水体中病毒的三种浓缩方法及其效果比较

目的 比较水体中病毒的三种浓缩方法,评价各方法的浓缩效果,为水体中病毒浓缩方法的选择提供依据.方法 将不同浓度的指示病毒(脊髓灰质炎病毒1型PV1)加入经高压灭菌处理后的污水处理厂二级出水中,采用钙离子法、牛肉汤洗膜法和载阳电荷滤料法对水样分别进行浓缩,采用逆转录-PCR技术检测灵敏度,观察指示病毒的某一特征基因片段P...     

两种方法浓缩污水水样及HBV-DNA基因探针检测

采用滑石粉-硅藻土浓缩法和Al_2(SO_4)_3·18H_2O浓缩法,浓缩某医院经处理的污水水样,并用基因探针检测该污水水样中的乙型肝炎病毒。将污水水样浓缩液点在硝酸纤维素膜上,再用HBV-DNA基因探针进行杂交。经放射自显影,结果表明,用Al_2(S0_4)_3·18H_2O浓缩法浓缩的经处理污水水样中发现有乙型肝炎病毒存在,其阳性率为50％;而用滑石粉-硅藻土浓缩法浓缩的经处理污水水样中未发现有乙型肝炎病毒。     

关于浓缩水中病毒时影响病毒回收率问题的初步探讨

本文用4种方法浓缩人工污染病毒的污水,通过病毒回收试验对影响病毒回收率及其稳定性的若干因素进行了探讨。结果表明,影响是多因素的。即或使用同一种浓缩方法,所用洗脱剂和洗脱条件对病毒回收率的影响极大;样品中病毒浓度影响到浓缩时的吸附效果,当然也影响到回收率,而病毒粒子团块的发生与打碎都是使病毒回收率不稳定的因素。这些结果提示我们选择和改进现有水病毒浓缩方法的一些途径,但也展示出稳定病毒回收率的艰巨性。     

皂土浓缩水病毒及其影响因素的探讨

生活污水中的人类病毒是其社会分布的反映，水中病毒的检测是病毒性传染病监测的一个重要方面。早在50年代，国外就开始此项研究[1]。我国近10多年来仅在少数单位开展，而皂土法浓缩污水尚未见正式报导。本文采用皂土为吸附剂，对实验性污染的污水进行浓缩，并对其影响因素进行探讨。1材料与方法1．1材料污水用无菌器具采集福州市区生活污水，4C静置过夜，次日取上清高压灭菌，将PH凋至7．2。病毒采用脊髓灰质炎病毒1型（PI）疫苗株作为实验性污染的病毒。病毒投放前先进行3次滴定，平均滴度为10’TCD50／0．lml。细胞使用本室保种或制…     

水中大肠埃希菌f2噬菌体反冲超滤装置浓缩效果评价

水环境中存在100多种威胁人类健康的血清型病毒,因饮用水污染病毒引起传染病的暴发流行屡见不鲜[1],受到广泛关注.自然水体特别是饮用水中,病毒含量极低,病毒的浓缩成为检测水病毒的关键.大肠杆菌噬菌体f2噬菌体属无包膜单链RNA病毒,直径为22 ～ 26 nm[2],其物理、化学性质及对外界环境耐力与脊髓灰质炎病毒等相似,检测方法简便,对人不致病.已有人建议将f2噬菌体作为肠道病毒的指示物[3-4].浓缩水体病毒方法多样,其中超滤法可用于污水处理、制备纯水和实验室病毒浓缩[5],但鲜见于大体积地表水的病毒浓缩.本实验采用直径10 nm的超滤膜,建立反冲式闭路浓缩系统,进行f2噬菌体回收实验并评价浓缩效果,旨在建立一种适用于地表水、饮用水的病毒浓缩方法.     

