基于生物效价和整合溶出度的六味五灵片体外溶出度研究

为了探讨化学-生物联合评价六味五灵片体外溶出度的可行性,该实验考察在0.1% SDS溶出介质中,不同溶出时间的六味五灵片溶出液对LX-2肝星状细胞的抑制作用,提出基于细胞抑制率所得六味五灵片的累积溶出度,与HPLC所测的五味子甲素、特女贞苷、连翘苷各指标成分的溶出度及自定义权重系数的多成分整合的溶出度运用f₂相似因子法分别进行相关性评价。结果显示,五味子甲素、连翘苷、特女贞苷各指标成分和整合溶出度与生物溶出度相比较,f₂相似因子依次为61,43,61,75,说明多成分整合的溶出度能更全面地反映全方的生物效价,以生物活性为导向的多成分整合的溶出度评价方法有望成为评价六味五灵片体外溶出度的有效手段之一。     

基于生物效价评价不同粉碎粒度对复方鳖甲软肝片体外溶出度的影响

目的 采用MTT比色法从细胞增殖的角度,结合HPLC法,探讨不同粉碎粒度对中药固体制剂体外溶出度的影响。方法 以复方鳖甲软肝片为模型药,对其原粉入药的药材进行不同程度的粉碎,考察在pH 7.4 PBS溶出介质中,不同粒度复方鳖甲软肝片溶出液对LX-2肝星状细胞的抑制作用,提出基于细胞抑制率所得复方鳖甲软肝片的累积溶出度,并与HPLC法测定芍药苷指标成分所得的溶出度运用f₂相似因子法进行相关性评价。结果 芍药苷溶出度随粉碎粒度改变而发生变化,其中200、300目体外累积溶出率较高,且f₂相似因子大于50,表明粒度为200、300目时,2种方法所测的溶出度具有较好的相关性。结论 基于生物效价检测方法可用于复方鳖甲软肝片的粒度筛选,同时,考虑到实际生产过程中成本因素,确定200目为复方鳖甲软肝片的最佳生产工艺。     

三七普通细粉与超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1体外溶出行为的比较研究

目的 研究三七普通细粉与超微粉中三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁及人参皂苷Rg₁的溶出行为,探讨粉体粒径对皂苷类成分溶出的影响。方法 采用桨法和HPLC技术同时分析不同粒径三七粉中三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rg₁的体外溶出情况,比较不同粒径粉末的溶出速率。结果 超微粉碎后3种皂苷类成分的溶出速率均显著提高。结论 超微粉碎有助于三七饮片中皂苷类成分的溶出,粉碎粒度对有效成分的溶出有显著的影响。     

人参皂苷Rg3固体分散体渗透泵片的研制及体外释放度考察

目的 通过体外溶出实验比较人参皂苷Rg₃固体分散体的单层和双层渗透泵片在释药行为上的差异及各自的优劣。方法 分别制备人参皂苷Rg₃固体分散体增溶型单层渗透泵片和双层渗透泵片,并对处方中的影响因素：渗透压活性物质的种类和用量、助悬剂的用量、包衣液中致孔剂的用量和包衣厚度进行优化,通过体外溶出实验对比2种制剂的释药行为。结果 制备的人参皂苷Rg₃固体分散体单层渗透泵片和双层渗透泵片均符合零级释放,对2种制剂分别与零级释药模型进行拟合,拟合系数分别为r₁=0.998 1,r₂=0.990 6。结论 人参皂苷Rg₃双层渗透泵片比单层渗透泵片释药更加完全,但是制备工艺比单层渗透泵片复杂。     

壮药“国虾薄”（绞股蓝）热处理产物中人参皂苷Rg3的分离与鉴定

目的：分离、鉴定国虾薄（绞股蓝）热处理产物中皂苷类化合物。方法：国虾薄在温度125 ℃、压力0.24 MPa 的条件下,加热处理3 h,用80%乙醇加热回流提取3 h,通过大孔树脂HP-20、硅胶柱及反相柱色谱等分离手段对其热处理产物进行分离,并用离子阱飞行时间质谱（LCMS-IT-TOF）、核磁共振波谱（NMR）等数据鉴定其成分。结果：从壮药国虾薄热处理产物中首次分离获得20（S）-人参皂苷Rg₃和20（R）-人参皂苷Rg₃两种不同构型的稀有人参皂苷。结论：通过热处理的方法能从国虾薄中分离得到人参皂苷Rg₃,这为人参皂苷Rg₃的制备提供了一个新思路。     

