脑缺血-再灌注后细胞凋亡的Caspase-3机制

脑缺血-再灌流后细胞凋亡的发生与Caspase-3密切相关。缺血-再灌流后,自由基的产生、细胞器的损伤、促凋亡因子释放等都会使Caspase-3 mRNA表达增强诱导凋亡。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系.方法 将42只成年雄性SD大鼠,体重250～280 g,随机分成对照组(n=3)、假手术组(n=3)和缺血再灌注6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和6 d组(n=6).采用栓线法制备大脑中动脉缺血90 min再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察Survivin和Caspase-3表达,TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 对照组及假手术组未见Survivin和Caspase-3表达,仅见凋亡细胞0～2个,缺血再灌注6 h,显示在缺血侧皮层、皮层下纹状体和海马区Survivin和Caspase-3表达增多,凋亡细胞增多,12 h～1 d三者均持续增多,2 d Caspase-3表达及凋亡细胞达到高峰,3～6 d呈下降趋势,而Sur-vivin的表达3 d达高峰,持续至6d有下降趋势(P<0.05).结论 大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后诱发Survivin和Caspase-3异常表达.并与细胞凋亡有密切联系.     

参附注射液对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区Caspase-3表达的影响

目的研究参附注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、参附注射液治疗组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,应用HE染色检测海马CA1区组织病理学改变,免疫组织化学法检测海马CA1区神经细胞Caspase-3的表达。结果缺血组大鼠海马CA1区神经细胞Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,给予参附注射液处理后,Caspase-3的表达较缺血组减弱（P〈0.01）,差异均有统计学意义。结论参附注射液可降低大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区Caspase-3的表达,可能与其脑保护作用有关。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在脑缺血再灌注损伤神经元凋亡中的作用

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,属于白细胞介素1β转换酶家族,是导致细胞凋亡的蛋白酶系统,在细胞凋亡的执行期发挥关键作用。在脑缺血再灌注损伤的病理过程中,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶发挥了重要的作用。     

Caspase-3激活的DNA酶与局灶性脑缺血神经元再灌注损伤的关系研究

日的 在半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂的干预下,探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3激活的DNA酶(caspase-activated Dnase,CAD)表达变化与神经元损伤的关系.方法 线拴法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,侧脑室给予抑制剂,应用HE、免疫组化、原位末端标记(TUNEL)染色及电镜观察大鼠大脑中动脉栓塞1 h后再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时caspase-3和CAD蛋白的表达及神经元凋亡程度的变化.结论 模型组蛋白与凋亡细胞的时空动态变化趋势基本一致;干预组各指标趋于平坦,6 h后波峰均有下降.结论caspase-3后继CAD的激活参与了鼠脑再灌注神经元的凋亡,caspase-3抑制剂能一定程度降低缺血再灌注后神经元凋亡,起到神经保护作用.     

缺血再灌注后脑细胞凋亡和Caspase-3蛋白的表达

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及分子机制。方法：雄性SD大鼠,采用可逆性大脑中动脉内线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血不同断头取脑,采用免疫组织化学检测Caspase-3蛋白表达,HE染色,甲苯胺蓝染色,光镜检查细胞损伤改变,测定丙二醛（MDA）含量。结果：光镜检查发现,缺血1h未见明显的神经细胞坏死;缺血2h,3h,6h组,出现细胞坏死及凋亡改变,假手术组未见上述变化;随缺血时间的延长Caspase-3蛋白表达呈递增趋势,Caspase-3蛋白表达时相与神经细胞的凋亡基本一致;缺血再灌注2h组比缺血再灌注0.5h组MDA含量明显增加。结论：随缺血及再灌注时间延长脑损伤逐渐加重,缺血性卒中溶栓治疗应在缺血1h以内进行,Caspase-3蛋白表达增加是引起细胞凋亡的分子机制之一。     

Caspase-3与脑缺血再灌注后神经元凋亡

脑缺血再灌注损伤(cerebral is-chemia reperfusion injury,CIR)是指脑缺血一定时间再恢复血液供应后,其功能不但未能恢复,却出现了更加严重的脑机能障碍。缺血再灌注损伤是一种常见、复杂的病理生理过程。在缺血再灌注损伤时除细胞坏死外,还存在另一种细胞死亡形式即细胞凋亡(apotosis)。由于     

中药对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡机制的研究进展

脑血管疾病一直严重危害人类健康,其中脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)的病理生理过程在这一疾病及其相应的治疗过程中发挥着重要的作用.近年来国内外的研究显示细胞凋亡与CIRI的关系密切,现将有关凋亡机制以及中药及其有效成分对抗CIRI细胞凋亡研究综述如下.     

