瘦素对体外培养子宫内膜异位细胞生长的影响

目的:探讨瘦素对体外培养的子宫内膜异位细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞、在位内膜细胞及正常内膜细胞,应用MTT比色法(四甲基偶氮唑蓝比色法)检测瘦素对三种细胞增殖情况的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:除了异位内膜组细胞在1ng/mL浓度瘦素下与对照组相(0ng/mL)比无明显差异外,1、10、100ng/mL浓度的瘦素作用于三种细胞与对照组比较均有明显促进细胞增殖的作用(P<0.05)。三组细胞在不同浓度的瘦素(1、10、100ng/mL)作用下与对照组比较均明显的抑制细胞凋亡,并随剂量增加凋亡率呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论:瘦素能促进子宫内膜异位、在位细胞及正常内膜细胞的增殖并抑制其凋亡。     

JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖中的作用.方法 免疫荧光染色法检测瘦素受体(OB-Rb)在Ishikawa细胞的表达.Ishikawa细胞分别用不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150 ng/ml)作用不同的时间(6、12、24 h)后,MTT法检测各组细胞的增殖情况;另应用不同浓度(0、25、50、100 μmol/L)JAK2激酶特异性抑制剂AG490阻断STAT3磷酸化后,采用MTT法检测瘦素对Ishikawa细胞增殖的影响;瘦素(100 ng/ml)作用Ishikawa细胞不同时间(0、20、40、60 min)后,采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞STAT3磷酸化水平.结果 免疫荧光染色证实Ishikawa细胞膜存在OB-Rb的表达;瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖,在0 ～100 ng/ml范围内呈剂量依赖性,于150 ng/ml瘦素作用24 h时细胞增殖效应最大;AG490可明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的促增殖作用,呈剂量依赖性;Ishikawa细胞经100 ng/ml瘦素处理后,随时间的延长,STAT3活化程度逐渐增高,至少可持续60 min.结论 瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路促进子宫内膜癌细胞的增殖.     

MAPKs通路在Leptin促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨MAPKs信号转导通路在瘦素(Leptin)促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制。方法:用MTT比色法观察不同浓度瘦素促MCF-7细胞的增殖效应,以及用JNK、ERK特异性抑制剂(SP600125,PD98059)阻断MAPKs信号通路对瘦素促MCF-7细胞增殖效应的影响;Westem blot检测瘦素干预不同时间对p-JNK、JNK、p-ERK、ERK蛋白表达水平的影响;RT-PCR检测在瘦素作用下以及MAPKs信号通路阻断情况下对MCF-7细胞表达瘦素受体(Ob-R)mRNA水平的影响。结果:50 ng/ml瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应最强,该浓度瘦素可使MAPKs信号通路中的靶蛋白发生磷酸化激活;50 ng/ml瘦素作用于MCF-7细胞30 s后p-ERK蛋白表达即显著增加,3 min后p-JNK蛋白表达亦显著增加;分别用SP600125和PD98059阻断JNK、ERK信号通路可显著抑制瘦素促MCF-7细胞的增殖效应.亦可抑制瘦素作用下MCF-7细胞Ob-R mRNA表达水平的增加。结论:瘦素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖效应可能与激活MAPKs信号通路有关,亦调控MCF-7细胞中瘦素受体的表达,在肿瘤细胞周围形成瘦素自分泌环,促进乳腺癌的发生发展。     

