同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的 探讨同系或同种胸腺与异种胸腺混合移植诱导移植免疫耐受而不发生自身免疫性疾病的可行性。方法 BALB／c裸小鼠的肾包膜下植入胸腺建立异种、同系与异种混合、同种与异种混合胸腺移植模型。4个月后，用流式细胞仪技术检测受者裸小鼠外周血中CD3^＋CD4^＋T细胞，用单向混合淋巴细胞培养了解受者T细胞对ConA以及同种异种淋巴细胞的反应性，异基因皮肤移植观察皮肤移植物存活期。用ELISA法检测受体血清中抗DNA自身抗体。结果 胎胸腺移植4个月后，受者裸小鼠中CD3^＋CD4^＋T细胞重建良好；T细胞对ConA以及无关的SD鼠异种淋巴细胞的反应性强，而对移植胸腺供体来源的淋巴细胞不发生增殖反应；受者对移植胸腺供体来源鼠皮肤移植物不发生排斥，而对无关的SD鼠皮肤移植物发生排斥。异种胸腺移植组发生消耗性疾病死亡高，抗DNA自身抗体明显高于混合胸腺移植组。结论 同系或同种异种胎胸腺混合移植可诱导受者T细胞对供者移植物的免疫耐受。     

耐受T细胞抑制NK细胞和巨噬细胞对大鼠皮肤移植物的排斥

目的 了解NK细胞和巨噬细胞在T细胞缺乏或T细胞成功重建的情况下对异种移植物排斥的作用。方法在无胸腺裸小鼠、通过混合胸腺移植重建T细胞后裸小鼠和正常免疫健全小鼠分别进行F344大鼠皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4+和CD8+T细胞的百分率,利用ConA增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果 在没有清除受体体内NK细胞和巨噬细胞的情况下,正常无胸腺BALB/c裸小鼠上移植的F344大鼠皮肤移植物发生了排斥,平均存活时间为(20.50±2.38)d;而在裸小鼠左肾包膜下移植的F344胎大鼠胸腺组织,却能够正常发育,并有效重建了受体的T细胞免疫,而且诱导了F344大鼠皮肤移植物的长期存活。结论NK细胞和巨噬细胞在异种移植物的排斥中起十分重要的作用,不同组织对NK细胞和巨噬细胞细胞毒性的易感性可能存在一定的差异。对异种供体抗原已产生耐受的T细胞可抑制受体体内NK细胞和巨噬细胞对异种移植物的排斥。     

同种移植激活的宿主树突状细胞能介导免疫耐受

目的 依据T细胞的发育机制理论。诱导针对移植物特抗原的异性免疫耐受。方法 先用致死剂量的γ射线，将受者的T细胞及干细胞去除，形成了一个不具干细胞、前T细胞和T细胞的受者模型，称受者模型Ⅰ。同时经同种皮肤移植制造正常的受者对供者器官的免疫排斥反应的模型，称模型Ⅱ。从模型Ⅱ中经免疫磁珠分选取得被供者抗原所激活的、具有抗原提呈功能的树突状细胞，与正常的事先准备好的受者骨髓细胞在体外混合后回输至受者模型Ⅰ中。受者Ⅰ完成免疫造血功能重建后。再对其行同种皮肤移植。分5组，分别观察移植皮片的存活时间。并常规病理组织切片和流式细胞分析检测。结果 由T细胞发育的上游诱导产生特异性的免疫移植耐受，比较对照组，实验组皮片存活时间显著延长（P〈0．005），流式细胞分析和病理组织学分析差异也有显著性。结论 在所建立的模型和系统中，能诱导移植物特异性的免疫耐受，也进一步验证了胸腺的阴性选择理论。     

混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受的实验研究

目的通过建立混合胸腺移植模型,对混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受及其机制进行初步研究.方法混合胎胸腺移植3个月后,进行异基因皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4 CD25 T细胞的百分率,利用免疫组化观察宿主骨髓源细胞在胸腺移植物内的分布情况.利用脾细胞过继转移,观察对异种供体抗原已产生耐受的受者脾细胞,能否将耐受状态过继转移至正常BALB/c小鼠.结果混合胸腺移植3个月后,受体外周血白细胞中CD4 CD25 T细胞的百分率为(2.83±0.20)% ,与正常BALB/c小鼠相比,相差不显著.免疫组化染色显示,在移植胸腺内宿主源MHC-Ⅱ分子阳性细胞主要位于髓质,并具有典型树突样外观.将对F344大鼠皮肤已产生耐受的脾细胞,过继转移至免疫健全的BALB/c小鼠,可特异延长胸腺供体来源的F344大鼠皮肤移植物的平均存活时间.结论通过胸腺移植诱导的免疫耐受,主要是以胸腺内的中枢排除机制以及调节性T细胞的免疫抑制作用为主,而且此种耐受具有一定的"可转传性".     

