大豆异黄酮对体外原代大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的 :研究大豆异黄酮对体外培养原代大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞 ,培养液中加入不同浓度的大豆异黄酮 ,以17- β 雌二醇 (E2)作为阳性对照组 ,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (BGP)含量。结果 :与正常对照组相比 ,大豆异黄酮可增加成骨细胞数量(P<0.01) ,提高细胞的ALP活性和BGP含量(P<0.01)。除ALP外 ,这些作用均低于E2(P<0.01)。结论 :大豆异黄酮可促进体外培养成骨细胞的增殖、分化 ,其作用与雌激素相似 ,但低于雌激素     

大鼠脑内成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究大鼠脑组织固有成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响，探讨合并脑外伤骨折愈合加快的可能原因。方法提取大鼠全脑、灰质、白质、垂体、肌肉、肝脏、大鼠血清等．制成匀浆提取液．体外培养大鼠成骨细胞．与空白培养液作对照观察大鼠各组织提取液对成骨细胞增殖、分化和矿化的作用。结果对成骨细胞增殖的影响：脑内灰质和白质成分较其他提取液显著促进成骨细胞增殖（P〈0．01）。其中灰质成分最为明显；对成骨细胞分化的影响：灰质，白质，血清成分对成骨细胞ALP活性的影响明显较其它各组高（P〈0．01），其中灰质成分为最高（P〈0．01）；对成骨细胞矿化的影响：肌肉组轻度抑制成骨细胞矿化结节形成（P〈0．05），其他各组无显著性差别。结论大鼠脑组织中灰质和白质能显著促进成骨细胞增殖和分化．尤以灰质为最强，但并不能明显促进成骨细胞矿化。脑外伤后脑组织内固有成分释放入血可能和合并脑外伤的骨折愈合加速有一定关系。     

黄芪多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对前脂肪细胞增殖、分化的影响及其机制。方法:以XTT法检测3T3-Ll前脂肪细胞的增殖;油红O染色并通过比色定量分析检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积;采用实时聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹(Western blotting)技术检测前脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体γ(peroxi some proliferator activated receptorγ,PPARγ)、CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα) mRNA以及蛋白质的表达。结果:APS浓度从0.025到0.8g/L,在24、48和72h各时间段对前脂肪细胞的生长均表现为增殖趋势,且呈一定的量效关系;0.4g/L APS处理的前脂肪细胞,胞浆中出现较大量脂滴,其作用与噻唑烷二酮(thiazo-lidinedione,TZD)类药物罗格列酮(rosiglitazone,ROS)相似;APS使前脂肪细胞分化相关基因PPARγ和C/EBPα mRNA与蛋白的表达明显增加,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:APS能够促进前脂肪细胞的增殖和分化,增加脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,其机制可能与其促进PPARγ和C/EBPα mRNA与蛋白质表达有关。     

大鼠成骨细胞的原代培养与鉴定

目的:针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞。方法:本实验用新生1~2d大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定。结果:所培养细胞具有体内成骨细胞的生物学行为。结论:本实验原代培养成骨细胞的方法切实可行,为体外研究提供了一种客观而有效的实验手段。     

改良大鼠成骨细胞原代培养方法的实验研究

目的获得一种操作简便、细胞数量多而纯的成骨细胞原代培养方法。方法改良I型胶原酶消化获得成骨细胞的方法,并检测成骨细胞形态、碱性磷酸酶染色、矿化结节形成。结果经改良的大鼠成骨细胞原代培养方法获得的细胞数量多,形态正常,且碱性磷酸酶分泌及矿化特性正常。结论改良大鼠成骨细胞原代培养方法是一种操作简便、细胞数量多的成骨细胞原代培养方法。     

