白藜芦醇对人CIK细胞功能的影响

目的探讨白藜芦醇对人C IK细胞生长以及体外杀伤活性的影响。方法体外常规法培养CD3＋CD56＋达15%以上的C IK细胞。用不同浓度的白藜芦醇诱导人CIK细胞48 h后：MTT比色法检测人CIK细胞增殖力、流式细胞术（FCM）测定CIK细胞表达的穿孔素和颗粒酶B的变化和乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性。结果白藜芦醇浓度在0～1.6μmol/L时能促进C IK细胞生长,并增加CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的含量表达。当浓度大于3.1μmol/L时可抑制CIK细胞生长,并随着药物浓度的递增抑制率逐渐增加。结论白藜芦醇在一定浓度下可促进CIK细胞生长,提高CIK细胞的杀伤活性。     

白桦脂酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞功能影响及机制研究

目的:观察白桦酯酸作用前后对人γδT细胞增殖及对胰腺癌SW-1990细胞杀伤活性的影响,探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为γδT细胞,收集培养第7天的γδT细胞,给予不同浓度白桦酯酸诱导48h,CCK8法检测白桦酯酸对γδT细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胰腺癌SW-1990细胞增殖率;γδT细胞分泌细胞因子的检测;流式细胞术(FCM)检测白桦酯酸作用前后γδT细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)、NKG2D、CD107a的表达变化;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定白桦酯酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞株SW-1990的活性影响。结果:白桦酯酸浓度在0.013～1.6μg/mL时能促进γδT细胞生长;经白桦酯酸诱导后的γδT细胞PFP、GrB、CD107a、NKG2DIFN-γ和TNF-а的表达显著高于对照组(P<0.05),对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性亦显著高于对照组(P<0.05)。结论:白桦酯酸在一定浓度范围内能够促进γδT细胞增殖,并增强其对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性,其机制可能与上调γδT细胞表面PFP、GrB、CD107a、NKG2D的表达和增加γδT细胞IFN-γ和TNF-а分泌有关。     

云芝多糖对人CIK细胞及其杀伤功能相关分子表达的影响

目的 探讨云芝多糖对人CIK细胞增殖及细胞杀伤功能相关分子表达的影响.方法 体外培养CIK细胞,不同浓度云芝多糖诱导人CIK细胞24h,CCK-8比色法检测人CIK细胞增殖,流式细胞仪测定CIK细胞表达的穿孔素、颗粒酶B和CD107a的变化.结果 不同浓度的云芝多糖可促进CIK细胞增殖,促进CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的和CD107a的表达,25 mg/L云芝多糖作用最强;但随着药物浓度的增加,CIK细胞增殖率逐渐降低,且细胞杀伤功能相关分子表达含量下降.结论 云芝多糖在低浓度下可促进CIK细胞增殖,提高CIK细胞的杀伤活性和功能.     

三叶青提取物对体外培养NK细胞功能的影响

目的 三叶青提物对体外培养NK细胞功能的影响。方法 用物理和化学方法分离和纯化三叶青中的有效成分,并用高效液相色谱（HPLC）法鉴定提取纯度。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞（PBMC）;在体外用磁分法从PBMC中分离NK细胞;用NK细胞培养基将分离后的NK细胞进行定向培养。收集培养第7天的NK细胞给予不同浓度的三叶青提取液诱导72h：用CCK-8法检测人NK细胞增殖率;流式细胞术（FCM）检测三叶青提取物作用前后NK细胞穿孔素（PFP）、颗粒酶B （GrB）、CD107a的表达;FCM法检测三叶青提取物诱导72h后NK细胞的IFN-γ表达。结果 将三叶青根块分别提取9个部分（分别命名为TH-t、TH-p、TH-a、TH-b、TH-w、TH-w1、TH-w2、TH-w3和TH-w4）。各部位三叶青提取物对NK细胞均有促进生长作用,差异有统计学意义（P<0.05）,在药物浓度相同条件下,以水煮脱糖部位（Th-w3）时促NK细胞生长活性最强;总提取物（Th-t）、石油醚部位（Th-p）和水部位脱糖流分次之,与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。三叶青总提取物作用NK细胞72h后,其穿孔素和颗粒酶B阳性表达均明显升高,以0.62μg/ml三叶青总提取物组的穿孔素和颗粒酶B阳性表达率达到最明显,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。经三叶青提取物诱导的NK细胞其IFN-γ表达以浓度为0.62μg/ml时最高（99.01%）,较对照组（88.46%）显著上升（P<0.05）。结论 三叶青提取物能促进慢性乙型肝炎患者NK细胞增殖和功能改变,上调NK细胞表面PFP、GrB、CD107a和IFN-γ的表达。     