供体脾细胞输注增强CTLA4Ig致小鼠皮肤移植耐受的研究

目的：研究联合应用供者特异性脾细胞输注（donor-specific-spleen-cell-transfusion,DST)与CTLA4Ig对促进小鼠皮肤移植物存活的作用。探索CTLA4Ig促进移植物存活的作用机制。方法：单独或联合应用CTLA4Ig及供者特异性脾细胞输注，同时行皮肤移植，观察皮肤移植物存活时间并检测受者脾细胞对供者细胞的单向混合淋巴细胞反应。结果：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig使小鼠皮肤移植物的存活时间延长，并使受者脾细胞对供者细胞的反应性特异性降低，与未处理组、单用CTLA4Ig或供者特异性脾细胞输注处理组相比有显著性差异（P＜0．01）。结论：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig可促进皮肤移植物的存活。移植物中过客淋巴细胞的存在可能对CTLA4Ig诱导免疫耐受有促进作用。     

两种诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中的尝试

0 引言异种器官移植的主要障碍就是受者对异种移植物的超急性排斥. 同种移植免疫耐受的诱导成功,使得诱导对异种供体的永久性耐受变得十分吸引人. 我们对建立造血嵌合体及供者特异性抗原受者胸腺内注射等诱导免疫耐受的方法在大鼠→兔异种心脏移植模型中进行了尝试.     

槐胺碱对皮肤移植大鼠T淋巴细胞的影响

目的：研究槐胺碱（SA）对移植排斥反应的影响并探讨其发生机制。方法：以同种皮肤移植大鼠作为动物模型,免疫荧光浊测定T淋巴细胞及克亚群数量;MTT比色法测定T淋巴细胞增殖反应。结果：SA减少CD3、CD4细胞数、降低CD4／CD8,抑制T淋巴细胞的增殖,延长移植物存活时间。结论SA对移植排斥反应有抑制作用,此作用与其减少T淋巴细胞数量并抑制T淋巴细胞功能有关。     

脐血移植重建同种异基因小鼠免疫造血系统的研究

目的探讨脐血移植重建同种异基因纯系小鼠免疫造血系统的可行性,建立一种新的研究脐血移植的方法.方法孕20d的C57BL/6小鼠(H-2b)经剖腹产取出胎盘和胎鼠,分离出脐血单个核细胞(MNC),1×106个MNC经尾静脉注入致死量照射的BALB/c小鼠.1月后,用抗H-2Db单克隆抗体检测嵌合体的存在.用混合淋巴细胞培养和皮肤移植检测特异性的免疫耐受.结果未移植的对照组3周内全部死亡.移植组75%存活并形成稳定的不全嵌合体.体外混合淋巴细胞培养和体内皮肤移植发现受鼠对供者的组织和细胞产生了特异的免疫耐受.结论小鼠脐血有足够的造血干细胞,能重建同种异基因小鼠的免疫造血系统而不引起明显移植物抗宿主病(GVHD),这一模型可用于研究临床脐血移植中遇到的问题.     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

造血干细胞移植后供者淋巴细胞输注研究进展

供者淋巴细胞输注（DLI）是有效的过继免疫治疗措施,在造血干细胞移植（HSCT）前输注有利于诱发并清除受者同种异体反应T细胞预防排斥的作用。在HSCT后输注有促进植入和抗白血病复发的作用。特别是在非清髓性-HSCT后行DLI可在低移植相关并发症基础上增强移植物抗白血病（GVL）效应。     

混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的　建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法　首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果　混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4 T和CD8 T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论　混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4 T和CD8 T细胞 ,而且受体中重建的T细胞还可发挥正常的免疫功能     

