3 解偶联蛋白-2是体内胰岛素分泌的负性调节因子(ADA 2001年会,41-OR)

β细胞分泌胰岛素依赖于细胞内ATP/ADP值.由于解偶联蛋白(UCP)-2具有潜在的促进质子漏出的活性及对β细胞内ATP合成的负性作用,故认为UCP-2可能是胰岛素分泌的负性调节因子.New haven的研究者对清醒空腹UCP-2敲除(KO)及对照动物进行了高血糖钳夹试验,评估胰岛素释放与3-3H葡萄糖的生成率.KO鼠要求明显高的葡萄糖输入速率以维持同一水平高血糖,基础血浆胰岛素浓度较对照组高2倍(p<0.001),并且,高血糖钳夹期间胰岛素分泌反应实际上较高,在钳夹试验最后1 h曲线下面积增加2倍(p<0.05).UCP-2 KO 鼠要求大量的葡萄糖输入可能是由于加强抑制肝糖输出,而不是由于增加外周胰岛素敏感组织对葡萄糖的摄入.因此认为,UCP-2是基础及葡萄糖诱导的胰岛素分泌的负性调节因子.β细胞特异性UCP-2受抑制为改善2型糖尿病患者胰岛素分泌提供了一个新的目标.     

7 饮食调节肠道k细胞分泌胰岛素(ADA 2001年会,21-OR)

已有试验证实转基因鼠的k细胞可表达人胰岛素(hINS),同时在β细胞被破坏后仍可保持正常的葡萄糖耐受.加拿大Edmonton的研究者研究了转基因鼠k细胞分泌胰岛素对摄食的反应.非空腹状态下,转基因鼠循环血浆hINS水平为(14.3±7.4)pmol/L,空腹24 h、44 h后,血浆hINS水平分别下降至基础值的55.3%±10.7%,42.0%±0.8%.重新进食后24 h,血浆hINS浓度增加了703.3%±204.7%,同时血糖浓度为(7.53±0.08)mmol/L,而对照组无此变化.提示肠道k细胞分泌胰岛素受饮食调节.这种与饮食相关的血浆hINS水平增加与小鼠葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)的增加相似.故认为k细胞可作为基因治疗的靶细胞以适当的调节胰岛素的分泌.     

12 睡眠不足:胰岛素抵抗及肥胖的危险因素(ADA 2001年会,183-OR)

最近的一项研究表明,如果持续5 d每晚睡眠时间不足4 h,则个体的糖耐量明显降低.因此芝加哥研究人员调查了削短睡眠时间的健康个体的葡萄糖代谢情况.研究包括27名非肥胖健康成人(23～42岁),13名为长期短时间睡眠者(S组,平均睡眠时间＜6.5 h),14名睡眠正常者(N组,平均＞7.5 h).各自持续8晚睡眠后过夜空腹,接受静脉葡萄糖耐量实验(IVGTT).结果,受试者平均睡眠时间分别为S组(316±48)min及N组(477±18)min(P＜0.01).两组在困倦感及葡萄糖曲线上无差异,然而短睡眠者在1、2期反应时相中胰岛素分泌均明显增多,超过正常睡眠者50%,因此前者的胰岛素敏感性较后者降低约40%.因此睡眠不足可导致健康非肥胖年轻人胰岛素敏感性明显降低,从而增加肥胖、高血压及糖尿病的危险.     

14 肥胖及2型糖尿病者一氧化氮敏感性减弱(ADA 2001年会,187-OR)

由ADA资助的该项研究检测了肥胖及2型糖尿病者内皮一氧化氮(NO)的敏感性.受试者为12名健康消瘦者、12名肥胖非糖尿病者及20名2型糖尿病者.研究人员将安培计的铁选择性电极安装于受试者皮下以测量NO,利用激光多普勒技术检测电极2 mm处的皮肤血流量,应用神经源性血管舒张技术(使皮肤局部加热至44℃共5 min)以测量NO刺激后产量及血管舒张性.结果,肥胖及糖尿病者皮肤对热刺激的反应性血流量及NO敏感性明显减弱,另外,加热期间3组NO水平均从基线明显上升,但组间无明显差异.因此,肥胖者热刺激的NO敏感性减弱.肥胖通过降低NO的反应性而成为糖尿病者微血管反应性减弱的主要因素.     

