多发性骨髓瘤免疫表型流式细胞术研究新进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种常见的血液系统恶性肿瘤,以浆细胞恶性增殖、溶骨破坏为特征,表现为M蛋白、骨骼破坏、贫血、肾功能受损和免疫功能异常.通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测其免疫表型特点,已经作为血液系统疾病的常用检测手段,在辅助诊断、评估预后以及监测微小残留病灶方面的价值,已经被越来越多的学者认同.本文就将免疫表型分析在MM中的应用进展方面作一个综述,包括流式细胞术在MM中的应用和MM中流式免疫表型的特点.     

应用骨髓细胞免疫表型分析诊断和监测多发性骨髓瘤

用流式细胞仪分析浆细胞轻链限制性和细胞表面的一些免疫标记(如CD138、CD38、CD56、CD117)能够清楚地识别多发性骨髓瘤,监测治疗后的微小残留病.这些方法很可能成为多发性骨髓瘤重要的临床诊疗标志.

Abstract：

Immunophenotyping with flow cytometry can clearly identify multiple myeloma cells and monitor minimal residual disease by using the characteristic of light chain restriction in plasma cells and some cell surface markers( eg CD138, CD38, CD56, CD117 ). This technology may provide important evidence in the diagnosis of multiple myeloma.     

多发性骨髓瘤免疫表型研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆性的B细胞疾病,以恶性浆细胞(Pc)在骨髓中大量增殖,产生溶骨性破坏及过量单克隆免疫球蛋白为主要表现.MM的诊断主要依靠骨髓中存在浆细胞浸润,血、尿中存在一定量的单克隆蛋白以及瘤细胞浸润或单克隆蛋白引起的器官损害(高钙血症、肾功能不全、贫血、骨质破坏等).本文就流式细胞术免疫表型检测对MM诊断和预后意义的研究进展做一综述.     

多发性骨髓瘤免疫表型研究进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆性的B细胞疾病,以恶性浆细胞(PC)在骨髓中大量增殖,产生溶骨性破坏及过量单克隆免疫球蛋白为主要表现。MM的诊断主要依靠骨髓中存在浆细胞浸润,血、尿中存在一定量的单克隆蛋白以及瘤细胞浸润或单克隆蛋白引起的器官损害(高钙血症、肾功能不全、贫血、骨质破坏等)。本文就流式细胞术免疫表型检测对MM诊断和预后意义的研究进展做一综述。     

多发性骨髓瘤免疫表型特征及其临床意义

目的探讨流式细胞术检测多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征及其临床意义。方法应用多参数流式细胞术(MP-FCM),采用CD138/CD45/SSC设门,检测40例MM患者和20例正常献髓者骨髓细胞免疫表型。结果 MM患者抗原异常表达率由高到低分别为CD45~(dim+/-)(95%)、CD81~(dim+/-)(80%)、CD56~+(70%)、CD27~(dim+/-)(50%)、CD200~(++)(48%)、CD33~+(40%)、CD28~(++)(35%)、CD117~+(18%)、CD19~+(5%)和CD20~+(3%)。CD56+、CD200~(dim+)、CD28~(dim+)在正常浆细胞的表达率分别为10%、10%和5%。结论应用MP-FCM检测MM细胞免疫表型,可准确地鉴别良恶性浆细胞,有助于MM的诊断、预后判断及靶向治疗。     

多参数流式细胞术检测多发性骨髓瘤免疫表型及意义

流式细胞术是研究细胞生物学的重要工具,具有快速、灵敏、客观和重复性好等特点。利用多参数流式细胞术可对多发性骨髓瘤进行细胞免疫表型检测,以及微小残留病的监测等,有助于多发性骨髓瘤的诊断、分型、预后判断及病情监测。     

多参数流式细胞术检测多发性骨髓瘤免疫表型及意义

流式细胞术是研究细胞生物学的重要工具，具有快速、灵敏、客观和重复性好等特点。利用多参数流式细胞术可对多发性骨髓瘤进行细胞免疫表型检测，以及微小残留病的监测等，有助于多发性骨髓瘤的诊断、分型、预后判断及病情监测。     