基于传质模型分析三七总皂苷超滤界面层分布特征及影响规律

目的 基于传质模型,探索三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）超滤膜界面层浓度分布特征及影响规律。方法 以PNS中4种指标性成分三七皂苷R₁（R₁）、人参皂苷Rg₁（Rg₁）、人参皂苷Rb₁（Rb₁）和人参皂苷Rd（Rd）为检测指标,收集膜通量与指标成分截留率,基于超滤分离系数与膜通量、溶质截留率的相关性,拟合界面层浓度幂函数方程。对比混合溶液、单体溶液、成分组合对指标性成分界面层浓度的影响规律,采用响应曲面法考察成分组合配比（Rg₁-Rd）、超滤膜截留相对分子质量、跨膜压力差对界面层浓度分布的影响规律,探讨超滤分离机制。结果 界面层浓度幂函数回归系数均大于0.95,指标性成分界面层浓度与溶质浓度、跨膜压力差呈正性相关,随着截留相对分子质量的增加,PNS的超滤过程以界面层过滤向溶液过滤分离逐步过渡,表现出界面分布趋向性人参三醇型皂苷＞人参二醇型皂苷,其中Rg₁可以抑制Rd进入界面层,从而影响其分离过程。结论 构建了皂苷类成分超滤界面层浓度计算方法,初步阐明了PNS界面层分布特征和影响规律。     

三七提取液中皂苷类成分的热稳定性分析

目的：考察三七水煎液中人参皂苷Rg₁,Rb₁,三七皂苷R₁的热稳定性。方法：采用HPLC测定人参皂苷Rg₁,Rb₁,三七皂苷R₁含量,色谱条件为流动相乙腈（A）-水（B）梯度洗脱（0~12 min,19%A;12~60 min,19%~36%A）,检测波长203 nm。通过单因素试验考察温度和加热时间对三七水煎液和混合对照品溶液中人参皂苷Rg₁,Rb₁,三七皂苷R₁含量的影响。结果：三七水煎液中人参皂苷Rg₁,Rb₁和三七皂苷R₁在不同温度下加热12 h均会发生不同程度的转化,随温度的增高转化速率增大,于100℃时分别约降至初始含量的30%,50%,30%;混合对照品溶液中3种皂苷类成分则几乎不发生转化。结论：三七水煎液中3种皂苷类成分含量的变化主要不是温度引起的,而可能是三七内部特殊物质的作用效果。     

复方阿胶浆化学成分和药理作用研究进展及质量标志物（Q-Marker）预测

复方阿胶浆具有补气养血的功效,临床主要用于治疗肿瘤、血液系统及妇科类疾病,但对其化学成分及药效物质基础研究较少,质量控制手段落后。通过对复方阿胶浆的化学成分和药理作用的研究进展进行综述,在此基础上,依据“五原则”对复方阿胶浆的质量标志物（quality marker,Q-Marker）进行预测分析,初步确定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、三七皂苷R₂（R型）、地黄苷D、焦地黄苯乙醇苷A₁、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、党参炔苷、绿原酸、牡荆素鼠李糖苷等可作为复方阿胶浆的Q-Marker,为复方阿胶浆的质量标准提升与后续研究提供参考。     

UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的 采用超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS/MS）建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、拟人参皂苷F₁₁、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F₁的含量测定方法。方法 使用Waters ACQUITY BEH C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^–1,柱温为40 ℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果 6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1 054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^–1时与峰面积线性关系良好（r>0.998）,平均加样回收率（RSD）分别为96.9%（2.2%）、100.1%（1.5%）、97.2%（1.8%）、98.5%（2.3%）、96.6%（2.8%）、100.2%（3.5%)。结论 所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。     