1 SUR1/Kir6.2通道的单点突变通过不同方式影响瑞格列奈与那格列奈(ADA 2001年会,35-OR)

瑞格列奈与那格列奈是两种新型的胰岛素促分泌剂,通过阻断ATP敏感K+通道发挥作用.格列苯脲可与β细胞KATP通道SUR1亚单位上2个不同的结合位点,即磺脲类位点与benzamido位点相互作用.通过比较瑞格列奈和那格列奈与格列苯脲的结构,发现瑞格列奈可与benzamido部分结合,而Nateglinide可与SUR1磺脲类部分结合.已证实大鼠SUR1上丝氨酸区域(1237)为磺脲类结合位点.通过PCR致人的SUR1中S1237Y点突变,之后将hSUR1[S1237Y]与hKir6.2在HEK293细胞内共表达,总体细胞检查显示变异通道的特点是甲苯磺丁脲的敏感性缺失,而格列苯脲抑制作用的可逆性增加.瑞格列奈仍可抑制电流通过变异的通道,而Nateglinide如甲苯磺丁脲一样,抑制作用几乎完全消失.因此,Nateglinide而不是瑞格列奈可与SUR1上的磺脲类位点相互作用.     

2 氨基酸通过与细胞外钙敏感受体相互作用刺激胰岛素分泌(ADA 2001年会,37-OR)

波士顿的研究者报道了从INS-1胰岛素瘤细胞中克隆钙敏感受体(CaSR).β细胞CaSR与大鼠肾脏CaSR同分异构体密切相关.他们指出L-氨基酸可作为CaSR的激动剂是通过提高细胞内Ca2+浓度的信号途径来刺激葡萄糖诱导的胰岛素分泌,从而提出提高正常饮食的氨基酸水平可作为CaSR信号的生理刺激物增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌.CaSR激动剂激活β细胞非选择性阳离子通道导致膜去极化及细胞内Ca2+浓度升高,引起ATP敏感K+通道活性的改变而调节β细胞膜的功能.故认为氨基酸作为β细胞CaSR生理性配基,通过激活非选择性阳离子通道促进了葡萄糖诱导的胰岛素分泌.     

8 PDX-1转染的肠上皮细胞在肾小囊中可分泌胰岛素(ADA 2001年会,23-OR)

PDX-1在胰腺发育早期具有重要的作用.最近的研究表明PDX-1可使非β细胞表达β细胞特异性基因.日本的研究者将PDX-1基因平稳地转染至大鼠未分化肠上皮细胞系IEC-6后该细胞可表达不同的β细胞特异性基因,如胰岛淀粉样多肽(IAPP)、葡萄糖激酶及NKx6.1(这些在原代IEC-6细胞中却检测不到),却不能表达胰岛素.将PDX-1(+)IEC-6细胞形成的细胞聚集物移植入成年雄性SD大鼠的肾小囊.14 d后,免疫组化分析显示PDX-1(+)IEC-6细胞聚集物中有胰岛素分泌,而经过同样处理的PDX-1(-)IEC细胞聚集物却无此变化.体外应用betacellulin(BTC) 治疗也获得相似的结果,而应用胰岛素样生长因子-1、转化生长因子-α则未发现该结果.进一步证实了BTC可促β细胞分化,同时肠上皮细胞可作为糖尿病基因/细胞治疗的工具,也阐明了胰腺发育过程中转录因子的不同作用.     

干扰肝细胞核因子-1α对HepG2细胞载脂蛋白M及胆固醇相关代谢酶表达的影响

目的 检测肝细胞癌和癌旁组织中肝细胞核因子(HNF)-1α、肝受体同系物(LRH)-1与载脂蛋白(apo)M表达的相关性,探讨HNF-1α对apoM、apoA-Ⅰ和胆固醇合成与转化关键酶表达的影响.方法 RT-PCR检测人肝细胞癌组织和癌旁组织中HNF-1α、LRH-1、apoM的表达水平.采用小干扰RNA(SiRNA)在人肝癌细胞株HepG2细胞中干扰HNF-1 α表达后,RT-PCR检测apoM、apoA-Ⅰ及羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇7 α-羟化酶1(CYP7A1)、法尼醇X受体(FXR)、小异源二聚体伴侣(SHP)-1的变化情况;Western blot检测apoM在蛋白水平的变化情况.对不同数据进行单因素方差分析、配对t检验或直线相关分析.结果 HNF-1 α、LRH-1、apoM mRNA在人肝细胞癌组织中明显高于癌旁组织(t值分别为-7.075,-8.803,-7.167,P值均＜0.01);HNF-1α和LRH-1与apoM的mRNA表达水平呈正相关(r=0.353,P＜0.01;r=0.523,P＜0.01).干扰HNF-1α后,与阴性对照相比,apoM、FXR、SHP-1 mRNA水平分别下降47.4%(F=77.627,P＜0.01)、47.9%(F=76.363,P＜0.01)、65.2%(F=365.772,P＜0.01),apoM蛋白水平下调54.3%(F=43.482,P＜0.01);HMGCR、CYP7A1 mRNA水平分别升高101.1%(F=218.666,P＜0.01)、138.5%(F=171.926,P＜0.01);而对apoA-Ⅰ无明显影响(F=0.170,P＞0.05).结论 HNF-1 α可提高apoM的表达水平,并通过促进胆固醇代谢关键酶的表达和抑制胆固醇代谢相关抑制因子的生成而促进胆固醇的转化,对心血管疾病具有保护作用.

