活性氧在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用

目的 评价活性氧(ROS)在七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,符合标准的40片海马脑片随机分为4组(n=10):氧糖缺失组(OGD组)、4%七氟醚预处理组(Sevo组)、ROS清除剂组(MPG组)和4%七氟醚预处理+ROS清除剂组(SM组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区缺氧期间和复氧1 h期间的顺向群锋电位(OPS);采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TYC)染色定量比色法分析脑片损伤程度.结果 与OGD组相比,Sevo组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率均升高,组织损伤百分率降低(P<0.01);与Sevo组相比,MPG组和SM组OPS消失时间缩短,OPS恢复程度、OPS恢复率降低,组织损伤百分率升高(P相似文献   

线粒体KATP通道介导七氟醚后处理的脑保护作用

目的 观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤保护与线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channels,mitoKATP)的关系. 方法 将符合标准的海马脑片按随机数字表法分为4组(每组10片):缺氧无糖损伤对照组(oxygen-glucose deprivation,OGD组)、4％七氟醚(sevoflurane)后处理组(4％Sevo组)、mitoKATP通道阻滞剂5-羟葵酸盐(5-hydroxydeeanoate,5-HD)组(5-HD组)、4％七氟醚后处理+5-HD组(SHD组),采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(orthodromic population spike,OPS);利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度. 结果 与OGD组比较,4％Sevo组OPS恢复程度(68±9)％和恢复率(60％)升高,组织损伤百分率(0.40±0.05)降低.与4％Sevo组比较,5-HD组和SHD组OPS恢复程度(6±5)％、(7±7)％和恢复率(10％、20％)降低,组织损伤百分率(0.64±0.08、0.65±0.06)升高. 结论 七氟醚后处理可减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤,该保护作用与mitoKATP通道的激活有关.     

ERK1/2信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用.方法 选取符合标准的大鼠海马脑片,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=10):缺氧无糖组(OGD组)海马脑片进行15 min缺氧无糖处理,即将灌流液改为经95％N2-5％ CO2混合气体饱和的无糖人工脑脊液(aCSF);4％七氟醚后处理组(Sevo组)缺氧无糖处理后用4％七氟醚平衡后的aCSF灌流30 min;ERK1/2特异性抑制剂PD98059组(PD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)的aCSF灌流10 min;二甲基亚砜组(DMSO组)缺氧无糖处理后用含1 mol/L DMSO的aCSF灌流10 min;4％七氟醚后处理+PD98059组(SPD组)缺氧无糖处理后用含ERK1/2特异性抑制剂PD98059(50μmol/L)并通人4％七氟醚的aCSF灌流30 min,处理完成 后各组均再用正常aCSF灌流1h.采用脑片灌流及电生理技术,细胞外记录海马CAI区的顺向群峰电位(OPS);采用TTC染色-定量比色法评价海马脑片损伤程度.结果 与OGD组比较,Sevo组OPS恢复程度和恢复率升高,海马脑片损伤程度降低(P＜ 0.01),其余3组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,PD组、DMSO组和SPD组OPS恢复程度和恢复率降低,海马脑片损伤程度升高(P＜0.01).结论 ERK1/2信号转导通路参与了七氟醚后处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的过程.     

浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响

目的 探讨浅低温联合七氟烷对大鼠海马脑片氧糖缺失损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重80～100 g,断头处死,剥离海马,制备脑片.取符合标准的海马脑片32片,随机分为4组(n=8):氧糖缺失组(OGD组)、七氟烷组(Sev组)、浅低温组(MH组)和浅低温+七氟烷组(MH+Sev组).OGD组和MH组分别于37℃或32℃下用经95%N2-5%CO2混合气体饱和的无糖(氧糖缺失)人工脑脊液(ACSF)灌流脑片14 min;Sev组和MH+Sev组分别于37℃或32℃下用预先经4%七氟烷平衡的有氧有糖ACSF灌流脑片14 min,再用预先经4%七氟烷平衡的氧糖缺失ACSF灌流脑片14 min.记录海马CA1区缺氧到复氧1 h期间的顺向群峰电位(OPS).采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果 与OGD组比较,Sev组和MH组OPS消失时间延长,OPS恢复程度升高,MH组LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与MH组比较,MH+Sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01);与Sev组比较,MH+sev组OPS消失时间延长,OPS恢复程度和恢复率升高,LDH释放率降低(P<0.05或0.01).结论 浅低温(32℃)联合4%七氟烷可减轻大鼠海马脑片氧糖缺失损伤.     