南宁市朝阳溪污水中诺如病毒污染状况分析

目的了解南宁市朝阳溪污水中诺如病毒污染状况。方法 2011年1-12月采集72份南宁市朝阳溪污水,用混合纤维素膜吸附法吸附病毒和聚乙二醇(PEG)沉淀法浓缩病毒后,经实时荧光逆转录-聚合酶链(Real-time RTPCR)方法进行NV核糖核酸(RNA)检测。结果全年采集72份污水中,诺如病毒核酸阳性率为100.00%,其中基因Ⅰ组阳性数为51份,阳性率为70.83%,基因Ⅱ组阳性数为72份,阳性率为100.00%。基因Ⅰ组冬春季检出率高于其他季节,基因Ⅱ组检出率无季节差异。结论南宁市朝阳溪污水中存在基因Ⅰ组和Ⅱ组诺如病毒污染,检出率高的季节与相关NV引起的腹泻高发季节报道相一致,污水中诺如病毒的监测是人群监测手段的重要补充。     

居住城市污水排放源上下游居民病毒性肝炎发病关系的比较

乙型肝炎是一种传染途径广泛,传播方式复杂的传染病而且乙肝病毒及HBSAG抗理化因素有很强的能力。张平镳等用酶联免疫吸附试验检测了经滑石粉硅藻土方法浓缩处理的环境污水中检出乙型肝炎病毒表面抗源(HBSAG)。尤其是从医院流入排水沟的污水中检测到了乙肝病毒。我们假设以县城为污水排放源,为了解居住县城上下游居民病毒性肝炎发病率是否有差别,对两个不同区域居住的居民病毒性肝炎发病情况进行了统计比较,经统计学处理,结果有明显差异。结论认为,居住下游居民病毒性肝炎发病率高于上游居民的     

水样中病毒浓缩和回收

近年来,由于水污染的加剧,病毒污染引起的水源性疾病正在增多,已经引起人民的广泛关注。即使很少量的病毒颗粒亦可致病。目前各种水样微生物学质量控制主要是通过常规监测粪大肠菌群和大肠埃希菌这样的细菌指示物来实现的,然而大多数观点表明环境水样中细菌和病毒污染水平并不相关,因而建立饮用水中病毒学监测指标十分必要。由于水样中只有少量病毒颗粒存在,进行水样检测前必须浓缩水样中的病毒。水中病毒的检测除了要有准确、灵敏的检测方法外,水中病毒的浓缩与回收的效率亦是决定病毒检测成败的关键。目前水样中病毒浓缩的方法很多,本文对常用的浓缩回收方法作一综述,并对各个浓缩回收方法的优缺点作一评价。     

用磁性氧化铁法检测饮用水中的病毒

在印度最大的污染问题是含有人类肠道病毒的生活污水排入水源,下游居民将这种污染了病毒而未经处理的水作为饮用水,从而发生疾病的流行。在城市则主要是由于间歇性供水,使停水时配水管道中产生负压,有可能使污水通过管道渗漏处进入配水系统,造成交叉污染,导致在印度不断发生传染性肝炎等的流行。基于上述原因,本实验研究了在50～100升水中检出少量病毒的较简单而灵敏的方法,即用磁性氧化铁作为吸附剂浓缩水中的病毒。在脱氯的水样中加入脊髓灰质炎Ⅰ型病毒,用该法检验时回收率为60～80%。其操作过程     

水及水产品诺如病毒快速检测技术研究

目的:进行水中病毒富集和水产品前处理方法的研究,以确定水及水产品诺如病毒快速检测技术。方法:不同水中病毒的浓缩富集方法,不同水产品前处理方法,通过荧光PCR检测比较效果,同时检测实际样本的诺如病毒。结果:两步浓缩法浓缩水中病毒效果比PEG沉淀法好,而两种水产品前处理方法相近,实际样本检测诺如病毒均为阴性。结论:确定了水和水产品诺如病毒快速检测技术,为水系和水产品诺如病毒监测提供依据。     

