ELISA一步法检测梅毒抗体钩状效应三例

笔者在用ELISA双抗原夹心一步法试剂检测梅毒抗体（TP-Ab）工作中遇到高滴度标本检测结果假阴性1例、弱阳性2例,经进一步实验判定此结果为钩状效应（Hook effect）引起,现报告如下。     

溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响

目的通过实验观察溶血标本在酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法中对乙型肝炎两对半（HBVM）检测结果的影响。方法用80例健康人（HBVM均为阴性）的血液标本,人为造成不同程度溶血,用ELISA一步法和二步法同时检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBe）,通过对检测结果的观察来分析溶血对检测结果的干扰程度。结果当溶血程度大于或等于10g／L时,ELISA一步法40％以上的标本0D值均大于临界值,差异有统计学意义（P〈0．01）;ELISA二步法仅为3％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论当溶血程度大于或等于10g／L对ELISA一步法检测HBVM的结果有干扰,可造成临界假阳性;ELISA二步法干扰不明显,无统计学意义。     

一步法HBV-DNA检测试剂的临床应用分析

目的：比较一步法与煮沸法检测HBV-DNA的结果,分析一步法临床推广价值。方法利用已知浓度的标准品检测其准确度,利用室内质控品评价其精密度,采用两种方法分三个批次进行平行检测临床标本62例,比较两种方法的灵敏度、检测结果的一致性及相关性。结果实测校准品与理论值对数据的偏差在可接受范围（0．08＜0．3 lgIU／mL ）,精密度满足临床需求（cv％＝5．62％＜10％）,两种方法阳性符合率为100％,阴性符合率为97．0％,总符合率为98．4％,两者检测结果线性关系良好,有显著相关（Y＝0．7839 X＋0．7101,R2＝0．9163）。结论一步法试剂有操作简便,抗污染力强、定量准确、重复性好,成本低等优点,特别适合基层实验室推广应用。     

检测乙型肝炎病毒e抗体的影响因素

目的探讨当乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）和乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）同时阳性，用改进的酶免疫竞争（EIA）二步法复查抗-HBe的必要性。方法使用EIA二步法检测HBeAg和抗一HBe同时阳性的标本，结果同一步法进行比较。结果用EIA一步法与二步法检测抗-HBe的吸光度（A）值，二者差异有非常显著性（P〈0．001）。结论用EIA一步法检测抗-HBe易出现前带现象而导致假阳性，建议用改进二步法检测。     

ELISA一步法和二步法检测临界值范围HBsAg的性能比较

目的比较酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的性能。方法将二步法初检吸光度（A）值〉0．0735的标本均用一步法检测,并将初检临界值范围内的标本再用二步法复测,将所有复检范围内的标本用电化学发光法检测。结果HBsAg检测结果4值〉0．5250的标本两法符合率为96．8％,A值在0．0735～0．5250之间的标本两法符合率为65．1％,两法的检测性能差异有统计学意义（P〈0．05）。结论二步法测定HBsAg与一步法比较,敏感性高。一步法存在漏检,二步法在检测低水平和过高浓度的HBsAz标本中具有显著优势。     

溶血和带血细胞标本对HBsAg结果的影响

目的通过实验来观察不同程度溶血和带血细胞标本对酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果的影响。方法用90例健康献血者的HBsAg为阴性的血液标本，人为造成不同程度的溶血和加入不等量的红细胞，再用ELISA一步法检测HBsAg，通过对结果的观察来分析溶血和带血细胞标本对ELISA一步法检测HBsAg的干扰程度。结果当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，42％以上的标本吸光度值均大于临界值（P〈0．01）。结论当血红蛋白大于或等于10g／L或红细胞浓度大于或等于0．125×10^12／L时，标本对ELISA一步法检测HBsAg有影响，可造成标本假阳性。     

一步法ELISA在HIV初筛中的应用探讨

目的探讨一步法ELISA试剂在HIV抗体初筛实验中是否存在高剂量钩状效应，及其影响程度和对策。方法分别采用一步法和二步法HIV抗体ELISA检测试剂盒对10例确诊抗体阳性样本进行检测以及样本梯度稀释后再复检。结果10例确诊样本二步法结果均阳性，一步法仅7例阳性；假阴性样本经10—1和10—2稀释后，再用一步法检测时结果均为阳性。结论ELISA一步法试剂的检测范围不可忽视。一步法双抗原夹心ELISA检测HIV抗体时的明显前带现象是潜在的漏检导致因素，应用于HIV初筛效果不如二步法。     

