APP17肽对Aβ导致神经元毒性作用的影响

通过观察β 淀粉样肽 (Aβ)前体蛋白 (APP1 7)中 3 1 9 3 3 5肽段 (APP1 7肽 )对Aβ引起神经毒性作用的影响 ,进一步证实APP1 7肽的神经营养作用。用固相法合成APP1 7肽、Aβ2 5 3 5,高效液相纯化 ,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型 ,分为正常对照组、Aβ2 5 3 51 0 μmol/L损伤组和Aβ2 5 3 51 0 μmol/L加APP1 7肽 1 0 μmol/L保护组。以细胞计数、噻唑蓝 (MTT)代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积、NT 3免疫细胞化学染色和细胞内游离钙离子(Ca2 + )浓度为观察指标。结果 :与正常对照组相比 ,Aβ2 5 3 5损伤组轴突长度和胞体面积均缩小 ,细胞计数减少 ,MTT代谢率降低 ,LDH漏出率升高 ,细胞内Ca2 + 浓度升高 ,而加入APP1 7肽保护后 ,可使上述指标恢复或接近正常。提示 :APP1 7肽具有神经营养和神经保护作用 ,可减轻Aβ引起的神经元损伤。     

李氏5号水提液在兴奋性氨基酸损伤神经元中的保护作用

OBJECTIVE: To investigate the effect of liquid extract of Lishi No.5 formula in protecting the neurons from excitatory amino acid injury. METHODS: Cultured neonatal SD rat hippocampal neurons were treated with 300 micromol/L NMDA and 5 micromol/L glycine for 10 min, and the conditioned culture medium was replaced by normal culture medium. After cell culture for 18 h, MTT assay and Hoechst33258 staining were performed to examine the cell survival rate and cell apoptosis, respectively. Intracellular free calcium concentration was assayed by image analysis of the calcium signals with confocal microscope and Fluo-3/AM indicator. RESULTS: The survival rate of the cultured cell was significantly decreased in response to treatment with 300 micromol/L NMDA and 5 micromol/L glycine, but the effects were obviously reversed by treatment with 0.5 mg/ml liquid extract from Lishi No.5 formula. Intracellular free calcium concentration was significantly increased by 10 micromol/L NMDA, which was remarkably inhibited by the liquid extract. The effects of NMDA on intracellular free calcium was abolished by pretreatment of the cells with MK-801 for 10 min, whereas the liquid extract significantly lowered the antagonizing effect of MK-801. CONCLUSION: Lishi No.5 formula protects the neurons from toxicity by excitatory amino acids possibly by alleviating intracellular free calcium overload induced by these amino acids.     

李氏5号水提液在兴奋性氨基酸损伤神经元中的保护作用

目的 探讨李氏5号水提液在兴奋性氨基酸性神经元损伤中的保护作用。方法 MTT法观察不同干扰因素作用下细胞成活率和用Hoechest333258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡的比例;借助共聚焦显微镜钙成像和钙荧光指示剂Fluo-3/AM测细胞内钙浓度。结果 300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min后换正常培养液培养18h,细胞死亡率比正常对照组高(54.64±5.76)%;用李氏5号水提液(终浓度为0.5mg/ml)预处理3h后,加300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min,换正常培养液同时加李氏5号水提液继续培养18h,细胞死亡率明显降低。10μmol/LNMDA可明显增加海马神经元胞质游离钙浓度。李氏5号水提液本身可轻度增加胞质游离钙浓度(与正常组比较差异不显著),但明显抑制NMDA导致的胞质游离钙浓度的升高;NMDA阻断剂MK-801明显拮抗NMDA导致胞质游离钙升高的效应,但李氏5号水提液预处理后,MK-801拮抗NMDA的效应显著降低。结论 李氏5号水提液可能通过拮抗兴奋性氨基酸所致的细胞内钙超载而明显保护神经元。     

