纳米级白藜芦醇和白藜芦醇β-环糊精包合物生物利用度的比较研究

目的 通过检测给药后血浆中白藜芦醇的量,比较纳米级白藜芦醇和白藜芦醇β-环糊精包合物生物利用度的差异。方法 采用高效液相色谱法,测定给药后不同时间段大鼠血浆中白藜芦醇的质量浓度,使用3p97软件进行药动学参数模拟。结果 纳米级白藜芦醇药动学参数：AUC＝315.89 μg?min/mL,t_max＝21.71 min,C_max＝3.23 μg/mL;白藜芦醇β-环糊精包物药动学参数：AUC＝185.83 μg?min/mL,t_max＝40.44 min,C_max＝1.69 μg/mL。结论 纳米级白藜芦醇达峰时间短,且生物利用度明显高于白藜芦醇β-环糊精包合物。     

甘草酸和甘草次酸对芍药苷在大鼠体内药动学参数的影响

目的 研究甘草酸及其代谢产物甘草次酸对芍药中主要活性成分芍药苷在大鼠体内药动学特征的影响,探索芍药与甘草配伍用药的合理性。方法 大鼠单独ig给予芍药苷或分别与甘草酸、甘草次酸联合用药,于不同时间点采集血样,LC-MS测定芍药苷血药浓度,建立药物浓度-时间曲线,采用DAS2.1.1软件计算、分析药动学参数。结果 甘草酸能减小芍药苷C_max、t_max,降低芍药苷AUC;甘草次酸能增加芍药苷C_max、t_max,显著提高芍药苷AUC。结论 甘草提高芍药苷生物利用度可能与甘草酸的代谢产物甘草次酸的作用相关。     

杜鹃素在大鼠体内的药动学研究

目的 研究杜鹃素在正常大鼠体内的药动学特征。方法 杜鹃素单剂量ig给予大鼠后,采用HPLC法测定给药后不同时间点大鼠血浆中的杜鹃素,通过DAS软件程序模拟计算,得出杜鹃素在大鼠体内相应的药动学参数。结果 杜鹃素在大鼠体内的药动学模型符合二室模型,主要药动学参数为：t_1/2α＝（0.33±0.10）h,t_1/2β＝（15.22±8.98）h,CL/F＝（14.89±3.45）L/(h?kg),C_max＝（1.61±0.14）mg/L,T_max＝（0.25±0.01）h,MRT_(0-t)＝（2.35±0.08）h,AUC_(0-t)＝（3.06±0.16）mg?h/L。结论 本研究建立的HPLC方法专属性强,简便、准确,可用于杜鹃素在大鼠体内的药动学研究;大鼠ig给予杜鹃素后,其在血浆中分布较快,半衰期较短。     

丹酚酸B及其活性代谢产物在大鼠体内药动学研究

目的 建立了灵敏快速的同时测定大鼠血浆中丹酚酸B及其主要代谢产物丹参素的LC-MS/MS方法。方法 以氯霉素为内标,用醋酸乙酯萃取,色谱柱为Symmetry C₁₈柱,流动相为甲醇-乙腈-0.5%甲酸（55︰5︰40）,体积流量为0.4 mL/min。选用电喷雾电离（ESI）三重四极杆串联质谱仪,在负离子模式下以选择反应监测（SRM）方式进行检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 717→519（丹酚酸B）、m/z 197→135（丹参素）和m/z 321→152（氯霉素）。结果 在该测定条件下丹酚酸B、丹参素和内标物的保留时间分别为3.12、2.60、3.98 min。丹酚酸B的线性范围为10～5 000 ng/mL,r＞0.995;丹参素的线性范围为5～5 000 ng/mL,r＞0.995,丹酚酸B和丹参素定量限分别为10、5 ng/mL。批内、批间精密度（RSD）均小于12.6%。大鼠ig给予丹酚酸B后,迅速吸收并逐渐转化成丹参素,丹酚酸B和丹参素的C_max分别为（1.21±0.31）、（0.27±0.05）μg/mL,t_max分别为（0.50±0.00）、（0.56±0.18）h,t_1/2分别为（1.20±0.11）、（1.57±0.16）h,AUC_0～t分别为（1.31±0.30）、（0.39±0.05）μg·mL^?1·h。结论 本方法可用于大鼠ig丹酚酸B后的血浆中丹酚酸B及其代谢产物丹参素药动学研究。     