酶免疫一步法检测乙型肝炎表面抗原影响因素探讨

乙型肝炎（下称乙肝）是一种严重危害人类健康的世界性传染病。我国是乙肝高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）携带者高达10％～15％。HBsAg在乙肝病毒（HBV）感染的检测中一直是最为重要的标志物，是乙肝的早期诊断指标之一。因此，准确地检测HBsAg对于HBV感染的临床诊断、治疗以及避免医患纠纷的发生有着重要意义。目前国内最常用的HB—sAg测定方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）中的双抗体夹心双位点一步法，该法简单、方便、快速，灵敏度较高，特异性较好。     

梅毒螺旋体和乙肝表面抗原检测中阳性拖带现象与钩状效应的关系

目地探讨采用一步法检测梅毒螺旋体和乙肝表面抗原并发生阳性拖带现象时是否存在钩状效应。方法将出现阳性拖带现象的第一个阳性孔标本及反应板上其对应位置的前一个标本各34例分成I、Ⅱ两组,分别用一步法和二步法进行复检,并将一步法阴性而二步法阳性的标本进行倍比稀释后用一步法检测,直至检出阳性。结果复检后,I组34例标本有5例为阴性,Ⅱ组中有4例因钩状效应呈假阴性,并且这4例标本造成阳性拖带现象。结论采用酶联免疫反应（ELISA）一步法检测时可因钩状效应使强阳性标本漏检,如果用固定加样针加样还可能造成交叉污染使其后的标本出现阳性拖带。     

脐血乙型肝炎病毒核酸载量检测

评价脐血乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）核酸载量检测结果。方法：通过建立扩增效率分析法，评价脐血进行HBV-DNA定量检测的有效性；通过比较脐血HBV血清学标志物的检测结果与脐血标本HBV-DNA定量检测结果，评价检测方法。结果：HBV血清学标志物检测结果为大三阳，即HBsAg（＋）、HBeAg（＋）和HBcAb（＋）的乙型病毒性肝炎产妇．其新生儿脐血标本在HBV-DNA定量检测中。20例中有13例（65％）发生扩增，扩增效率分析与其他血清标本差异无显著性：该20例脐血标本的HBV血清学标志物检测结果HBcAb（＋）12例（60％），HBeAg（＋）11例（55％），而其中HBsAg（＋）仅1例（5％）。结论：脐血标本可用于检测HBV核酸载量。     

ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析

目的 验证酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)二步法诊断试剂灵敏度及评价HBsAg二步法诊断试剂的质量.方法 分别采用ELISA一步法及二步法两种方法检测体检人群2 154例和不同浓度质控血清,结果 不一致样本进行化学发光法定量检测.结果 一步法检测HBsAg阴性1 978例,阳性176例,阳性率为8.17%;二步法检测HBsAg阴性1 953例,阳性201例,阳性率为9.33%.ELISA一步法检测的1 978例HBsAg阴性样本中,有25例二步法检测为阳性.一步法检出率较低,仅为二步法的87.56%,而漏检率为1.16%.一步法最低检测浓度为1 IU/mL,二步法为(0.1～0.2) IU/mL.结论 一步法与二步法HBsAg试剂灵敏度差异有统计学意义(P<0.01),二者检出率具有统计学意义(P<0.05).     

TP-ELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体钩状现象研究

目的 通过探讨钩状效应对酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗原夹心一步法检测梅毒特异性抗体结果的影响,评价双抗原夹心ELISA一步法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用价值.方法 采用稀释法,ELISA双抗原夹心二步法和振荡法分别检测怀疑存在钩状效应的血清标本8例;采用ELISA双抗原夹心一步法和二步法分别检测40例健康体检者血清和卫生部临床检验中心提供的梅毒抗体临床科研血清盘一套.结果 8例ISA双抗原夹心一步法检测结果为阴性,怀疑存在钩状效应的患者血清标本,采用ELISA双抗原夹心二步法进行检测时,结果均转为阳性;进行1:2,1:10,1:50和1:100倍稀释后,采用ELISA双抗原夹心一步法进行检测,分别有7例,8例,8例和5例结果转为阳性;将反应板在孵育过程中同时进行振荡,有5例转为弱阳性;ELISA双抗原夹心一步法和二步法分别检测40例健康体检者血清和卫生部临床检验中心提供的梅毒抗体临床科研血清盘,除3例弱阳性结果不符外,其它结果均一致.结论 建立敏感度高的ELISA两步法或采用现有ELISA一步法试剂同时对标本进行原倍和一定倍数稀释后检测,可以既克服钩状效应,又保证检测的敏感度.     