基于HPLC-DAD-ESI/MSn技术分析八珍汤在大鼠体内的代谢化学成分

 目的 鉴定口服八珍汤后大鼠血中原型成分及代谢产物。方法 对八珍汤给药后所得血清样品,应用HPLC-DAD-MS联用技术,在线进行选择离子扫描(SIM、二级碎片离子全扫描,对八珍汤的体内代谢化学成分进行解析。结果 大鼠口服八珍汤后从血中发现了22个入血成分,其中16个成分为八珍汤所含成分的原型,6个为新产生的代谢产物,其中原型成分分别为白术内酯Ⅰ、5-羟甲基-2-糠酸、羟基芍药苷、白术内酯Ⅲ、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、阿魏酸、藁本内酯、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁;代谢产物分别为芍药苷代谢素Ⅰ、3-O-β-D-18β-甘草次酸单葡萄糖醛酸苷、甘草次酸、人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rd。结论 为揭示八珍汤的药效物质基础、阐明中药复方的配伍原则及质量标准制定提供科学的理论依据。     

Study on Integral Dissolution Model Based on Biological Potency for Compound Chinese Materia Medica

Objective To investigate the integral dissolution model based on biological potency in order to evaluate the dissolution of Compound Chinese materia medica(CCMM) in vitro. Methods The contents of paeoniflorin, phillyrin, ginsenoside Rg1, and adenosine of ten batches of Compound Biejia Ruangan Tablet(CBRT) were determined at different times. The self-defined weighting coefficient based on the contents has been created to establish the integral dissolution model. In addition, the biological potency of CBRT was measured by MTT assay. Then, the f2 similar factor was used to evaluate the similarity of the batches. Results Compared with batch a, some batches’ f2 values of paeoniflorin and adenosine were less than 50, while f2 values of ginsenoside Rg1, phillyrin, and integral component were more than 50. Likewise, ginsenoside Rg1, phillyrin, and integral component were all in good correlation with biological dissolution. Conclusion The results of the integral dissolution based on biological test of CBRT demonstrate that the bioassay method may be a promising supplement for its quality evaluation.     

人参总皂苷主要成分大鼠体内药动学研究

目的研究人参总皂苷中9种人参皂苷Rb1、Rb2/Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1和Rh1在大鼠体内的药动学。方法大鼠ig 200 mg/kg人参总皂苷后于不同时间点眼底静脉丛取血。生物样本采用正丁醇液-液萃取,经C18柱,应用梯度洗脱程序进行色谱分离(体积流量0.2 m L/min),应用液质联用(LC-MS)技术检测。结果大鼠ig人参总皂苷后,血浆中可测得6种人参皂苷(Rb1、Rb2/Rb3、Rc、Rd、Re和Rg1),其中二醇型的人参皂苷(Rb1、Rb2/Rb3、Rc和Rd)的体内暴露程度及半衰期显著高于三醇型的人参皂苷(Re和Rg1)。结论建立的人参皂苷血药浓度测定方法简便、灵敏、特异,适用于大鼠血浆中各人参皂苷的测定及人参总皂苷的药动学研究。     

人参皂苷Rh_2促进K562细胞自噬凋亡的体内实验研究

该实验为研究人参皂苷Rh_2对人白血病细胞体内抑制作用,并从自噬凋亡角度来探讨其机制。采用人白血病K562细胞异体移植瘤模型,灌胃人参皂苷Rh_2后,测取肿瘤直径、体积、抑瘤率,观察人参皂苷Rh_2的抗肿瘤活性;化学发光法检测瘤组织HDAC和HAT活性;Western blotting法检测HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC4,HDAC5,HDAC6的表达;Real-time PCR法检测自噬重要基因和HDAC6,Hsp90的mRNA表达水平;HE染色观察细胞凋亡,免疫组化法检测HDAC6,Hsp90和激活型的caspase 3蛋白表达水平。结果显示,人参皂苷Rh_2能抑制K562细胞异体移植瘤的生长,抑制率达53.10%;人参皂苷Rh_2能明显降低HDAC活性和降低HDAC1,HDAC2,HDAC6表达;人参皂苷Rh_2能抑制HDAC6和Hsp90表达,并增加自噬重要基因beclin-1,LC3A和LC3B表达;组织病理学结果显示人参皂苷Rh_2可明显增加肿瘤细胞凋亡。人参皂苷Rh_2具有较好的体内抗肿瘤作用,可能通过HDAC6,Hsp90通路调节自噬凋亡,抑制肿瘤细胞在体内增殖。     