黄芪多糖对环磷酰胺致大鼠毒性的保护作用

目的:研究黄芪多糖(APS)对大鼠原代培养肝细胞抗氧化能力的影响作用。方法:采用"二步灌流法"制备大鼠原代肝细胞,给予40μmol/L的环磷酰胺造成脂质过氧化模型,然后给予三剂量(50、100及150μmol/L)的黄芪多糖,对照组给予相同体积的PBS,继续培养24 h,测定培养基上清生化、细胞内氧化及抗氧化指标,并评价黄芪多糖对环磷酰胺致毒性的保护作用。结果:相对于对照组,黄芪多糖各剂量组转氨酶(ALT,AST)及丙二醛(MDA)含量均明显下降(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖效应。结论:黄芪多糖对环磷酰胺引起的大鼠肝细胞脂质过氧化有一定的抑制作用。     

黄芪多糖对大鼠骨关节炎的影响

目的:探讨黄芪多糖对大鼠骨关节炎(OA)的影响。方法:4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后50只大鼠分成5组:正常组、模型组、0.10,0.25,0.50 g/L的黄芪多糖治疗组,分组后即开始用不同浓度的黄芪多糖关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.2 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、取关节滑膜检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),切取关节,进行大体及组织学观察,用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)在关节软骨中的表达。结果:黄芪多糖在高浓度可明显修复关节软骨的退变(P<0.01),降低关节滑膜、血清的MDA水平(均P<0.01),增加SOD活性(P<0.01);在低浓度时对关节软骨的修复作用并不明显(P>0.05),也不能显著降低关节滑膜、血清的MDA水平(均P>0.05)和增加SOD活性(P>0.05)。黄芪多糖可以抑制MMP-3在关节软骨中的表达(P<0.01),黄芪多糖在高浓度时可明显增加关节软骨中葡糖氨基聚糖(GAG)含量(P<0.01)。结论:黄芪多糖关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复。     

黄芪多糖对大鼠骨关节炎的影响

目的：探讨黄芪多糖对大鼠骨关节炎（OA）的影响。方法：4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后50只大鼠分成5组：正常组、模型组、0.10,0.25,0.50 g/L的黄芪多糖治疗组,分组后即开始用不同浓度的黄芪多糖关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.2 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、取关节滑膜检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）,切取关节,进行大体及组织学观察,用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）在关节软骨中的表达。结果：黄芪多糖在高浓度可明显修复关节软骨的退变（P〈0.01）,降低关节滑膜、血清的MDA水平（均P〈0.01）,增加SOD活性（P〈0.01）;在低浓度时对关节软骨的修复作用并不明显（P〉0.05）,也不能显著降低关节滑膜、血清的MDA水平（均P〉0.05）和增加SOD活性（P〉0.05）。黄芪多糖可以抑制MMP-3在关节软骨中的表达（P〈0.01）,黄芪多糖在高浓度时可明显增加关节软骨中葡糖氨基聚糖（GAG）含量（P〈0.01）。结论：黄芪多糖关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复。     

恒山黄芪粉碎度与黄芪多糖得率关联度研究

目的 研究恒山黄芪粉碎度与黄芪多糖得率之间的关系。方法 采用超微粉碎机对恒山黄芪进行超细化处理并按不同粒度分组,比较各组别恒山黄芪在不同温度、不同料液比条件下,水法提取与CaO法提取黄芪多糖的得率。结果 恒山黄芪粉体粒度≥600目（破壁前）,黄芪多糖得率同等粉碎度CaO法提取优于水法提取,小于800目（破壁后）得率趋于一致。无论是采用水法还是CaO法提取,恒山黄芪在粉碎粒度为800目时,选择提取温度80 ℃,料液比1∶8,黄芪多糖得率达到最高,分别为8.36%和8.49%。结论 恒山黄芪多糖得率与粉碎度存在关联性。     