可视穿刺器直视一步法建立腹膜后腔技术的临床应用价值研究

目的 探讨可视穿刺器直视下一步法建立腹膜后腔技术的临床应用价值。方法 收集80例需手术治疗的上尿路疾病且行后腹腔镜手术患者,分为研究组和对照组,每组40例。研究组采用可视穿刺器直视一步法建立腹膜后腔技术,对照组采用自制球囊扩张建立腹膜后腔技术。比较2组患者腹膜后腔建立（全部置入3个套管） 完成时间及不良事件（通道漏气、通道出血、脏器损伤、第一条通道建立时扩张过深或过浅）的发生率。结果 与对照组相比,研究组建立腹膜后腔完成时间较短（P < 0.01）,且不良事件发生率低于对照组（P < 0.05）。结论 可视穿刺器直视一步法建立腹膜后腔技术可在直视下简单、快速、安全、有效地建立腹膜后腔,具有较高的临床应用价值。     

一种新型快速定量检测HBV DNA试剂的评价

目的对一种新型快速定量检测HBV DNA试剂进行性能评价。方法以达安公司HBV DNA定量检测试剂(浓缩碱裂解法)为参比试剂,湖南圣湘公司HBV DNA定量检测试剂(一步法)为实验试剂,比较两法对117例临床标本和2012年江苏省室间质评样本检测结果的相关性和准确性。评价一步法PCR试剂的敏感性、特异性、线性关系和重复性。结果两种试剂检测25例HBV DNA阴性标本,结果均为阴性,92例HBV DNA阳性样本中87例两法均为阳性。经以10为底数的对数转换后,一步法检测结果为4.82±1.80,浓缩碱裂解法为4.78±1.89,结果无统计学差异(t=-0.74,P>0.05),且两法相关性良好(r=0.971,P<0.05)。两法特异性均为100%(25/25);一步法敏感性为98.9%(91/92),浓缩碱裂解法为95.7%(88/92);两法检测室间质评样本均在合格范围内。一步法检测试剂的r为0.999;两份HBV DNA阳性样本重复检测10次的变异系数(CV)分别为0.89%和0.15%。结论一步法试剂的检测结果准确可靠,与浓缩碱裂解法试剂相比,操作简便快速。     

采用牛角型扩张器经皮一步扩张法气管切开术的临床应用体会

目的：探讨经皮牛角型扩张器一步法气管切开术的临床应用方法及效果。方法：分析采用经皮牛角型扩张器一步法气管切开术的18例患者的手术时间,观察术中患者呼吸频率、心率、血压及血氧饱和度,出血量及并发症。结果：采用经皮导丝牛角型扩张器一步法气管切开术能一次性顺利扩张造瘘口,气管套管经插入器插入造瘘口顺畅,瘘口与气管切开套管匹配,平均手术时间（6±1.5）min,其中扩张造瘘口时间平均（20±5.5）s,插入气管套管时间平均（12±3）s出血少。术中呼吸频率、心率、血压、血氧饱和度无明显波动,术后出现1例纵隔皮下气肿。结论：经皮牛角型扩张器一步法气管切开术操作安全、简单、快速,值得临床应用推广。     

两种抗中性粒细胞胞浆抗体检测方法的结果比较

目的比较间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）结果的一致性。方法回顾1 337例同时使用IIF和ELISA检测ANCA的结果,比较2种方法结果的一致性并进行原因分析。结果 2种方法联合检测出90例ANCA阳性结果,阳性一致性为83.82%,阴性一致性为98.27%,结果一致性较好（Kappa值〉0.75）。22例IIF阴性、ELISA阳性的样本中有14例抗核抗体阳性。11例ELISA阴性,IIF阳性的样本中有1例杀菌/通透性增强蛋白（BPI）阳性。结论 IIF和ELISA单独检测均有漏检,联合检测的效果最佳。     