李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF信号转导的影响

通过检测D 半乳糖老化小鼠海马神经元NGF(神经生长因子 )、PI3K(磷脂酰肌醇酯 3激酶 )、Akt/PKB(蛋白激酶B)、CREB(cAMP应答元件结合蛋白 )的表达 ,观察李氏 5号方对海马神经元NGF信号转导的影响。将小鼠随机分为 5组 :正常对照组 (C组 )、D 半乳糖模型组 (D组 )、李氏 5号方大剂量药物治疗组 (L组 )、中剂量药物治疗组(M组 )、小剂量药物治疗组 (S组 )。D、L、M、S 4组每日皮下注射半乳糖 65mg/kg。L、M、S 3个治疗组分别灌胃李氏5号方 0 .6、0 .3、0 .1 5g/kg ,连续 3个月。免疫组织化学染色方法和Westernblotting检测海马神经元NGF、PI3K、Akt/PKB、CREB的表达。结果 :4种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布 ,细胞计数与D组有显著性差异 ;D组海马阳性反应细胞着色浅 ,少有突起 ,细胞数目少。 3个剂量李氏 5号方治疗组染色结果与C组相似 ,与半乳糖老化组比较均有显著性差异 ,李氏 5号方水提取液能明显上调NGF的PI3K通路中的一些信号转导蛋白 ,提示 :李氏 5号方水提取液中可能含有能激活PI3K的活性物质 ,为深入研究李氏 5号方的有效成分打下基础。     

叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。     

中药对Aβ25-35损伤的SH—SY5Y细胞的保护作用

目的：研究阿尔兹海默病（Alzheimer disease,AD）治疗常用中药熟地黄、黄芪等几种单味药及中药复方左归丸对β淀粉样蛋白（Aβ）产生及聚集的影响,以探讨中药对AD的保护作用。方法：用Aβ25-35对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞进行损伤,制备AD细胞模型。采用刚果红染色、MTT法检测熟地黄、黄芪、石菖蒲等中药对Aβ聚集的影响;Real—timePCR方法观察这几种中药的药物血清对细胞的β淀粉样蛋白前体（APP）基因、β-分泌酶、γ-分泌酶表达的影响。结果：刚果红染色结果显示,山茱萸、黄芪、当归和左归丸可以抑制Aβ25-35聚合,形成长的淀粉样原纤维;熟地黄、山茱萸、黄芪、当归、左归丸对Aβ所致细胞的损伤均有保护作用,并呈现剂量依赖关系;低浓度的石菖蒲及远志能够保护细胞,但高浓度的石菖蒲和远志对细胞无保护作用。实时定量PCR结果显示,熟地黄、黄芪、左归丸对APP、β-分泌酶及γ-分泌酶的mRNA表达均有不同程度的抑制;当归能抑制β-分泌酶mRNA的表达。结论：熟地黄、山茱萸、黄芪、当归等中药及左归丸对Aβ损伤的神经细胞均有保护作用,其可能是通过抑制APP、β-分泌酶及γ-分泌酶mRNA的表达,从而减少Aβ的产生及聚集、降低Aβ的沉积,以达到防治AD的作用。     

胰岛素增敏剂罗格列酮对链脲佐菌素损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的观察胰岛素增敏剂罗格列酮对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)所致胰岛素信号转导通路损伤的SH-SY5Y细胞的影响。方法将人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞分为对照组、STZ制备神经元损伤模型组(STZ 0.8 mmol/L)、罗格列酮干预组(STZ 0.8 mmol/L+罗格列酮20μmol/L),测定每组的细胞计数、噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,观察罗格列酮对SH-SY5Y细胞的作用。结果与对照组相比,STZ模型组的细胞计数和MTT代谢率降低(P<0.01),LDH漏出率升高(P<0.01);经罗格列酮保护后,上述细胞生存指标明显改善,细胞计数和MTT代谢率均高于STZ损伤组(P<0.01),LDH漏出率降低(P<0.01)。结论罗格列酮可以减轻STZ引起的神经细胞毒性,提高细胞生存率,其作用机制尚需进一步探讨。     

