猪胸腺免疫抑制提取物活性成分的分离和性质

用DextranG－25柱凝胶色谱对猪胸腺免疫抑制提取物进行了分离，得到6个组分，组分Ⅲ、Ⅳ对植物凝集素诱导的人外周血淋巴细胞转化具有较强的抑制活性。用SephadexG-10色谱对组分Ⅲ进行了进一步的分离，出现在外水体积的组分1免疫抑制活性最强。高活性组分的A260nm／A280nm之值和反相高效液相色谱结果表明，活性物质为与核酸类物质有关的肽，且肽与核酸有固定比例。     

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达CYP1A1（第241-381个氨基酸）与谷胱甘肽S-转移酶（GST）的融合蛋白作为抗原,用于制备CYP1A1多克隆抗体. 根据正反重组质粒pGEX/1A1表达的融合蛋白大小不同的原理,直接表达筛选得到正向重组质粒pGEX/1A1. 通过优化表达条件, 提高了目的蛋白的表达水平. 包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离, 获含纯化融合蛋白GST-1A1的PAGE凝胶. 直接用含GST-1A1的凝胶悬液免疫BALB/c小鼠,自腹水中获取CYP1A1多克隆抗体（1A1pAb）. 1A1pAb用切胶纯化的融合蛋白GST-2B6交叉吸收,蛋白A- Sepharose亲和层析柱来纯化. 用切胶纯化的融合蛋白GST-1A1及GST-2B6的免疫印迹反应初步鉴定1A1pAb的特异性. 纯化的1A1pAb对融合蛋白GST-1A1反应特异性较强,但仍对GST-2B6有弱交叉反应. 在实际应用中可根据反应强度来加以区分.     

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .在实际应用中可根据反应强度来加以区分     

质粒表达型shRNA对CHL-3A4转基因细胞系细胞色素P450 3A4基因表达的抑制作用

目的研究质粒表达型shRNA对CHL-3A4转基因细胞系细胞色素P450 3A4基因表达的抑制作用.方法设计并构建3条shRNA真核表达载体（CYP 3A4 Ⅰ、CYP 3A4Ⅱ、CYP 3A4Ⅲ）,转染CHL-3A4转基因细胞,以空载体组及无关序列的shRNA表达载体组为阴性对照;转染后48 h,Western blotting观察RNA干扰对CYP 3A4蛋白表达的影响;RNA干扰后,用HPLC法测定CHL-3A4转基因细胞的硝苯地平氧化酶的活性.结果CYP3A4Ⅲ表达载体能显著抑制CYP 3A4蛋白表达（75%）,抑制硝苯地平氧化酶的活性.结论RNA干扰能抑制CYP 3A4基因表达.     

2004年美国药物研究与开发回顾-续完

Amgen／Abgenix公司正在合作开发直接作用于表皮生长因子受体（EGFR）的新一类治疗药panitumumab。这个产品目前正作为单独和与其他药物连用用于各种类型的癌，处于Ⅱ和Ⅲ期临床试验中，包括结直肠、肺和肾癌。它是用Abgenix公司的XenoMouse技术创造的，这个抗体没有鼠蛋白并可能导致滴注反应、免疫原性和过敏反应低发生率的更有利的安全性。4月份开始的一项Ⅲ临床试验旨在评估将panitumumab每隔周加入到Avastin和Eloxatin基或Camptosar基化疗方案中作为转移性结直肠癌一线治疗的潜在利益。     

奥扎格雷钠对急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的影响

目的 探讨奥扎格雷钠对血小板活化功能的影响.方法 将所有入选病人随机分为A组:奥扎格雷钠加活血化淤治疗组和B组:单纯活血化淤治疗组,每组均为30人.用ELISA法分别检测两组治疗前后血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)含量.结果 治疗前A、B两组间的GPⅡb/Ⅲa含量无明显差异,治疗后A、B两组间的GPⅡb含量仍无明显差异,而GPⅢa有明显差异.结论 奥扎格雷钠对GPⅡb/Ⅲa有不完全的影响,对GPⅢa有影响而对GPⅡb无影响,即奥扎格雷钠未能最终阻断血小板的激活.     