异种胸腺移植后T细胞重建的初步研究

目的 建立异种胸腺移植模型，动态观察受体T细胞的重建情况。方法 将F344近交系大鼠的胎胸腺植入裸小鼠的左肾包膜下，分别在术后2，3月断尾采血，流式细胞仪检测T细胞重建情况。结果 异种胸腺移植后，能够有效重建受体的T细胞，并有明显的时间依赖关系。胸腺移植后3月，CD4＋T细胞和CD8＋T细胞占PBMC的比率分别达到7．75％和10．04％。结论 大鼠胎胸腺直接植入裸小鼠能够有效重建外周血的T细胞。     

N-乙酰半胱氨酸对负载主要组织相容性抗原的树突状细胞生物学特性的影响

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对负载同种异基因MHC抗原的树突状细胞(DC)生物学特性的影响。方法用GM-CSF IL-4定向诱导BALB/c小鼠骨髓细胞分化为DC,观察在负载MHC抗原时加入NAC对DCI-Ad和CD86mRNA的表达和刺激T细胞增殖能力的影响,及其延长同种异基因小鼠皮肤移植物存活时间的效果。结果在NAC作用下,负载MHC抗原的DCI-Ad和CD86mRNA表达水平降低;经NAC处理后,负载MHC抗原的DC刺激T细胞增殖的能力降低;小鼠皮肤移植术前用经NAC处理的负载供者MHC抗原的DC注射到受者体内,可延长移植皮片存活时间。结论NAC可抑制同种异基因MHC抗原对DC的促成熟作用,有利于诱导小鼠皮肤移植免疫耐受。     

异基因造血干细胞移植患者干细胞亚群数量与侵袭性真菌感染关系的临床研究

目的回顾性分析异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）患者T淋巴细胞亚群免疫重建与侵袭性真菌感染（invasive funga linfections,IFI）相关性。方法通过观察移植后T淋巴细胞亚群重建特点,比较真菌易感者与非易感者之间T淋巴细胞亚群数量间的差异,探讨移植后T淋巴细胞亚群数量与真菌易感性的关系。结果①移植后中位随访时间为29（5～45）个月。移植后出现IFI的患者57例（44．9％）,首次IFI发生的中位时间为23（1～702）天;②CD8’T淋巴细胞重建明显早于CD4’T淋巴细胞;③真菌易感组与非易感组移植后12个月CD3’T淋巴细胞比例值间有统计学差异（P=0．034）,但其预测真菌易感性却无统计学意义（P=0．072）;移植后真菌易感组与非易感组间T淋巴细胞亚群绝对值均无统计学意义,考虑与病例数较少有关。结论①尽可能避免IFI各种高危因素,并采取积极有效的预防措施,减低IFI发生率及病死率;②移植后12个月CD3’T淋巴细胞比例值减少的患者易发生真菌感染,其可一定程度预测真菌易感性。     

持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立

目的：建立持久稳定的造血嵌合体模型．方法：将预处理后的SD大鼠经尾静脉注射BALB／c小鼠骨髓细胞,诱导形成特异性耐受的嵌合体SD大鼠．30d岳,再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给致死性照射后的BALB／c小鼠,监测小鼠的存活率,移植后30d做皮片移植和混合淋巴细胞培养,观察小鼠嵌合率的变化．结果：嵌合体模型小鼠仅有轻度移植物抗宿主病的表现,生存期明显延长,移植后嵌合率较稳定,移植皮片存活期延长,与对照组相比有显著性差异．结论：通过输入嵌合体骨髓的方法可建立稳定持久的大鼠→小鼠嵌合体模型．     

FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应的影响

目的观察FTY720对大鼠心脏移植急性排斥反应(AR)的影响并探讨其相关机制。方法利用Cuff技术建立颈部异位心脏移植模型,受体大鼠随机分为对照组和FTY720组,每组12只。FTY720组自术前3 d至术后11 d管饲FTY720(3 mg·kg~(-1)),对照组管饲等量生理盐水。2组均于术后第5天随机选6只动物抽取外周血后留取标本,其余6只观察存活期。苏木素-伊红染色光镜下观察排斥反应级别;流式细胞仪检测外周血CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞。结果FTY720组心脏移植物平均存活时间长于对照组,排斥反应级别低于对照组,CD4~+T淋巴细胞和CD8~+T淋巴细胞阳性率低于对照组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论FTY720能明显减轻大鼠心脏移植AR。     