Abstract：

Objective To determine wether there were connections among hepatocyte nuclear factor1 alfa (HNF-1α),liver receptor homolog-1 (LRH-1),apolipoprotein M (apoM) and to investigate the effects of HNF-1 αt in HepG2 on the expressions of apoM,apolipoprotein A-Ⅰ (apoA-Ⅰ) and the key enzymes in cholesterol metabolism and biotransformation.Methods The mRNA expressions of apoM,LRH- 1 and HNF- 1 α were detected by RT-PCR.HNF- 1 α was interfered and RT-PCR was used to detect the changes of apo M,apo A-Ⅰ,Cyp7Al,farnesoid X receptor (FXR) and small heterodimer partner-1 (SHP-1).Western blot was used to detect the change of apo M protein.Results The expressions of apoM,LRH-1 and HNF-1αmRNA were obviously higher in HCC tissue than that in para-cancer tissue (the vaule of tis -7.167,-7.075,-8.803,P ＜0.01 respectively).HNF-1 α and LRH-1 positively correlated with the expression of apoM (r = 0.353,P ＜0.01;r = 0.523,P ＜ 0.01 respectively);RT-PCR and western blot results showed that the expressions of apoM,FXR and SHP-1 mRNA,could be obviously suppressed by HNF-1 α interfering as compared to the negative controls by 47.4%,47.9%and 65.2% (P ＜ 0.01) respectively,and the expression of apoM protein also decreased by 54.3% (F = 43.482,P ＜ 0.01).The expressions of HMGCR and CYP7A mRNA increased by 101.1% and 138.5% (P ＜ 0.01) respectively as compared to the negative control.But there is no effect on expression of apoA-Ⅰ mRNA (F = 0.170,P ＞ 0.05).Conclusions HNF-1 α could promote cholesterol biotransformation by increasing the expression of apoM and the key enzymes in cholesterol metabolism and decreasing inhibiting factor.So HNF-1 α provided protection against cardiovascular disease.     

肝细胞核因子—1α基因多态性与血浆胰岛素水平的变化

目的：了解2型糖尿病中肝细胞核因子（HNF）－1基因的变化与其对血浆胰岛素水平的影响。方法：用梯度变性胶电泳分析2型糖尿病与正常人的NHF－1α基因改变,测定相应血浆胰岛素水平,统计分析它们之间的关系。结果：发现该基因三处多态性改变;第7号外显子中密码子459的CTG变为TTG,密码子489的AGC变为AAC,第7号内含有第7位碱基G变为A,这三处变化为一种多态性,多态性纯合子的血浆胰岛素水平偏低,在75克葡萄糖负荷后血浆胰岛素水平与正常基因型的进行t检验,P＜0．05,结论：携带上述多态性改变者胰素分必水平偏低,提示HNF－1α的这一多态性改变可能在2型糖尿病发病中起一定的作用。αα     

9 与2型糖尿病不同,1型糖尿病与脂肪酸结合蛋白2 基因密码子54多态性无关(ADA 2001年会,30-OR)

与野生型(Ala-54/ Ala-54)相比,2型糖尿病(T2DM)脂肪酸结合蛋白(FABP)2基因苏氨酸(Thr)取代丙氨酸(Ala)密码子54多态性与空腹及餐后甘油三酯(TG)水平增加及异常脂血症有关.为评估该多态性是否与1型糖尿病(T1DM)有关(该患者通常无代谢综合征表现),研究者筛查了181例血糖控制与T2DM患者相似的T1DM患者.野生型、杂合子(Ala -54/Thr-54)与纯合子(Thr-54/ Thr-54)间总、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及非HDL-胆固醇无差别.脂负荷后,血浆、乳糜微粒中TG及极低密度脂蛋白(VLDL)曲线下面积在野生型组与纯合子组中相似.表明与T2DM不同,T1DM与FABP 2基因密码子54多态性引起高TG血症及异常脂血症无关.因两型糖尿病血糖控制相似,故其他因素如年龄和(或)胰岛素抵抗可能参与伴有 FABP2基因密码子54 多态性的T2DM患者异常脂血症的发生.     

