重组睫状神经营养因子对胶质瘤细胞系c—myc mRNA表达的影响

目的：观察重组睫状神经营养因子（ｒＣＮＴＦ）对大鼠胶质瘤Ｃ６细胞系体外生长和癌基因ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达的影响。方法：用细胞培养和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ的表达。结果：２００ｎｇ／ｍｌｒＣＮＴＦ可抑制Ｃ６细胞的增殖，细胞形态发生明显改变，ｃｍｙｃｍＲＮＡ的表达降低。结论：ｒＣＮＴＦ对Ｃ６细胞的生长抑制作用可能与其参与癌基因的调节有关，表明ｒＣＮＴＦ作为一种细胞调节因子对胶质瘤具有治疗作用     

Tamoxifen体内外抑制胶质瘤细胞生长研究

目的：探讨Tamoxifen在体内外对胶质瘤细胞的抑制作用及其机制；方法：Tamoxifen在体内外作用于C6大鼠胶质瘤细胞系，并用MTT法、TUNEL法、免疫组化及动态MRI来检测效果；结果：Tamoxifen能在体外明显抑制胶质瘤细胞生长，在体内抑制作用尚不确定；Tamoxifen可抑制PKC及IGF-1表达；结论：Tamoxifen抑制胶质瘤细胞生长的机制之一可能是抑制PKC及IGF-1活性。     

干扰素α对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的：探讨干扰素α对白血病Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，FRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果：干扰素α可显著的降低Raji细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

反义硫代寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系转化生长因子α基因表达及生长抑制作用的研究

目的研究转化生长因子α（ＴＧＦα）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系中该ＴＧＦα基因表达的作用。方法采用人工合成反义、正义及随机三组硫代脱氧寡核苷酸（ＳＯＮ）经阳性脂质体包裹后转染人脑胶质瘤ＴＪ９０５细胞系。用细胞计数检测转染后瘤细胞的生长抑制率，用细胞原位ＲＮＡ杂交与免疫组化方法检测ＴＧＦαｍＲＮＡ及蛋白的表达水平。结果ＴＧＦα反义ＳＯＮ可抑制ＴＪ９０５细胞系的生长和ＴＧＦαｍＲＮＡ及其蛋白的表达。结论ＴＧＦα反义ＳＯＮ能够抑制人脑胶质瘤ＴＪ９０５细胞系ＴＧＦαｍＲＮＡ及其蛋白的表达，同时细胞的生长受到明显抑制。     

人脑胶质瘤细胞系BT325中癌基因表达及GBP—iRNA对其影响的研究

作者以人脑胶质瘤细胞系BT325为研究对象，胶质瘤瘤旁组织为对照，用四种癌基因探针c-myc,v-erb-B,H-ras和v-sis进行DNA和RNA打点杂交，并用小剂量GBR-iRNA处理BT325细胞。结果表明BT325细胞系中c-myc癌基因扩增和过高表达的强度分别为4.21倍和3.92倍；erb-B癌基因扩增和过高表达的强度分别为8.14倍和7.20倍。小剂量GBP-iRNA可抑制BT325细胞系中c-myc和erb-B癌基因的表达，抑制幅度分别为43.16%和41.72%。     

下调miR-93表达抑制人脑胶质瘤细胞生长和侵袭的研究

目的 验证下调miR-93表达对人脑胶质瘤细胞株的生长和侵袭抑制作用.方法 合成miR-93抑制物,应用脂质体转染人脑胶质瘤细胞以抑制其表达,实时定量PCR检测转染后miR-93表达情况,流式细胞术检测、四甲基偶氮噻唑法(MTT)试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长变化,tran-swell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染miR-93抑制物后,细胞中miR-93高表达被明显抑制,细胞周期进展迟滞,S期细胞减少,生长速度减慢,克隆形成能力减弱,穿过matrigel胶的细胞数减少,侵袭能力被抑制.结论 下调miR-93表达可抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭.     

p53基因对胶质瘤细胞系U251生长抑制作用的研究

背景与目的：肿瘤抑制基因p53是调节多种与细胞周期、凋亡、DNA修复等有关基因表达的转录因子。p53基因在大约30％的胶质瘤中发生突变，在胶质瘤的发生和发展中起重要作用。本文主要探讨野生型p53基因过表达对脑胶质瘤细胞系U251细胞生长抑制的机制。方法：通过p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染U251细胞系，RT-PCR及Westem blot方法检测转染效率；并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因对U251细胞生长的影响。结果：MOI为100时，野生型p53基因的过表达可引起U251细胞G0、G1期阻滞、诱导U251细胞凋亡以及引起U251细胞生长抑制。结论：p53基因可以通过细胞周期G0、G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长。     