EX527对热量限制保护SH-SY5Y细胞的影响

目的 观察SIRT1抑制剂EX527对热量限制处理的人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的影响。方法 体外培养SH-SY5Y细胞,分为正常对照组(NC组)、热量限制组(CR组)和热量限制加SIRT1抑制剂组(CR+EX527组),光镜下观察细胞形态学改变,测定各组细胞噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide, MTT)代谢率及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,应用蛋白免疫印迹(Western blotting)法测定SIRT1表达量。结果 与NC组相比,CR组细胞形态好,表现为细胞胞体饱满、突起伸展、贴壁牢固,MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率有降低趋势,CR组和CR+EX527组SIRT1表达均增加(P<0.05);与CR组相比,CR+EX527组细胞形态较差,突起回缩,贴壁性不好,MTT代谢率降低(P<0.05),LDH漏出率有升高趋势,SIRT1表达略减少。结论 热量限制对神经细胞具有保护作用,而SIRT1抑制剂EX527能够减弱热量限制的神经保护作用,提示热量限制对SH-SY5Y细胞的保护作用可能是由SIRT1介导的。     

救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 通过观察复方中药救脑益智方剂水提液对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长以及胰岛素信号通路的影响, 探讨其对神经细胞保护作用的机制。方法 体外培养SH-SY5Y细胞, 分为对照组(C组)、救脑益智1号方组和3号方组, 每组药物剂量分别为0.0625 mg/mL、0.125 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL, 测定各组细胞的噻唑蓝(MTT)代谢率, 选定0.125 mg/mL进行细胞免疫荧光染色, 观察细胞形态和胰岛素受体底物-1(IRS-1)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的变化。结果 与对照组相比, 救脑益智组MTT代谢率升高(P<0.05), 细胞形态好, 表现为细胞胞体饱满、贴壁良好、突起延长, IRS-1和CREB表达增加。结论 复方中药救脑益智水提液能促进神经细胞生长, 提高神经元胰岛素信号通路相关因子IRS-1和CREB表达, 推测其神经保护作用机制与胰岛素信号通路有关。     

SH－SY5Y 细胞中谷氨酰胺对Hsp70 的表达的影响

目的: 研究SH－SY5Y 细胞中谷氨酰胺对Hsp70 的表达的影响。方法: 培养SH－SY5Y 细胞并用谷氨
酰胺干预后,分别使用PCＲ 和Western blot 检测SH－SY5Y 细胞中Hsp70 的表达; 用HSF－1 siＲNA 转染SHSYSY
细胞,用谷氨酰胺干预后,用PCＲ 和Western blot 检测SH－SY5Y 细胞中HSF－1 及Hsp70 的mＲNA 表达水
平及蛋白表达水平。结果: 培养SH－SY5Y 细胞并用谷氨酰胺干预后,SH－SY5Y 细胞中Hsp70 mＲNA 表达水平
及蛋白水平及均上调; 用HSF－1 siＲNA 转染SH－SYSY 细胞,即使用谷氨酰胺干预,SH－SY5Y 细胞中HSF－1 及
Hsp70 的mＲNA 表达水平及蛋白表达水平均下调。结论: 谷氨酰胺可以上调SH－SY5Y 细胞中Hsp70 的表达,且
这种上调呈HSF－1 依赖性。     

远志寡糖酯对β淀粉样蛋白25～35诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤及AKT / CREB / BDNF 信号通路的影响