蛹虫草菌丝体多糖对小鼠乳腺增生模型的影响

目的 观察蛹虫草菌丝体多糖对乳腺增生模型小鼠雌激素水平、免疫功能及病理形态改变的影响。方法 实验设对照组、模型组、蛹虫草菌丝体多糖组和乳康丸阳性对照组。采用苯甲酸雌二醇联合黄体酮制备小鼠乳腺增生模型。以放射免疫法检测小鼠血清雌二醇水平,计算子宫指数,观察小鼠免疫功能和病理形态。结果 与模型组比较,蛹虫草菌丝体多糖能够显著降低乳腺增生小鼠血清雌二醇水平、子宫指数（P＜0.05）,明显增加单核-巨噬细胞廓清指数、吞噬指数及脾脏指数（P＜0.05）,乳腺腺泡和导管的增生在一定程度上减少。结论 蛹虫草菌丝体多糖能够调节乳腺增生小鼠雌激素分泌,增强机体免疫能力,且有效抑制小鼠乳腺腺泡和导管的扩张及增生。     

丹参提取物对小鼠吗啡身体依赖性形成的影响及其机制

目的 观察丹参提取物（含隐丹参酮85.11%）对小鼠吗啡身体依赖性形成及其对脑内环磷酸腺苷（cAMP）和一氧化氮（NO）生成的影响。方法 剂量递增sc吗啡建立小鼠吗啡依赖模型,观察丹参提取物对盐酸纳洛酮催促吗啡依赖小鼠戒断症状的影响,并分别用放射免疫分析法、硝酸还原酶法测定小鼠脑内cAMP和NO水平。结果 丹参提取物（80 mg/kg）可显著降低吗啡依赖小鼠催促戒断症状;对吗啡依赖小鼠脑内cAMP无明显影响,但可显著降低吗啡依赖小鼠脑内NO水平。结论 丹参提取物能缓解吗啡依赖小鼠的戒断症状,其机制可能与下调脑内NO水平有关。     

影响山西恒山野生蒙古黄芪质量的环境因素研究

目的 通过相关性分析和逐步回归分析方法分析海拔、经度、纬度、坡向、坡度生态环境因素对恒山产野生蒙古黄芪黄酮类和皂苷类成分的影响,筛选出影响黄芪质量的主要环境因素。方法 采用HPLC-DAD法测定了毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分;UPLC-ELSD法测定了黄芪皂苷I、黄芪皂苷II、黄芪皂苷III、黄芪甲苷4种皂苷成分。采用SPSS17.0软件对黄芪各成分进行相关性分析,并以逐步回归分析法分析各生态因素对各成分量的影响。结果 建立逐步回归方程,毛蕊异黄酮苷的量与黄酮总量相关系数为0.958,黄芪皂苷I的量与皂苷总量相关系数为0.969,毛蕊异黄酮的量与芒柄花素的量相关系数为0.896,呈极显著的正相关;皂苷总量与黄酮总量相关系数为?0.505,呈显著的负相关。随着海拔和纬度的升高,黄芪中毛蕊异黄酮和黄酮总量升高;芒柄花素的量随经度的增加而增加;种植在阴坡的黄芪中黄芪皂苷I和皂苷总量的量高,且随坡度增大而升高;黄芪皂苷II的量主要受坡度的影响。结论 影响恒山野生蒙古黄芪药材黄酮成分量的主要因素是海拔和纬度,经度也有一定的影响;坡向和坡度对黄芪的皂苷成分的量有显著的影响,纬度、海拔也有一定的影响。     

鸦胆子油微囊-原位凝胶的制备及体外释药机制的研究

目的 制备鸦胆子油微囊-原位凝胶,并探讨其体外释药性能。方法 以复凝聚法制备鸦胆子油微囊,并将微囊载于泊洛沙姆407形成的原位凝胶中,采用无膜溶出模型考察其体外溶蚀及释放情况。结果 制得的微囊大小均匀,平均粒径为89.399 μm,包封率和载药量分别为94.5%～97.4%（n＝3）和48.3%～52.6%（n＝3）;加入微囊后泊洛沙姆407凝胶的相变温度提高了6 ℃左右,微囊-原位凝胶的体外释药符合Higuchi方程,且持续释放可达96 h以上。结论 鸦胆子油微囊-原位凝胶制备方法简便,载药量高,并有一定的缓释作用。     