不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用

目的 研究不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞胰岛素受体(InsR)酪氨酸磷酸化水平的影响,探讨瘦素在胰岛素受体信号转导分子机制中的作用.方法 体外培养人工流产胚胎的绒毛滋养细胞,根据培养基中加入瘦素的浓度不同将实验分为空白对照组以及瘦素浓度分别为100、250、500 μg/L的实验组.每组分别培养24 h后,采用Western blot方法测定滋养细胞膜磷酸化胰岛素受体β亚基的含量.结果 滋养细胞细胞膜磷酸化胰岛素受体β亚基水平测定:浓度分别为100、250、500 μg/L的实验组胰岛素受体的磷酸化水平均显著低于对照组(P<0.05),并随着瘦素浓度的上升,绒毛滋养细胞细胞膜磷酸化胰岛素受体β亚基的含量进一步下降.空白对照组的磷酸化胰岛素受体蛋白水平为(1.216 2±0.032 2),当瘦素浓度分别为100、250 μg/L和500 μg/L时,磷酸化的胰岛素受体蛋白水平分别为(1.056 7±0.042 4)、(0.957 6±0.026 8)和(0.734 2±0.038 8).瘦素浓度和滋养细胞膜胰岛素受体β亚基磷酸化水平呈负相关(r=-0.403 2, P<0 05).结论 瘦素与胰岛素受体信号转导系统有相关性,抑制细胞膜胰岛素受体β亚基磷酸化可能是其影响胰岛素受体信号转导的机制之一.     

瘦素受体蛋白在人卵巢黄素化颗粒细胞的表达

目的　通过检测人卵巢卵泡液中瘦素 (leptin)的浓度及瘦素受体蛋白在人卵巢黄素化颗粒细胞的表达 ,探讨瘦素对人卵巢的作用。方法　体外受精胚胎移植 (IVF -ET)患者经阴道超声引导下取卵时留取卵泡液 ,采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法检测血清与人卵泡液中瘦素浓度并分离颗粒细胞体外培养 ,采用免疫细胞化学方法检测瘦素受体蛋白的表达。结果　人卵巢黄素化颗粒细胞检测到瘦素受体蛋白的表达 ,即荧光显微镜下观察到颗粒细胞发出黄绿色荧光 ;卵泡液中瘦素浓度平均为 ( 19 2 8± 4 2 2 )ng/ml,与血清中瘦素浓度 ( 2 0 0 2± 3 45 )ng/ml比较差异无显著性(P >0 0 5 )。结论　卵泡液中检测到瘦素的存在 ,并在人卵巢黄素化颗粒细胞上检测到瘦素受体蛋白的表达 ,提示卵巢为瘦素作用的靶器官 ,瘦素可能参与卵巢功能的调节。     

瘦素及其受体系统在子宫内膜的表达

目的　研究瘦素 (Leptin)及其受体 (Obgenereceptor ,Ob -R)在子宫内膜的表达 ,探讨Leptin对女性生殖的影响。方法　分别用免疫组织化学和原位杂交技术检测Leptin、具信号传导功能的Leptin长受体 (Ob -Rb)在子宫内膜 (39例 ,增殖期 2 4例 ,分泌期 15例 )的表达。结果　 (1)Leptin、Ob -RbmRNA及其蛋白在人的子宫内膜的腺体及间质均呈阳性表达。 (2 )Ob -Rb蛋白在分泌期子宫内膜的表达明显高于增殖期 ,差异有极显著性P <0 0 1)。Leptin蛋白在不同期子宫内膜的表达差异无显著性。 结论　瘦素和瘦素受体系统在孕卵着床和种植过程中可能发挥重要作用。     

瘦素受体在子宫肌瘤组织中表达的初步研究

目的　测定瘦素受体在子宫肌瘤组织中的表达 ,探讨瘦素及其受体与子宫肌瘤的相关性。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 4 3例全子宫切除手术子宫肌瘤组织及远离肌瘤的平滑肌组织中瘦素受体mRNA表达水平。同时采用放射免疫法 (RIA)检测子宫肌瘤病人及 4 0例正常对照组血清中瘦素水平。结果　子宫平滑肌及子宫肌瘤组织均存在瘦素受体mRNA表达 ,且表达水平无显著性差别 (P >0 .0 5 ) ,子宫肌瘤组 (增生期 )血清瘦素为 (1 1 .2± 3.8)ng/ml与对照组 (9.3± 4 .6 )ng/ml比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　子宫肌瘤组织与子宫平滑肌相同有瘦素受体表达 ,瘦素、瘦素受体与子宫肌瘤的发生可能无直接相关性     

