Stat3信号传导通路对喉癌细胞G3～S期的调控

目的：探讨Stat3信号传导通路对喉癌细胞G1～S期调控的可能机制。方法：应用阳离子脂质体介导Star3反义寡核苷酸转染人喉癌Hep-2细胞，阻断其Star3通路；MTT法检测细胞增殖状态；流式细胞术检测细胞周期；Western blot检测Stat3、磷酸化Star3、G1期Cyclins、CDKs、p21、p27的表达。结果：转染Star3反义寡核苷酸后喉癌细胞增殖受抑制，Stat3、磷酸化Star3、G1期Cyclins、CDKs表达水平下降，p21与p27表达水平上升。结论：Star3信号传导通路可能通过调节CDK／Cyclin复合物与细胞周期素依赖性激酶抑制因子（CKI）成员之间的平衡而调节喉癌细胞G1～S期转换。     

Stat3反义寡脱氧核苷酸在体外诱导喉癌细胞凋亡

目的:探讨Stat3反义寡核苷酸对人喉癌Hep-2细胞株细胞凋亡的影响。方法:设计Stat3反义寡核苷酸序列,应用脂质体瞬时转染法转染人喉癌Hep-2细胞,应用Western blot和RT-PCR检测Stat3及p-Stat3的表达;MTT实验检测Stat3反义寡核苷酸对转染细胞的抑制情况,应用DNA ladder、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)及流式细胞术检测细胞凋亡水平和形态变化。结果:Western blot和RT-PCR结果显示Stat3反义寡核苷酸分别在蛋白及mRNA水平显著抑制Stat3基因表达,并在蛋白水平抑制p-Stat3表达;转染Stat3反义寡核苷酸的喉癌细胞增殖明显受到抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);DNA ladder、AO/EB及流式细胞术证实Stat3反义寡核苷酸在体外可抑制Stat3基因表达并诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,且呈现浓度依赖性。结论:Stat3对喉癌细胞的过度生长、增殖起一定作用,Stat3反义寡核苷酸能够诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖。     

Stat3反义核苷酸通过调节凋亡相关因子诱导喉癌细胞凋亡

目的:探讨反义Stat3基因诱导喉癌细胞凋亡的机制。方法:将设计好的已证实能诱导人喉癌细胞凋亡的Stat3反义寡核苷酸序列,应用脂质体瞬时转染法转染人喉癌Hep-2细胞,应用Western blot、PCR检测Hep-2细胞中Bcl-2,Bax及C-Myc基因及蛋白的表达情况。结果:Western blot和RT-PCR结果显示转染Stat3反义寡核苷酸细胞组,Bax的表达随反义寡核苷酸浓度增加,表达增强,而Bcl-2及C-Myc的表达则减弱。结论:反义Stat3寡核苷酸通过上调Bax,下调Bcl-2及C-Myc基因表达来参与其诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡的过程。     

脂质体介导p27基因转染对喉癌细胞系Hep-2生长影响的研究

目的探讨p27基因对喉癌Hep-2细胞系生长的抑制作用,为喉癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法采用基因转染技术,将p27cDNA转染到喉癌Hep-2细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果转染p27基因的喉癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0～G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dotblot、Western blot杂交和免疫组化证实,p27mRNA表达有明显差异（P〈0.01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P〈0.01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1～S期。结论提高喉癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗喉癌的新途径。     

反义Stat3基因诱导喉癌细胞凋亡的线粒体机制探讨

目的:探讨Stat3反义寡脱氧核苷酸转染人喉癌Hep-2细胞株后,细胞内线粒体的改变,为阐明喉癌细胞凋亡的机制奠定一定的理论基础,为临床上喉癌的治疗开辟一条新思路。方法:将设计好的Stat3反义寡核苷酸序列(ASODN),应用脂质体转染法以不同浓度转染人喉癌Hep-2细胞,并设空白组(MOCK)及正义对照组(SODN)作为比较,检测各转染组Hep-2细胞中线粒体膜电势、电压依赖性阴离子通道(VDAC)以及Cyt-c,以判断线粒体的变化。结果:随着ASODN浓度的增加,线粒体膜电势降低,VDAC逐渐增加,Cyt-c释放逐渐增多。结论:在Stat3影响人喉癌Hep-2细胞凋亡的机制中,线粒体途径发挥了作用。初步阐明Stat3影响喉癌细胞增殖的调控机制,为临床治疗提供了新的研究靶点。     

