幽门螺杆菌对食管癌COXⅠ表达的影响

目的观察幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)作用于食管癌细胞后细胞色素氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidaseⅠ,COXⅠ)mRNA及其蛋白表达的变化,探讨Hp在肿瘤发生发展中可能的作用机制。方法将Hp与食管癌细胞分别作用4、8、24 h,收集细胞,应用Real-Time PCR和Western blot法检测各时间点COXⅠmRNA及其蛋白表达。结果 Hp与食管癌细胞共培养4、8、24 h后,COXⅠmRNA表达量逐渐减少,4 h的表达量显著低于对照组,其后下降速度减慢,24 h后表达量不再有明显改变。COXⅠ蛋白表达呈现相似的趋势。结论 Hp与食管癌细胞共培养后,可导致线粒体编码基因COXⅠmRNA及其蛋白表达障碍,从而影响线粒体功能。     

幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响

目的观察幽门螺杆菌(H.pylori)作用于胃癌细胞后线粒体编码基因COXⅠmRNA及蛋白的表达变化,探讨H.pylori致胃癌的分子机制。方法H.pylori培养滤液分别作用于胃癌细胞4、8和12 h后,收集细胞,应用RT-PCR和W estern b lot法检测各时相点COXⅠ基因和蛋白表达变化。结果H.pylori培养滤液作用4 h后,线粒体COXⅠmRNA的表达开始降低,8 h下降更明显,12 h下降速度减缓。各时相点的表达量明显低于对照组(P<0.05)。COXⅠ蛋白表达呈现出相同的趋势,各时相点的表达量明显低于对照组(P<0.05)。结论H.pylori可下调胃癌细胞线粒体编码基因COXⅠmRNA及蛋白的表达,影响线粒体功能。     

H.pylori对胃癌细胞线粒体膜蛋白ANT1表达的影响

目的 观察幽门螺杆菌(H.pylori,HP)作用于胃癌细胞后线粒体膜蛋白ANT1 mRNA 及蛋白的表达变化,探讨H.pylori致胃癌的分子机制.方法 HP分别作用于胃癌细胞0、12、24、48h后,收集细胞,应用RT-PCR和Western blot 法检测各时相点ANT1基因和蛋白表达变化.结果 HP与胃癌细胞共培养12h后,ANT1 mRNA 的表达增加,24h增加更明显,48h达到高峰.各时相点的表达量明显高于对照组(P<0.05).ANT1蛋白表达在各时相点均增加,明显高于对照组(P<0.05).结论 HP可上调胃癌细胞线粒体膜蛋白ANT1 mRNA及蛋白的表达,影响线粒体膜通透性改变,这可能是HP通过线粒体途径诱发凋亡的分子靶点之一.     

失血性休克大鼠肠上皮细胞mtTFA、COX Ⅰ、COX Ⅳ基因表达的改变

目的 探讨失血性休克(简称休克)大鼠肠上皮细胞核转录因子mtTFA基因以及核编码线粒体蛋白基因COX Ⅳ和线粒体编码COX Ⅰ基因表达的改变.以探讨在缺血缺氧性损害中核转录因子mtTFA对线粒体基因组表达的影响.方法 采用RT-PCR方法观察休克大鼠肠上皮细胞mtTFA、COX Ⅰ和COX Ⅳ基因mRNA量的改变.结果 休克早期mtTFA mRNA表达变化不明显,至休克4h有所增强,到休克5h下降到休克前水平;休克1h大鼠肠上皮细胞COXⅠ mRNA表达开始增加,3h达高峰,后又降低,到休克5h显著低于休克前水平.休克大鼠肠上皮细胞核基因编码COXⅣ mRNA休克3h略有增高,休克4h后开始下降,至休克晚期低于休克前水平.结论 mtTFA mRNA表达变化在休克时发生较晚,且升高幅度较小,说明休克时该基因对细胞缺血缺氧性损害的敏感性较低.休克时COX Ⅰ mRNA比COX ⅣmRNA上调速度快,维持时间长,说明休克早期线粒体基因表达的改变在细胞缺血缺氧性损伤的保护中起着更重要的作用.     

幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体外膜电压依赖阴离子通道的影响

目的 观察幽门螺杆菌(HP)作用于胃癌细胞后VDAC1、VDAC2和VDAC3 mRNA的表达变化,探讨HP通过线粒体途径致凋亡的分子机制.方法 HP分别作用于胃癌细胞,0、12、24、48h后收集细胞,提取RNA,应用RT-PCR 检测各时相点VDAC1、VDAC2和VDAC3 mRNA表达的变化.结果 HP与胃癌细胞共培养12h后,VDAC1、VDAC2和VDAC3 mRNA的表达均增加,24、48h仍呈上升趋势.各时相点的表达量明显高于对照组(P<0.05).结论 HP可能通过上调VDAC 基因的表达,使线粒体膜通透性改变,引发凋亡.     