瘦素对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖.迁移及侵袭的影响

目的 探讨不同浓度的瘦素对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖.迁移.侵袭能力的影响。方法 分别用0ng/ml(空白对照组).10ng/ml.50ng/ml.100ng/ml.125ng/ml,5组不同浓度的瘦素处理人甲状腺乳头状癌K1细胞,MTT实验检测不同浓度瘦素处理后细胞的增殖能力.划痕实验检测细胞迁移能力.Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 MTT实验检测结果显示,瘦素对K1细胞的增殖没有影响(P>0.05);不同浓度的瘦素处理K1细胞后24h后划痕实验迁移率分别为:40.201%.47.383%.59.950%.68.732%.79.306%;48h后划痕实验迁移率分别为:49.398%.74.192%.86.733%.87.795%.90.005%。随瘦素浓度增加与处理时间延长,划痕内面面积缩小,迁移率增加(P<0.05)。Transwell实验结果显示,穿出聚碳酸酯膜的细胞数依次增多(P<0.05)。结论 随处理时间的延长和瘦素浓度的增加,人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖能力不受影响,K1细胞迁移和侵袭能力均呈上升趋势。     

瘦素干扰他莫昔芬抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的机制

目的:检测乳腺癌细胞株MCF-7中瘦素受体(leptin receptor)的表达,并探讨瘦素(leptin,LEP)对他莫昔芬(tamox-ifen,TAM)抑制MCF-7细胞增殖的影响及机制。方法:用免疫荧光及Western blot法检测MCF-7细胞中瘦素受体的表达。以100 ng/ml的LEP及1 000 nmol/L的TAM同时处理MCF-7细胞,用MTT法检测LEP及TAM对细胞增殖的影响,并用West-ern blot及免疫荧光的方法检测作用前后雌激素受体(ERα)表达水平的变化。合成人雌激素反应元件(estrogen response ele-ment,ERE)的核心片段,并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点,构建成含有ERE报告基因的质粒pERE-LUC,用脂质体转染的方法将该质粒瞬转到MCF-7细胞中,用LEP及TAM处理后检测荧光素酶的表达,以探讨其对ERα转录的影响。结果:MCF-7细胞呈瘦素受体的阳性表达。100 ng/ml的LEP能够削弱TAM对MCF-7细胞的增殖抑制作用,并能够通过上调ERα的转录及表达水平来干扰TAM对细胞增殖的抑制作用。结论:LEP能够干扰...     

检测血清Leptin浓度变化对NASH的临床意义

目的探讨血清瘦素(Leptin)浓度变化对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的诊断及预后判断的临床应用价值。方法采用放射免疫法检测Leptin。结果NASH组瘦素浓度(13.320±5.323ng/ml)显著高于非酒精性脂肪性肝病(NASFL)组(8.0684±2.320ng/ml,p<0.05)和正常对照(NC)组(3.533±1.686ng/ml,p<0.05),NASFL组瘦素浓度显著高于NC组(p<0.05)。结论当Leptin≥10.35ng/ml时,提示非酒精性脂肪性肝炎的诊断,患者愈后不良。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

hCG对HTR8 SVneo滋养层细胞系MMP 2表达的影响与调控机制

目的探讨绒毛膜促性腺激素（hCG）对滋养层细胞系HTR8 SVneo侵袭活性的影响及其可能的调控机制。方法将培养的HTR8 SVneo细胞根据处理因素分为对照组、低浓度hCG（10?IU/mL）刺激组、高浓度hCG（100?IU/mL）刺激组,再将HTR8 SVneo细胞分为对照组、hCG（100?IU/mL）刺激组、DPCPX(A1R特异性阻断剂）+hCG（100IU/mL）联合刺激组。采用RT PCR检测各组HTR8 SVneo细胞基质金属蛋白酶 2（MMP 2）的表达变化,明胶酶谱检测各组HTR8 SVneo细胞MMP 2蛋白水平的分泌变化。 结果高浓度hCG（100?IU/mL）较低浓度hCG（10?IU/mL）刺激后的HTR8 SVneo细胞MMP 2的表达与分泌均上升（P<均0.05）;腺苷受体A1R的表达同时升高（P<0.05）。阻断A1R的作用通路后,MMP 2的表达与分泌均下降（P均<0.05）。 结论随着hCG浓度的升高, HTR8 SVneo细胞的侵袭性逐步增强,其调控机制为通过促进A1R的表达而使MMP 2的分泌升高。     

