缺血后处理对大鼠肾脏缺血再灌注后肾小管上皮细胞超微结构的影响

目的:观察缺血后处理对大鼠缺血再灌注后肾小管上皮细胞超微结构的影响.方法:将24只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血后处理组(IPO组),每组8只.分别建立动物模型.IR组在同时夹闭双侧肾动脉45 min后恢复血供,IPO组在肾缺血45 min后采用反复10次再灌注20 s-缺血20 s的后处理方法.恢复血供24 h后留取各组大鼠肾组织标本,在透射电镜下观察肾小管上皮细胞超微结构变化,分别计算微绒毛、细胞器、细胞核的超微病变指数.结果:IR组大鼠肾小管上皮细胞表现出不同程度的变性、坏死、崩解,IPO组大鼠肾小管上皮细胞可见变性、凋亡,较少见坏死及崩解.对病变指数分析提示,其微绒毛、细胞器、细胞核等超微结构改变均较IR组轻.结论:缺血后处理可以减轻缺血再灌注后肾小管上皮细胞的损伤,减少细胞坏死,稳定线粒体等细胞器结构,从而减轻急性肾脏IR损伤.     

用改进TA-Fe法同时显示脊髓微血管及神经组织细胞

目的：镜下观察改进TA-Fe法同时显示大鼠脊髓微血管和神经元的效果。方法：改进TA-Fe法，以TA-Fe法媒染脊髓微血管，以苏木精或HE法复染神经组织细胞。结果：脊髓微血管和各种细胞均得到了良好的显示。不同部位血管的微密度不同，血管密集区神经元丰富，神经细胞散在部位血管稀疏。结论：改进TA-Fe法可同时显示脊髓微血管和神经组织细胞，并直观地展示了两者之间的相互关系，是一种研究缺血性中枢神经系统疾病的新方法。     

TA-Fe法媒染卵巢内微血管的光镜观察

目的:光镜下观察大鼠卵巢各部位微血管的分布.方法:应用单宁酸媒染固定液灌流大鼠,取卵巢作冰冻切片,氯化铁呈色显示微血管.结果:卵巢髓质内可见较粗大,密集的不同切面的血管.其分支进入皮质,皮质血管较少,分布在卵泡周围、大卵泡膜、间质腺及黄体内.卵泡膜毛细血管呈网状,黄体血窦似肝小叶血窦样分布.结论:TA-Fe法可清晰地显示卵巢微血管,为研究卵巢的血供提供了一种新方法.     

睾酮对雌性小鼠肾脏酶细胞化学的影响

目的观察大剂量睾酮对雌性小鼠肾脏酶细胞化学的影响。②方法应用电镜细胞化学方法，观察了大剂量睾酮对雌性小鼠肾小管上皮细胞线粒体标志酶（细胞色素Ｃ氧化酶）和质膜标志酶（Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶）活性的影响。③结果对照组小鼠近端和远端小管上皮细胞内细胞色素Ｃ氧化酶活性呈高电子密度，睾酮组小鼠近端及远端小管上皮细胞内线粒体的细胞色素Ｃ氧化酶活性明显减弱，电子密度降低，其远端和近端小管上皮细胞的质膜内褶处Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性明显减弱。④结论大剂量睾酮可引起肾小管上皮细胞超微结构的改变，以及与能量代谢等功能有关的酶活性减弱     

结蛋白的纯化、抗体的制备及免疫组织化学鉴定

参考Small和Geisler两法加以改进。从鸡肫中提取纯化结蛋白,用淋巴结内微量注射法制备兔抗结蛋白抗体。用免疫组织化学染色法(PAP法)对抗结蛋白抗体作鉴定。结果:心肌、骨骼肌、平滑肌(除主动脉平滑肌)呈强阳性反应;胆管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞、远端肾小管上皮细胞、汗腺分泌部上皮细胞部分呈弱阳性反应。     

氯化汞中毒对大鼠肾小管上皮细胞 氯化汞中毒对大鼠肾小管上皮细胞碳酸酐酶活性的影响

目的研究氯化汞对肾小管上皮细胞碳酸酐酶活性的影响,探讨组织细胞化学方法在研究汞中毒的价值.方法用改良的Hansson法通过电镜观察碳酸酐酶反应颗粒的改变。结果汞中毒引起肾小管上皮细胞超微结构变化及定位于近曲小管刷状缘质膜、内吞泡膜、线粒体被膜和远曲小管上皮细胞线粒体被膜上碳酸酐酶活性下降.结论汞中毒明显抑制肾小管上皮细胞碳酸酐酶活性,细胞组织化学方法为研究汞中毒提供了可行的研究方法.     