5 新的糖尿病模型:小鼠胰岛β细胞过度表达ICER的研究(ADA 2001年会,45-OR)

日本的研究者曾报道过转录因子ICER通过竞争性抑制其他的转录激活因子直接与胰岛素基因相结合,有效地抑制胰岛素基因转录.同时,在糖尿病状态下,胰岛内ICER同分异构体的表达增强.因此,他们培育了ICER转基因鼠,发现该鼠可表现严重的高血糖,体重明显低于对照组,胰岛素mRNA的表达与血清胰岛素浓度非常低.口服葡萄糖耐量试验中,ICER转基因鼠胰岛内胰岛素含量是对照组的1/23,不能对葡萄糖刺激产生反应.因此,ICER 可强有力地抑制体内胰岛素基因的转录,引起严重的胰岛素缺乏性糖尿病,增加转录抑制因子可能是其胰岛素mRNA降低的原因.因此,提出该ICER转基因鼠是一种新型的糖尿病动物模型.     

肝细胞核因子4α及1α与糖尿病的关系

肝细胞核因子（HNF）是一类异质的保守转录因子，参与调节肝脏内糖代谢、脂代谢相关基因的表达。HNF在胰岛中也有表达，其家族成员在β细胞胰岛素基因的转录活化、维持胰岛β细胞正常功能及调节糖代谢等方面都起重要的作用。随着青少年发病的成人型糖尿病（MODY）突变基因的相继发现和MODY病理机制研究的深入，HNF在2型糖尿病（T2DM）发病机制中的作用倍受关注。     

2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子(HNF)-4α、HNF-1α基因表达研究

以RTPCR方法检测胰岛素抵抗(IR)大鼠及2型糖尿病(DM)大鼠肝脏肝细胞核因子(HNF)4α及HNF1αmRNA表达水平。结果显示肝脏HNF4α及HNF1αmRNA表达量在IR大鼠显著低于正常对照大鼠,在DM大鼠则进一步降低。两基因表达改变可能与IR及2型DM有关。     

13 腹型肥胖中内皮依赖性血管舒张减弱而血管紧张素Ⅱ介导的血管收缩增强(ADA 2001年会,186-OR)

研究人员对8名具有胰岛素抵抗的腹型肥胖男性的血管舒缩功能进行了研究,调查了他们前臂血管对刺激剂的反应性,并以8名消瘦者为对照.同时还检测了受试者的游离脂肪酸(FFA)及葡萄糖代谢的调节情况和身体组成情况.结果,腹型肥胖者内皮依耐性血管舒张(EDVD)明显减弱,而血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管收缩性(AIVC)明显增强,而且基础及胰岛素刺激的葡萄糖处理功能明显受抑而棕榈酸盐转换显著增强.EDVD及AIVC与胰岛素抵抗明显相关(分别为r=0.65及r=0.75,P＜0.05),内皮非依赖性血管舒张与血管的反应性、棕榈酸盐转换及身体组成均无关.因此腹型肥胖者的内皮依赖性血管舒张减弱及AngⅡ介导的血管收缩增强与葡萄糖代谢相关,而与身体组成及FFA代谢无关.     

高浓度血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与百岁老人痴呆有关

衰老与机体免疫和血中单核细胞分裂失平衡有关,血浆白介素-6(IL-6)浓度的增高,白介素-1(IL-1)受体拮抗剂增加,可溶性肿瘤坏死因子受体-1(sTNFR-Ⅰ)增加与年龄之间的关系已有报道,血浆IL-6水平增加,TNFR-Ⅰ和TNFR-Ⅱ在淋巴细胞中的表达增强,单核细胞产生IL-6增加,血浆组胺增多均与痴呆有关,但血浆TNF-α浓度和与之有关的疾病尚无报道。本文作者研究的目的是评估一组百岁老人血浆中的TNF-α浓度并寻找其与动脉硬化、综合健康状况之间的关系。进而,研究血中TNF-α浓度是否与血中白细胞数、体重指数或血浆IL-6、sTNFR-Ⅰ、CPR浓度有关。     