目的 观察远志寡糖酯对β淀粉样蛋白25～35(Aβ_25～35)诱导的人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤及蛋白激酶B/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子(AKT/CREB/BDNF)信号通路关键凋亡蛋白的影响。方法 将培养的SH-SY5Y细胞分为对照组、Aβ_25～35 损伤模型组、远志寡糖酯(50、100、200、400 mg/L)组和Aβ_25～35 损伤+远志寡糖酯(50、100、200、400 mg/L)组。对照组和远志寡糖酯组分别给予等体积完全培养液和不同浓度的远志寡糖酯溶液后与细胞共孵育24 h; Aβ_25～35 损伤模型组和Aβ_25～35 损伤+远志寡糖酯组分别给予等体积完全培养液和不同浓度的远志寡糖酯溶液2 h后,加入25μmol/L Aβ_25～35的溶液与细胞共孵育24 h。采用MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞凋亡;Western Blot检测SH-SY5Y细胞内pAKT/AKT、pC...     

反义bcl—2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y生长和凋亡的作用

目的：研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH－SY5Y的生长和凋亡的作用。方法：采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine转染SH－SY5Y,经嘌呤霉素筛选,应用RT－PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达,建立细胞株SH－SY5Y／Asbcl-2,应用免疫组化和Western印迹分析Bcl－2蛋白的表达变化;MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况;通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA梯带。结果：RT－PCR证实转染细胞SH-SY5Y/相A－2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达,免疫组化及Western印迹分析显示SH－SY5Y／Asbcl-细胞凋亡形成的DNA梯度更明显。结论：脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞。反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达,抑制SH－SY5Y的细胞的生长,增加SH－SY5Y细胞对CP的敏感性,促进细胞凋亡。     

牛磺酸对Aβ1-40诱导人神经母细胞瘤细胞毒性保护作用

目的探讨牛磺酸对Aβ1-40诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞毒性的保护作用及其机制。方法用不同浓度(0.8、8.0、20.0mmol.L-1)牛磺酸预处理SH-SY5Y细胞(牛磺酸组)及不用其处理SH-SY5Y细胞(A1-40模型组),同时加入终浓度为20.0μmol.L-1的Aβ1-40,继续培养24h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞技术检测细胞线粒体膜电位的变化。结果与A1-40模型组比较,3个浓度牛磺酸处理组细胞存活率明显增高(F=4.16,q=3.05～9.68,P<0.05、0.01);与0.8mmol.L-1牛磺酸组相比,8.0、20.0mmol.L-1牛磺酸组细胞存活率增高(q=4.97～6.63,P<0.01)。Ho-echst33258荧光染色显示,3个浓度牛磺酸组细胞的细胞核呈现均匀的淡蓝色荧光。流式细胞技术检测显示,与A1-40模型组比较,3个浓度牛磺酸组线粒体膜电位均升高(F=17.64,q=4.04～8.72,P<0.05、0.01);与0.8mmol.L-1牛磺酸组相比,8.0、20.0mmol.L-1牛磺酸组线粒体膜电位升高(q=3.48～4.69,P<0.05)。结论牛磺酸对Aβ1-40诱导的SH-SY5Y细胞毒性有明显的保护作用,其机制可能与稳定线粒体膜电位而拮抗细胞凋亡有关。     

重组人BDNF对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用

目的 观察人脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ 25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用.方法 取新生wistar大鼠海马细胞进行体外培养.分别加入不同浓度的BDNF及聚集态A β 25-35作用于培养的海马神经元,采用MTT法观察BDNF对A β 25-35致海马神经元存活率影响及Hoechst 33342染色观察BDNF对A β 25-35致海马细胞凋亡的影响.结果 显微镜下观察BDNF处理组比A β 25-35模型组细胞损伤小,细胞生长良好.MTT结果显示随着BDNF浓度增高,细胞存活率逐渐增高,在0.6nmol/L时最明显,与A β 25-35模型组比较,细胞存活率显著增高(P＜0.01).Hoechst 33342染色显示随着BDNF浓度增大凋亡率减少,与A β 25-35组比较凋亡率均显著减少(P＜0.01).结论 BDNF对培养海马神经元有神经营养活性,对Aβ致培养海马神经元的损伤有保护作用.     