异氟醚预处理改善大鼠海马脑片缺氧损伤

目的以大鼠海马脑片为研究对象,采用微电极记录技术,观察异氟醚预处理对海马脑片缺氧损伤后顺向群锋电位(OPS)以及缺氧损伤电位(HIP)的影响。方法 SD大鼠60只,随机均分为五组:空白对照组(C组);实验对照组(EC组);异氟醚预处理组(IP组);iNOS阻断剂氨基胍(AG)组(AG组);异氟醚预处理+iNOS阻断剂组(IPAG组)。IP组给予3h异氟醚预处理,AG组给予iNOS阻断剂处理,IPAG组给予3h异氟醚预处理,同时给予iNOS阻断剂,取脑片后分别给予14min的缺氧处理,观察不同处理对海马脑片OPS恢复以及HIP的不同效应。结果 IP组的OPS的恢复程度、恢复率明显高于C组、EC组、AG组和IPAG组(P<0.05),IP组HIP持续时间明显长于C组、EC组、AG组和IPAG组(P<0.05),HIP的出现时间五组差异无统计学意义。结论异氟醚预处理可明显减轻海马脑片缺氧损伤;用iNOS阻断剂可去除这种保护作用,证明这种预处理作用与异氟醚预处理产生的iNOS有关。     

瞬时受体电位阳离子通道M7在海马神经元损伤中的作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道M7(TRPM7)在七氟醚预处理缓解缺血缺氧性损伤(OGD)后海马神经元损伤中的作用。方法出生1d的SD大鼠,提取海马神经元,将其随机分为五组:对照组(C组)、七氟醚预处理组(Sev组)、OGD组、七氟醚预处理+OGD组(SD组)和七氟醚预处理+缓激肽(TRPM7特异性激动剂)+OGD(B组)。缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24h以制备OGD模型。C组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2%七氟醚预处理1h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;SD组海马神经元行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型;B组神经元于七氟醚预处理前15 min在培养基中加入缓激肽(TRPM7特异性激动剂,终浓度200μmol/L),之后行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型。正常培养24h后,分别采用MTT法检测神经元相对存活指数,TUNEL凋亡染色法检测神经元凋亡率,Western blot检测TRPM7蛋白含量,实时定量PCR法检测TRPM7 mRNA表达水平,ELISA法测定神经元IL-1β和TNF-α蛋白含量。结果 OGD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于C组(P0.05),而相对存活指数明显降低于C组(P0.05)。SD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显低于OGD组(P0.05),而相对存活指数明显高于OGD组(P0.05)。B组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于SD组(P0.05),而相对存活指数明显低于SD组(P0.05)。结论七氟醚预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻缺血缺氧性损伤后海马神经元凋亡和炎症反应。     

HO-1在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用

目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡中的作用.方法 出生48 h内的Wistar大鼠,体外培养海马神经元,随机分为6组,每组108孔,正常对照组(C组):不做任何处理;2%七氟烷预处理组(S1组):2%七氟烷预处理60 min后正常培养24 h;OGD组:缺糖缺氧45 min后复糖复氧,再正常培养24 h以制备氧糖剥夺模型;2%七氟烷预处理+OGD 组(S1+OGD组)和4%七氟烷预处理+OGD组(S2+OGD组):分别经2%、4%七氟烷预处理后制备氧糖剥夺模型;4%七氟烷预处理+ZnPPⅨ+OGD(Z组):4%七氟烷预处理同时在培养液中加入ZnPPⅨ(终浓度10 μmol/L),其余处理同S2+OGD组.正常培养24 h时检测神经元存活率、凋亡率和HO-1蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与C组比较,OGD组、S1+OGD组、S2+OGD组和Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,S1组海马神经元HO-1 mRNA 及其蛋白表达上调(P<0.01),神经元存活率、凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与OGD组比较,S1+OGD组、S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调,Z组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与S1+OGD组比较,S2+OGD组海马神经元存活率升高,凋亡率降低,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与S2+OGD组比较,Z组海马神经元存活率降低,凋亡率升高,海马神经元HO-1 mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01).结论 HO-1可能参与了七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡的机制.     

JNK信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖(OGD)损伤中的作用.方法雄性成年SD大鼠,体重270～290 g,断头处死,剥离海马,制备海马脑片.取大鼠海马脑片96张,采用随机数字表法,将其随机分为8组(n=12):对照组(C组)、OGD组、异氟醚预处理组(Iso组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、SP600125+异氟醚预处理组(SP+Iso组)、SP600125+七氟醚预处理组(SP+Sevo组)、二甲基亚砜(DMSO)+异氟醚预处理组(DMSO+Iso组)和DMSO+七氟醚预处理组(DMSO+Sevo组).采用电生理技术,细胞外记录CA1区群锋电位(PS)波幅,计算PS恢复程度.采用碘化丙啶染色法,测定细胞活力.结果 与C组比较,其余各组PS恢复程度和细胞活力降低(P＜0.01);与OGD组比较,Iso组、Sevo组、SP+Iso.组、SP+Sevo组、DMSO+Iso组和DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01);与180组比较,SP+Iso组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Iso组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05);与Sevo组比较,SP+Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高(P＜0.01),DMSO+Sevo组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异氟醚预处理和七氟醚预处理可通过抑制JNK信号通路,减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤.