尿液对粪便隐血检测结果的影响

目的：探讨粪便中混入尿液对粪便隐血检测结果的影响。方法30例经内窥镜检查无消化道出血的志愿者留取合格尿液、粪便及尿粪混合便标本,分别进行血红蛋白（Hb）和转铁蛋白（Tf）免疫胶体金检测。结果30例合格尿液标本中,检出Tf（＋）Hb（＋）者7例、Tf（＋）Hb（-）22例、Tf（-）Hb（-）1例;30例合格粪便标本均为 Tf（-）Hb（-）;30例尿粪混合便标本中检出 Tf（＋）Hb（＋）7例、Tf（＋）Hb（-）22例、Tf（-）Hb（-）1例。结论尿液混入粪便标本中会影响 Tf 和 Hb 的检测结果。     

核酸测序法与荧光PCR法测定HBV基因分型比对试验分析

目的 对核酸测序方法和荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性进行比对分析.方法 核酸测序方法作为金标准与荧光PCR法检测结果进行分析,计算乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性.结果 200例样本中,金标准检测结果阳性78例;在这78例中,荧光PCR法检测结果阳性78例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的灵敏度为100.00%;金标准检测结果阴性122例,荧光PCR法检测结果阴性121例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的特异度为99.18%.荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的分型准确性为100%.荧光PCR法和金标准方法的分型检测结果,无统计学差异.结论 荧光PCR法具有高灵敏度、高特异度、防污染能力强、自动化程度高、速度快等优点,适合用于传染病监测和临床使用的乙型肝炎病毒（HBV）的分型快速检测.     

高血压性心脏病心脏B超与心电图的对比

目的比较高血压性心脏病心脏B超与心电图的检测结果。方法选取高血压性心脏病患者76例为研究对象,对患者进行心脏B超和心电图检测并分析其结果。结果心脏B超检查结果：76例患者中,左室肥厚23例（30.26%）,左房增大36例（47.37%）,左室增大15例（19.74%）,主动脉扩张2例（2.63%）,主动脉弹性减退40例（52.63%）。二尖瓣舒张期血流A峰与E峰比值大于1的患者共48例（63.16%）。心电图检查结果 ：左室肥厚14例（18.42%）,心肌缺血65例（85.53%）,心率心律变化者15例（19.74%）。左房增大7例（9.21%）,左室增大5例（6.58%）。心脏B超在左室肥厚检出率、左室增大检出率和左房增大检出率方面,均显著高于心电图检测结果 （P〈0.05）。结论心脏B超在检测左室肥厚、左室增大和左房增大方面,比心电图更为敏感。     

2种HLA-B27检测方法在强直性脊柱炎诊断中的比较

目的：通过比较2种中国药监局（CFDA）批准的人类白细胞抗原（HLA）-B27体外诊断试剂盒,探讨荧光聚合酶链式反应（PCR）体外诊断试剂盒在 HLA-B27检测中的临床应用价值。方法收集该院573例临床血液样本,分别采用基于荧光PCR 技术和流式细胞法的2种上市获批试剂盒进行 HLA-B27检测,对于2种方法检测结果不一致的样本采用 PCR 测序方法进行确认,同时随机抽取5％的荧光 PCR 法检测结果为阳性的样本进行复验。结果573例样本,采用流式细胞法试剂盒检测出阳性191例,阴性382例;相同样本使用荧光 PCR 试剂盒检测 HLA-B27基因阳性共194例,阴性379例。最终结果以流式细胞法作为参照,2种试剂盒阳性符合率为96.33％（184／191）,阴性符合率为94.76％（362／382）,27例样本不符（占总样本数的4.71％）,2种方法的总符合率为95.29％[（184＋362）／573],Kappa 值为0.896,（P ＝0.02）;四格表资料卡方检验 P ＝0.021,2种方法检测结果一致性较高,但检测结果存在差异。复测标本中（包括27例检测结果不一致标本）HLA-B27基因测序结果与荧光PCR 试剂盒检测判断结果一致。结论相比临床 HLA-B27检测的权威方法流式细胞方法,荧光 PCR 法试剂盒在保证较高结果一致性的基础上,在 HLA-B27检测上可能具有更为准确的判断能力,且相比标本制备和操作更为简单,具有较强的临床应用价值和前景。