Caspase-3激活的DNA酶在缺血再灌注神经元损伤中的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)激活的DNA酶(caspase-activated Dnas,CAD)基因、CAD蛋白的表达及Caspase-3抑制剂对缺血神经元的保护作用及其机制.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及再通模型,利用RT-PCR与Weste...     

己酮可可碱对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3表达的影响

目的：探讨己酮可可碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法：sD大鼠随机分为假手术组、脑缺血-再灌注模型组、川芎嗪组和己酮可可碱组,每组10只。术前实验性灌胃给药,川芎嗪给药剂量为50mg／kg,fyllX组给药剂量为100mg／kg,每日-次,连续给药10天。采用线栓法制作大鼠脑缺血-再灌注损伤模型。造模成功2h后再尾静脉注射1次。假手术组和对照组给予生理盐水。用TUNEI．法检测脑缺血2h再灌注24h大鼠皮质和海马神经细胞凋亡率,免疫组化法观察Bcl-2和Caspase-3蛋白表达。结果：与脑缺血-再灌注组比较,川芎嗪组和PTX组皮质和海马部神经细胞凋亡率明显减少（P均〈0．01）,Bcl-2表达明显增加（P均〈0．01）,Caspase-3表达明显降低（P均〈0．01）,川芎嗪组和Prx组两组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：PTX可抑制大鼠神经细胞凋亡,促进Bcl-2表达,降低Caspase-3表达。     

不同脑温对全脑缺血再灌注后相关基因及细胞凋亡的影响

目前国内外学者开始尝试低温治疗脑缺血、脑出血和重型颅脑外伤 [1 ] ,但是脑缺血后脑温控制到何种程度方可发挥最大的脑保护作用 ,同时又不产生严重的并发症 ,至今尚未见统一的标准。为此 ,本研究以大鼠全脑缺血再灌注模型 ,观察不同程度降温对脑缺血后海马 CA1 区的 c- fos和大脑皮质bcl- 2相关基因以及脑细胞凋亡表达的影响。1　材料与方法1.1　动物及分组　健康雄性 Sprague- Dawley(SD)大鼠 ,体重 2 5 0± 15 g,随机分为假手术组和脑缺血组 ,后者再分为常温 (37～ 38℃ )组、亚低温 (31～ 32℃ )组和高温 (41～ 42℃ )组 ,每组 6只…     

纳络酮对脑缺血-再灌注海马细胞凋亡的影响

目的观察缺血-再灌注期间海马细胞的凋亡及纳络酮对神经细胞的保护作用.方法20只新西兰大白兔随机分成 4 组(n=5)正常对照组、单纯缺血组(缺血组,夹闭颈总动脉和椎动脉30min)、缺血-再灌注组(再灌注组,夹闭颈总动脉和椎动脉30min后开放6h)、缺血-再灌注加纳络酮干预组(纳络酮组, 0.8 mg/kg静注及0.3mg/kg静滴).然后用流式细胞仪检测干预前、后的海马细胞的凋亡状况.结果缺血组(17.87%±3.04%)、再灌注组(38.84%±12.86%)的细胞凋亡比率显著高于对照组(5.94%±0.59%,P<0.01);再灌注组又明显高于缺血组 (38.84%±12.86% vs 17.87%±3.04% )和纳络酮组(38.84%±12.86% vs 8.96%±0.97%,P<0.01);而对照组与纳络酮组间则无显著差异.结论①兔全脑缺血后30min出现海马细胞凋亡;再灌注6h后,上述改变加重.②纳络酮对缺血-再灌注引起的神经细胞凋亡有一定的保护作用.     

天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

目的探讨天麻素对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用机制。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24h后取大鼠大脑组织进行HE染色观察病理改变,TUNEL法计数凋亡细胞,Real time RT-PCR检测胱天蛋白酶3(casepase-3)mRNA的表达。结果天麻素能明显改善中动脉闭塞所致局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理变化,减少细胞凋亡(P<0.01),降低caspase-3mRNA的表达(P<0.05)。结论天麻素可通过下调caspase-3mRNA的表达减少大脑神经细胞凋亡,对缺血再灌注损伤大鼠脑组织发挥保护作用。     

山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的保护作用

目的：探讨山楂叶总黄酮（FMCL）对脑缺血再灌注(CIR)损伤的保护作用及其可能机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组（舒血宁1.8 mg•kg^-1）及山楂叶总黄酮高、中、低（100 、30和10 mg•kg^-1）剂量组，采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型；流式细胞仪检测神经细胞凋亡率；原位末端标记（TUNEL）法测定神经细胞凋亡；免疫组化染色观察凋亡相关蛋白Fas、细胞色素C(CytC)蛋白表达的变化。结果：与模型组比较，山楂叶总黄酮高剂量组TUNEL染色阳性细胞数明显减少（P<0.01），凋亡率明显下降（P<0.01）；与模型组比较，山楂叶总黄酮高和中剂量组CytC蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01），Fas蛋白表达无明显变化。结论：山楂叶总黄酮可抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，其机制可能与抑制线粒体Cyt C通路的凋亡有关。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3、Bcl-2表达的影响