胶质瘤TGF-β1、p53、PTEN表达及其临床意义

目的探讨TGF-β1、p53、PTEN蛋白在不同恶性程度胶质瘤中的表达及临床意义.方法应用免疫组化EliVisionTM二步法检测92例胶质瘤中TGF-β1、p53、PTEN蛋白的表达.结果 TGF-β1、p53与胶质瘤级别呈正相关,高分化组与低分化组组间差异有显著性(P<0.05、P<0.01);PTEN与胶质瘤级别呈负相关,高分化组与低分化组组间差异有显著性(P<0.05);TGF-β1与p53的表达呈正相关(r=0.231、P<0.05);PTEN不表达、p53表达的胶质瘤患者预后差(P<0.05、P<0.05).结论 PTEN、p53的表达与预后密切相关,可以作为判断胶质瘤预后的标记.     

胶质瘤组织中基质分解素-1基因表达的研究

目的　探讨胶质瘤组织中基质分解素 -1(MMP3 )基因表达与胶质瘤浸润性生长特性的关系。方法　采用逆转录共扩增定量PCR方法 ,检测脑胶质瘤及正常组织中MMP3 基因表达水平。结果　Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中MMP3 表达水平 ( 1.11±0 .2 8)明显高于Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤 ( 0 .6 4± 0 .10 )及正常脑组织 ( 0 .2 3± 0 .0 3) ;胶质瘤组织MMP3 基因表达水平与肿瘤大小无关。结论　基质分解素 -1在胶质瘤浸润生长中可能起重要作用。     

14-3-3β通过β- catenin 调控胶质瘤细胞的生长和增殖

目的：研究14-3-3β基因在胶质瘤细胞生长和增殖中的调控作用。方法：构建14-3-3β基因过表达质粒并设计14-3-3β基因和β- catenin 基因 siRNAs,分组转染人体正常神经星形胶质细胞系 SVGp12和胶质瘤细胞系 U87,噻唑蓝（MTT）法观察14-3-3β基因过表达/沉默和β- catenin 基因沉默对细胞生长和增殖的影响,并利用 qRT - PCR 定量分析受调控原癌基因的表达变化。结果：14-3-3β基因过表达的星形胶质细胞生长能力显著高于对照组（P ﹤0.05）,而β- catenin 基因沉默的星形胶质细胞生长受到明显抑制（P ﹤0.05）。观察到14-3-3β基因或β- catenin 基因沉默的胶质瘤细胞生长能力也显著低于对照组细胞（P ﹤0.05）。结论：胶质瘤细胞的生长和增殖受到14-3-3β基因的调控并且其调控是通过β- catenin 基因来进行的,但其具体的信号调控机制需要进一步探讨。     

替莫唑胺抑制胶质瘤细胞系U251体外侵袭能力的研究

背景与目的：胶质瘤是原发性脑肿瘤中发病率最高且预后较差的肿瘤,本文旨在研究替莫唑胺是否可以通过改变TGF-β2表达水平来抑制U251细胞侵袭。方法：MTT法检测替莫唑胺对U251增殖力的影响,Transwell法检测U251细胞侵袭能力．Real-time RT—PCR检测替莫唑胺作用后U251细胞中TGF-βmRNA表达．ELISA法检测TGF-β2蛋白表达。结果：替莫唑胺抑制U251细胞侵袭力,MTY试验证实替莫唑胺（50μmol／L）在24小时内对U251细胞存活力无影响。Realtime RT—PCR和ELISA法证实替莫唑胺降低了U251细胞中TGF-β2表达。通过引入TGF-β2抗体,发现替莫唑胺通过抑制TGF-β2表达降低了U251细胞的侵袭作用。结论：替莫唑胺可以通过抑制TGF-β2表达来降低U251细胞的侵袭作用,因此替莫唑胺不仅可以应用在化疗领域,而且还可以运用到生物治疗领域．从而为胶质瘤的治疗提供新靶点。     