多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析

目的探讨多参数流式细胞术(MFC)在多发性骨髓瘤患者初诊和微小残留疾病的检测意义。方法采用多参数流式细胞技术,通过CD138或CD38抗原标记识别74例多发性骨髓瘤患者的浆细胞,联合CD45、CD56、CD19、CD20、CD117表面抗原标记及胞浆Kappa和Lambda轻链鉴别异常骨髓瘤细胞。结果 44例初诊病例中,CD138在可检测的病例中均呈阳性表达,同时CD19阴性,42例病例(95%)CD45阴性或弱阳性,其他表面抗原标记CD38、CD56、CD20、CD117的检测率分别为98%、93%、45%、41%,胞浆Kappa和Lambda轻链均呈限制性克隆型表达。14例病例用于评估初诊及治疗过程中免疫表型的变化,其中11例病例(79%)出现至少1个及以上异常表型的变化,4例(29%)病例化疗后抗原标记荧光强度显著增加,7例(50%)病例荧光强度显著降低。CD45、CD19、胞浆免疫球蛋白轻链为最稳定的标记,未见显著抗原标记的变化,2例CD38(14%)、7例CD56(50%)、4例CD20(29%)及2例CD117(14%)病例呈现显著的抗原密度的变化。30例已治疗病例用于评估MRD的免疫表型,其中25例检测出异常的瘤细胞,5例病例未见显著的限制性轻链克隆型表达,Kappa与Lambda比值在0.5~2,认定MRD阴性。结论流式细胞术用于多发性骨髓瘤的诊断疗效及预后的判断具有重要意义,采用胞浆免疫球蛋轻链的检测可提升微小残留检测的正确性。     

应用流式细胞术评估多发性骨髓瘤预后的研究进展

流式细胞术在多发性骨髓瘤方面的临床应用很为广泛,例如可以应用于与反应性浆细胞增多的区别诊断、疾病进展的监测、疾病预后的评估、微小残留病的监测等等.以流式细胞术为基础的免疫表型克隆分析,促进了更严格的诊断和随访技术的发展.本综述主要是介绍最新的骨髓瘤的恶性浆细胞的免疫表型、最广泛的抗原（如CD19,CD33,CD28,CD45,CD56及CD117）在正常的和恶性的浆细胞的表达的差别.本综述还着重介绍了恶性浆细胞表型和染色体异常之间的相关性,明确多发性骨髓瘤的预后因素.     

多发性骨髓瘤微小残留病检测研究进展

近年来,随着临床对多发性骨髓瘤(MM)治疗效果的提高,患者的无进展生存(PFS)和总体生存(OS)期都获得延长,大部分患者可接近或达到完全缓解(CR),但多数患者仍面临MM复发的难题.目前认为导致MM复发的主要原因是体内微小残留病(MRD)的存在.MRD是指经治疗获得CR后体内残留少量血液肿瘤细胞的状态.通过高敏感度的技术检测MM患者MRD的状态,可为MM的诊断、治疗及预后提供依据.笔者拟就MM患者的MRD检测技术及其特点,MRD检测技术以及这些技术面临的挑战和未来发展方向进行综述.     

多发性骨髓瘤的分层及微小残留病检测

多发性骨髓瘤(MM)是血液肿瘤中一类常见的恶性疾病,发病率居血液肿瘤第2位,其发病率在我国逐年上升,且发病趋势呈年轻化,严重影响患者的生存时间和生活质量.近年来,随着对MM研究的深入,使MM患者的无进展生存(PFS)和总体生存(OS)期均明显提高,但目前仍不能从根本上治愈该病.对于存在高度异质性的MM,基于预后分层进行规范化、精准化治疗及应用高灵敏度的技术手段检测微小残留病(MRD)是治疗该病主要的发展趋势.     

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术分析

目的 根据白血病细胞的异常免疫表达,建立流式细胞术检测儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)微小残留病(minimal residual disease,MRD)的方法 ,探讨流式细胞术检测MRD在儿童ALL个体化治疗中的意义.方法 用流式细胞术以多种四色荧光抗体组合对健康儿童骨髓进行检测,建立健康儿童骨髓细胞双参数点图分析模板.对75例ALL初诊患儿的骨髓细胞进行MRD筛选,找出在双参数点图上的位置明显区别于正常骨髓细胞的免疫表型组合作为MRD监测的有效免疫表型组合,对其中60例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本用这些有效免疫表型组合进行MRD监测.同步进行细胞形态学检测和PCR检测29种融合基因、IgH/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排.结果流式细胞术检出69例(92.0%)可用于MRD监测的有效免疫表型组合,PCR检出21例(28.0%)可用于MRD监测的融合基因或IgH/TCR基因重排;诱导治疗结束后及后续治疗中有25份骨髓标本细胞形态学未检出白血病残留细胞,流式细胞术检测仍有0.021%～4.130%的白血病残留细胞.结论 流式细胞术检测儿童ALL MRD能较好地评估临床缓解期间ALL患儿体内残留白血病细胞的数量,其覆盖面和速度优于PCR检测方法 ,敏感性高于形态学检测方法 .     