RP-HPLC法测定固公果中蔷薇酸和委陵菜酸

目的：利用RP-HPLC方法测定彝族药物固公果中蔷薇酸、委陵菜酸的量。方法：采用Ultimatex B-C₁₈（美国Welch公司,150 nm × 4.6 mm,5 μm）色谱柱,以甲醇-1.5%磷酸水溶液（33︰67）为流动相,体积流量1.0 mL/min,检测波长210 nm。结果：固公果中蔷薇酸与委陵菜酸能得到很好的分离。测定线性范围分别为：蔷薇酸77.4～774.3 μg/mL,r＝0.999 9;委陵菜酸54.7～546.9 μg/mL,r＝0.999 9。蔷薇酸平均回收率为102.5%（n＝9）,委陵菜酸平均回收率为103.7%（n＝9）。结论：该法便捷、灵敏、准确,重复性好,可以控制该药材的质量。     

甘草次酸-丹参酮IIA复方脂质体处方优化及制备工艺研究

目的 研究甘草次酸（GA）-丹参酮II_A（Tan II_A）复方脂质体（GT-Lip）的制备工艺。方法 以大豆卵磷脂（SPC）和胆固醇（Ch）为膜材,薄膜分散探头超声法制备GT-Lip。通过单因素考察确定水合温度和探头超声功率,正交设计法优化处方工艺;低速离心法测定脂质体中GA与Tan II_A包封率,动态光散射粒径仪测定脂质体粒径与Zeta电位,透射电镜测定脂质体形态。结果 优化处方工艺为SPC-Ch质量比6∶1,SPC-Tan II_A物质的量之比30∶1,SPC-GA物质的量之比24∶1,水合温度为30 ℃,探头超声条件为380 W超声5 min;制备得到的GT-Lip中Tan II_A、GA的包封率分别为（81.50±0.76）%、（98.63±0.90）%（n＝3）,平均Zeta电位为（?19.00±0.98）mV（n＝3）,平均粒径为（120.5±1.62）nm（n＝3）。结论 优化的GT-Lip制备工艺稳定可行。     

HPLC-MS法测定附桂骨痛胶囊中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱

目的 建立测定附桂骨痛胶囊中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的HPLC-MS分析方法。方法 采用HPLC-MS,色谱柱为Polaris C₁₈-A柱（50 mm×2.0 mm,5 μm）,流动相为甲醇-水（90∶10）,体积流量0.2 mL/min,质谱检测采用电喷雾电离源,正离子方式检测。结果 新乌头碱、乌头碱和次乌头碱分别在0.464～3.944 μg/mL（r＝0.999 6）、81.6～816 ng/mL（r＝0.999 4）、0.482～6.748 μg/mL（r＝0.999 7）线性关系良好,平均回收率分别为98.8%（RSD 3.1%）、98.1%（RSD 3.3%）、98.4%（RSD 3.3%）（n＝6）。结论 该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可以为附桂骨痛胶囊的质量控制提供科学依据。     