失血性休克对肠上皮细胞线粒体编码的细胞色素氧化酶mRNA表达变化的研究

目的　观察大鼠失血性休克后肠上皮细胞线粒体编码基因细胞色素氧化酶亚基 (COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ )mRNA的表达变化。方法　采用失血性休克模型 ,分离肠上皮细胞后进行RNA的提取 ,应用RT PCR检测COXⅠ、COXⅡ、COXⅢmRNA的表达变化。结果　大鼠失血性休克 1h ,COXⅠ、COXⅡ基因表达开始增强 ,2h表达最强 ,以后随着休克时间延长 ,表达又逐渐减弱 ,失血性休克晚期 5h表达显著低于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　失血性休克可引起大鼠肠上皮细胞线粒体编码基因COXⅠ、COXⅡmRNA的明显改变。     

体外共培养体系中胆管癌细胞对人脐静脉内皮细胞b-FGF和VEGF表达的影响

目的 探讨体外共培养体系中胆管癌细胞(QBC939)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立胆管癌QBC939细胞与HUVEC体外共培养体系,采用CCK-8法检测共培养不同时相HUVEC的增殖;ELISA检测共培养上清液中b-FGF含量;qRT-PCR和Western blot检测共培养不同时相点HUVEC细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达.结果 共培养后12、24、48 h和72 h,HUVEC增殖较对照组显著增高(P＜0.01).与0h组比较,共培养12、24、48 h上清液中b-FGF含量显著增高(P＜0.05).共培养12 h时VEGF mRNA表达显著增加,并持续至72 h(P＜0.01),VEGF蛋白表达在共培养12h后显著增高,24、48、72 h时与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人胆管癌QBC939细胞可促进血管内皮细胞增殖、增加b-FGF分泌和VEGF表达.b-FGF和VEGF表达增加与肿瘤血管新生,以及肿瘤的生长和转移可能具有相关性.     

肝细胞色素氧化酶Ⅰ在非酒精性脂肪肝大鼠形成中的作用

目的研究肝脏线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ(COXⅠ)在非酒精性脂肪肝大鼠的表达及其意义.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饲料2、4、8、12周组(其中每组各8只);紫外分光光度法测定肝脏细胞色素氧化酶活性,Western blot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中肝细胞COX Ⅰ蛋白的表达变化,逆转录聚合酶链反应测定肝细胞COX Ⅰ mRNA表达变化.结果脂肪肝2、4、8和12周细胞色素氧化速率分别为(0.88±0.32)、(0.76±0.37)、(0.48±0.26)、(0.39±0.21)/win,与正常对照组(0.98±0.37)/min较明显降低(P＜0.01),肝细胞COX Ⅰ基因及蛋白表达随着脂肪肝程度的加重亦明显增强.结论非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素C氧化酶活性下降以及线粒体编码呼吸链相关的细胞色素C氧化酶COX Ⅰ基因和蛋白质降低,与脂肪肝引起的肝脏损害密切相关.     

慢病毒介导HGF-ShRNA干扰肝细胞生长因子表达对肝星状细胞凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的HGF-ShRNA部分干扰大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)及肝星状细胞(HSCs)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达,对BMSCs与HSCs共培养体系中HSCs凋亡的影响,探讨两种细胞来源的HGF对HSCs凋亡的促进作用.方法 应用6孔培养板,建立BMSCs及HSCs双层细胞共培养体系,实验分4组:(1)HSCs单独培养组:HSCs单独培养;(2) BMSCs+ HSCs共培养组:BMSCs与HSCs共培养;(3)BMSCs转染共培养组:使用慢病毒介导的HGF-ShRNA转染BMSCs后与HSCs共培养;(4)HSCs转染共培养组:使用慢病毒介导的HGF-ShRNA转染HSCs后与BMSCs共培养.分别于培养24、48、72 h后,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组HSCs凋亡率,Western blot、荧光定量PCR分别检测各组DR5、Caspase-8蛋白及mRNA的表达.结果 BMSCs+ HSCs共培养组HSCs的凋亡率明显高于HSCs单独培养组和BMSCs转染共培养组,且呈时间依赖性(P＜0.01),而与HSCs转染共培养组比较差异无统计学意义(P＞0.05);BMSCs+ HSCs共培养组HSCs中DR5、Caspase-8蛋白及mRNA表达量均明显高于HSCs单独培养组及BMSCs转染共培养组(P＜0.01),而与HSCs转染共培养组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs旁分泌HGF通过上调HSCs的DR5、Caspase-8的表达促进HSCs的凋亡.HSCs自分泌的HGF在共培养体系中促进其凋亡的作用甚少.     

亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基IV的下调机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基IV(COX IV)表达的变化情况及其机制和意义.方法 用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX IV蛋白和mRNA表达的变化.活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化以及caspase-3的激活.caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化.瞬时转染干扰NB4细胞中COX IV表达后,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 亚硒酸钠诱导NB4细胞COX IV蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化.活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调与caspase-3激活.caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调.干扰COX IV表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加.结论 在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX IV在蛋白水平显著下调.活性氧介导COX IV下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX IV表达下调,抑制COX IV能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性.