Abstract：

Objective To evaluate the role of c-Jun N-terminal kinase (JNK) signaling pathway in the protective effect of isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning against oxygen-glucose deprivation (OGD) injury in rat hippocampal slices. Methods Male adult SD rats weighing 270-290 g were anesthetized with ether and decapitated. The hippocampi were removed and sagittally sliced (400 μm thick) and placed in artificial cerebral spinal fluid aerated with 95% O2-5% CO2 . Ninety-six hippocampal slices were randomly divided into 8 groups (n = 12 each): control group (group C), OGD group, isoflurane preconditioning group (group Iso),sevoflurane preconditioning group (group Sevo) , SP600125 + isoflurane preconditioning group (group SP + Iso),SP600125 +sevoflurane preconditioning group (group SP + Sevo), DMSO + isoflurane preconditioning group (group DMSO + Iso) and DMSO + sevoflurane preconditioning group (group DMSO + Sevo). Electrophysiological technique was used to record the amplitude of population spike ( PS) in the stratum pyramidale of CA1 region and the degree of recovery of PS was calculated. The cell viability was determined by propidium iodide staining. Results Compared with group C, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly decreased in the other groups ( P ＜ 0.01) . Compared with group OGD, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in groups Iso, Sevo, SP+Iso, SP+Sevo, DMSO+ Iso and DMSO + Sevo (P＜ 0.01). Compared with group Iso, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP+Iso ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Iso ( P ＞ 0.05) . Compared with group Sevo, the degree of recovery of PS and cell viability were significantly increased in group SP + Sevo ( P ＜ 0.01) , while no significant change was found in group DMSO + Sevo ( P ＞ 0.05). Conclusion Isoflurane preconditioning and sevoflurane preconditioning can attenuate the OGD injury to rat hippocampal slices through inhibiting JNK signaling pathway.     

七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响

目的探讨七氟醚对新生小鼠fractalkine/CX3CR1表达及学习记忆功能的影响。方法取健康6日龄C57BL/6新生小鼠36只,分为对照组(C组)、七氟醚1组(S1组)、七氟醚2组(S2组),每组12只。C组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的60%氧浓度的吸入;S1组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的2%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%;S2组小鼠出生后第6、7和8天每天接受1次2 h的3%七氟醚麻醉,吸入氧浓度为60%。三组分别于出生后第9天(T_1)及出生后第34天(T_2)时各处死6只小鼠,取脑组织,采用Western blot法检测海马脑片fractakine和CX3CR1蛋白含量;real-time PCR检测海马脑片fractalkine和CX3CR1 mRNA的表达量。三组剩余6只小鼠用药3周后即出生第29天时行为期5 d的mirror水迷宫实验进行学习记忆能力测试并记录。记录出生后第29～32天小鼠的逃避潜伏期和游泳速度、原平台穿越次数。结果与C组比较,S1组和S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05);与S1组比较,S2组学习记忆功能降低且海马脑片fractalkine和CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论 6日龄小鼠连续吸入七氟醚3 d,3周后出现七氟醚麻醉浓度递增的学习记忆能力障碍。小鼠吸入七氟醚可致幼龄小鼠海马脑片fractalkine、CX3CR1蛋白含量和mRNA表达量降低。     

内皮祖细胞源性外泌体对氧糖剥夺-复氧复糖神经元损伤的影响

目的评价内皮祖细胞源性外泌体对氧糖剥夺-复氧复糖神经元损伤的影响。方法培养HT22小鼠海马神经元, 采用随机数字表法分为3组(n=30):对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)和氧糖剥夺-复氧复糖+内皮祖细胞源性外泌体组(OGD/R+EXO组)。C组细胞正常培养, OGD/R组采用无糖无血清DMEM培养基在94%N2-1%O2-5%CO2混合气体培养6 h进行氧糖剥夺, 随后更换正常培养基进行复氧复糖24 h。OGD/R+EXO组于氧糖剥夺-复氧复糖造模前24 h在培养基中加入20 μg/ml内皮祖细胞源性外泌体。采用免疫荧光染色法鉴定内皮祖细胞, Western blot法、透射电镜、纳米颗粒追踪分析法鉴定外泌体。采用CCK-8法检测神经元活力, ELISA法测定MDA含量和SOD活性, TUNEL染色法检测神经元凋亡率, Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果培养细胞为内皮祖细胞, 成功提取内皮祖细胞源性外泌体。与C组相比, OGD/R组和OGD/R+EXO组神经元活力降低, MDA含量升高, SOD活性降低, 神经元凋亡率升高, Bax表达上调, B...