乙酰葛根素在大鼠体内的药动学研究

目的 考察乙酰葛根素ig和iv给药后葛根素在大鼠体内的药动学特征。方法 大鼠ig给予400 mg/kg或尾iv给予160 mg/kg乙酰葛根素。采用高效液相色谱（HPLC）法检测血浆样品中葛根素。结果 乙酰葛根素在大鼠体内代谢为葛根素,葛根素药动学过程符合二室模型,主要药动学参数：ig给药葛根素AUC_0～∞为（44.76±4.13）mg?h?L^?1,iv给药葛根素AUC为（36.67±5.3）mg?h?L^?1,ig给予乙酰葛根素后大鼠体内葛根素的暴露水平（生物利用度）为48.12%,ig给药的C_max为（12.07±0.15）μg/mL,t_max（1±0.33）h,t_1/2为（2.52±0.21）h。结论 HPLC法可作为乙酰葛根素在大鼠体内药动学的检测手段,ig乙酰葛根素后,葛根素在大鼠体内的暴露水平得到显著提高。     

复方烟酸辛伐他汀双层缓释片的制备及Beagle犬体内药代动力学

以烟酸和辛伐他汀为模型药物制备复方双层缓释片,并评价其体外释放特性。采用双周期双交叉给药方案,LC-MS/MS法同时测定自制制剂和市售制剂中烟酸和辛伐他汀的血药浓度,对6只Beagle犬进行了药代动力学和生物利用度的初步研究。自制制剂和市售制剂给药后烟酸的c_max分别为（6.43±0.80）和（6.38±0.47）μg/mL,t_max分别为（2.80±1.00）和（2.50±1.00）h,AUC分别为（30.16±4.51）和（27.49±4.04） μg·h/mL;辛伐他汀的c_max分别为（38.65±1.71）和（40.54±2.33）ng/mL,t_max均为（1.50±0.40）h,AUC分别为（118.76±11.83）和（115.76±5.46）ng·h/mL。结果表明两种制剂中烟酸和辛伐他汀的AUC,c_max和t_max都等效,说明自制制剂和市售制剂在Beagle犬体内具有生物等效性。     

水飞蓟宾过饱和自微乳给药系统在大鼠体内的药动学研究

目的 研究水飞蓟宾过饱和自微乳给药系统（S-SMEDDS）在大鼠体内的药动学特征。方法 12只雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,对照组大鼠ig给予水飞蓟宾自微乳（SMEDDS）533 mg/kg,实验组大鼠ig给予水飞蓟宾-S-SMEDDS 533 mg/kg。采用Accusampler清醒动物自动采血装置于不同时间点采血,HPLC法测定大鼠ig水飞蓟宾- S-SMEDDS后水飞蓟宾的血药浓度,非房室模型的统计矩分析方法计算药动学参数。结果 对照组和实验组的t_max分别为（1.00±0.40）、（1.50±0.84）h,C_max分别为（5.68±0.52）、（16.10±4.06）μg/mL,AUC_0→t分别为（27.30±3.29）、（82.64±12.36）μg?h?mL^?1。结论 将水飞蓟宾制成S-SMEDDS可进一步提高其口服生物利用度。     

青枯菌诱导广藿香防御相关酶同工酶分析

目的 研究青枯菌诱导广藿香的致病过程及防御相关酶同工酶的动态变化。方法 利用青枯菌粗毒素诱导广藿香试管苗,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对诱导植株中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）同工酶谱带的变化进行分析。结果 青枯菌诱导1～7 d后的广藿香植株,表现渐进的发病过程,开始时,植株失绿、少数叶片萎垂;逐渐植株茎杆弯曲、整株叶片萎蔫。同工酶电泳分析表明,SOD同工酶在第1、3天时分别出现了新谱带,与对照共有的谱带,强度先增后减;CAT同工酶在第3、5天时分别出现新谱带,第6天时强度达到最大;POD同工酶在第1、4天时分别出现了新谱带,强度先增后减,第7天时所有谱带消失。结论 青枯病的发生呈现渐进的过程。青枯菌诱导1～7 d,广藿香SOD、CAT和POD同工酶谱带在数目和强度上均有所不同,呈动态变化,表明SOD、CAT和POD在广藿香抵抗青枯菌入侵时可能起到较为重要的作用。     