凝血抑制物检测在血栓性疾病的价值

目的探讨凝血抑制物抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、蛋白C、蛋白S的活性变化对血栓性疾病心肌梗塞、脑卒中、DIC、术后深静脉血栓四种疾病的影响.方法用STA compact全自动凝血分析仪对心肌梗塞31例、脑卒中45例、DIC 17例、术后深静脉血栓43例、正常对照组50例以及治疗1周的心肌梗塞29例和DIC 16例进行AT-Ⅲ、蛋白C、蛋白S的活性测定.结果所有疾病组三个项目活性均大幅低于正常对照组,差异均具有非常显著性意义(p＜0.01).而治疗一周复检的心肌梗塞和DIC两疾病组三个项目活性均有较大提高,但与对照组比差异仍具有显著性意义(P＜0.01或P＜0.05).结论凝血抑制物AT-Ⅲ、蛋白C、蛋白S活性检测可以作为血栓性疾病可靠的诊断和治疗监测指标.     

宫颈鳞癌组织中TPX2和Aurora-A蛋白的表达水平及预后意义

目的探究 TPX2和 Aurora?A蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达水平及预后意义。方法回顾性选取 2011年 6月至 2013年 6月徐州市中心医院 85例宫颈鳞癌、 30例宫颈上皮内瘤变( CIN)Ⅱ~Ⅲ、30例 CIN Ⅰ和 20例慢性宫颈炎四组病人为研究对象。运用免疫组织化学方法检测 TPX2和 Aurora?A蛋白在各组宫颈组织中的表达情况;本课题组对宫颈鳞癌病人进行随访,采用 Kaplan?Meier法以及 Cox比例风险回归模型分析 TPX2和 Aurora?A蛋白表达水平与宫颈鳞癌病人总生存期的关系。结果 TPX2蛋白在宫颈鳞癌、 CIN Ⅱ~Ⅲ、CIN Ⅰ和慢性宫颈炎四组病人宫颈组织中的表达阳性率分别为 60.0%、50.0%、6.7%、5.0%, Aurora?A蛋白在四组病人宫颈组织中的表达阳性率分别为 63.5%、53.3%、10.0%、5.0%。TPX2和 Aurora?A的蛋白表达水平在宫颈鳞癌和 CIN Ⅱ~Ⅲ宫颈组织中显著高于 CIN Ⅰ和慢性宫颈炎( P＜0.05)在宫颈鳞癌组与 CIN Ⅱ~Ⅲ组、 CIN Ⅰ组与慢性宫颈炎组之间差异无统计学意义( P＞0.05)。相关分析显示 TPX2与 Aurora?A的,蛋白表达水平呈正相关( r＝0.229,P＝0.035)。 Kaplan?Meier生存分析显示, TPX2和 Aurora?A蛋白阳性表达病人的总生存期显著低于阴性表达病人( P＜0.05)。多因素 Cox回归分析显示, TPX2和 Aurora?A蛋白可作为宫颈鳞癌病人预后的独立危险因素［风险比( HR)＝2.449,95%置信区间( CI):1.056~5.676,P＝0.037;HR＝2.354,95%CI:1.182~4.688,P＝0.015］。结论宫颈鳞癌组织中 TPX2和 Aurora?A蛋白表达水平增高,其阳性表达与宫颈鳞癌的预后相关,有望成为指导临床治疗和预后的分子靶标。     

人TNF-α突变体Y87H/A145R的表达及纯化

用大肠杆菌表达人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的突变体Y87H/A145R,并研究其生物学特性.在5 L发酵罐中培养大肠杆菌工程菌,当菌体密度(D<,600>)增长到35时,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目标蛋白表达,包涵体蛋白的最终表达水平为2.5 g/L.用High Q Micro-prep凝胶柱纯化包涵体蛋白,然后通过透析复性,蛋白纯度大于99%.用分子排阻色谱分析Y87H/A145R的分子特征.结果表明,Y87H/A145R与TNF-α一样,以三聚体形式存在.而且,Y87H/A145R能明显抑制TNF-α诱导的L929细胞凋亡.小鼠试验表明,突变体Y87H/A145R不但失去了TNF-α的细胞毒性,并且能有效抑制TNF-α引起的急性肝坏死.     