Beta-淀粉样蛋白对体外培养人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的 观察Beta-淀粉样蛋白(beta-amyloid,Aβ)对体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的毒性作用.方法 将体外培养的人神经母细胞瘤细胞,分为BSA对照组(0.5 mg/mL)、Aβ组(Aβ1-42寡聚体,50 μg/mL)和Aβ+p75-FC组(50μg/mL Aβ1-42+100 μg/mL p75-FC,p75-FC为p75NTR胞外段与人IgG FC段的融合蛋白,能够竞争性阻断p75NTR),分别干预72 h,采用结晶紫染色法观测SH-SY5Y细胞轴突的生长长度,采用MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率.结果 干预结束后,Aβ组SH-SY5Y细胞轴突长度(42.83±14.98) μm明显短于BSA对照组[(69.76±19.24) μm,P=0.003];在同时给予p75-FC干预后,其轴突长度(65.37±17.52) μμm与BSA对照组轴突长度比较差异无统计学意义(P =0.600).Aβ组SH-SY5Y细胞D(490)值(0.203±0.068)明显低于BSA对照组(0.428±0.094,P=0.002);在同时给予p75-FC干预后,其D(490)值(0.447 ±0.103)与BSA对照组比较差异无统计学意义(P=0.768).结论 Aβ对人神经母细胞瘤细胞具有毒性作用,且通过p75NTR介导实现.     

阿托伐他汀对Aβ损伤的神经元细胞的保护作用

目的:探讨阿托伐他汀(Ato)对β样淀粉蛋白25~35(Aβ25~35)诱导的神经元细胞活力改变、氧化指标的影响。方法:选用SD大鼠脑皮层组织建立不同浓度的Ato干预的AD细胞模型。通过MTS法测定神经元细胞活力,通过硫代巴比妥法和WST-1法分别测定神经元细胞培养基的丙二醛(MDA)含量和SOD活力。结果:与空白对照组比较,不同浓度Ato组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组和不同浓度Ato组比较,Aβ组、Aβ+不同浓度Ato组细胞活力降低,MDA含量升高,SOD活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组比较,Aβ+不同浓度Ato组神经元细胞活力上升,MDA含量下降,SOD活性上升,差异有统计学意义(P<0.05);Aβ+1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L Ato 3组间比较,Aβ+10μmol/L Ato组神经元细胞活力最高,MDA含量最低,SOD活性最高,Aβ+5μmol/L Ato组次之,Aβ+1μmol/L Ato组最低。结论:阿托伐他汀可以减轻Aβ25~35造成的细胞氧化损伤,保护神经元细胞。     

别嘌呤醇对环孢素A肾毒性的保护作用

目的 :研究环孢霉素A(CsA)对肾功能、肾小球内超氧化物、血栓素B2 (thromboxaneB2 ,TXB2 )形成的影响 ,探讨抗氧化药物别嘌呤醇对环孢素A肾毒性的保护作用 .方法 :4组成熟雄性Wistar大鼠分别接受CsA (30mg·kg-1·d-1)、别嘌呤醇 (10mg·kg-1·d-1)、CsA (30mg·kg-1·d-1)加别嘌呤醇 (10mg·kg-1·d-1)、CsA溶剂橄榄油治疗 30d .结果 :CsA使肾功能减退、肾小球内超氧化物、TXB2 形成增加 .别嘌呤醇降低CsA的肾毒性副作用 ,并使肾小球内超氧化物、TXB2 量减少 .结论 :CsA引起的急性肾功能衰竭可能与肾小球内超氧化物、TXB2 形成增加有关 .同时应用别嘌呤醇使肾小球内超氧化物、TXB2 量减少 ,对CsA的肾毒性有保护作用     

β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞突触素、发动蛋白I及衔接蛋白180表达的影响

[摘要]目的：探讨β-淀粉样肽（Aβ）对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞突触素（syn）、发动蛋白I（DynI）及衔接蛋白180（AP180）表达的影响。