转双价抗虫基因 Bt-CpTI 提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 CryIA(c) 和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 CpTI 共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法 构建了以 CaMV 35S 为启动子,新霉素磷酸转移酶 (Npt-Ⅱ) 为选择标记,带有 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因的植物表达载体 pGBI121S4ABC 并转入根癌农杆菌 LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经 PCR 和 Southern 杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果 T₀ 代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到 16.67%。Southern 杂交检测结果表明外源 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论 转双价抗虫基因 Bt-CpTI 是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。     

单叶蔓荆种子休眠特性研究

目的 研究单叶蔓荆种子休眠的原因及解除休眠的方法。方法 以单叶蔓荆的果实（蔓荆子）为材料,用石蜡切片法研究单叶蔓荆种子形态解剖学特点,通过种子吸胀和抑制物测试研究其休眠原因,采用浓硫酸和赤霉素（GA₃）处理打破种子休眠。结果 打破单叶蔓荆种子休眠的方法为GA₃处理,解除休眠的最佳方法为浓硫酸处理15 min,1.0 mg/mL GA₃浸种18 h,蛭石培养床30 ℃恒温培养能够达到发芽率78.7%。结论 蔓荆具有坚硬厚实的果皮,机械束缚是休眠的主要原因;果皮中含有萌发抑制物质,GA₃处理可有效解除单叶蔓荆种子的生理休眠。     

百蕊草种子适宜萌发条件的研究

目的 研究百蕊草种子萌发的适宜条件。方法 用光照培养箱人工培养的方法研究百蕊草种子萌发适宜条件。结果20～25 ℃的黑暗环境中百蕊草种子萌发率达72.5%～75%,且幼苗生长健壮;其寄主白茅根系分泌物可促进百蕊草种子萌发,萌发率可达76.67%。结论 百蕊草种子萌发的适宜条件为20～25 ℃的黑暗环境,寄主白茅根系分泌物可促进百蕊草种子萌发,提高发芽率。     

广西不同产区两面针HPLC指纹图谱研究

目的 采用高效液相色谱法建立两面针的HPLC色谱指纹图谱分析方法,为其品质控制提供可靠依据。方法 采用HPLC-UV分析两面针的指纹图谱。色谱柱：Ultimate^TMXB C₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为水（0.2%磷酸＋0.2%三乙胺）（A）-乙腈（B）,梯度洗脱：0～5 min,8%～12% B;5～7 min,12%～15% B;7～14 min,15%～21% B;14～35 min,21%～25% B;35～40 min,25%～36% B;40～60 min,36%～52% B;60～80 min,52%～100% B;80～95 min,100% B;体积流量1.0 mL/min;柱温 35 ℃;检测波长 250 nm,测定24批两面针指纹图谱,应用相似度分析、系统聚类分析,对两面针进行分类研究。结果 在色谱指纹图谱中,确定了22个共有峰,根据相似度分析、系统聚类分析的结果,将24批药材分为2类。结论 该指纹图谱检测方法方便,重现性好,可用于两面针质量控制。     

枸杞多酚提取物中总多酚的测定

目的 建立紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中的总多酚。方法 采用紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中总多酚,用水稀释样品,加入显色剂Filin-Ciocalteu试剂,在760 nm处测定吸光度,用同样方法测定并绘制标准曲线。结果 紫外分光光度法测定枸杞多酚提取物中总多酚的量分别为24.03%、26.38%、25.45%、28.27%、29.08%,线性范围1～8 μg/mL,R²＝0.999 5。平均回收率为103.5%,RSD＜5%。结论 该方法操作简单,准确可靠,适于枸杞多酚提取物中总多酚的测定。     

