藤梨根提取物诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

软枣猕猴桃又称软枣、洋枣，始载于《开宝本草》，其根茎称为藤梨根，含熊果酸、剂墩果酸、琥珀酸、胡萝卜甙等成分，并富含Fe、Cu、Mn、Se等元素，该药具有清热解毒作用，通过近些年的一些文献报道证实，藤梨根及其制剂真有较好的抗癌作用，故而我们进行了实验研究以观察藤梨根提取物对胃癌细胞凋亡产生的影响。     

藤梨根含药血清对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 研究藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将9只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为藤梨根含药血清高、低剂量组和对照组,每组3只,含药血清组分别以12.5、6.25 g/(kg·d)的藤梨根灌胃,对照组予生理盐水灌胃,3 d后取腹主动脉血制备含药血清及对照组血清,3 组血清分别干预体外培养的人肺癌A549细胞24 h,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂测定藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用,应用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹法检测藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)、B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响.结果 CCK-8法检测结果示,藤梨根含药血清对人肺癌A549 细胞有增殖抑制作用.与对照组比较,含药血清组增殖抑制率明显增高(P<0.01).藤梨根含药血清对A549细胞有诱导细胞凋亡的作用,与对照组比较,低、高剂量组凋亡率增高(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,藤梨根含药血清作用人肺癌A549细胞24 h后,肺癌细胞EGFR和Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 藤梨根含药血清可抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调EGFR和Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达相关.     

藤梨根提取液抗肺癌作用的实验研究

目的:观察藤梨根提取液对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用,为其治疗肺癌提供实验依据。方法:采用MTT检测法、集落形成试验观察药物对细胞的作用,用流式细胞术检测细胞凋亡,同时分析药物对细胞周期的影响。采用裸鼠移植瘤模型进行体内实验,并绘制移植瘤生长曲线,计算抑制率。结果:各浓度的藤梨根提取液对肺腺癌A549细胞有较强的抑制效应,呈现出明显的时相性和量－效依赖性,流式细胞仪检测结果显示,藤梨根提取液作用后,G0/G1期细胞数增加,细胞出现凋亡,并随药物浓度增大,作用增强。移植瘤体内试验显示,藤梨根提取液高剂量组（按1?000?mg/kg）和低剂量组（按500?mg/kg）的抑瘤率分别为71.40%和40.35％,治疗组移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组（P＜0.01）。结论:藤梨根提取液在体内外对人肺腺癌A549细胞生长均有抑制作用,体外作用与G0/G1期阻滞有关,并有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用。     

茶多酚对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的：通过观察茶多酚在体内对人鼻咽癌细胞的抑制作用,探讨其可能的抗癌机制。方法以人鼻咽癌细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型,以茶多酚腹腔注射干预,在观察抑瘤率基础上,以实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测裸鼠移植瘤VEGF在mRNA及蛋白水平上的表达变化。结果茶多酚具有显著抑制鼻咽癌细胞 HONE1移植瘤生长的作用,与模型对照组相比,低、高剂量茶多酚组体内抑瘤率分别为18．82％、47．66％,呈浓度相关性（P＜0．05）;荧光定量 PCR及Western blot结果示,茶多酚可下调VEGF的mRNA和蛋白表达水平,且呈浓度依赖性,其中高剂量组变化明显,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论茶多酚对人鼻咽癌HONE1细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,机制可能与调节VEGF表达,从而抑制肿瘤血管生成等作用有关。     

不同剂量环磷酰胺对裸鼠A549细胞移植瘤凋亡的影响

目的 探讨小剂量环磷酰胺对裸鼠肺腺癌移植瘤凋亡的影响.方法 建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,不同剂量环磷酰胺干预,测定抑瘤效果和副作用,免疫组化检测NF-κB P65表达,电镜、TUNEL检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 小剂量组经环磷酰胺处理后肿瘤体积与大剂量组和对照组相比明显减小;电镜下出现典型凋亡小体,凋亡指数明显增高(P＜0.05)而P65蛋白表达比对照组显著减少(P＜0.05).结论 小剂量环磷酰胺能抑制肺癌移植瘤增长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能与下调NF-κB信号传导途径有关.     