医院污水中SARS冠状病毒核酸的检验

目的　了解收治SARS病人的定点医院污水中是否含有病毒和病毒核酸。方法　采用载阳电荷滤材吸附浓集污水中的SARS冠状病毒 ,消毒前浓集污水 2 5L ,消毒后 2 5～ 5 0L ;采用VERO细胞培养及RT -PCR技术检测SARS冠状病毒。结果　建立的阳电荷浓集方法对污水中加标f2 噬菌体回收率平均 12 7% ,而SARS冠状病毒回收率只有 1 0 2 %。消毒前在 30 9医院和小汤山医院污水的6d监测中均检测出SARS冠状病毒核酸 ;消毒后 ,在 30 9医院只有 3d监测出病毒核酸 ,其余样品均未检出病毒核酸 ;两医院所有的污水回收液中均未检出活病毒或具有感染性的病毒。结论收治SARS病人医院污水中含有SARS冠状病毒核酸 ,但没有检出活病毒或具有感染性的病毒 ,因此 ,在当时条件下 ,医院污水 ,尤其是消毒后污水传播SARS冠状病毒可能性较小。     

应用套式PCR技术从污水及淤积海水中检出甲型肝炎病毒RNA

水传甲型肝炎暴发或流行时水样中甲型肝炎病毒(ＨＡＶ)的检测,一直是困扰人们的问题。水中ＨＡＶ的浓度很低,不能直接检出,需将大量水样浓缩后才能进行检测。水中病毒的浓缩方法有很多种,如滤膜吸附、阳电荷滤材等方法,各有其优缺点。目前还没有一种方法能达到人们的理想需求〔1〕。为此,我们利用现有的实验室条件,分别采用ＰＥＧ-ＮａＣｌ沉淀及石英粉滤柱法浓缩水样,并应用灵敏度较高的套式ＰＣＲ技术,从营口鲅鱼圈医院污水及淤积海水中检出了ＨＡＶＲＮＡ,现将结果报告如下。材料与方法　(1)水样的采集:1999年6月在营口鲅鱼圈地区采集了…     

检测水中病毒方法的评价——浓缩系统

过滤吸附-洗脱法是使用滤器浓缩水中低浓度病毒的最普通的方法,这种方法可检测大体积的水。但是,得到洗脱液的体积仍比较大,需要进行第二次浓缩。为此,本文评价了用来检测接种于自来水和河水中2型脊髓灰质炎病毒的两种玻璃纤维滤器和一种纤维素滤器以及用作第二次浓缩的有机絮凝技术,目的在     

污水提取物致突变性研究(综述)

本文综述了近年来研究污水有机化合物的致突变性问题。着重介绍了污水致突物的各种浓缩方法,说明了用Ames试验检测污水提取物致突变性的可行性以及污水致突物在土壤中降解的可能性。     

几种水处理方法对污水中病毒清除作用的评估

目的评估不同水处理方法(沉淀过滤法、超滤法、臭氧消毒法、氯消毒法)对病毒的清除效果。方法在污水中人为添加定量的柯萨奇病毒作为病毒指示剂，采用不同的水处理方法处理污水，以细胞培养法，细胞半数致死剂量(TCID50)为检测指标，检测各种水处理方法对柯萨奇病毒的清除效率。结果臭氧消毒法对病毒清除最为有效，其次为沉淀过滤法与超滤法，氯消毒法效果不明显。结论对污水中病毒的清除不能采用单一工艺，需多种工艺互补才能有效清除病毒。     