异体恒河猴视网膜色素上皮细胞移植探讨

目的 观察供体视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)在视网膜下腔生长情况,为视网膜色素上皮细胞移植的临床应用提供实验基础.方法 体外获取恒河猴视网膜色素上皮细胞经传代培养至第3代,用5-溴脱氧尿嘧啶标记后经外路将供体色素上皮细胞移植到受体恒河猴视网膜下腔,用光镜和电镜观察移植细胞的存活情况.结果 供体细胞在受体视网膜下腔形成有极性的单细胞层,贴附于Brueh膜上,并形成微绒毛和基底内褶,细胞内可见吞噬体.结论 外路法是一种切实可行的视网膜色素上皮移植方法,移植后的细胞可存活并恢复正常的结构和功能.     

高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

目的探讨高血糖对人肾小管上皮细胞活性氧（ROS）产生及凋亡的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞（HKC）分别以不同时间在含有5.5 mM D（右旋）-葡萄糖（正常糖对照组）、25 mMD-葡萄糖（高糖组）和20 mML（左旋）-葡萄糖＋5.5 mMD-葡萄糖（渗透压对照组）的DMEM培养基中培养。用化学发光法特异性检测细胞内H2O2水平。将细胞用荧光染料CM-H2DCFDA标记后用激光共聚焦显微镜检测活细胞中总ROS水平。用荧光染料Hoechst33258对细胞染色后在荧光显微镜下计数细胞凋亡率。用AnnexinV-FITC/碘化丙锭双染后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。在高糖组中同时加入30 mM的抗氧化剂牛磺酸,观察其对细胞凋亡的影响。结果化学发光法检测和共聚焦显微镜检测显示高糖可明显促进肾小管上皮细胞内活性氧的产生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;Hoechst33258染色法检测和流式细胞仪检测分析显示高糖可明显诱导肾小管上皮细胞的凋亡发生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;流式细胞仪检测分析显示抗氧化剂牛磺酸可明显抑制高糖诱导的肾小管细胞凋亡,与高糖组比较有显著差异（P〈0.01）。结论高糖可通过促进细胞内生成过量ROS而诱导肾小管细胞凋亡发生,抗氧化剂可阻断高糖诱导的肾小管细胞凋亡。     

肾小管周围毛细血管损伤与肾小管上皮细胞凋亡的关系

目的 观察单侧输尿管完全梗阻(CUUO)模型中肾小管周围毛细血管(PTC)损伤与肾小管上皮细胞凋亡的关系.方法 建立SD大鼠CUUO模型,用免疫组化方法检测PTC的密度,TUNEL法对PTC和肾小管上皮细胞进行原位凋亡测定,透射电镜显示超微结构变化.结果 梗阻第1周,Flk-1阳性PTC数量变化不显著,肾小管上皮细胞凋亡很少见.第2、4周,Flk-1阳性的PTC数量减少,肾小管扩张或萎缩明显.电镜显示肾小管上皮细胞、PTC内皮细胞的死亡形式主要为凋亡;TUNEL显示肾小管上皮细胞凋亡在第14 d达到高峰,然后迅速下降.在梗阻第2周时,PTC密度与肾小管上皮细胞凋亡负相关(r=-0.863,P＜0.01).结论 PTC损伤是以内皮细胞凋亡为主要特征,PTC减少在肾小管上皮细胞凋亡的过程中发挥了重要作用.     

湿片法和革兰氏染色法在判断阴道清洁度的应用与评价

目的比较湿片法和革兰氏染色法在判断阴道清洁度中的差异，而革兰氏染色在阴道清洁度判断中的重要作用。方法收集妇科门诊病人的阴道分泌物标本，分别用湿片和革兰氏染色法对同一标本进行白细胞、上皮细胞、阴道毛滴虫、真菌、线索细胞、阴道乳酸杆菌和杂菌等常规项目的检查，记录结果，分别对各项目进行统计分析，判断阴道清洁度。结果湿片法对白细胞、上皮细胞、滴虫的检出率高于革兰氏染色法（P〈0．01）。结论湿片法和革兰氏染色法两者相结合能较准确地划分清洁度，明确阴道炎的性质。     

肾脏年龄性变化Ⅱ大鼠肾集合管的透射电镜观察

本文利用透射电镜和图象分析仪对三组不同年龄大鼠肾集合管上皮细胞进行了观察和分析。结果表明：（１）初生组大鼠肾集合管上皮细胞的核质比明显大于青年组和成年组，而青年组与成年组的核质比则无明显差别；（２）细胞形态包括细胞间连接、细胞基底部的质膜内褶等方面，初生组与青年组、成年组都有较大的变化。     