藤梨根乙酸乙酯提取物对人食管癌细胞生长的抑制作用

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对培养的人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,探讨藤梨根对人食管癌细胞的作用机制.方法 MTT比色法检测藤梨根乙酸乙酯提取物在不同浓度（1 μg/ml,10 μg/ml,100 μg/ml）及不同时间（2 h,48h,72 h）对Eca-109细胞生长抑制作用,TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应,免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达.结果 ①藤梨根乙酸乙酯提取物对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达到77.5%.②提取物对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组,未见有明显凋亡现象.③提取物对瘤细胞作用24 h,48 h,72 h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强（P＜0.01）;同时伴有Bcl-2表达的减弱,在72 h后最明显,差异有显著意义（P＜0.01）.结论 藤梨根乙酸乙酯提取物能有效抑制人食管癌Eca-109细胞生长.     

藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的研究藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法采用不同浓度的藤梨根提取物作用于人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学方法检测Bcl-2基因表达。结果藤梨根作用于SGC-7901,在(8～32)mg/mL时促进该细胞呈不同程度的凋亡;藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达阳性灰度值分别为103.41±1.01,104.05±1.239,0.52±1.09。结论藤梨根提取物对SGC-7901有明显促凋亡作用;藤梨根提取物抑制SGC-7901 Bcl-2蛋白水平的表达有可能是促进SGC-7901凋亡的作用机制。     

蛞蝓提取物抑制A549细胞及其小鼠移植瘤的生长

目的观察蛞蝓提取物（LE）对体外培养人肺癌（A549）细胞及其小鼠移植瘤生长的影响。方法运用平皿集落形成法,检测LE对A549细胞锚定依赖性生长的影响;通过光镜观察LE对小鼠移植瘤的组织形态改变;小鼠移植瘤模型治疗实验评估LE在体治疗肺癌的有效性。结果LE可抑制体外培养A549细胞锚定依赖性生长,呈剂量依赖性。LE腹腔注射给药能导致小鼠移植瘤组织的局灶性坏死;50mg／kg,100mg／kgLE腹腔注射给药具有抑制小鼠移植瘤生长作用。结论蛞蝓提取物对人肺癌A549细胞有生长抑制作用。     

持续小剂量化疗对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤VEGF-C及其受体Flt-4表达的影响

目的探讨持续小剂量(LDM)化疗对肺腺癌A549细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)/fms-样酪氨酸激酶-4(Flt-4)轴的影响及其机制。方法将人肺腺癌A549细胞接种于18只裸鼠皮下,建立荷瘤动物模型,以随机数字表法将其分为最大耐受剂量(MTD)组(CTX 100mg.kg-1腹腔注射,隔日1次,连续3次;n=6)、LDM组(CTX 20mg.kg-1.d-1腹腔注射,n=6)和对照组(0.1mL生理盐水腹腔注射,1次/d;n=6)。治疗21d后脱颈处死裸鼠,取皮下肿瘤组织,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肿瘤组织中VEGF-C、Flt-4的蛋白及mRNA表达。结果 LDM组裸鼠肿瘤组织VEGF-C、Flt-4蛋白及mRNA的表达水平均显著低于MTD组和对照组(P<0.05)。结论 LDM化疗可能通过降低肿瘤组织VEGF-C、Flt-4的表达而减少肺腺癌A549荷瘤裸鼠肿瘤的淋巴转移。     

熊果酸体内抗肺癌作用机制探讨

目的：探讨熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法:采用人肺腺癌A549细胞株进行裸鼠移植瘤实验。通过移植瘤生长曲线、终末瘤重计算抑制率观察熊果酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用,采用免疫组化法检测VEGF蛋白表达、微血管密度,TUNEL检测凋亡指数,探讨其作用机制。结果:实验组用药后移植瘤生长缓慢,实验结束时,实验组瘤重及瘤体积明显低于对照组（P＜0.05）,抑瘤率为51.35％。实验组移植瘤组织微血管密度及VEGF蛋白表达明显低于对照组（P均＜0.01）,实验组癌细胞凋亡指数高于对照组(P＜0.01)。结论:熊果酸对裸鼠肺腺癌移植瘤生长有抑制作用,其机制可能与降低移植瘤促血管生成因子VEGF的表达、抑制新生血管的形成和促进肿瘤细胞凋亡有关。     

巢式RT-PCR技术检测肺癌76例微量癌细胞转移分析

目的 :建立检测肺癌患者外周血及淋巴结微转移癌细胞的敏感的分子检测方法 ,并探讨其临床应用的意义。方法 :采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术特异引物扩增 CK19- m RNA,以检测肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19- m RNA的表达情况。分析CK19- m RNA扩增结果与患者临床指标的关系。结果 :76例肺癌患者外周血标本中 39例CK19- m RNA阳性 ,阳性率为 5 1 .3% ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率为 3.7% ,1 5例健康对照者均为阴性。全部患者 1 5 7枚淋巴结中 CK19- m RNA检测出阳性率为 38.9%( 61 / 1 5 7) ,常规病理方法检出阳性率为 1 4.6% ( 2 3/ 1 5 7) ,两种方法比较 ,有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,且 HE染色阴性的 1 34枚淋巴结中 ,经 RT- PCR法证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% ( 38/ 1 34) ,两组比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :巢式 RT- PCR是一种特异性和敏感性均较高的癌细胞微量转移检测方法 ;可能有助于肺癌细胞微转移的早期诊断。     