病毒灭活血浆对人自然杀伤细胞功能影响的体外实验研究

目的：探讨病毒灭活血浆对人自然杀伤细胞（ natural killer cell ,NK细胞）生长、细胞表型以及体外杀伤活性的影响。方法采用病毒灭活血浆和新鲜冰冻血浆分别培养人NK细胞,观察2组培养体系中NK细胞的扩增情况;用流式细胞仪（FCM）检测NK细胞CD3-CD56＋表达以及NK细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的含量变化;用乳酸脱氢酶法测定NK细胞杀伤SGC-7901细胞活性。结果病毒灭活血浆与新鲜冰冻血浆比较,在促进NK细胞的增殖以及CD3-CD56＋的表达上无明显差异（ P＞0．05）;检测培养10天的NK细胞,病毒灭活血浆培养组细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a以及杀伤活性与新鲜冰冻血浆培养组也无明显差异（P＞0．05）。结论病毒灭活血浆对人NK细胞的增殖、细胞表型和体外杀伤功能均无明显影响。     

舒林酸对人γδT细胞的作用研究

目的:探讨舒林酸在预防消化道肿瘤中对人γδT细胞的影响.方法:异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞.不同浓度的舒林酸诱导γδT细胞和胃腺癌细胞(SGC-7901),流式细胞术检测培养前后的γδT细胞表面标记及检测舒林酸诱导的γδT细胞和SGC-7901细胞凋亡百分率.乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性.结果:γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,CD44达94.0%.舒林酸在100 μmol/L时对γδT细胞的生长抑制率达42.1%,明显高于对SGC-7901抑制率(7.4%).γδT细胞和胃腺癌细胞SGC-7901细胞经不同浓度的舒林酸诱导24 h后杀伤SGC-7901细胞作用在12.5 μmol/L时最强.舒林酸浓度在100 μmol/L时对γδT细胞作用24 h的凋亡率(52.71%)显著高于SGC-7901细胞(7.88%).结论:舒林酸在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性,而对胃癌细胞株抑制作用不明显.这一结果为临床非甾体类药物预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据.     

白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法 不同浓度的角质细胞生长因子（KGF）诱导人永生角质形成细胞（HaCaT），显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型，采用不同浓度白藜芦醇作用HaCaT细胞，计算半抑制浓度（IC50），根据IC50选出后续实验白藜芦醇的浓度；将银屑病模型细胞分为阴性对照组（30 μg/L生理盐水），2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇组，阳性对照组（5.0 μg/mL维A酸）及空白对照组（未加任何药物），MTT法检测各组银屑病模型细胞的增殖，流式细胞术检测各组银屑病模型细胞的凋亡率，Western blotting检测各组银屑病模型细胞Caspase-3、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表达。结果 不同KGF浓度组HaCaT细胞0 h、12 h、24 h、48 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②不同浓度组的OD值有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值高于其他浓度组；③不同浓度组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值从24 h开始明显高于其他浓度组。0 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L、4.0 μmol/L白藜芦醇作用HaCaT细胞24 h后的OD值比较，差异有统计学意义（P <0.05），白藜芦醇浓度升高OD值降低，白藜芦醇可抑制HaCaT细胞增殖，IC50值约5.3 μmol/L。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞24 h、48 h、72 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②各组OD值有差异（P <0.05），③各组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），从48 h开始，5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇对银屑病模型细胞具有一定的抑制增殖作用。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞的凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05），5.0 μmol/L、7.5 μmol/L的白藜芦醇对银屑病模型细胞有促凋亡作用。5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组与阴性对照组和空白对照组比较，Caspase-3蛋白相对表达量升高（P <0.05），p-ERK1/2、p-P38蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 白藜芦醇可能是通过抑制ERK/MAPK和/或P38/MAPK通路发挥作用进而抑制银屑病细胞增殖并促进其凋亡，具体作用机制还有待更深入研究。     

舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究

目的探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制。方法常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸（1、2、4、8、16、32μmol／L）诱导24h,收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株（SGC-7901和BCG-823）活性。每组测试样本和指标均设未加药物诱导的对照组。结果舒林酸浓度在8μmol／L时,γδT细胞穿孔素和粒酶B达最高[分别为（71．5±5．3）％和（78．3±7．1）％],明显高于对照组[分别为（51．4±7．3）％和（60．9±7．1）％]。γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL—12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8μmol／L时上清液中IFN-γ浓度达最高[（246．1±20．7）ng／L],明显高于对照组[（196．1±13．2）ng／L];当舒林酸浓度达32μmol／L时,γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组,两者比较有显著性差异（P〈0．05）。γδT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8μmol／L时达到峰值,此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为（73．6±3．9）％和（76．3±3．9）％,与对照组[（60．1±3．7）％和（59．2±4．5）％]比较有明显差异（P〈0．05）。结论舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关。     

吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究

目的探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康（分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mmol/L）诱导,24 h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果吡罗昔康浓度为0.04 mmol/L时诱导的γδT细胞穿孔素和粒酶B分别为78.7%和71.8%,明显高于对照组（分别为51.4%和60.9%）。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达,并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24 h后,培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌,并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04 mmol/L时最高（75%）,明显高于对照组（58%）。结论经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。     

白藜芦醇增强乳腺癌细胞对γδ T细胞的敏感性及其机制研究

目的探讨γδT细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性,观察白藜芦醇增强γδT细胞的抗肿瘤活性。方法体外扩增培养人γδT细胞并用流式细胞术进行鉴定。实验分为对照组、白藜芦醇组、γδT细胞组、白藜芦醇+γδT细胞组及白藜芦醇+γδT细胞+c-FLIP质粒组。LDH释放实验检测γδT细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性;western blot实验检测白藜芦醇及γδT细胞处理后MDA-MB-231细胞的细胞Fas-相关性死亡结构域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)的表达水平、活化半胱天冬酶(caspase)8、caspase 9、caspase 3的活化和细胞色素c的释放。结果流式细胞实验结果显示在体外用Br HPP和IL-2培养14天的人单个核细胞、CD3和γδTCR,确定这些定向培养的效应细胞为γδT细胞。LDH释放实验显示γδT细胞+白藜芦醇组对MDA-MB-231的杀伤活性为(68.2±7.1)%,显著高于γδT细胞组的(21.4±3.2)%(P0.05)和白藜芦醇+γδT细胞+cFLIP质粒组的(27.9±3.6)%(P0.05)。Western blot实验结果显示白藜芦醇处理能显著降低MDAMB-231细胞中c-FLIP蛋白的表达,γδT细胞+白藜芦醇组MDA-MB-231的活化caspase 8及细胞色素c的释放均显著高于γδT细胞组和白藜芦醇+γδT细胞+c-FLIP质粒组。结论白藜芦醇下调乳腺癌细胞c-FLIP的表达,提高乳腺癌细胞对γδT细胞的敏感性。     

姜黄素对CIK细胞杀伤胃癌细胞株SGC-7901作用的影响及其机制的研究

目的探讨姜黄素对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）杀伤胃癌细胞株SGC-7901作用的影响及其机制。方法10名健康者外周血单个核细胞（PBMC）在体外经多种细胞因子诱导为CIK细胞;收集培养第5天的CIK细胞,给予不同浓度的姜黄素诱导,37℃、5%CO2条件下继续培养72 h,LDH法检测CIK细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;FACS法检测CIK细胞表型CD3＋CD8＋、CD3＋CD56＋含量及穿孔素、颗粒酶B水平。结果①姜黄素诱导后,CIK细胞杀伤胃癌SGC-7901的活性明显提高,在10μmol/L时杀伤活性显著高于对照组（P〈0.05）。②姜黄素诱导后,CIK细胞内穿孔素和颗粒酶B的水平明显提高（P〈0.05）。③姜黄素能够显著增加CIK细胞的CD3＋CD56＋表达（P〈0.05）,降低其CD3＋CD8＋表达（P〈0.05）。结论姜黄素能提高CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性,其机制可能与其增加CIK细胞穿孔素和颗粒酶含量以及增加CD3＋CD56＋表达有关。     