Effect of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion

The effects of leptin on cytotrophoblast proliferation and invasion activity were investigated. Immunohistochemistry was used to determine the placental expression of leptin in first-trimester pregnancy. By using RT-PCR and quantitative real-time PCR, the expression of leptin in cytotrophoblast and the effect of leptin on cytotrophoblast secretion were detected. The potential of cell proliferation, invasiveness and migration was assessed by MTT, Transwell invasion assay and migration assay respectively when the cytotrophoblast was cultured with different concentrations of leptin. The results showed that： （1） Leptin was distributed diffusely around cell membrane, in cytoplasma, and on nuclear mem- brane of cytotrophoblast; （2） Leptin mRNA was expressed in cytotrophoblast. Ten ng/mL leptin could promote the secretion of cytotrophoblast significantly （P〈0.01）; （3） After culture with different concentrations of leptin for 24 h or longer, the proliferation of cytotrophoblast was inhibited, while in 24 h leptin could promote cytotrophoblast invasion and migration. Leptin at a concentration of 500 ng/mL could promote cytotrophoblast invasiveness and migration significantly as compared with controls （P〈0.05）. It was suggested that leptin could inhibit cytotrophoblast proliferation, and promote cytotro- phoblast invasion and migration activity.     

Circulating leptin and osteoprotegerin levels affect insulin resistance in healthy premenopausal obese women

We investigated the relationship between circulating leptin and osteoprotegerin (OPG) levels and insulin resistance assessed by HOMA-IR in premenopausal obese and normal weight women. Thirty four obese women (age 31 +/- 8 years) (BMI 35 +/- 4 kg/m(2)) with 19 healthy controls (age 31 +/- 7 years) (BMI <25 kg/m(2)) (BMI 21 +/- 2 kg/m(2)) were included in the study. Women were healthy and had no osteoporosis. Circulating leptin levels were significantly higher in obese women (17.11 +/- 2.05 ng/mL vs. 8.38 +/- 4.71 ng/mL, p <0.0001) and decreased OPG levels were found (14.7 +/- 7.15 pg/mL vs. 19.17 +/- 6.37 pg/mL, p = 0.03). Leptin showed a positive correlation with BMI (r = 0.851, p <0.0001), waist-to-hip ratio (r = 0.692, p <0.0001), fasting insulin (r = 0.441, p <0.001), HOMA-IR (r = 0.412, p = 0.002), fibrinogen (r = 0.387, p = 0.004), uric acid (r = 0.293, p = 0.033), hematocrit (r = 0.394, p = 0.003), systolic (r = 0.504, p <0.0001), and diastolic blood pressure (r = 0.363, p = 0.008). OPG showed a negative correlation with insulin (r = -0.341, p = 0.013) and HOMA-IR (r = -0.324, p = 0.018). In obese women group, the regression equation of HOMA-IR was (HOMA-IR = [0.095 x leptin]-[0.051 x OPG] + 1.71). However, there was no relation between leptin and OPG levels. In conclusion, circulating leptin and OPG levels were related to insulin resistance in premenopausal obese women. However, leptin had no interference in OPG in premenopausal women.     

瘦素对结肠癌细胞株HT-29的影响

目的:观察瘦素对结肠癌细胞株HT-29的细胞生长的作用。方法:贴壁培养HT-29细胞,分别给予不同浓度的瘦素(0.5×10-6、5×10-5,1×10-4,2×10-4g/L)。并同时以浓度为1×10-4g/L的表皮生长因子(EGF)作为阳性对照组,通过测定生长曲线、四甲基谷氮唑蓝实验MTT法观察瘦素对HT-29细胞生长的影响。结果:通过生长曲线,发现在相同时间段,瘦素浓度在5×10-6-2×10-4g/L时,呈剂量依赖性促进HT-29细胞增殖。但即使在瘦素促细胞增殖最为明显的2×10-4g/L组中,和阳性对照组EGF比较,其细胞增殖数量仍为低。MTT法结果显示,不同浓度的瘦素作用于HT-29细胞后,在72 h内,呈时间、剂量依赖性促进HT-29细胞生长,其增长率在5.1%-67.9%之间。细胞计数和MTT法均显示瘦素可促进结肠癌细胞HT-29的生长和增殖。提示瘦素作为多功能的细胞因子和结肠癌的发生密切相关。结论:在离体实验中,瘦素具有促结肠癌细胞HT-29生长增殖的作用,且和其浓度、时间相关。     

