盐酸青藤碱脂质体的制备工艺研究

目的 提高盐酸青藤碱（sinomenine hydrochloride,SIN-HCl）脂质体的药物包封率,并阐明处方药量与脂质体粒径等因素对包封率的影响规律。方法 以离心沉淀-离心超滤法测定SIN-HCl脂质体的包封率;以包封率与成型性为主要指标筛选薄膜分散法（TFH）、逆相蒸发法（REV）与乙醚注入法（EI）3种制备方法;考察水化液的种类、pH值、离子浓度以及pH梯度载药、磷脂-胆固醇比例、药脂比对包封率的影响;以全面设计试验考察处方药量与粒径两因素对包封率的影响规律;考察代表性脂质体样品在4 ℃下的稳定性。结果 最适的制备工艺为薄膜分散法;最佳水化液为柠檬酸缓冲液（CBS）;随着水化液pH值的升高,包封率增加;当水化液的pH值相同时,脂质体包封率随着水化液离子浓度的降低而增加;pH梯度载药可提高脂质体的包封率,pH梯度载药脂质体的最适水化液为pH值2.5的CBS,最适大豆磷脂-胆固醇比例为6∶1,SIN-HCl与大豆磷脂的比例由1∶6增至6∶6,未经探针式超声处理的脂质体包封率略有下降;建立了药物包封率与处方药量和粒径之间的定量关系,一定粒径与处方药量的脂质体包封率大于80%;成品脂质体的稳定性良好。结论 pH梯度主动载药技术可以制备高包封率的SIN-HCl脂质体。     

盐酸青藤碱纳米柔性脂质体的制备及其性质研究

目的 制备盐酸青藤碱纳米柔性脂质体,探索其体外透皮给药的规律与机制。方法 采用薄膜分散法制备以丙二醇为柔软剂的盐酸青藤碱纳米柔性脂质体,考察卵磷脂、胆固醇与丙二醇对脂质体包封率的影响;高效液相色谱（HPLC）法测定青藤碱的量,原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）和光子相关光谱仪（PCS）描述其物理性质。采用双室扩散池法研究其体外透皮给药规律,透皮给药结束后用扫描电镜（SEM）观察皮肤表面结构的变化。结果 卵磷脂、胆固醇和丙二醇的质量分数分别为3%、0.02%、25%时,制备的柔性脂质体对盐酸青藤碱的包封率为（66±2.3）%;其外观为圆形或椭圆形,内部为多层囊泡结构,粒径为（170±26）nm,表面电位为－（43±3.4）mV。柔性脂质体能够使角质层结构变得紊乱无序,角质细胞间隙增大而提高皮肤对药物的渗透性。结论 纳米柔性脂质体能够显著提高盐酸青藤碱透皮给药效果,可作为盐酸青藤碱透皮给药的新型纳米载体。     

盐酸青藤碱醇质体的制备及其体外经皮渗透研究

目的 制备盐酸青藤碱醇质体并考察醇质体作为盐酸青藤碱经皮给药载体的渗透特性。方法 采用注入法制备盐酸青藤碱醇质体,并对其形态、粒径及包封率进行分析;采用透皮扩散仪,以小鼠皮肤进行体外透皮试验,比较盐酸青藤碱在水溶液、脂质体以及醇质体中的透皮行为。结果 制得的盐酸青藤碱醇质体外形圆整,平均粒径为88.7 nm,包封率为62.8%,累积透皮量和透皮速率均明显高于盐酸青藤碱脂质体和水溶液。结论 醇质体能明显促进盐酸青藤碱的经皮渗透,有望成为盐酸青藤碱透皮给药的新载体。     

盐酸青藤碱醇质体的制备及其性质考察

目的 研究盐酸青藤碱醇质体的最佳制备工艺,并考察不同促渗剂对其体外经皮渗透的影响和该制剂的皮肤过敏性。方法 采用注入法制备盐酸青藤碱醇质体,以包封率为评价指标,通过正交设计优化最佳制备工艺;同时对其形态、Zeta电位、粒径大小进行分析;以氮酮为阳性促渗剂,研究丁香精油等不同促渗剂预处理离体小鼠腹部皮肤24 h后,对盐酸青藤碱24 h累积渗透量的影响。以豚鼠为动物模型,进行皮肤过敏性试验。结果 所得青藤碱醇质体平均包封率为（66.18±1.84）%,平均粒径为（102.2±10.4）nm,Zeta电位为（?52.4±1.5）mV。2%丁香酚预处理皮肤组,盐酸青藤碱醇质体24 h的累积渗透量为412.493 2 μg/cm²,大约是醇质体组（未促渗）的1.6倍、水溶液组（未促渗）的5.8倍。该制剂外用对皮肤无致敏性。结论 优选得到的盐酸青藤碱醇质体处方和制备工艺合理,醇质体稳定性良好,经皮给药安全。2%丁香酚可显著提高盐酸青藤碱的体外渗透效果。     

