新型二维高效液相色谱测定人血清伏立康唑浓度方法的建立与应用

目的建立全自动二维高效色谱法(2D-HPLC)测定血清中伏立康唑的浓度并应用于临床。方法第一维色谱柱为ASTON SC2柱(4.6mm×25mm,5μm),流动相为20mmol/L磷酸铵∶乙腈∶甲醇=3∶1∶1(V∶V∶V,磷酸调pH=5.4),流速1.2mL/min;第二维色谱柱为SHIMADZU C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为10mmol/L醋酸铵(三乙胺调pH7.0)∶10mmol/L醋酸铵(三氟乙酸调pH3.0)∶甲醇∶乙腈=30∶10∶10∶50(V∶V∶V∶V),流速1.0mL/min;中间柱为ASTON SH柱(3mm×10mm,5μm),辅助流动相为纯水。样品由一维色谱柱萃取,经中间柱捕获并转移至第二维色谱柱分析,检测波长256nm,柱温40℃,进样量200μL。结果伏立康唑在0.28～22.56μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,最低定量限为0.28μg/mL,方法回收率为99.01%～104.62%,提取回收率为85.81%～89.82%,日内、日间精密度RSD均小于9%。结论该方法操作简单、准确、灵敏,符合血清样品的测定要求,适用于伏立康唑临床血药浓度测定。     

HPLC法同时测定小鼠血浆中3种银杏酸单体的浓度

目的: 建立小鼠血浆中银杏酸（ginkgolic acid,GA) 3种主要单体GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法: 以制备的GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1单体为标准品,采用外标法建立标准曲线。采用乙腈预处理样品以沉淀其中蛋白质。采用SinoChrom ODS AP C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-3%醋酸(92∶8)为流动相,流速1.0 mL· min^-1,检测波长为310 nm。结果： GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1标准曲线分别在0.135～20μg·mL^-1,0.129 ～20μg·mL^-1和0.211～22μg·mL^-1范围内线性关系良好（r均＞0.999 0）;回收率均＞70.2% (n=5),测定准确度为95.2%~101.5%;日内相对标准偏差≤6.2%,日间相对标准偏差≤9.5%。结论：成功建立测定GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1单体的HPLC方法,其灵敏度高,重现性、精密度和准确性好。     

反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统分析维生素D3软胶囊(油性基质)

 目的   开发维生素D3软胶囊(油性基质)在反相高效液相色谱(reverse phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)系统中的含量测定和杂质分析方法。方法   RP-HPLC系统的色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长265 nm,柱温25 ℃,流速1 mL/min。以乙腈混合不同比例的甲醇、水、乙醇为流动相,探究这4种流动相组分对维生素D3及其3种同分异构体在C18柱上保留行为的影响。根据保留行为研究选择合适的流动相进行含量测定和杂质分析。结果   以纯乙腈为流动相时,含量测定方法回收率仅为80.55%~84.37%;而以V(乙腈)∶V(水)=90∶10为流动相时回收率显著改善(98.07%~103.23%,RSD<1.69%),同时可改善峰形,适用于含量分析。该方法呈现良好的线性［(0.52~5.2)×10-4 μmol/L,R2>0.999］和精密度(RSD<2.32%)。以V(乙腈)∶V(水)=95∶5为流动相能够排除空白油性基质峰对杂质峰的干扰,可用于杂质分析。结论   本方法能在RP-HPLC系统中简单而准确地进行维生素D3软胶囊(油性基质)的含量测定和杂质分析。     

高效液相 (HPLC) 荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度

 目的  建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)。方法  血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2-羧乙基)膦盐酸盐［tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride,TCEP］还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐(7-fluorobenzofurazan-4-sulfonic acid ammonium salt,SBD-F)进行衍生化反应,荧光检测器检测。色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温29 ℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5∶96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱。激发波长385 nm,发射波长515 nm。采用外标法定量。结果  Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50~800 μmol/L、4~64 μmol/L、10~160 μmol/L和2.5~40 μmol/L。Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L。各组分日内、日间精密度RSD均<12 %。平均回收率为95.01 %~116.17 %。结论  该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测。     

