.05)。结论:在不同感染时间,Cur、Y20和6B促进SP感染的BEAS-2B细胞SLPI表达,减少TNF-α和IL-1β分泌,其机制可能与抑制TLR2表达、下调NF-κB转录活性有关。     

青蒿琥酯对结核分枝杆菌诱导的TNF-α、IL-6表达的影响

目的探讨青蒿琥酯(artesunate, ASN)对结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis, Mtb)诱导THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6的影响及机制研究。方法体外培养THP-1细胞。MTT法检测ASN对细胞的活性影响;RT-qPCR检测细胞因子TNF-α、IL-6和TLR2mRNA表达;ELISA检测TNF-α、IL-6分泌,Western blot检测TLR2受体表达。结果 MTT法检测ASN浓度在0～20μg/mL范围内培养48h均对细胞无毒性;与对照组相比,Mtb显著增加TNF-α、IL-6mRNA及蛋白表达,而20μg/mL ASN能显著抑制TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。此外,20μg/mLASN能显著抑制TLR2mRNA及蛋白表达。结论 ASN可能通过抑制TLR2受体表达缓解Mtb诱导的炎症反应。     

人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡

为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。     

肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经TLR2及TLR4调控THP-1分泌TNF-α

目的 探讨肺炎嗜衣原体(Cpn)热休克蛋白10(HSP10)诱导人单核细胞分泌炎症因子的作用及Toll样受体(TLR)2、TLR4与此作用的相关性.方法 制备Cpn HSP10(CHSP10)纯化蛋白,去内毒素活性后用不同浓度(0.5、1、5、10、20、30μ/ml)刺激THP-1细胞0、6、12、24、36、48、60 h,并比较蛋白不同处理组别中TNF-α的水平差异;以间接免疫荧光及RT-PCR鉴定THP-1细胞上的TLR4及TLR2;分离C3H系野生型和TLR4缺陷型小鼠巨噬细胞,以CHSP10刺激后检测TNF-α水平;用抗TLR2/TLR4单克隆抗体预孵育细胞,ELISA检测CHSP10刺激细胞前后TNF-α的变化.结果 CHSP10刺激THP-1细胞引起上清液炎症因子TNF-α水平显著增加,经加热等处理后蛋白诱生TNF-α的作用明显降低.THP-1细胞可检测到TLR2及TLR4的mRNA及蛋白表达,CHSP10诱生C3H系野生型小鼠细胞分泌的TNF-α明显高于TLR4缺陷型小鼠细胞,TLR2/4经单克隆抗体作用后均可显著降低CHSP10诱导THP-1分泌TNF-α的水平.结论 CHSP10可能作为炎症相关蛋白参与了Cpn对宿主细胞的致炎作用;并且TLR2及TLR4在该炎症刺激信号的传递过程中发挥一定的作用.     

人参皂苷降低β淀粉样蛋白诱导THP-1单核细胞ERK的磷酸化和细胞因子含量

目的观察人参皂苷对β-淀粉样蛋白(-βamyloid,Aβ)1-40诱导的THP-1单核细胞系表达细胞因子和磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)的影响。方法用Western blotting方法测定磷酸化ERK的表达,放射免疫法测定细胞培养上清液中的细胞因子IL-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度。结果Aβ刺激组磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达明显高于对照组。人参皂苷(50、100和150 mg/L可减少Aβ诱导THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表达。与模型组比较,人参皂苷治疗组Aβ1-40诱导的THP-1细胞磷酸化ERK和细胞因子(IL-1β、IL-8和TNF-α)的表达明显降低。结论人参皂苷可抑制Aβ诱导的ERK磷酸化,进一步减少细胞因子的产生。     

β2GPI/抗 β2GPI抗体复合物激活THP-1细胞内TRIF途径

目的:观察β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能否激活单核细胞株THP-1的TRIF途径,以探讨TRIF依赖途径在抗磷脂综合征(APS)发病机制中的作用.方法:采用一定剂量β2GPI/抗β2GPI抗体复合物刺激THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA及总蛋白,荧光定量PCR (RT-PCR)检测细胞TRIF mRNA水平,Western blot检测细胞TRIF蛋白表达情况;进一步观察TLR4途径抑制剂-TAK-242是否干预β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物对TRIF的诱导表达以及相关细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的表达.结果:β2GPI/抗β2 GPI抗体复合物( 100 mg/L)能够诱导THP-1细胞表达TRIF(mRNA 及蛋白),并显示时间效应,分别于刺激1h和2h时TRIF mRNA及蛋白表达至高峰.TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞TRIF的诱导表达,同时抑制IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子的表达.结论:TRIF依赖的TLR4途径参与了β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对THP-1细胞的激活,提示其在抗磷脂综合征的病理机制中发挥一定作用.     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力及其相关Toll样受体的差异性