盐酸青藤碱微囊的制备及其质量评价

目的 研究盐酸青藤碱微囊的制备工艺,并考察其体外释药特性。方法 用复凝聚法制备盐酸青藤碱微囊,以包封率为指标,用正交试验设计法对盐酸青藤碱的制备工艺进行研究,用高效液相色谱法研究制备的微囊体外释药特性,并且对其形态、稳定性等进行研究。结果 盐酸青藤碱微囊的囊心囊材比、搅拌速率及成囊温度对微囊的包封率均有显著影响,当囊心与囊材比为1∶3、搅拌速率为200 r/min、成囊温度为60 ℃时,制得的盐酸青藤碱微囊囊形圆整光滑,囊壁清晰,粒径均匀,平均包封率可高达85%,载药量平均为16.5%,囊径为4～12 μm。结论 复凝聚法制备盐酸青藤碱微囊工艺简单、可靠,产品稳定性好。微囊作为一种新兴剂型,具有一定的缓释效果。     

全缘千里光碱脂质体包封率测定方法的研究

目的 建立全缘千里光碱(integerrimine,INT)脂质体包封率测定方法.方法 尝试以葡聚糖凝胶柱分离法与离心沉淀-离心超滤法测定INT脂质体的包封率,考察了第一种方法中游离药物柱回收率、游离药物和脂质体的分离度,考察了第二种方法中超滤膜对游离药物的吸附、滤出液中有无脂质体以及稀释对包封率测定结果的影响,并以第二种方法测定了空白脂质体与药物水溶液混合制得脂质体的包封率.结果 葡聚糖凝胶柱分离法不能实现药物与脂质体的完全分离,超滤膜对INT溶液浓度基本无影响,离心沉淀可实现脂质体与外水相两部分质量的准确分离.离心-超滤法测定中样品稀释1倍使脂质体包封率降低约50%.结论 葡聚糖凝胶柱分离法不适于INT脂质体的包封率测定,离心-超滤法可高效、准确、方便地测定INT脂质体包封率;INT与脂质双分子层有一定的亲和力,但在其中的滞留性较差.     

HPLC 法测定洛莫司汀-碘海醇复方脂质体的药物含量及包封率

目的：建立 RP-HPLC 法测定洛莫司汀-碘海醇复方脂质体中药物的含量及包封率。方法：使用 Diamonsil^TM（钻石）C₁₈ 色谱柱（200 mm × 4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈 - 水（65︰35）,柱温 25 ℃,体积流量 1.0 mL/min,检测波长为 230 nm,鱼精蛋白凝聚法分离游离药物,测定复方脂质体中洛莫司汀的含量及包封率;使用 Diamonsil ^TMC₁₈ 色谱柱（200 mm × 4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇 - 水（10︰90）,柱温 25 ℃,体积流量 1.0 mL/min,检测波长为 244 nm,鱼精蛋白凝聚法分离游离药物,测定复方脂质体中碘海醇的含量及包封率。结果：洛莫司汀与辅料及溶剂峰分离良好,在 1.0～20.0 μg/mL线性关系良好（r = 1.0, n = 5）,回收率为 99.0 %～101.0 %;碘海醇与辅料及溶剂峰分离良好,在 6.0～60.0 μg/mL线性关系良好（r = 0.999 9, n = 5）,回收率为99.0 %～101.0 %。结论：该方法准确、简单,可用于洛莫司汀-碘海醇复方脂质体含量及包封率的测定。     

正交试验优选石杉碱甲脂质体的制备研究

目的 优化石杉碱甲脂质体的制备工艺和处方。方法 采用薄膜分散结合硫酸铵梯度法制备石杉碱甲脂质体,以包封率为评价指标采用正交试验优化石杉碱甲脂质体的最优处方和工艺条件。结果 石杉碱甲脂质体的最优处方工艺条件为：孵化温度为60 ℃,药脂比为1∶40,孵化时间为30 min。所得脂质体的包封率为87.02%以上。结论 由最佳处方工艺条件制备的石杉碱甲脂质体包封率较高,包封率和体外释放稳定,重现性好。     