Rel A在喉癌Hep-2细胞系中的表达和意义

目的:研究Rel A基因在人喉癌Hep-2细胞中的表达及意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫细胞组织化学技术分别检测Rel A基因的mRNA和蛋白在人喉癌细胞系Hep-2和人正常永生化表皮细胞系Hacat中的表达。结果:Rel A基因的mRNA在Hep-2细胞中高表达,在Hacat细胞中低表达(P<0.05)。Rel A基因的蛋白在Hep-2细胞中高表达且主要表达于细胞浆,在Hacat细胞中低表达(P<0.05)。结论:Rel A基因的高表达可能与喉癌发生、发展有关。     

c-FLIP反义寡核苷酸对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究

目的研究细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白反义寡核苷酸（c-FLIP-ASODN）对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤的作用。方法采用食管癌EC109细胞株建立裸鼠移植瘤模型,将其分为空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸（SODN）组、ASODN组。通过移植瘤生长曲线、终末瘤重,免疫组化法检测c-FLIP蛋白表达、增殖指数,RT-PCR检测移植瘤c-FLIP-mRNA变化,TUNEL检测凋亡指数,观察c-FLIP-ASODN对食管癌裸鼠移植瘤的作用。结果ASODN组治疗后移植瘤生长缓慢,实验结束时ASODN组瘤重及瘤体积明显低于其它各组,抑瘤率为68.19％。ASODN组移植瘤组织c-FLIP-mRNA及蛋白、Ki-67抗原表达较其它各组明显减少,而移植瘤细胞凋亡指数明显高于其它各组(P均<0.01)。其余三组上述指标间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论c-FLIP -ASODN对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与降低的c-FLIP-mRNA和蛋白表达、抑制移植瘤细胞的增殖活性及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

MicroRNA-16抑制人卵巢癌在裸鼠皮下移植瘤生长的研究

目的:探讨microRNA-16(miRNA-16)转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3在裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法:将成熟miRNA-16双链模拟物及其阴性对照序列转染人卵巢癌SKOV-3细胞株,然后分别接种于裸鼠皮下,观察两组肿瘤出现时间及肿瘤体积变化,接种20d后取出肿瘤组织称重,计算抑瘤率。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肿瘤组织中Bcl-2mRNA表达,并进行免疫组化检测两组肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达。结果:miRNA-16转染组肿瘤生长相对延缓,种瘤20d后miRNA-16转染组移植瘤重量明显小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),抑瘤率达38.46%;PCR结果显示miRNA-16转染组Bcl-2 mRNA表达量与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);移植瘤组织免疫组化分析两组Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-16对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长有抑制作用,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

cyclinD1在卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤组织中的表达及意义。方法构建人上皮性卵巢癌3AO裸鼠皮下移植瘤模型;设阴性对照组及早、中、晚期3个肿瘤组,应用免疫组化方法及流式细胞术(FCM)检测正常组织及移植瘤卵巢癌组织中cyclinD1的表达。结果 3AO卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型平均成瘤率91.7%。正常组织cyclinD1表达阴性或弱阳性,而卵巢癌组织中cyclinD1呈过表达(54.63%)。早、中、晚期卵巢癌组织中cyclinD1阳性表达率分别是35.00%、55.60%和73.30%,肿瘤细胞凋亡率分别是7.97%、3.45%及1.83%,Mean值分别是23.15、37.31、63.28。结论 cyclinD1在卵巢癌组织中呈过表达,且其表达与移植瘤生长增殖呈正相关,cyclinD1的表达与卵巢癌发生发展关系密切。     