菘蓝花期靛蓝、靛玉红和多糖分布规律研究

目的 考察菘蓝花期不同部位的靛蓝、靛玉红和多糖的积累分布情况。方法 采用HPLC法测定菘蓝花蕾期及盛花期2个阶段植株不同部位中靛蓝、靛玉红量,并采用苯酚-硫酸法测定各部位的多糖量。结果 靛蓝、靛玉红在叶中分布较多,根、茎、花中较少,其中基部叶的量最高。花蕾期叶中靛蓝、靛玉红量均高于盛花期,花中靛蓝、靛玉红量高于花蕾中的量。多糖在菘蓝全株均有分布,花蕾期根中量最高,盛花期地上部分的上端高于下端。结论 花期的菘蓝体内有靛蓝、靛玉红的分布,且主要分布于叶片内,花蕾期靛蓝、靛玉红总量高于盛花期的总量;多糖在菘蓝中分布有一定的规律,花蕾期根中多糖分布较多,地上部分多糖量有增加趋势。     

丹参滴丸对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响及其作用机制

目的 观察丹参滴丸对CCl₄致大鼠肝纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法 除对照组外,其余各组大鼠用CCl₄复合因素法诱导肝纤维化大鼠模型,丹参滴丸各组同时ig给予丹参滴丸700、350、175 mg/kg,阳性对照组给予扶正化瘀胶囊1 500 mg/kg,每天给药1次,连续给药7周,正常大鼠给予蒸馏水作为对照组。测定各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的活性及总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、IV型胶原的水平;测定肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和羟脯氨酸（Hyp）的量;HE和Masson染色观察肝组织病理形态学改变;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 丹参滴丸能明显抑制肝纤维化大鼠血清中ALT、AST、NAG活性的升高,降低IV型胶原的量,增加TP和ALB的量;降低肝组织中Hyp和MDA的量,提高SOD的活性,抑制胶原纤维的增加,亦能降低α-SMA的表达。结论 丹参滴丸有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制与其抗脂质过氧化、抑制胶原纤维的增加及降低α-SMA的表达等密切相关。     

芥子碱平喘作用及其机制研究

目的 研究芥子碱的平喘作用及其机制。方法 采用整体动物引喘法研究芥子碱的平喘作用;豚鼠肺支气管灌流法,考察芥子碱对气道平滑肌的舒张作用。结果 中、高剂量（14.8、74 mg/kg）芥子碱（ig给药）,低、中、高质量浓度（91.9、459.5、919.0 mg/L）芥子碱（喷雾给药）均可明显延长Ach所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期,与对照组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;芥子碱能够明显增加气道灌流液流速和灌流滴数,与对照组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 芥子碱以ig或喷雾方式给药,均具有明显的平喘作用;芥子碱能通过扩张气道平滑肌,增加肺和气管容量,从而起到平喘作用。     

低温诱导黄花蒿中青蒿素的生物合成及其机制研究

目的 研究低温处理对黄花蒿中青蒿素及其他萜类合成通路的影响。方法 以4 ℃为胁迫条件,利用高效液相色谱法测定青蒿素量;硫酸钛沉淀法和N, N-二甲基-对-亚硝基苯胺漂白反应分别检测黄花蒿叶片过氧化氢（H²O²）和单线态氧（¹O²）量;紫外分光光度法检测过氧化氢酶（CAT）活性;实时荧光定量PCR技术定量分析青蒿素合成途径及竞争途径关键酶基因的表达。结果 4 ℃处理4 h后黄花蒿叶片中¹O²和H²O²量升高,并伴随着青蒿素量和CAT活性逐步提高,4、24、48 h后青蒿素量分别提高20%、65%、80%;4 ℃处理24 h后,青蒿素合成相关基因（HMGR、FPS、ADS、CYP71AV1、CPR和DBR2）的表达普遍上调,其中ADS基因的表达提高16倍;而青蒿素合成竞争途径酶（β-石竹烯合酶）基因（CS）表达则下调近20倍。结论 低温刺激可能通过产生高浓度活性氧（ROS）促进青蒿素合成前体转化,上调青蒿素合成相关基因表达并抑制竞争途径基因表达等途径促进青蒿素合成。