供者调控T细胞对异基因造血干细胞移植后造血与免疫重建、移植物抗宿主病发生及生存的影响

目的 研接受不同数量供者CD4 CD25 调控T细胞(TReg)移植对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植物抗宿主病(GVHD)的发生和造血与免疫重建的影响.方法 对30例接受allo-HSCT患者采用流式细胞仪测定移植物中的TReg值和移植后患者不同时间点外周血T淋巴细胞亚群及TReg.按移植供者TReg绝对数是否大于或等于10.0×10/kg为标准分为高TReg移植组和低TReg移植组,比较两组患者移植后造血与免疫重建、TReg重建、GVHD发生及无病生存率有无差异.结果 高TReg组的白细胞(WBC)和血小板(PLT)重建时间分别为 (8.62±2.29)d和 (12.69±5.74)d,低TReg组分别为 (8.88±2.71)d和 (15.18±6.71)d(P值分别为0.778和0.613),两组间WBC和PLT重建时间无显著性差异.高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD3 ,CD45RO CD4 T细胞重建, 30dCD3 、CD4 CD3 T细胞重建明显快于低TReg组患者(P值分别为0.039、0.024、0.014、0.020).高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD25 TReg重建, 180 d与低TReg组相比明显加快(P值分别为0.013、0.005).高TReg组和低TReg组患者急性GVHD发生率分别为61.54%(8/13)和94.12%(16/17),两组统计有显著性差异(P=0.027),移植的供者TReg数与急性GVHD的发生程度呈负相关(rs=0.393,P=0.032).高与低TReg组无病生存率分别为(60.40±16.10)%和(72.00±2.00)%,无显著性差异(P=0.818).结论 供者TReg能促进allo-HSCT后免疫重建及CD4 CD25 TReg重建,降低移植后急性GVHD的发生率.     

抗T细胞受体αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植诱导小鼠皮肤移植耐受

目的:探讨抗T细胞受体(T cell receptor, TCR)αβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓细胞输注方法在同种异基因小鼠皮肤移植耐受诱导中的作用.方法:第0天,向C57BL/6小鼠(受体)尾静脉输注2×10⁸个BALB/c小鼠(供体)来源的骨髓细胞,同时腹腔注射抗TCRαβ单抗500 μg;第2天,向C57BL/6小鼠腹腔注射抗CD80单抗500 μg.第6天进行皮肤移植.在不同的时间对C57BL/6小鼠进行迟发型超敏反应测定和混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)分析,并进行MLR的白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)逆转实验、过继转移实验和嵌合体检查,探讨耐受形成的机制.结果:接受了抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合供体骨髓移植的C57BL/6小鼠,供体皮肤移植物平均存活70 d;在迟发型超敏反应和混合淋巴细胞反应中均表现出显著的低反应性.IL-2逆转实验结果表明克隆不应答可能参与了移植耐受的形成.体内、体外过继转移实验均显示耐受C57BL/6小鼠脾细胞中存在抑制细胞的活性.嵌合体检查结果表明在耐受C57BL/6小鼠的胸腺和脾中均形成了混合嵌合体,嵌合体水平随时间下降.结论:抗TCRαβ单抗和抗CD80单抗联合大剂量供体骨髓细胞输注可以在组织相容性抗原完全不相同的成年小鼠间成功诱导出皮肤移植物的长期耐受.     

异基因造血干细胞移植患者T细胞亚群数量与侵袭性真菌感染关系的临床研究

目的回顾性分析异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)患者T淋巴细胞亚群免疫重建与侵袭性真菌感染(invasive fungal infections,IFI)相关性。方法通过观察移植后T淋巴细胞亚群重建特点,比较真菌易感者与非易感者之间T淋巴细胞亚群数量间的差异,探讨移植后T淋巴细胞亚群数量与真菌易感性的关系。结果①移植后中位随访时间为29(5～45)个月。移植后出现IFI的患者57例(44.9%),首次IFI发生的中位时间为23(1～702)天;②CD8+T淋巴细胞重建明显早于CD4+T淋巴细胞;③真菌易感组与非易感组移植后12个月CD3+T淋巴细胞比例值间有统计学差异(P=0.034),但其预测真菌易感性却无统计学意义(P=0.072);移植后真菌易感组与非易感组间T淋巴细胞亚群绝对值均无统计学意义,考虑与病例数较少有关。结论①尽可能避免IFI各种高危因素,并采取积极有效的预防措施,减低IFI发生率及病死率;②移植后12个月CD3+T淋巴细胞比例值减少的患者易发生真菌感染,其可一定程度预测真菌易感性。