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(LPS)诱导人单核-巨噬样细胞THP-1分泌IL-1β、TNF-α、IL-6能力及相关Toll样受体(TLR)的差异. 方法 采用酚水法提取Pg ATCC33277株脂多糖(Pg-LPS),并用红外光谱法和鲎试验进行鉴定.采用ELISA试剂盒定量检测Pg-LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6水平.采用TLR2或TLR4单克隆抗体阻断试验联合ELISA检测,了解Pg-LPS结合靶细胞上Toll样受体的类型.实验中采用大肠杆菌0111:B4株脂多糖(E-LPS)作为对照. 结果 1μg/ml Pg-LPS作用THP-1细胞,分别于0.5、6和6 h检测分泌IL-1β、TNF-α和IL-6的水平明显升高(P0.05).TLR2或TLR4单抗均可有效阻断Pg-LPS作用的THP-1细胞分泌IL-1B或IL-6(P<0.05),但仅,ILR2单抗显示了阻断TNF-α分泌的作用(P<0.05).E-LPS诱导THP-1细胞分泌上述3种细胞因子的活性仅可被TLR4单抗所阻断(P<0.05). 结论 Pg-LPS诱导THP-1细胞分泌IL-1β、TNF-α和IL-6活性略高于E-LPS,TLR2而非TLR4是Pg-LPS介导靶细胞分泌上述细胞因子的主要受体.     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。     

下调TPD52基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨下调肿瘤蛋白D52(TPD52)基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:将针对TPD52的特异性si RNA(si-TPD52)及其阴性对照转染原代培养的子宫肌瘤细胞,并加入Dickkopf-1(DKK1)作为Wnt信号通路抑制剂,转染48 h后,用Western blot检测TPD52及Wnt信号通路关键分子β-catenin和相关靶蛋白cyclin D1和survivin的蛋白表达; MTT及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率的变化; RT-qPCR检测TNF-α和IL-6的m RNA表达。结果:TPD52在转染si-TPD52的子宫肌瘤细胞的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05);与阴性对照组比较,si-TPD52组细胞活力明显受到抑制,凋亡率增加,TNF-α的m RNA表达降低,IL-6的m RNA表达升高,β-catenin、cyclin D1和survivin的蛋白表达降低(P 0. 05);加入DKK1后si-TPD52对细胞活力和凋亡的影响更明显。结论:下调TPD52基因表达可通过Wnt信号通路抑制子宫肌瘤细胞生长和诱导凋亡,同时下调TNF-α和上调IL-6表达。     

高糖预处理影响单核细胞对热灭活金黄色葡萄球菌刺激的反应

目的 观察高糖状态下热灭活金黄色葡萄球菌(HKSA)诱导的人单核细胞株THP-1凋亡特点,以及表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-1β蛋白分泌规律.方法 体外培养THP-1单核细胞,分别以5.5 mmol/L葡萄糖(LG)和25.0 mmol/L葡萄糖(HG)培养12h～8d.将HG和LG培养6d的单核细胞加入HKSA.分别于HKSA加入前和加入后2～48 h提取单核细胞,检测细胞凋亡、IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达.细胞凋亡采用Annexin V与PI双染法,流式细胞技术检测;IL-1β蛋白分泌采用ELISA法检测;提取细胞总RNA,反转录生成cDNA后采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)法,检测iNOS和IL-1β mRNA表达情况.结果 (1)高糖刺激THP-1单核细胞12 ～48 h后IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达较刺激前显著增加(P＜0.05),iNOS和IL-1β mRNA表达在24 h达最高值,IL-1β蛋白分泌48 h达高峰.细胞凋亡在高糖刺激48 h～4 d较刺激前显著增加(P＜0.05).(2)两组细胞加入HKSA后6～48 h表达iNOS和L-1β显著高于刺激前(P＜0.01),24h达高峰,48 h表达下降;IL-1β蛋白分泌在48 h达最高值.两组细胞凋亡率在加入HKSA后12h、24h、48 h逐渐增加(P＜0.01).单核细胞加入HKSA前和加入HKSA后12h,高糖组与低糖组比较,高糖组IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达均低于低糖组,凋亡率高于低糖组(P＜0.05).结论 高糖和HKSA对单核细胞分泌IL-1β蛋白、表达iNOS和IL-1β mRNA的影响与刺激时间有关;单核细胞处于持续高糖状态时,高糖可以增加细胞凋亡率,降低IL-1β蛋白分泌、iNOS和IL-1β表达.