用带阳电荷的滤器从废水处理厂流出水中检测病毒

用带阳电荷的滤器浓缩自来水和饮用水中的病毒已有报道。本文目的是试验带阳电荷的滤器在浓缩废水处理厂流出水中的病毒效能,并用这一方法监测了两个废水处理厂的活性污泥流出水中的肠道病毒。在Florida大学污水处理厂和Gainesville污水处理厂(氯化消毒之前)的出口采集活性污泥流出水(activated sludge effluent)。19升水样品用Ⅰ型脊髓灰质炎病毒(LSC病毒株)或柯萨奇B 3型病毒接种,通过直径为273 mm的Zeta Plus滤膜(置于Plexiglas滤器中)过滤,流率为5升/分。吸附于滤膜表面的病毒用400 ml 4 M尿素-0.05 M赖氨酸(pH9)通过滤膜洗脱,洗脱剂与滤膜接触时间约为30秒     

有机絮凝法浓缩水中埃柯7型和柯萨奇A9型病毒的效果

Katzenelson等曾报道,吸附-牛肉浸液洗脱法和有机絮凝法(Organic flocculation)最适于检测饮用水中的脊髓灰质炎病毒。本文报告了这种两步法浓缩饮用水中的非脊髓灰质炎肠道病毒的效果。选择污水中常见的Echo 7和Cox A9代表     

荧光定量PCR检测GⅡ型扎幌样病毒方法的建立

[目的]建立贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。[方法]通过用PEG6000对贝类中GⅡ型扎幌样病毒进行浓缩,用Trizol法提取病毒RNA,设计出针对GⅡ型扎幌样病毒保守序列的通用引物与探针,建立GⅡ型扎幌样病毒荧光定量PCR检测方法。[结果]此荧光定量PCR方法对贝类中GⅡ型扎幌样病毒检测呈现高度特异性,与诺瓦克样病毒、GⅠ型扎幌样病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝/μl,线性范围为102～106拷贝,标准曲线的相关系数为0.9993。[结论]本研究建立了贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。     

贝类中诺如病毒检测方法的优化

目的优化贝类中GⅡ型诺如病毒(No V GⅡ)的检测方法。方法用No V GⅡ人工染毒贝类样本,分别比较曲通X-100缓冲液(KNT)、Tris/甘氨酸/牛肉膏(TGBE)缓冲液、甘氨酸缓冲液、脱脂牛奶、磷酸盐缓冲液(PBS)、PBS-吐温80缓冲液和大豆蛋白缓冲液的洗脱效果以及PEG沉淀法、超滤法和膜吸附法3种浓缩方法的回收效果,并采用实时荧光RT-PCR方法进行检测,最后运用优化后的方法对诺如病毒污染的贝类各组织的病毒含量进行检测,以确定最佳检测部位。结果实时荧光RT-PCR结果表明,人工染毒后的贝类样品采用KNT缓冲液洗脱,再用PEG沉淀法浓缩,回收率最好,达18.95%;诺如病毒在贝类中的分布主要集中于进出水口、鳃和消化腺。结论贝类海产品中诺如病毒的检测建议取贝类的进出水口、鳃和消化腺,用KNT缓冲液洗脱、PEG沉淀法浓缩,实时荧光RT-PCR进行检测,以提高检测率。     

水中诺如病毒浓缩与应急检测研究

目的探索适合于基层实验室开展的水中诺如病毒浓缩与应急检测的方法,评估钙离子法对水体中诺如病毒的富集效果及检测灵敏度,为水源性诺如病毒突发疫情的病原检测提供可靠的检测数据。方法将不同浓度的指示病毒(GⅡ型诺如病毒)加入到不同水样中,用钙离子法进行富集,用荧光定量PCR检测,根据富集前后的病毒浓度,评估方法的回收率;根据不同梯度的检测值,评估方法的灵敏度。同时制备不同的模拟水样进行荧光定量PCR检测。结果钙离子法的平均回收率为81.6%,检测灵敏度为模拟样本中病毒浓度为10 copy/μl。而10份不同模拟水样荧光定量PCR检测阳性9份。结论钙离子法浓缩水样中的诺如病毒,回收率与灵敏度均较高,操作简单;同时,荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点,适用于基层实验室开展水体中诺如病毒的应急检测。