不同比例制川乌配伍甘草对单酯型生物碱煎出量的影响

目的 研究制川乌配伍甘草对制川乌中多种单酯型生物碱煎出量的影响,探索其变化规律,以指导制川乌与甘草的合理配伍。方法 HPLC法测定制川乌与甘草不同比例配伍时煎出液中单酯型生物碱的总量,并通过对比,分析不同配比对煎出量的影响。结果 随着甘草配伍量的增加,煎煮液中单酯型生物碱总量逐渐降低,每种单酯型生物碱煎出量趋于单煎液煎出量的40%。结论 甘草配伍制川乌时,甘草的使用量应是制川乌的一半以上,既可以保证煎出液中单酯型生物碱总量稳定可控,又可以防止制川乌毒性过大造成使用危险。     

羊耳菊花的化学成分研究

目的 研究羊耳菊花Inula cappa的化学成分。方法 采用系统溶剂提取法结合各种色谱分离技术、理化性质和光谱数据鉴定结构。结果 从羊耳菊花中共分离得到10个化合物,分别鉴定为木栓酮（1）、乙酸羽扇豆醇酯（2）、豆甾醇（3）、ineupatorolide B（4）、cleomiscosin C（5）、木犀草素（6）、3, 4-二羟基苯甲酸（7）、芹菜素（8）、fortuneletin（9）、luteolin 4′-methyl ether（10）。结论 化合物2、4、5、7、9、10为首次从该植物中得到。     

土茯苓内生芒果球座菌的次级代谢产物及其抗肿瘤活性研究

目的 研究土茯苓内生芒果球座菌Guignardia mangiferae的次级代谢产物及其抗肿瘤活性。方法 采用硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱和制备薄层色谱等色谱技术进行分离纯化,通过现代波谱技术进行结构鉴定;以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460为供试细胞株,采用SRB法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究。结果 从土茯苓内生芒果球座菌的100 L液体发酵提取物中分离得到12个化合物,经波谱数据分析鉴定其中10个化合物,分别为15-hydroxyl tricycloalternarene 5b（1）、guignardiaene D（2）、guignardiaene C（3）、guignardone A（4）、guignardone B（5）、3-(4-甲苯氧基)-丙酸（6）、2, 4-壬二醇（7）、麦角甾酮（8）、酪醇（9）、对羟基苯甲醛（10）。杂合萜类化合物1～5对SF-268细胞具有选择性的抑制作用,化合物6、7对MCF-7细胞具有选择性的抑制作用。结论 化合物6～10均为首次从该属真菌中得到,其中化合物6、7为新的天然产物。     

KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制研究

目的 研究克雷伯菌属对亚胺培南耐药机制以及KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制。方法 收集四川大学华西医院两个阶段（2009～2010年和2012～2013年）分离的对亚胺培南耐药的克雷伯菌属细菌。琼脂稀释法测定亚胺培南最低抑菌浓度(MIC),CARB ChromID平板和改良Hodges试验检测碳青霉烯耐药表型,PCR检测细菌的KPC-2基因表达。质粒接合试验检测质粒传播性。随机引物扩增多态性DNA（RAPD）方法和肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）技术分别用于分析质粒和菌株的同源性。结果 第一阶段筛选并确证耐亚胺培南的3株产酸克雷伯菌首先获得碳青酶烯类抗生素耐药性,第二阶段筛选并确证耐亚胺培南的7株肺炎克雷伯菌出现相同的获得性耐药。PCR显示10株细菌均携带KPC-2型基因。质粒接合试验显示产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因的质粒可以传递到受体菌,且与KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌中携带的质粒具有同源性。ERIC-PCR结果显示7株KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌具有同源性。结论 四川大学华西医院分离的对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌主要耐药机制是产生KPC-2型碳青霉烯酶。产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因质粒,该质粒具有传递性且与肺炎克雷伯菌携带质粒相同。肺炎克雷伯菌中耐药株的传播形式为同一克隆传播,而在克雷伯菌属中不同菌种间耐药传播途径为同一质粒的水平传播。