瘦素通过调控细胞周期蛋白促进人肝癌细胞增殖

目的：观察瘦素对人肝癌细胞株Huh 7增殖活性的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：在培养液中加入不同浓度的瘦素后,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21^waf1的表达。结果：MTT检测显示,瘦素可促进Huh 7细胞的增殖,有一定的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示,瘦素能明显降低G0/G1期细胞比例并提高S期细胞比例;瘦素（100 ng/ml）处理24 h后,实时荧光定量PCR检测发现Cyclin D1 mRNA表达量增高至对照组的3.15倍,P21^waf1mRNA表达量则为对照组的55%,两者均有显著性差异（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结合图像分析系统分析也发现100 ng/ml的瘦素处理24 h后,与对照组相比,Cyclin D1蛋白的表达明显增高（P〈0.01）,P21^waf1蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论：瘦素可通过促进Cyclin D1表达、抑制P21^waf1表达,使人肝癌细胞Huh7由G0/G1期向S期转换,从而促进其增殖。     

瘦素、胰岛素样生长因子-1与多囊卵巢综合征高胰岛素血症的关系

目的了解瘦素、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)与多囊卵巢综合征(PCOS)高胰岛素血症间的关系,探讨相关发病机制。方法采用病例-对照的方法,实验分为PCOS组(92例)和对照组(92例),其中PCOS组又分为PCOS-高胰岛素血症组(46例)和PCOS-非高胰岛素血症组(46例)。通过放免法检测血清瘦素、胰岛素样生长因子-1、睾酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮等的水平,葡萄糖氧化酶法检测血糖水平。结果PCOS组瘦素(16.8±9.8ng/mL)、IGF-1水平(214.8±131.6ng/mL)明显高于对照组(分别为11.6±6.8ng/mL、118.0±82.9ng/mL)(P<0.05)。PCOS患者中高胰岛素组瘦素水平(19.2±10.2ng/mL)明显高于正常胰岛素组(12.5±7.6ng/mL)(P<0.05),IGF-1及空腹血糖在两组间差异无统计学意义。多元逻辑回归结果显示,在调整了体重指数、睾酮、黄体生成素/卵泡刺激素比值、双氢睾酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮等因素后,瘦素、IGF-1均是PCOS的危险因素,但均不是高胰岛素血症的危险因素。结论瘦素、IGF-1可能与PCOS的发病机制有关,但与高胰岛素血症的关系有待进一步探讨。     

瘦素对细胞免疫的影响

目的探讨高瘦素水平在不同免疫状态下对免疫系统的影响。方法选用8周龄的清洁级BALB／c雄性小鼠40只,采用抽签法随机分为5组,分别注射外源性鼠瘦素和阻断瘦素抗体人为造成小鼠的不同瘦素水平状态,分别注射环孢素A（CsA）将小鼠分为正常免疫状态和免疫抑制状态两类,并设立相应的对照组。利用TUNEL技术,经流式细胞仪检测胸腺细胞中CD4^＋、CD8^＋细胞的凋亡情况。结果胸腺CD4^＋、CD8^＋细胞的凋亡结果一致。正常免疫状态下,注射瘦素组细胞凋亡率与其对照组的差异无显著性,注射瘦素抗体组细胞凋亡率较其对照组增高;免疫抑制状态下,注射瘦素组细胞凋亡率低于其对照组。结论瘦素可起正向免疫调节作用,减少胸腺细胞的凋亡,缺乏瘦素可增加胸腺CD4^＋、CD8^＋细胞凋亡。正常免疫状态下,瘦素水平升高不能显示其对免疫系统的调节作用;免疫抑制状态下,这种调节作用得以体现。该现象的存在为长期存活肾移植患者免疫状态的评估提供了一个新视角。