高效液相法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量

目的:用HPLC法测定血美安胶囊中丹皮酚和芍药甙的含量。方法:用75%乙醇提取样品,所得样品溶液同时用于丹皮酚和芍药甙的含量测定。色谱条件:C18色谱柱;丹皮酚测定所用流动相为水∶乙腈∶冰乙酸(60∶40∶3),检测波长为274nm;芍药甙测定所用流动相为甲醇∶水(30∶70),检测波长为230nm。结果:丹皮酚和芍药甙的线性范围分别为0.0344～0.1720g/L和0.0792～0.3960g/L,平均回收率分别为99.9%和99.6%。结论:本方法简便、快捷、重现性好,可用于血美安胶囊中这2种成分的含量测定。     

高效液相色谱法测定隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中两性霉素B和伊曲康唑含量

 目的 建立人脑脊液(CSF)中两性霉素B(AmB)和伊曲康唑(ITZ)含量测定的高效液相色谱方法(HPLC)，并用于隐球菌性脑膜炎患者脑脊液样品的测定。 方法 脑脊液样品经固相萃取(SPE)后直接进样。AmB测定采用Gemini 5w C18柱，流动相为5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(醋酸调pH至4.5)/乙腈(62/38，V/V)，流速0.3mL/min，DAD检测器：检测波长410nm。ITZ测定采用YMC C18柱，流动相为0.2%三氟乙酸/乙腈(45/55,V/V)，流速1.1mL/min，荧光检测器：激发波长260nm，发射波长365nm。 结果 AmB和ITZ的线性范围均为5ng/mL~100ng/mL，线性相关系数大于0.999，最低定量限为5ng/mL，低、中、高浓度质控样品在日内、日间精密度均小于7.6%。 结论 该方法灵敏、快速、简便，适用于隐球菌性脑膜炎患者治疗药物监测。     

高效液相色谱法测定人血浆中阿昔莫司的浓度及其药代动力学

目的 建立人血浆阿昔莫司的定量分析方法,为药代动力学研究提供技术手段。方法 采用高效液相色谱法,以Inertsil/ WondaSilTM C18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱为固定相;以乙腈∶2mmol/L四丁基溴化铵（磷酸调pH值至3）=13∶87（V/V）为流动相,咖啡因为内标。流速1.0mL/min;检测波长263nm。结果 阿昔莫司在0.05~6μg/mL浓度范围内线性关系良好,标准曲线方程为y=0.74190342x-0.0025535（r2=0.99926),最低定量限为0.05μg/mL,绝对回收率、精密度、准确度与稳定性均符合生物样本测定要求。结论 本研究所建立方法专属性强,灵敏度高,精密度和准确度好,可用于阿昔莫司药代动力学研究。     

HPLC-UV检测法及其在比格犬血浆非布司他浓度检测中的应用

目的建立测定比格犬血浆非布司他浓度的高效液相色谱紫外(HPLC-UV)检测法。方法采用冰醋酸和乙腈对500μL比格犬血浆进行蛋白沉淀,离心后取上清液20μL进样分析。采用反相C18液相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)进行检测;流动相为甲醇-水(90∶10,V/V),流速1.0 mL/min,紫外检测波长为314nm。结果非布司他色谱峰的保留时间为4.50min,标准曲线在0.27～16.32μg/mL浓度范围内线性关系良好,平均相关系数(r)=0.999 5±0.002 0。日内和日间的精密度均不超过7.0%;准确度分别为96.7%～104.2%、97.7%～105.4%。结论 HPLC-UV检测法简单、准确、可靠,可用于非布司他药代动力学研究。     