GW4064激活法尼酯X受体抑制结肠癌细胞生长浸润及基质细胞衍生因子1的表达

目的 探讨法尼酯X受体（FXR）特异性激动剂GW4064抑制结肠癌细胞生长浸润的机制。方法 体外培养人结肠癌细胞系HT-29,用浓度为0、0.1、1、3、5、7、10 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞72 h,采用MTT法检测细胞活力;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,用相差显微镜观察细胞形态;用浓度为0、1 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用细胞划痕实验检测细胞浸润的变化;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用PCR检测FXR mRNA和基质细胞衍生因子1（SDF-1）mRNA表达的变化;用浓度为0、1、5、7 μmol/L的GW4064分别处理24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液中SDF-1表达的变化。于裸鼠皮下接种HT-29细胞建立裸鼠成瘤模型,灌胃给予GW4064或溶剂DMSO,16 d后检测肿瘤生长情况及瘤体中FXR与SDF-1 mRNA的表达。结果 GW4064处理HT-29细胞后,细胞生长受到抑制,且呈剂量依赖性,1、3、5、7、10 μmol/L GW4064组HT-29细胞的生长活力与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。用相差显微镜观察可见GW4064处理HT-29细胞后,细胞收缩变圆,从瘦长的细胞向表皮样细胞改变。细胞划痕实验结果显示GW4064处理HT-29细胞后,细胞迁移距离变短,与对照组（0 μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.05）。PCR检测结果显示GW4064处理后FXR mRNA表达呈剂量依赖性增加,而SDF-1 mRNA表达则相反。ELISA检测结果显示细胞培养上清液中SDF-1的表达量随着GW4064浓度的增加而逐渐下降,1、5、7 μmol/L GW4064组与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。给予GW4064后,荷瘤小鼠肿瘤体积变小,与对照组（给予DMSO）相比差异有统计学意义（P<0.05）,并且瘤体内FXR mRNA表达增加、SDF-1 mRNA表达减少。结论 FXR激活后抑制了结肠癌细胞生长浸润,同时抑制了结肠癌细胞SDF-1的表达分泌。     

木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制

目的 研究木犀草苷对人食管鳞状癌Eca109细胞生长的抑制作用及其机制。方法 Eca109细胞经不同浓度木犀草苷处理后,MTT法检测Eca109细胞增殖;倒置显微镜观察Eca109细胞形态的变化;流式细胞术检测Eca109细胞周期变化及细胞凋亡情况;RT-PCR检测Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达。结果 MTT实验表明,木犀草苷80、120、160、200、240 μmol/L对Eca109细胞均有抑制作用,且与浓度相关。木犀草苷可引起Eca109细胞形态改变、体积缩小,并与周围细胞脱离,浓度为240 μmol/L时使细胞呈出芽状,有的细胞伸出多个伪足样突起;浓度为160、240 μmol/L时,可将细胞阻滞于G₂/M期,诱导细胞凋亡;浓度为240 μmol/L并处理Eca109细胞48 h后,使Eca109细胞cyclin D1、survivin和c-myc基因表达低于对照组（P＜0.05）。结论 木犀草苷对食管鳞状癌Eca109细胞的生长有显著抑制作用,其通过改变细胞周期、诱导细胞凋亡及抑制相关基因的表达发挥抗肿瘤作用。     

白藜芦醇抑制TXNIP/NLRP3信号通路改善脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎性损伤

[目的]观察白藜芦醇对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞（HK-2）炎性损伤的保护作用,及其对TXNIP/NLRP3炎性通路的影响。[方法]采用脂多糖（LPS,1 mg/L）体外诱导HK-2细胞炎性损伤模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量（50 μmol/L）白藜芦醇组、LPS+中剂量（100 μmol/L）白藜芦醇组、LPS+高剂量（200 μmol/L）白藜芦醇组;CCK8法检测HK-2细胞相对存活率,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测炎性因子白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,Western Blot方法分析诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧酶-2（COX-2）、人硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）及人隐热蛋白（NLRP3）表达。[结果]与LPS诱导组比较,不同浓度白藜芦醇干预的HK-2细胞相对存活率明显升高（P<0.05）,细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低（P<0.05）,细胞中炎性蛋白iNOS及COX-2表达水平显著降低（P<0.05）;细胞中TXNIP及NLRP3蛋白表达也显著降低（P<0.05）,并表现出剂量依赖性。[结论]白藜芦醇可以明显抑制LPS诱导的HK-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性通路活化相关。     

环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响

目的探讨环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响。方法异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的环磷酰胺诱导γδT细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测环磷酰胺对γδT细胞增殖率的影响,LDH法检测γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测诱导前后的γδT细胞的凋亡率及NKG2D受体表达水平。结果γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,当环磷酰胺浓度在0.05~2.0 ng/L时能够促进人γδT细胞的生长,增殖率随着该药物浓度的增高而增高,浓度大于2.0 ng/L时抑制γδT细胞的生长,γδT细胞杀伤活性与对照组比较明显增高,凋亡率与对照组比较明显降低,且γδT细胞表面NKG2D表达水平明显高于对照组。结论环磷酰胺在一定的浓度范围内,促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,抑制γδT细胞的凋亡,增强γδT细胞表面NKG2D的表达水平,为环磷酰胺在肿瘤免疫治疗中提供了一定的理论依据。     