三染色-流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微量残留病的研究

目的 建立三染色－流式细胞术检测微量残留白血病细胞。方法 利用三染色－流式细胞仪检测急性B淋巴细胞白血病患独骨髓中的CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型白血病细胞。结果 在23例急性B淋巴细胞白血病患儿骨髓中均可检测到CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型细胞,检测敏感度约为10^－4。正常人骨髓、化疗后再和髓和长期完全缓解的白血病患儿的未检测到CD10^ CD22^ CD45^-或dim表现型细胞。该法可在化疗后50d内监测到白血病细胞的变化,并且在骨髓细胞形态学确认复发之前即可检测到白血病细胞逐渐增加。结论 利用三染色－流式细胞仪检测骨髓中的CD10^ CD22^_CD45^-或dim表现型白血病细胞可以敏感地监测到急性B淋巴细胞白血病患儿微量残留病的变化。     

八色流式细胞术检测急性B淋巴细胞白血病微小残留病方法的建立

目的 建立八色流式细胞术(8c-FCM)检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的方法,并进行初步验证.方法 采用CD19/侧向角散色光(SSC)、CD45/10和CD34(或cTdT)联合设门,两管八色抗体组合检测B-ALL的MRD.将B-ALL细胞株Nalm-6细胞掺入正常人骨髓细胞中,使Nalm-6细胞占有核细胞比例为10.00％、1.00％、0.10％、0.01％和0.005％,采用已建立的8c-FCM,进行回收试验和重复性试验,评价检测方法的准确度和精密度.检测抗体标记Nalm-6后保存不同时间的荧光强度变化,评价各荧光抗体的稳定性.检测并分析39份骨髓细胞免疫表型,包括对照者9例,初发或复发B-ALL患者9例,B-ALL化疗或骨髓移植(BMT)后缓解期病例21例,评价8c-FCM方法检测正常骨髓B淋巴系细胞群和B-ALL细胞的免疫表型结果,以及对B-ALL的MRD 检测结果,并探讨其与现用四色流式细胞术(4c-FCM)的可比性.结果 建立了以CD19、CD45、CD10为主的两管八色抗体组合检测MRD的方法;当掺入的细胞株占有核细胞比例≥0.10％时,变异系数(CV)＜2.5％,平均回收率为95.81％;当获取106个细胞,Nalm-6细胞比例10.00％ ～0.01％时,检测到的Nalm-6细胞占骨髓有核细胞比例与实测值呈线性相关(r=0.99,P＜0.05),该法检测骨髓中Nalm-6细胞的灵敏度达到0.01％.Nalm-6细胞株标记抗体后随时间延长略有降低,但24h内平均荧光强度减低＜10％.应用该方法检测骨髓中CD19阳性的B淋巴系细胞,对照组呈现4个连续发育阶段,可分为4期:Ⅰ期CD45low/CD10stro/CD20 -/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅱ期CD45 +/CD10+/CD20-/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅲ期CD45 +/CD10 +/CD20-/CD38stro/CD34 -或cTdT-,Ⅳ期CD45stro/CD10 -/CD20 +/CD38low/CD34 -或cTdT -.初发和复发B-ALL患者骨髓中白血病细胞与对照组相比,均存在抗原表达异常;8c-FCM检测B-ALL缓解组,有5例存在MRD,主要抗原表达与4c-FCM检测结果一致,5例MRD细胞的范围为0.02％～5.42％.结论 本研究所建立的两管8c-FCM新方法检测骨髓中白血病细胞的重复性好、准确度高,可鉴别骨髓正常B淋巴系细胞群、B-ALL治疗缓解后骨髓造血重建的B系前体细胞与MRD细胞群;和4c-FCM比较,两管8c-FCM新方法的标本用量少,检测速度快,能够有效诊断B-ALL的MRD.     

Flow cytometry for minimal residual disease testing in acute leukemia: opportunities and challenges

Introduction: Flow cytometric quantification of minimal residual disease (MRD) in acute leukemia (AL) represents an indispensable tool to guide modern therapeutic protocols toward a precision medicine approach, being a powerful predictor of the overall response to treatment. This review covers the most challenging aspects and developments of this method, aiming at supporting further its implementation in clinical practices.

Area covered: Flow cytometric MRD is based on the discrimination of leukemia cells from their physiological counterparts by the recognition of the leukemia-associated immunophenotypes. Technical and standardization advances along the last decades have been implemented allowing flow cytometric MRD to consolidate its role in modern therapeutic protocols for ALs. However, gaps in sensitivity and data interpretation are still present together with the need for further optimization of MRD-based clinical protocols. In this review, we critically analyze and discuss the most relevant and representative contributions in the field by accurate selection of the literature available in PubMed.

Expert commentary: Further research in flow cytometric MRD can bring this technology toward wider and consistent applications in multiple acute leukemia settings rendering this tool a future golden standard and providing clinicians with more reliable and accurate tools for clinical decisions.