RP-HPLC测定人体血浆中氯唑沙宗

本文建立了快速简便测定人体血浆中氯唑沙宗的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法。采用YWG-C_(18)H_(37)柱,甲醇-水(60:40,V/V)为流动相,内标为非那西丁,UV检测波长282nm。血浆样品用乙酸乙酯提取,色谱蜂分离完全,方法线性良好,r=0.9999,提取回收率为94.44±:2.02％(n=20),方法回收率为103.18=2.68(n=20)。天内精密度以CV表示为1.94％～3.38％,天间精密度为2.91％～4.19％。本法用于测定人体血浆中氯唑沙宗的浓度。     

高效液相色谱法测定人血浆中甲苯咪唑含量

目的建立固相萃取、反相高效液相色谱测定人血浆中甲苯咪唑的方法。方法血浆加入阿苯哒唑为内标,以0.5mol/L的硼砂NaOH缓冲液3ml碱化后经乙醚提取,固相萃取,进行HPLC测定,采用HypersilBDSC18(4.6mm×200mm5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1mmol/L(NH4)2SO4溶液(60∶40,V/V);流速1.0ml/min;检测波长310nm。结果甲苯咪唑血药浓度为0.05～1.6μg/ml,峰面积与血药浓度呈线性关系,方法平均回收率为97.21%。平均RSD为3.56%;最低检测限为0.02μg/ml。结论该方法符合生物样品分析要求,为甲苯咪唑的体内含量测定提供了一种简便、准确、灵敏度高的分析方法。     

HPLC法测定香青百草油中丁香酚的含量

目的:建立一种测定香青百草油中丁香酚含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(65∶35),流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为280 nm.结果:丁香酚在0.034～0.549 μg范围呈良好线性关系,平均回收率为9...     

兰索拉唑肠溶胶囊释放度的HPLC测定

 目的 建立测定兰索拉唑肠溶胶囊释放度的HPLC方法。方法 采用Xtimate C18柱(4.6mm×150 mm, 5 μm)色谱柱,流动相为水∶乙腈∶三乙胺(60∶40∶1),用磷酸调节pH至7.0,流速1.0 mL/min,检测波长为285 nm,柱温30℃。结果 兰索拉唑线性范围为1~25 μg/mL(r=0.999 99),平均回收率为101.5%、100.8%、101.3%(RSD为0.39%~1.54%),日内精密度(RSD)为0.68%~1.78%,日间精密度(RSD)为0.55%~1.87%,测得释放度均>75%。结论 本方法作为兰索拉唑肠溶胶囊的体外溶出度测定简便、灵敏、准确、重现性好,可作为兰索拉唑肠溶胶囊的质量控制方法。     

HPLC法测定金钱利胆丸中丹酚酸B的含量

目的:建立金钱利胆丸中丹酚酸B含量的测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,Kromasil ODS C18分析柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59),检测波长286 nm,流速1.0 mL/min,柱温25℃。结果:丹酚酸B在0.126 8μg/mL～2.536μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 4),平均回收率为96.5%,RSD=1%(n=5)。结论:该法操作简便、准确,适用于金钱利胆丸的质量控制。     

HPLC法测定原料药中埃索美拉唑的含量

 目的 建立用于测定原料药中埃索美拉唑含量的HPLC法。方法 采用HPLC法测定,色谱柱:Waters XTerra- MS C8反相柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),流动相:V(乙腈):V (20 mmol/L醋酸铵缓冲液,pH 7.6)=28:72,检测波长280 nm,柱温25 ℃,流速1 mL/min。 结果 埃索美拉唑浓度在0.01~0.07 mg/mL范围内与峰面积之间呈现良好的线性关系(r=0.9996),方法回收率为98.49%~101.72%,RSD为0.15%~0.58%。结论 本方法简便快速,能准确检测原料药中埃索美拉唑的含量,可作为原料药质量控制的分析方法。     