紫杉醇对尤文肉瘤细胞系诱导凋亡及生长抑制的研究

目的 研究抗微管药紫杉醇在体外实验条件下对尤氏肉瘤细胞系RD—ES的诱导凋亡及生长抑制作用。方法 不同浓度的紫杉醇作用于体外培养的RD—ES细胞，通过形态学观察，台盼兰染色，Giemsa染色，流式细胞仪分析技术，原位末端标记分析凋亡细胞DNA降解产物等方法，观察紫杉醇诱导RD—ES凋亡的作用。结果 通过与其他化疗药物比较，及随时间剂量改变的情况，可见紫杉醇对RD—ES细胞的诱导凋亡作用呈时间，剂量依赖关系，细胞分裂受阻，凋亡峰明显，多核瘤细胞增多，胞浆中空泡明显。原位末端标记可见DNA降解后的阳性反应。结论 体外诱导实验证实紫杉醇对RD—Es细胞系的有丝分裂有明显的抑制作用及诱导凋亡作用且随时间，剂量增加而增大。     

人脑胶质瘤中PTEN基因突变和蛋白表达的研究

目的 :研究人脑胶质瘤中PTEN蛋白表达和PTEN基因突变情况。方法 :应用免疫组化技术和聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR SSCP)技术 ,检测 10 2例人脑胶质瘤中PTEN蛋白表达及PTEN基因突变。结果 :PTEN阳性染色主要定位于细胞质中。 10 2例中PTEN蛋白表达 5 5 / 10 2(5 3 9% ) ,高分化组 (Ⅰ级和Ⅱ级 ) 32 / 39(82 1% )与低分化组 (Ⅲ级和Ⅳ级 ) 2 3/ 6 3(36 5 % )之间差异有极显著意义 ,P <0 0 1;4 2例胶质母细胞瘤中共有 11例发生PTEN基因突变 ,突变率为 2 6 % (11/ 4 2 ) ;6 0例其他胶质瘤中仅 1例发生突变 ,胶质母细胞瘤突变率显著高于其他胶质瘤 ,χ2 =11 6 2 ,P <0 0 1。结论 :PTEN基因突变或缺失在人脑胶质瘤的发生发展中起重要作用 ,与肿瘤恶性分化程度密切相关     

重组人β-干扰素在体内外对肿瘤生长的抑制作用

观察点突变重组人 β 干扰素 (IFN β)对人肿瘤细胞体内外生长的抑制作用 ,为其临床应用提供实验资料。 方法 :分别将人结肠癌LoVo、肺腺癌A5 49细胞置于含 2 0 0IU/ml,10 0 0IU/ml及 5 0 0 0IU/mlIFN β培养基中培养 2 4h后 ,于 0 .3%琼脂糖培养基中培养 10～ 14d ,观察软琼脂中集落形成情况。将裸鼠皮下接种LoVo ,A5 49细胞 ,72h后分组 ,每次注射 2 0万IU/kg或 10 0万IU/kg ,5 0 0万IU/kgIFN β ,每天 1次 ,连续 10d ,同时设置生理盐水对照组、标准品组和注射用环磷酰胺治疗组。荷瘤后第 14天处死小鼠 ,称取瘤重。以上实验均重复 3批。结果 :在体外 ,经重组人新型 β 干扰素处理的LoVo细胞及A5 49细胞的集落数均明显低于未经处理的细胞 (0 .0 5 >P >0 .0 1) ,与标准品组无明显差异 (P >0 .0 5 )。荷瘤裸鼠经治疗后 ,瘤重随着重组人 β 干扰素剂量的升高而降低 ,即重组人β 干扰素可呈剂量依赖性地抑制LoVo ,A5 49细胞在体内的生长 ,在疗效方面与标准品间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :重组人 β 干扰素在体内外能明显抑制人结肠癌和肺腺癌的生长     