环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响

目的探讨环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响。方法异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的环磷酰胺诱导γδT细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测环磷酰胺对γδT细胞增殖率的影响,LDH法检测γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测诱导前后的γδT细胞的凋亡率及NKG2D受体表达水平。结果γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,当环磷酰胺浓度在0.05~2.0 ng/L时能够促进人γδT细胞的生长,增殖率随着该药物浓度的增高而增高,浓度大于2.0 ng/L时抑制γδT细胞的生长,γδT细胞杀伤活性与对照组比较明显增高,凋亡率与对照组比较明显降低,且γδT细胞表面NKG2D表达水平明显高于对照组。结论环磷酰胺在一定的浓度范围内,促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,抑制γδT细胞的凋亡,增强γδT细胞表面NKG2D的表达水平,为环磷酰胺在肿瘤免疫治疗中提供了一定的理论依据。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的 观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS（1 μg/mL）刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB（NF-κB）核转运的作用,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的变化。结果 当Tet浓度＜1 μmol/L时,单独或与1 μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度＞10 μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞（红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状）为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

冬凌草甲素抑制人胃癌SGC-7901细胞生长的G2/M期阻滞机制研究

目的 研究冬凌草甲素抑制人胃癌 SGC-7901 细胞生长作用及 G₂/M 期阻滞机制。方法 MTT 法检测冬凌草甲素对 SGC-7901 细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测冬凌草甲素对 SGC-7901 细胞周期的影响;Western blotting 法检测冬凌草甲素对 Cdk1、Cyclin B1 两种蛋白表达的影响。结果 冬凌草甲素作用于 SGC-7901 细胞的 IC₅₀ 为 15.64 μmol/L;冬凌草甲素对 G₂/M 期细胞的阻滞作用随着浓度的增加而增强;Cdk1 和 Cyclin B1 蛋白的表达量随着冬凌草甲素浓度的增大显著降低。结论 冬凌草甲素通过下调 SGC-7901 细胞内 Cdk1、CyclinB1 两种蛋白的表达,阻滞细胞于 G₂/M 期而抑制 SGC-7901 细胞生长。     

白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞形态、线粒体膜电位、活性氧及钙离子浓度的影响

目的 研究白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法 SGC-7901细胞体外培养48 h,分为白藜芦醇低、中、高剂量组（44、88、176 μmol/L）,阳性对照组（5-FU 153.8 μmol/L）;阴性对照组（不含药物同体积培养液）,荧光显微镜观察不同浓度的白藜芦醇对SGC-7901细胞的形态学影响;流式细胞仪检测白藜芦醇对肿瘤细胞中线粒体膜电位、活性氧的的影响;激光共聚焦显微镜观察白藜芦醇对肿瘤细胞中钙离子浓度的影响。结果 显微镜下可见肿瘤细胞染色程度加深,染色质聚集、断裂,产生大小不等的凋亡小体,且随着白藜芦醇浓度加大,现象越来越明显,表明细胞凋亡的比例不断增加;白藜芦醇能够明显降低肿瘤细胞中线粒体膜电位,随着白藜芦醇浓度不断增加,肿瘤细胞中活性氧也不断增加,说明白藜芦醇能够提高肿瘤细胞中的活性氧水平来诱导其凋亡;白藜芦醇对肿瘤细胞中钙离子的浓度有一定的作用,其中高剂量能够显著提高肿瘤细胞中钙离子的浓度,且呈现一定的剂量依赖关系。结论 白藜芦醇通过影响SGC-7901肿瘤细胞线粒体膜电位、活性氧及钙离子浓度导致肿瘤细胞凋亡,且与剂量相关。     

银杏内酯A、B对高胆固醇诱导的PC12细胞胆固醇代谢的影响

[目的] 基于体外血脑屏障(BBB)环境, 观察高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇的代谢情况及银杏内酯A、B对其的影响。[方法] 利用Transwell装置共培养星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞建立体外BBB, 并与PC12细胞共培养。在Transwell 内皮细胞侧添加40 μmol/L胆固醇, 并分别给予30 μmol/L 银杏内酯A和25 μmol/L 银杏内酯B进行干预。干预结束后, 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术, 检测胆固醇代谢关键酶低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)及胆固醇24S-羟化酶基因(CYP46)在mRNA水平的表达。[结果] 高胆固醇环境下, LRP-1表达下调(P<0.01), ACAT 及ABCA1表达上调(P<0.05), CYP46的表达有上调趋势;药物干预后, 除LRP-1有不同程度的升高(P<0.05), 其余各指标均无明显变化。[结论] GKA、B对高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇代谢关键酶LRP-1的表达有一定影响。