小檗碱对NIT-1细胞肝细胞核因子-4α表达的影响

目的: 探讨小檗碱促进NIT-1细胞胰岛素分泌的可能分子机制.方法: 用不同浓度小檗碱干预NIT-1细胞24 h后, 行葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)试验检测小檗碱对胰岛素分泌的影响, 胰岛素采用放射免疫法检测. 应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测小檗碱对NIT-1细胞增殖的影响, 以RT-PCR及Western blot分别检测HNF-4α基因和蛋白的表达水平.结果: 与正常对照组相比, 小檗碱显著促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌, 对基础胰岛素分泌无明显作用; 当小檗碱低于10 μmol/L, 对NIT-1细胞增殖无显著抑制作用, 当小檗碱为10 mmol/L时, 对NIT-1细胞有明显抑制作用(0.341±0.041vs 0.392±0.033, P<0.05); 经小檗碱干预的NIT-1细胞HNF-4α mRNA和蛋白表达水平显著升高( P<0.05或0.01), 呈剂量依赖性相关.结论: 小檗碱能促进NIT-1细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌, 可能与其上调HNF-4α的表达有关.     

076 高浓度血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与百岁老人痴呆有关

衰老与机体免疫和血中早核细胞分裂失平衡有关,血浆白介素-6(IL-6)浓度的增高,白介素-1(IL-1)受体拮抗剂增加,可溶性肿瘤坏死因子受体-1(sTNFR-Ⅰ)增加与年龄之间的关系已有报道,血浆IL-6水平增加,TNFR-Ⅰ和TNFR-Ⅱ在淋巴细胞中的表达增强,单核细胞产生IL-6增加,血浆组胺增多均与痴呆有关,但血浆TNF-α浓度和与之有关的疾病尚无报道.本文作者研究的目的是评估一组百岁老人血浆中的TNF-α浓度并寻找其与动脉硬化、综合健康状况之间的关系.进而,研究血中TNF-α浓度是否与血中白细胞数、体重指数或血浆IL-6、sTNFR-Ⅰ、CPR浓度有关.     

4 胰岛素对葡萄糖依赖性促胰岛素多肽反应的第二时相缺陷可能也涉及到2型糖尿病的发病(ADA 2001年会,43-OR)

丹麦的研究者研究了2型糖尿病患者对胰升糖素样肽(GLP)-1、葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)刺激后胰岛素与C肽第一、二时相的分泌反应.8例2型糖尿病患者及6例对照者为研究对象,分别于4 d进行4种不同的实验.在高血糖钳夹试验中,分别给予1 pmol GLP-1、4 pmol GIP、16 pmol GIP或不给予激素.2型糖尿病患者第一时相(0～20 min)的胰岛素与C肽曲线下面积在输入GLP-1及低剂量GIP后正常且几乎没有差别,仅输入葡萄糖后有所降低.而第二时相(20～120 min)胰岛素与C肽的反应在输入低剂量GIP之后均较输入GLP-1有明显降低,仅输入葡萄糖时却明显升高.二者对高剂量、低剂量GIP的反应相似.高血糖钳夹试验中血浆葡萄糖浓度在进行试验的4 d内无差别.健康对照组在输入GIP后胰岛素、C肽第一、二时相的分泌反应均正常.因此认为2型糖尿病患者保留对GLP-1反应的第一、二时相,而对GIP 反应的第二时相有缺陷,这可能造成2型糖尿病的发病.     

11 载脂蛋白E缺乏的糖尿病C57BL/6J小鼠限制饮食中糖基化终末产物可减少动脉粥样硬化损伤(ADA 2001年会,33-OR)

利用富含糖基化终末产物(AGE)的西方饮食,纽约的研究者研究了限制饮食中的AGEs对糖尿病动脉粥样硬化的作用.通过链脲佐菌素使8周龄的apoE-/-雄性小鼠发生糖尿病.随机分配至给予常规啮齿类食物(RD)组及已知食物热量与营养成分但AGEs含量降低10倍(LD)组.2个月时,根据主动脉根部损伤面积,发现LD组与RD组相比,动脉粥样硬化的发生显著减少,这与LD组血清AGE 水平显著降低有关.相反,血浆脂质在二组间无差别.对RD组动物进行组织染色发现损伤部位内皮细胞(EC)与泡沫细胞内有AGE聚集,而LD 组EC内AGE染色较少.AGE染色与动脉粥样硬化损伤共存,与AGE受体-1(AGE-R1)、AGE-R2密度相一致,提示AGEs、AGE-R1、AGE-R2与动脉粥样硬化过程的调节有功能上的联系.降低饮食中AGE的摄入可预防糖尿病动脉粥样硬化的发生.