P53反义RNA抑制肝细胞癌生长的研究

目的;针对突变型P53基因的致癌性,采用反义RNA技术以阻断肝细胞内源突变型P53的表达,研究对肝癌细胞生长的影响,为肝癌基因治疗提供可行的理论基础。方法;采用定向克隆将人野生型P53基因cDNA反向插入到哺乳动物表达载体P^CR3.1的EcorRⅠ和XbaⅠ位点,构建了反义P^CR3.1-P^53(AS)表达载体。用免疫组化法鉴定Bel-7402肝细胞株为内源P53突变株,用脂质体转染法将PCR3．1－P53（AS）、PCR3．1空载体导入Be17402细胞中,同时设Bel17402细胞对照组。用MTT法测定细胞的生长、用FCM测定细胞周期的变化。结果：转入PCR3．1－P53（AS）Bel7402细胞生长明显受到抑制,而转入PCR3．1的Bel7402细胞生长与对照组Bel7402细胞之间差异不大;FCM结构也表明转入PCR3.1-P53(AS)的细胞的生长明显被阻滞于G0／G1期,而其他两组之间则相差不大,表明可能P53反义RNA对肝癌细胞突变型P53表达的阻断,肝癌细胞显示出正常方向逆转迹象。结论：本研究结果表明,肝细胞癌内源突变型P53的表达被反义RNA抑制后,细胞增殖速度显著下降,FCM的结果也证明细胞部分受阻于G0／G1期,显示了向正常方向逆转的迹象。此研究结果即为肝癌发生提供理论基础,也为肝癌基因治疗提供新思路。     

重组人干扰素-β制品的质量标准研究

目的：通过对重组ＩＦＮ－β的质量研究和实验方法参数的选择,建立重组ＩＦＮ－β的质量控制标准。方法：通过采用细胞病变抑制法,以ＩＦＮ－α国家标准器、ＷＨＯ的ＩＦＮ－β国际标准品作为参考品测定样品的含量,比较Ｌｏｗｒｙ法、ＢＣＡ法测定ＩＦＮ－β的蛋白浓度,采用鲎试剂法检测内毒素含量,按照《中国生物制品规程》有的关要求进行其他项目的测定。结果：结果表明可和ＩＦＮ－α标准品和ＩＦＮ－β标准品测定ＩＦＮ－β     

基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

目的摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中,17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4h后的表达量最高,目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中,纯度达80%,经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%,用G25柱转换缓冲液,使缓冲液pH值＞8,同时去除缓冲液中的还原剂DTT,将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制,最终获得纯度＞98%和比活性>3×107U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。     

人脑胶质瘤中癌基因及其他相关基因的研究进展

癌症的发展是一个复杂和多步骤的过程,在这个过程中一系列进行性改变导致体细胞的失控性增殖。癌细胞的特征是能够无约束地生长,能够侵袭到周围正常的组织,并能够转移到远处的器官。大多数肿瘤,包括神经系统的肿瘤,都是原发的。改变后细胞的遗传学破坏是由于或者是遗传中的倾向性,细胞周期中DNA重排,病毒感染和整合;或者是暴露在突变因子情况下,诸如离子辐射一类,这些因素可以使癌细胞的生长优于它的正常部分。通常广谱肿瘤中的遗传学改变包括两类基因的改变：第一,癌基因的优势,它的出现导致细胞的改变;第二,隐性抗癌基因的缺乏,它的缺乏引起细胞的改变。后者通常又称为肿瘤抑制基因,生长抑制基因或隐性抗癌基因。正常细胞的增殖是在这些促进细胞生长的原癌基因和抑制细胞生长的抗癌基因的内在控制下进行的突变、重排、缺失或扩增,从而潜在性地激活原癌基因导致肿瘤的形成。同样的事件可以发生在抗癌基因和抑癌基因的失活,干扰它们在细胞中作为细胞增殖的负性调控作用。这个讲座主要介绍GenBank中与人脑肿瘤相关的抑癌基因的情况。     

经胎盘诱发大鼠脑肿瘤不同阶段p53表达的研究

目的：利用亚硝基乙基脲（ENU）经胎盘诱发大鼠脑肿瘤的模型。对肿瘤发生前，后各个阶段的p53基因的变化进行连续地观察和研究。方法：（1）取孕7d大鼠，腹腔注射NEU（80mg/kg)建立子代鼠脑肿瘤模型；（2）应用免疫组化的方法。对子代鼠60d,90d,120d和150d鼠脑p53蛋白表达进行观察。结果：子代鼠出生后60d,90d,120d和150d，特别是60d和90d组，异常p53蛋白的表达增加，肿瘤内与瘤周组织间差异有统计学意义。结论：异常p53蛋白的表达存在于肿瘤发生前，发生早期及发生后各阶段，进一步说明p53基因突变及其表达产物功能缺乏是脑胶质瘤起源的重要原因。p53基因的功能失常仅可能是导致基因链活动紊乱的因素之一。而肿瘤的形成还可能需要其他因素点燃。成年期的生命特点值得注意。