盐酸青藤碱多囊脂质体的制备及其释放特性研究

目的制备包封率较高且具有较好缓释性能的盐酸青藤碱多囊脂质体。方法用复乳法制备盐酸青藤碱多囊脂质体,以包封率和囊形为考察指标,采用均匀设计优选最佳处方和工艺,并考察其形状、粒径及体外释放性能。结果制得的盐酸青藤碱多囊脂质体包封率在80%以上,形状圆整,粒径较均匀,多数分布在20～30μm,体外释放符合Higuchi方程,释药t1/2为52.7 h。结论盐酸青藤碱多囊脂质体处方工艺稳定可行,包封率高且具有良好的缓释特性。     

硫酸铵梯度法制备槐定碱脂质体的研究

目的 对槐定碱脂质体的处方进行考察并优化。方法 硫酸铵梯度法制备槐定碱脂质体,采用单因素对影响包封率的处方因素进行初步筛选,以包封率、载药量及综合评价为指标,采用星点设计考察药物及硫酸铵浓度对制备工艺的影响,对结果进行多元线性和二项式拟合,效应面法选取最佳工艺条件进行预测分析。结果 从复相关系数上看,各指标二项式拟合方程均优于多元线性回归方程,根据优化工艺制得的槐定碱脂质体包封率为51.81%、载药量为5.39%。结论 优选的槐定碱脂质体制备工艺稳定可行。     

离心对不同层次脂肪移植成活率的影响*

目的 探究离心后不同层次脂肪的移植成活率,以便更好地指导临床应用。方法 选取新西兰兔腹股沟脂肪,按照Coleman方法离心脂肪,并将其分为上、中、下3层,每层各1 ml移植于背部皮下;3个月后,对移植物进行组织学观察、测量体积及CD31免疫组织化学染色。结果 下层脂肪移植物成活体积,血管密度及成活质量均高于上层和中层脂肪移植物（P?<0.05）,而中层和上层脂肪移植物成活体积、血管密度脂肪成活质量比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 按Coleman方法离心后的下层的脂肪成活率及成活质量较好,可以作为临床脂肪移植的理想选择。     

小鼠胰岛密度梯度离心方法的研究

目的探索最优的密度梯度离心方案,提高胰岛的纯度和得率,为胰岛移植相关研究奠定基础。方法采用雄性Balb／c小鼠作为供体分离胰岛,以0.5mg／ml胶原酶Xl灌注和消化胰腺,通过不同的密度梯度离心策略分离纯化胰岛,进行双硫腙（DTZ）特异染色法染色,显微镜下观察胰岛的纯度和得率,并通过吖啶橙（AO）／碘化丙啶（PI）染色检查分离获得的胰岛活性,最终确定最佳的密度梯度离心方法。结果Balb／c小鼠在Ficoll一1．108（4m1）、1．096（2m1）、1．069（2m1）、HBSS（2m1）,加速度1、减速度1、400r／min、4min中转1800r／min、8min离心后胰岛得率为（125±39）IEQ、纯度为（79．6±105）％,经相同条件二次梯度后得率无明显降低但纯度明显提高．达（96．2±14）％。经AO／PI染色鉴定分离胰岛活性良好。结论本研究所采用的小鼠胰岛密度梯度离心方法很有效,能稳定地获得纯度较高且数量可观的胰岛。     

梯度离心法分离、富集、纯化新生乳鼠心肌细胞

目的:探讨体外心肌细胞的分离与培养实验方法,建立研究心脏疾病的基础实验平台。方法:取新生小鼠心脏12只,利用胰酶和胶原酶双消化6次,利用percoll密度梯度离心法离心纯化分离细胞,贴壁培养1h,分离层纤维细胞,抗体标记分离后的心肌细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度。结果:分离新生小鼠的心肌细胞的纯度为91.3%。结论:本方法操作简单,获得心肌细胞的分离效率高,存活时间长。     

多步离心法提取K526细胞外泌体

目的:探讨多步离心提取K526细胞外泌体的实验方法.方法:选用白血病细胞株K562细胞为研究对象,取其培养上清液,经多步骤离心获取提取物,然后进行形态和蛋白成分分析.结果:形态和蛋白成分分析证实所提取到的物质正是K526细胞外泌体.结论:多步离心是一种方便实用的提取外泌体的方法.     