多沙唑嗪对前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3在裸鼠体内生长的影响及其作用机制.方法:建立前列腺癌细胞系PC-3的裸鼠体内移植瘤模型,将30只荷瘤裸鼠随机分为5组[A组(对照组),B组(多沙唑嗪3 mg/kg),C组(多沙唑嗪10 mg/kg),D组(多沙唑嗪30 mg/kg),E组(多沙唑嗪100mg/kg)].接种肿瘤细胞1周后每天1次灌胃给药,每周测量肿瘤体积2次,给药2周后处死裸鼠,取肿瘤组织做免疫组织化学Ki67及细胞凋亡DNA原位标记法(TUNEL法)检测,并用免疫印迹法研究蛋白Smad-4及IκBα在各组肿瘤组织中的表达情况.结果:多沙唑嗪给药组肿瘤体积较对照组显著缩小,肿瘤的重量较对照组亦显著减轻,而不同剂量的多沙唑嗪给药组间肿瘤大小差异无统计学意义.免疫组织化学结果显示前列腺癌细胞Ki67的阳性率在A至E组依次为36.5%±8.5%,37.7%±11.3%,40.1%±12.7%,37.2%±12.3%,39.3%±13.1%,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);而前列腺癌细胞的TUNEL阳性率在A至E组依次为9.5%±3.5%,24.7%±8.3%,25.7%±9.7%,28.2%±12.1%,27.5%±11.3%,各用药组明显高于对照组(P＜0.01);免疫印迹结果表明用药组蛋白Smad-4及IκBα的表达显著高于对照组.结论:α1肾上腺素能受体拮抗剂多沙唑嗪对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3裸鼠体内移植瘤的生长具有明显抑制作用,其作用机制可能是药物诱导了前列腺癌细胞凋亡,对细胞的增殖并没有明显的影响;而TGF-β1信号转导通路的激活可能是多沙唑嗪引起前列腺癌细胞凋亡的重要机制.     

MicroRNAs在唐氏综合征模型小鼠海马中的异常表达

目的：寻找唐氏综合征模型鼠Ts65Dn和对照二倍体组小鼠海马组织中差异表达的microRNAs。方法：从小鼠的海马组织中提取小分子RNA,采用RNA加尾和引物延伸RT- PCR法检测microRNAs。通过geNorm软件和Normfinder软件分析选择最佳的内参照基因,将每种microRNAs按其引物Tm值排成阵列,用梯度实时PCR仪在不同的退火温度扩增,并计算每种相对于microRNAs内参照基因的表达量。结果： geNorm和Normfinder两种方法均选定miR-27a为最稳定的内参照基因,共检测了52种microRNAs,其中miR-33 和miR-19a在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著下调,miR-130在Ts65Dn小鼠海马组织中表达显著上调,小鼠16号染色体三体区段包含的miR-802在Ts65Dn小鼠和对照二倍体小鼠海马组织中表达量均低,差异没有统计学意义。结论：MicroRNAs在Ts65Dn小鼠海马组织中的异常表达可能与唐氏综合征脑发育不良有关。     

5-氨基酮戊酸-光动力学疗法治疗荷瘤裸鼠宫颈癌的实验研究

目的 分析5-氨基酮戊酸-光动力学疗法(ALA-PDT)对宫颈癌裸鼠移植瘤的体内疗效,对不同给药途径的光动力学治疗(PDT)效果进行比较,以寻找光毒反应最小的给药方式.探讨ALA-PDT诱导宫颈癌细胞凋亡的作用途径.方法 选择人宫颈癌Me180细胞系建立裸鼠宫颈癌移植瘤模型,通过人宫颈癌裸鼠移植瘤体内抑瘤实验、常规染色、免疫组化法检测ALA-PDT对宫颈癌肿瘤组织凋亡抑制蛋白生存素(Survivin)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白表达的影响等方法,对局部给药和尾静脉给药两种给药方法 进行比较研究.相对实时荧光定量法检测ALA-PDT对宫颈癌肿瘤组织凋亡抑制基因Survivin和Bcl-2、促凋亡基因P53、Bax、Bad mRNA表达的影响.结果 局部给药PDT组的肿瘤体积[(0.09 ±0.02)cm3]与对照组[(0.67±0.06)cm3]相比明显减小,差异有统计学意义(P＜0.01),其中局部给药PDT组在7～14 d时体积最小,且体积减小最明显.HE常规染色可观察到PDT组肿瘤受激光照射的皮下细胞区域坏死明显.免疫组化检测结果 表明,ALA-PDT可显著地抑制宫颈移植瘤组织的Survivin和VEGF的蛋白表达.移植瘤组织mRNA的相对实时荧光定量结果 证明PDT治疗后凋亡抑制基因Survivin和Bcl-2的mRNA的表达明显降低(均P＜0.01),而促凋亡基因P53、Bax、Bad mRNA表达水平稍有增高,但差异无统计学意义.结论 ALA-PDT对宫颈癌治疗是有效的.临床用光动力治疗宫颈癌或癌前病变患者应尽量使用局部给药方式,以减少PDT光毒作用的危害和不便.