用pH梯度洗脱蛋白A-葡聚糖柱中的人IgG_1、IgG_2和IgG_4

Hjelm 等(1972)曾注意到与葡聚糖共价结合的蛋白 A 在层析纯化大多数哺乳类动物IgG 上的潜在用途。人 IgG_3不与蛋白 A 结合,将业经 DEAE 纯化的 IgG 加入蛋白 A-葡聚糖柱上,IgG_3单独出现在直接流出的组份中     

麻疹病毒核蛋白在大肠杆菌中的表达:用缺失突变株定位抗原性位点

麻疹病毒(MV)的核蛋白(NP)由525个氨基酸组成,作者克隆了其中502个氨基酸序列的cDNA.将得到的cDNA进行如下处理:先用核酸外切酶Ⅲ从3'端外切消化,然后用限制性内切酶去除内部片段(但保留解读框架),将经过删除的cDNA克隆到质粒pRIT上,在大肠杆菌中表达出A蛋白-MVNP融合蛋白.对表达的蛋白进行纯化后,用蛋白印迹法进行分析.     

知母皂苷AⅢ通过miR-129-5p/STAT3轴调节肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨知母皂苷AⅢ(TAⅢ)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法:用不同浓度的TAⅢ处理A549细胞后,CCK-8法检测TAⅢ对A549细胞的细胞毒性。体外培养A549细胞,分为对照组(Control组)、TAⅢ组(20μmol·L^-1)、TAⅢ+anti-NC组、TAⅢ+anti-miR-129-5p组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-129-5p、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)表达,平板克隆实验检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-129-5p和STAT3的靶向关系。BALB/c裸鼠移植瘤实验检测TAIII在体内的抗肿瘤活性,免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织Ki-67、p-STAT3表达。结果:低浓度TAⅢ(1,5μmol·L^-1)对A549细胞存活率无显著影响(P>0.05),高浓度TAⅢ(10,20,30,6...     

Ⅲ型开放性骨折48例临床治疗

目的 总结Ⅲ型开放性骨折临床治疗结果及影响因素。方法 对48例处Ⅲ型开放性骨折依据Gustilo法进行分类，对治疗结果进行对比、分析。结果 采用石膏固定及牵引感染率最高，易出现关节僵硬．患肢功能较用外固定架方法治疗者差；ⅢB、ⅢC型骨折的感染率及截肢均高于ⅢA型骨折。结论 Ⅲ型积极行早期清创、固定及软组织修复有助于减少骨折并发症，促进肢体功能康复。     

波依定联合氟伐他汀对原发性高血压左室肥厚的影响

目的评价波依定合用氟伐他汀对原发性高血压左室肥厚的影响。方法将80例原发性高血压左室肥厚患者随机分为A、B两组,A组给予波依定5 mg/d;B组给予波依定5 mg/d+氟伐他汀40 mg/d。疗程6个月,治疗前后用放免法测定血清中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、NO含量。分别在用药前后用超声心动图检查评价心肌肥厚。结果两组患者药物治疗后血压降低的同时LVM I及血清PCⅢ浓度也较治疗前降低(P<0.01),B组血清PCⅢ浓度的降低较A组更明显(P<0.05),LVM I的降低在两组间差异有统计学意义(P<0.05),B组治疗后NO的变化明显高于A组(P<0.05)结论波依定合用氟伐他汀对原发性高血压左室肥厚逆转及舒张功能改善有协同作用,较单一用药疗效显著。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的:研究A549与肺泡上皮细胞共培养条件下姜黄素对经转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞生长、凋亡及分泌细胞外基质的影响,为姜黄素抗纤维化提供实验依据。方法:将利用与肺泡上皮细胞来源的A549细胞进行transwell跨室共培养的人胚肺成纤维细胞分为5组:对照组、模型组、不同浓度姜黄素(5、10、20μmol·mL-1)进行干预的治疗组。CCK-8法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;ELISA法测定细胞外基质Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)的分泌。结果:姜黄素对人胚肺成纤维细胞有抑制作用,呈剂量依赖式。姜黄素处理组细胞凋亡率较对照组、模型组明显增加(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素治疗组Bcl-2蛋白的表达明显减弱,而Bax蛋白的表达明显增强,Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)浓度下降。结论:姜黄素能抑制TGF-β1刺激的与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞的增殖,降低细胞外基质的形成,促进其凋亡,具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达来实现。     

阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒所致肝纤维化的临床疗效观察

目的观察阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒所致肝纤维化的临床疗效。方法将134例慢性乙肝患者随机分为A、B组,A组给予阿德福韦酯及基础保肝治疗,B组给予基础保肝治疗加复方丹参治疗,均治疗12周。观察治疗前、后2组血清玻璃酸酶、层粘连蛋白、Ⅲ期前胶原肽、Ⅳ型胶原的变化。结果治疗后A组4项指标与B组相比均明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论阿德福韦酯是治疗乙型肝炎病毒所致肝纤维化有效药物之一。     

复方甘草酸苷抗乙肝病毒所致肝纤维化的临床疗效观察

目的:观察复方甘草酸苷抗乙肝病毒所致肝纤维化的临床疗效。方法:将118例慢性乙肝患者随机分为A、B组,A组给予复方甘草酸苷及基础保肝药物治疗,B组仅给予基础保肝药物治疗,均治疗12wk。观察治疗前、后2组血清玻璃酸酶、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原的变化。结果:治疗后A组4项指标与B组相比均明显降低,具有显著性差异(P<0·05)。结论:复方甘草酸苷是治疗乙肝病毒所致肝纤维化有效药物之一。     

蝎毒提取物对受损神经再生与修复过程的影响

蝎毒 (scorpionvenom ,SV)是全蝎的主要药效成分 ,包括蛋白组分和非蛋白组分 ,其中占多数是蛋白组分 ,亦是发挥药理活性的主要成分。我室对马氏钳蝎SV的研究发现 ,SV中一种相对分子质量 90 0 0左右的组分有较强镇痛作用 ,我们称它为SV A组分[1 ] 。本实验通过蛛网膜下腔给予最小镇痛剂量的SV A ,观察对大鼠神经痛病理模型受损神经恢复过程的影响。1　材料与方法1 .1　材料　SV冻干粉 ,由本室自提 ;用QHyperDTM阴离子交换柱和Biosys 2 0 0 0型蛋白纯化系统 (美国Beckman公司生产 )洗脱得到SV A组分 ,冷冻干燥备用。神经生长因子(ne…     

体外短波深部热疗对不同类型慢性前列腺炎的疗效观察

目的 观察体外短波热疗治疗慢性前列腺炎的疗效.方法 将218例慢性前列腺炎患者按症状分为Ⅱ型、ⅢA型和ⅢB型,均用体外短波深部热疗仪治疗,5次为1疗程,连续治疗3个疗程.结果 治疗后,Ⅱ型及ⅢA型在前列腺液中的白细胞(EPS-WBC)计数方面与治疗前比较差异均有统计学意义(均P＜0.01),三组患者在前列腺症状积分指数(NIH-CPSI)方面与治疗前比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 体外短波深部热疗对慢性前列腺炎有较好的作用.     

美西律对心功能不全的疗效观察

目的：美西律对心功能Ⅲ-Ⅳ级（NYHA分级）并发室性心律失常与心功能正常并发室性心律失常疗效的影响。观察心衰与心律失常及治疗的关系。方法：观察组20例，心功能Ⅲ-Ⅳ级，对照组A组30例，心功能Ⅰ-Ⅲ级，对照B组20例，心功能Ⅲ－Ⅳ级（心功能Ⅲ-Ⅳ级按入院先后分组）。观察组矫正心功能基础上加用美西律300－450mg.d^-1，对照A组在治疗原发性病基础上加用美西律30－450mg.d^-1，对照B组单纯矫正心功能。结果：观察组有效率为25％，与对照A组（73．3％）比较，P＜0．01，与对照B组（20％）比较，P＞0．05，结论：本观察提示，心衰时室性心律失常的发生与心功能有关。