不离心直接上游法优化精子用于夫精宫腔内人工授精

目的：探讨不离心直接上游法优化精子前后精子动态与形态学主要参数的变化。方法：随机采用不离心直接上游和洗涤上游2种方法对90例患者130个夫精宫腔内人工授精周期前的精子进行优化,分析这2种方法优化精子前后精子动态与形态学主要参数变化的差异。结果：130个夫精宫腔内人工授精周期中,洗涤上游法70个周期,不离心直接上游法60个周期。2种上游法处理精液后,精子动态学主要参数与处理前比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,形态学主要参数与处理前比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,不离心直接上游法优化后精子的主要参数与洗涤上游法比较,差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论：不离心直接上游法优化精子可以选择应用于夫精宫腔内人工授精前精液的体外处理。     

密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞方法的优化

目的:对密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞的方法进行优化,以提高该方法分离骨髓单个核细胞的收率。方法:骨髓血40份,100 ml/份,分为常规组和优化组,每组20份。常规组骨髓与NS 1∶1混合稀释后,直接通过Ficoll分离液分离单个核细胞;优化组通过先将骨髓血洗涤一次,加入等量NS充分吹打混匀,200目筛网过滤,保持细胞悬液和Ficoll分离液1∶1的体积比进行分离操作。对每份分离得到的骨髓单个核细胞通过白细胞稀释液稀释后计数,计算单个核细胞的回收率。结果:常规组,分离后的白膜层有12份界面不清晰,同时均混有少量的红细胞。优化组,分离后的白膜层有3份界面不清晰,仅有极少的红细胞混入。两种方法收集的骨髓单个核细胞数比较,优化组多于常规组(P﹤0.01)。结论:通过对密度梯度离心法的步骤进行优化,可提高骨髓单个核细胞的分离效果。     

超速离心浓缩对提高血液NAT筛查不确定标本鉴别率的临床研究

目的探讨超速离心浓缩（简称超浓缩）血液标本中的病毒对提高三联检核酸筛查阳性、病毒含量低不能常规鉴别标本的可鉴别率。方法30份Roche COBAS s201核酸扩增检测系统筛选出的COBAS TaqScreen MPX HIV、HCV、HBV三项联检核酸阳性,但COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV、HCV及HBV定量试剂原倍鉴别结果均阴性的标本,进行4℃、24600g超速离心1h,浓缩富集病毒后,使用Roche公司的COBASAmpliPrep/COBASTaq-ManHIV、HCV及HBV定量试剂盒进行HIV、HCV及HBV鉴别试验,鉴别阳性的标本,超浓缩处理后用Novartis（原Chiron）公司的PROCLEIX ULTRIO试剂进行相应病毒的鉴别试验加以确证。结果30份RocheMPX核酸筛查阳性、鉴别阴性的标本,经4～10倍超浓缩处理后有23份标本被鉴别为HBV阳性,可鉴别率为76.7%。结论超浓缩处理可解决绝大部分核酸检测三联检阳性但鉴别未果的标本的病毒鉴别问题。     

离心造粒法和流化床包衣制备硫普罗宁肠溶微丸

目的:应用离心造粒法及流化床包衣制备硫普罗宁肠溶微丸,并对其性质进行考察.方法:采用国产离心造粒机制备硫普罗宁微丸,采用L9(34)正交设计实验优化工艺条件;用底喷流化床包衣设备,将微丸包肠溶衣,考察微丸的粉体学性质及不同包衣增重微丸的体外释放实验.结果:制得的硫普罗宁微丸圆整度好,大小均匀.20%包衣增重的微丸体外释...     

凝胶过滤法和离心法测定盐酸川芎嗪脂质体包封率比较

目的：比较凝胶过滤法和离心法测定盐酸川芎嗪脂质体包封率。方法：用葡聚糖凝胶Sephadex G-50装柱,分离盐酸川芎嗪脂质体和游离药物;另外用转速为15000r/min的高速离心机分离脂质体和游离药物,HPLC法测定盐酸川芎嗪药物浓度,计算包封率。结果：两种测定包封率的方法结果一致,没有显著性的差异（P〉0.05）。结论：可用离心法代替凝胶过滤法方便快速地测定盐酸川芎嗪脂质体包封率。     

促排卵联合PureceptionTM密度梯度法优选精子在AIH中的应用

目的:探讨促排卵联合PureceptionTM密度梯度法优选精子在AIH中的应用。方法:采用促排卵治疗后,用PureceptionTM密度梯度离心法处理精液,并将优选后的精子应用于AIH治疗周期。结果:精液处理后,精子密度由处理前(47.13±22.97)×109/L提高到(69.32±12.65)×109/L,活率由42.27±12.33%提高到83.20±10.21%,畸形精子率由62.42±23.12%降至38.28±17.24%,差异有显著性。59对夫妇共进行了113个AIH治疗周期,自然周期(33例)AIH妊娠率9.10%,促排卵周期(80例)AIH妊娠率15.00%,差异有显著性。结论:PureceptionTM密度梯度法是一种较好的精子优选方法,联合促排卵治疗可以获得获得较满意的AIH临床妊娠率。