高效液相色谱法同时测定双五胶囊中4种有效成分的含量

目的建立同时测定双五胶囊中紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法HPLC法,采用Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为A:甲醇-乙腈(1∶1),B:水,梯度洗脱,0～5min,35%～60%A;5～10min,60%～70%A;10～50min,70%～90%A;50～90min,90%A。流速为1ml/min,柱温:35℃,检测波长220nm。结果紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素浓度分别在1.28～20.40μg/ml(r=0.9997)、6.30～100.80μg/ml(r=0.9996)、1.20～19.20μg/ml(r=0.9998)和3.75～60.00μg/ml(r=0.9996)范围内呈良好的线性关系。4种成分精密度实验RSD<1%。24h内稳定性RSD<1.5%。紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的平均加样回收率分别为99.47%、102.50%、99.21%、101.86%。结论所建立的方法具有快速、简便、准确等优点,可用于双五胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法测定芎菊上清丸中绿原酸的含量

目的建立以RP-HPLC法测定芎菊上清丸中绿原酸含量的方法。方法色谱柱为SHIM-PACKVP-ODS(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(12∶88),流速为1.0ml/min,检测波长为327nm,柱温为30℃。结果绿原酸进样量在0.0090～0.1125μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9993);平均回收率为99.26%,RSD=0.88%(n=6)。结论本方法简便、快速、准确,可用于芎菊上清丸的质量控制。     

高效液相色谱法监测环孢素A的全血浓度

目的:建立高效液相色谱法测定环孢素A全血浓度的方法。方法:采用SpherisorbC8(150mm×4.6mm,5μm)分析柱,流动相为甲醇∶水(75∶25,V/V),检测波长214nm,流速1ml/min,柱温为60℃。结果:环孢素A浓度在50ng/ml～2000ng/ml范围内线性良好(r=0.9998),平均方法回收率为99.7%,日内及日间精密度<6%(n=5)。结论:本方法简便、准确、可靠,能较好的满足临床血药浓度监测的需要。     

蒙药复方森登-4特征图谱及其中6个指标性成分的含量测定

目的建立蒙药复方森登-4特征图谱及同时测定其中没食子酸、京尼平-1-β-D-龙胆二糖苷、栀子苷、(2R,3R)-双氢杨梅素、芦丁、杨梅素6个成分含量的方法。方法采用高效液相色谱‘HPLC’法。蒙药复方森登-4特征图谱色谱系统:用Extend-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.6%磷酸水溶液(B)为流动相,流速为1 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。蒙药复方森登-4中6个成分含量测定色谱系统:用Extend-C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.6%磷酸水溶液(B)为流动相,流速为0.5 m L/min,检测波长为254 nm和292 nm,柱温为27℃,进样量为10μL。结果蒙药复方森登-4特征图谱共检出90多个峰,与标准品HPLC图谱比对,共指认出10个峰,其中6个峰可以含量测定。经后续HPLC含量测定,6个成分的含量均在线性范围内,并与其各自峰面积积分值呈良好的线性关系(均r=0.999 9);平均回收率在98.29%~103.75%之间,RSD为1.44%~2.97%。结论本法准确、简便、重复性好,可作为蒙药复方森登-4的质量控制方法。     

高效液相色谱法测定常见药物中的亚硝酸盐含量

目的：探讨高效液相色谱法测定三种抗感染药物中的亚硝酸盐含量。方法：采用高效液相色谱法,通过优化色谱条件[流动相V（双蒸水）：V（乙腈）=60：40;检测波长：激发波长375nm,发射波长415nm;流速：0．8ml／min;进样量：lOμl;进样方式：自动式进样;柱温：50℃进行检测。结果：阿莫西林、头孢曲松钠、头孢唑肟钠三种样品的亚硝酸盐回收率在85．6％-95．5％之间,方法平均相对标准偏差在1．4％-2．6％之间,在0．0005-0．299μg／ml范围内线性关系良好,r=O．9999。结果：高效液相色谱法测定药物亚硝酸盐含量避免了传统方法中色素等有机物干扰严重的问题,方法简单,环境影响因素少,抗干扰能力强,值得推广应用。