Re1A反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨Re1A反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞增殖的影响.方法:设计Re1A反义寡核苷酸序列,转染Hep-2细胞后在不同的时间点行MTT检测瘤细胞生长抑制情况,取转染48 h的Hep-2细胞行克隆形成实验,应用RT-PCR和Western blot检测RelA mRNA和蛋白的表达.结果:MTT显示转染Re1A反义寡核苷酸可明显抑制Hep-2细胞的增殖,随时间延长抑制率升高,与对照组比较差异有统计学意义.克隆形成实验显示Re1A反义寡核苷酸的Hep-2细胞克隆形成率明显低于对照组,与对照组比较差异有统计学意义.RT-PCR和Western blot结果显示Re1A反义寡核苷酸分别在mRNA和蛋白水平显著抑制RelA基因表达.结论:Re1A反义寡核苷酸可抑制Re1A的mRNA和蛋白的表达,并抑制Hep-2细胞增殖和克隆形成.     

表皮生长因子受体信号通路调控E-cadherin表达影响喉癌细胞增殖和侵袭的机制

目的　探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）信号通路调控喉癌细胞E-cadherin表达并影响细胞增殖、侵袭等生物学行为的机制。方法　采用外源性的EGFR激动剂表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）和EGFR酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼干预体外培养喉癌Hep-2细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移力和侵袭力及相关蛋白表达改变。结果 EGF呈时间和浓度依赖性促进喉癌细胞增殖,并使喉癌细胞G1期比例减少而S期比例增加,细胞迁移距离及侵袭能力明显增加;厄洛替尼呈时间和浓度依赖性抑制喉癌细胞增殖,并导致喉癌细胞G1期比例增加而S期比例减少,同时增加细胞凋亡率,细胞迁移距离及侵袭能力均明显低于对照组。Western blot检测发现EGF干预使喉癌细胞E-cadherin表达下调而Vimentin表达上调,而厄洛替尼干预后喉癌细胞E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调。结论 小分子酪氨酸激酶抑制剂阻断EGFR信号通路导致喉癌Hep-2细胞E-cadherin表达上调,并抑制细胞增殖和侵袭转移能力。     

XIAP反义寡核苷酸对hep-2细胞放射治疗的增效作用

目的:通过XIAP反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞增殖、凋亡及放疗反应。方法:体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6h后4Gyγ射线照射。24h后RT-PCR检测XIAPmRNA表达,流式细胞仪检测蛋白水平及凋亡率,MTT检测细胞存活情况。结果:各浓度的反义寡核苷酸转染组hep-2细胞形态改变,MTT结果为细胞凋亡率随剂量增加而增高。800nmol/LXIAP反义寡核苷酸转染,使XIAPmRNA表达下调,蛋白表达下降,细胞凋亡率增加(P<0.05);4Gy照射后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显,较对照组细胞凋亡率增加,细胞存活率明显下降(P<0.05)。结论:XIAP反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低蛋白表达,促进细胞的凋亡并能提高对放疗的敏感性。     

反义端粒酶催化亚单位抑制喉癌细胞生长的离体实验研究

目的：探讨人端粒酶催化亚单位（hTERT)反义寡核苷酸对人喉癌细胞株Hep-2的生长抑制作用。方法；用脂质体包裹hTERT反义寡核苷酸转染体外培养的Hep-2细胞，分别于转染后24、48、72h用MTT法检测细胞增殖活性，转染的72h行HE染色及端粒酶活性测定。结果：转染后细胞增殖活性降低；细胞生长密度下降；端粒酶活性受到抑制。结论：hTERT反义寡核苷酸短期内可以降低端粒酶活性、抑制喉癌细胞的生长。     