The effects of inosine and Ligusticum wallichii on ischemic injury of renal proximal tubule epithelial cells:cytochemical study

Cytochemical methods were used to evaluate the changes of intracellularcalcium,plasma membrane permeability and their relationship during ischemia andreflow in rat renal proximal tubule epithelial cells.In addition,the preventive ef-fects of inosine and Ligusticum wallichii on ischemia and reperfusion cell injurywere studied.The results showed that the preventive effects of inosine andLigusticum wallichii were obvious.Redistribution and slight increase of calciumoccurred during the ischemic period in the proximal tubule cells.In this periodthe changes of plasma membrane permeability were gentle.Following the exten-sion of reflow time,a large amount of calcium deposited in the cells andmitochondria.The plasma membrane became broken.There was a positivecorrelation between the calcium level in mitochondria and that in cytoplasm.     

急性缺血再灌流肾损伤的组织学变化

观察家兔肾缺血１小时再灌注２小时和２４小时的组织学变化。方法：３１只日本大耳白兔随机分为４组,左肾缺血小时再灌流２小时组和再灌流２４小时组及各自的对照组,采用肾动脉夹闭法制成急性缺血再灌流损务模型。结论近端小管比肾小球滤过膜对缺血再流刺激更为敏感,白细胞可能参与了缺血再灌流肾损伤。     

Caspase-3在缺氧和内毒素致肾小管损伤的肾组织表达

目的 为了建立缺氧和内毒素致肾小管损伤模型,观察Caspase-3在肾组织的表达,以探讨其肾小管的损伤机制.方法 以SD大鼠为实验动物,予麻醉及机械通气,同时予阴茎静脉注射伤寒杆菌脂多糖,吸入氧浓度从21%降至5%的氧,通气至180rain结束.取肾组织作HE染色病理切片检查及用Caspase-3免疫组化S-P法染色观察模型肾组织的病理改变及肾组织中Caspase-3的表达.结果 (1)病理组织学所见:大部分肾小球充血,内皮及系膜细胞轻度肿胀,肾近曲小管上皮明显肿胀,呈浊样改变;大部分远曲小管镜下未见明显改变,部分上皮细胞肿胀,浊样变性在;整个肾间质呈充血现象.无炎性细胞浸润,(2)免疫组化结果:Caspase-3染色位于胞浆,大部分远曲小管上皮呈Caspase-3阳性反应,以外髓远曲小管为明显;近曲小管偶见Caspase-3阳性细胞,肾小球Caspase-3染色阴性.结论 (1)缺氧及内毒素可致肾小管损伤,且以近曲小管为著,远曲小管及内髓部损伤相对较轻,(2)Caspase-3在远曲小管明显表达,提示在缺氧及内毒素致肾小管损伤中,同时存在细胞变性坏死及细胞凋亡,近曲小管以细胞变性坏死为著,而远曲小管细胞凋亡明显.

Abstract：

Objectives To observe the expression of caspase-3 in the kidney of a rat model of renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia and explore the mechanism of renal tubular damage. Methods Ten rats were anesthetized with artificial ventilation and received 2 mg/kg lipopolysaccharide (LPS) injection through the penile vein. The FiO_2 was reduced 90 min later from 21% to 5%, and the ventilation was withdrawn after another 90 min. Immediately after ventilation withdrawal, the kidney of the rats were obtained for immunocytochemistry and HE staining. Results HE staining showed obvious hyperemia in most of the glomeruli, mild swelling of the endothelial and mesangial cells, severe swelling and turbidity in the proximal tubular epithelial cells without obvious changes in most of the distal proximal tubules. A small portion of the interstitial epithelial cells showed swelling and turbidity, and the entire renal interstitium appeared hyperemic but without inflammatory cell infiltration. Immunocytochemistry detected the presence of caspase-3 in the cytoplasm, and most of the distal renal tubule cells were positive for caspase-3, while only occasional cells showed caspase-3 positivity in the proximal tubular epithelial cells. Most of the proximal tubular epithelial and glomerulus cells were negative for caspase-3. Conclusions Endotoxin and hyoxia can induce renal damage, particularly in the proximal renal tubule cells, and the distal tubular epithelial cells sustain relatively light damage. Caspase-3 is strongly expressed in the distal renal tubular cells, suggesting that in renal tubular damage induced by endotoxin and hypoxia, cell degeneration, necrosis and apoptosis coexist in the tubular epithelial cells; degeneration and necrosis occur primarily in the proximal tubular epithelial cells, while apoptosis is obvious in the distal renal cells.     