不同干燥方式对人参果浆中稀有皂苷生成的影响

目的 研究采不同干燥方法对人参Panax ginseng果浆中原型皂苷降解和稀有皂苷生成的影响。方法 采用HPLC建立了同步检测11种人参皂苷含量的分析方法，对采用冷冻、电热、汽热3种方法干燥的人参果浆样品中原型皂苷和稀有皂苷的含量进行了测定。结果 与未干燥处理的人参果浆进行对比，冷冻干燥样品中11种人参皂苷含量变化较小；人参果浆电热干燥和汽热干燥样品中原型皂苷发生降解，稀有皂苷生成出现不同程度增加。结论 人参果浆经电热干燥和汽热干燥后原型人参皂苷Re、Rg₁、Rb₁、Rc、Rb₂、Rb₃发生降解，稀有人参皂苷F₁、Rh₁、Rg₃、Rk₁、Rh₂含量增加。     

基于HPLC法和灰色关联法评价不同产地、不同商品规格三七质量

目的客观评价三七内在质量,构建三七质量评价的灰色关联模型,为三七质量评价及多指标成分中药材质量评价提供参考。方法采用HPLC法同时测定不同产地、不同商品规格三七样品中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd含量,结合灰色关联法建立整体质量评价模型。结果所建立方法同时测定了三七皂苷R1,人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd成分含量,方法学考察结果良好;灰色关联法可以区分出道地产区样品、合格样品和不合格样品。结论所建立的HPLC测定方法简单准确、稳定快速、分离效果好,可用于三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量测定;灰色关联法可用于多指标成分中药质量评价。     

硫熏白芍配方颗粒检控指标的探讨

目的鉴于前期研究发现硫熏药材特征含硫衍生物比二氧化硫(SO_2)残留指标更具专属性和重现性,现探讨SO_2、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯(硫熏特征含硫衍生物)作为硫熏白芍配方颗粒检控指标的可行性。方法采用《中国药典》2015年版SO_2残留测定法和HPLC法,考察模拟硫熏白芍配方颗粒制剂过程中(提取、浓缩和干燥)SO_2残留和芍药苷及芍药苷亚硫酸酯的量转移规律。结果在硫熏白芍提取液、浓缩液和干浸膏中均能检测到SO_2残留、芍药苷和芍药苷亚硫酸酯,说明三者均可指示硫熏白芍配方颗粒制剂过程质量变化;但三者量转移规律不同,SO_2和芍药苷呈下降趋势,最终转移率分别为25.5%和91.8%,而芍药苷亚硫酸酯呈上升趋势,最终转移率为118.5%。对市售白芍配方颗粒检测可知,全部样品中均检测到芍药苷,凡测到SO_2残留的样品,也可检测到芍药苷亚硫酸酯。结论鉴于SO_2残留是安全性指标,而芍药苷和芍药苷亚硫酸酯分别反映了白芍配方颗粒内在质量和硫熏影响程度,故三者结合可科学评价硫熏白芍配方颗粒的品质,客观表征其安全性和有效性。     

基于有效成分的溶出性与粉末分散性构建通脉大生片的粉末分散体

目的改善通脉大生片中丹参与白芍的溶出性,构建优良的粉末分散体。方法采用普通粉碎法及超微粉碎法对白芍、丹参及紫河车进行粉碎,并将六偏磷酸钠(SH)作为粉碎分散剂,共制备19个粉末分散体样品。考察各粉末分散体的粒径分布、红外光谱、分散性,比表面积及孔隙率,采用HPLC法测定丹酚酸B、芍药苷含量,评价不同粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度。结果红外光谱结果显示超微粉碎、药材混合打粉、SH均没有使药材粉末产生新的物质。丹参-白芍混合超微粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度最高,丹酚酸B 83.57%,RSD 2.03%;芍药苷80.75%,RSD 0.61%。结论溶出度不仅受粉末比表面积的影响,同时还受到粉末分散性的影响。在改善粉末中有效成分溶出度时,不仅要考虑增大粉末的比表面积,还应改善粉末的分散性。紫河车与丹参-白芍的混合超微粉末中,丹酚酸B、芍药苷溶出度较丹参-白芍混合粉末中两者的溶出度低,因此将紫河车单独粉碎后与另两者混合。