[目的]探讨阿托伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.[方法]随机将48只雄性SD大鼠分为4组:对照组、假手术组、缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组.阿托伐他汀预处理组在模型制备前用阿托伐他汀20mg/kg连续灌胃10d,1次/d;假手术组及缺血再灌注组用相同体积的等渗盐水连续灌胃10d.以线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于缺血2h再灌注24 h后行5分制神经功能评分,并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达.[结果]与对照组和假手术组比较,缺血再灌注组和阿托伐他汀预处理组神经功能缺损较为严重,脑梗死体积增大,凋亡细胞数目增多,Caspase-3、Bcl-2表达显著增加(P＜0.01).与缺血再灌注组相比,阿托伐他汀预处理组神经功能有不同程度改善,脑梗死体积明显减小,凋亡细胞数及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达增高,比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).[结论]阿托伐他汀预处理对大鼠脑缺血再灌注有神经保护作用,其作用机制可能与阿托伐他汀上调脑组织中Bcl-2、下调Caspase-3表达,抑制细胞凋亡有关.     

BMP-7对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中Bcl-xl和Caspase-3表达影响

目的探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-xl和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspases-3)表达的影响。方法成年健康雄性SD大鼠38只,应用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、BMP-7治疗组(C组),C组于再灌注后立即尾静脉注射BMP-7(0.1mg/kg),A组和B组同步给予等量生理盐水,于再灌注24h后行神经功能缺陷评分,原位末端标记(TUNEL)法检测梗死脑组织细胞凋亡情况,免疫组化方法检测脑组织中Bcl-xl和Caspase-3的表达。结果缺血2h再灌注24h后,与B组相比,C组大鼠神经功能缺陷评分明显降低(t=3.35,P<0.01);TUNEL检测阳性细胞数明显减少(F=409.95,P<0.01);缺血侧脑组织Bcl-xl的表达明显增强(F=229.31,P<0.01),而Caspase-3的表达明显减弱(F=848.38,P<0.01)。结论 BMP-7可能通过增强Bcl-xl的表达和抑制Caspase-3的表达对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤发挥一定的保护作用。     

脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的研究

目的探讨脑缺血再灌注后不同时间点病理变化与细胞凋亡的特点。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,光镜下观察病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果1脑缺血2h再灌注1~6h皮质缺血区病理变化不明显,24~48h病理变化明显;2脑缺血2h再灌注1h皮质缺血区可见凋亡细胞,24~48h达高峰,72h开始下降。结论脑缺血2h再灌注1~6h皮质缺血区脑细胞凋亡较轻,24~48h明显加重,且与病理变化相对应。宜尽早采取有效的干预措施抑制细胞凋亡,减轻脑组织病理损害。     

黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的：：探讨黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法：大鼠脑缺血再灌注模型的制备采用改良的四血管(4－VO)阻断法。采用 TUNEL 法检测海马神经元凋亡情况,RT－PCR 法和免疫组织化学法分别检测 caspase－3 mRNA 及蛋白的表达。结果：模型组大鼠海马组织神经细胞凋亡指数及 caspase－3表达均明显增多,与假手术组相比,差异具有统计学意义(P <0.05);而黄芪注射液可明显抑制脑缺血再灌注后的神经细胞凋亡,减少 caspase－3的表达,与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠脑损伤具有明显的脑保护作用,该作用机制可能与抑制 caspase－3表达有关。     

脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关基因Caspase-3表达的影响

[目的]观察脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,进一步探讨其作用机制。[方法]Wistar大鼠雄性70只,按照体质量随机分为7组,每组10只。即脑心康片高剂量组、中剂量组、低剂量组、尼莫地平组、银杏叶片组、模型组和假手术组,分别给等体积生理盐水,各组均连续灌胃给药7d。末次给药30min后,采用大鼠大脑中动脉线栓法制备不完全脑缺血模型,观察脑心康片给药前后大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经功能缺损导致的行为学变化;免疫组织化学法检测脑心康片对脑缺血后24、48、72h脑组织半胱氨酰天冬氨酸激酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。[结果]脑心康片能明显改善脑缺血大鼠的神经功能缺损症状,抑制Caspase-3蛋白的表达。[结论]脑心康片对脑缺血具有保护作用,遵循一定的时效关系和量效关系,其机制可能与脑心康片抑制凋亡相关基因的表达,进而抑制神经元细胞凋亡有关。