小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究

目的:探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞间充质细胞转型的形态学变化.方法:利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型,常规组织学分析小鼠肾脏病理变化,免疫组化检测a-SMA的表达,肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况,明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况.结果:成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型,并被组织学分析证实.免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达a-SMA的细胞,肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变,明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化.结论:肾小管基底膜局部断裂,肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型的过程.     

扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用

目的:观察扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用.方法:Wistar大鼠40只,分为正常组、模型组、扶正化瘀方药物组.采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射4周和含汞等重金属的饲料喂饲造模8周,制备大鼠肝纤维化-肾间质纤维化模型.药物组以扶正化瘀方自第5周起灌胃,1次/d,共4周.肾组织HE染色及六胺银(periodic acidsilvermetheramine,PASM)染色,观察肾组织炎症与胶原纤维沉积变化;试剂盒方法检测血清尿素氮与肌酐含量,观察肾功能变化;盐酸水解法测定肾组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,观察胶原生成变化.结果:模型大鼠肾小管上皮细胞浊肿、坏死与脱落,炎性细胞浸润;肾间质增宽,大量胶原沉积;肾小管基底膜增厚,出现皱褶;血清尿素氮与肌酐含量上升,肾组织Hyp含量显著增加.扶正化瘀方药物组明显减轻模型大鼠肾小管炎症坏死与肾间质胶原沉积,减轻肾组织Hyp含量,降低异常增高的血清尿素氮与肌酐水平.结论:DMN腹腔注射与汞等重金属饲料口服可造成大鼠肾间质纤维化,扶正化瘀方可明显改善大鼠肾功能,有抗肾间质纤维化的作用.     

肌苷、川芎对肾近端小管上皮细胞缺血损伤的影响——细胞化学观察

本实验采用钙离子细胞化学定位法、膜通透性细胞化学示踪法结合普通超微结构及EDX电镜分析,从细胞水平观察了肾近端小管上皮细胞缺血损伤情况以及药物对它的影响。实验结果表明:肌苷、川芎对细胞缺血损伤有保护作用。缺血期,细胞中及线粒体内钙离子增多。此时,质膜的损伤并不严重。缺血后复流,随着复流时间的延长,细胞中及线粒体内钙离子进行性增多,质膜的损伤也越来越重。线粒体内钙离子含量与胞质中钙离子含量有密切关系。     

复康片对卡马西平肾毒性的预防作用

目的:探讨复康片对卡马西平肾脏毒性的预防作用.方法:将48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、复康片低剂量组、复康片高剂量组共4组,每组12只.正常对照组正常喂养,每天灌胃蒸馏水,其余不做任何处理.余3组建立CBZ致肾脏损伤模型,造模同时复康片低、高剂量组分别按750 mg·kg-1·d-1和1500 mg·kg-1·d-1灌胃复康片1次/d.实验第90天,处死所有大鼠,腔静脉取血,离心取血清测肾功能,取肾组织在光镜下观察肾脏组织病理学.结果:与正常对照组比较,模型对照组肾功能异常,肾小球内细胞增多,肾小管上皮细胞水肿,管腔狭窄,间质炎细胞浸润.尿素氮(BUN)水平明显升高.中药复康片低剂量组表现为肾小球结构基本正常,肾小管上皮细胞轻度水肿,间质可见炎细胞浸润,尿素氮(BUN)水平明显降低.中药复康片高剂量组大鼠肾小球结构正常,肾小管上皮细胞轻度水肿,间质轻度炎细胞浸润,尿素氮(BUN)水平显著降低.结果表明高剂量组的效果要好于低剂量组,结论:复康片可预防卡马西平肾毒性.     

细胞治疗对急性尿毒症犬影响的实验研究

目的 :测定急性尿毒症犬在细胞治疗过程中的病理生理改变并评估疗效 ,从而为临床应用提供实验依据。方法 :选 2 5kg左右犬 12只 ,分对照组和细胞治疗组 ,建立急性尿毒症模型后进行透析治疗 ,观察相关指标变化。结果 :细胞治疗组心输出量、血IL 10含量增加 ,HCO3- 升高 ,K+ 下降明显 ,超滤液中氨排泌增多 ,实验犬存活时间延长。结论 :附加了肾小管细胞作用的透析疗法优于常规的血液透析