白藜芦醇抗喉癌作用的研究

目的：通过对白藜芦醇（Res）抗喉癌作用的研究,筛选一种新型的抗喉癌生物反应调节剂。方法：采用四氮唑溴盐（MTT）法测定经Res处理后的Hep2细胞的生长抑制率,并以流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;建立喉癌小鼠模型,检测NK细胞杀伤率、刺激指数、抗体释放量及IL2、IL-8、TGF-β1和VEGF的含量。结果：Res呈时间一剂量依赖性抑制Hep-2细胞增殖,促进细胞凋亡,出现明显的凋亡峰和G0／G1期阻滞现象;荷瘤小鼠生长状况改善,免疫功能增强。结论：Res作为一种生物反应调节剂,能提高机体抗肿瘤免疫应答水平,调节细胞因子分泌,发挥抗喉癌作用。     

榄香烯联合热疗对Hep-2细胞周期进程及凋亡率的实验观察

目的观察榄香烯联合热疗对体外培养的Hep-2细胞株（人喉癌细胞株）增殖抑制作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同组别对Hep-2细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期进程的变化及凋亡率,透射电子显微镜观察Hep-2细胞亚细胞水平变化。结果单纯榄香烯组、单纯热疗组及榄香烯联合热疗组,对Hep-2细胞增殖抑制率分别为28.8%、25.7%和47.1%,榄香烯联合热疗组能显著提高Hep-2细胞增殖抑制率。细胞周期进程发生明显改变：G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,凋亡率上升。透射电子显微镜下可见线粒体肿胀,核染色质趋边凝集及凋亡小体。结论榄香烯联合热疗能够抑制Hep-2细胞增殖,抑制Hep-2细胞G1期向S期转化进程,诱导Hep-2细胞凋亡。     

中药土贝母对Hep-2细胞株诱导分化的研究

目的：为了观察土贝母对Ｈｅｐ－２细胞株诱导调亡的机制。方法：应用ＭＴＴ比色法和流式细 胞仪测定细胞周期的变化，并应用电子显微镜技术观察诱导分化后亚细胞结构。结果：土贝母制剂对 Ｈｅｐ－２细胞株有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，不同的药物浓度和不同的作用时 间凋亡的发生差异均有显著意义，Ｇ１期细胞堆积，Ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞相对增多，亚细胞结构， 细胞线粒体肿胀变性，核固缩。结论：土贝母制剂能阻上Ｇ０／Ｇ１期细胞向Ｓ期转化进程，抑制Ｈｅｐ－２增 殖，促进Ｈｅｐ－２细胞凋亡。     

三氧化二砷和维生素C联合诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)与维生素C联用对喉癌细胞(Hep-2)凋亡的协同作用.方法:As2O3及联用VitC孵育体外培养的人Hep-2,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,Annexin-V/PI双染色流式细胞术观察各组细胞凋亡变化.结果:As2O3与VitC联用能显著降低单用As2O3的细胞存活率(P<0.05),同时VitC能显著增强As2O3诱导细胞凋亡作用(P<0.01).结论:联用VitC能增强As2O3诱导Hep-2凋亡的作用.     

槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用

目的:探讨槲皮素对体外培养的人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2生长的影响及作用机制,研究槲皮素治疗喉癌的可行性.方法:采用MTT法、倒置相差显微镜及流式细胞仪观察槲皮素对人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的作用情况.结果:槲皮素呈时间和浓度依赖性抑制Hep-2细胞的增殖,使Hep-2细胞贴壁能力减弱,形态变小变圆,悬浮细胞和颗粒增加,引起Hep-2凋亡,细胞周期阻滞于S期.结论:槲皮索能够抑制喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2的生长和增殖,其抑制作用与细胞凋亡有关.