硒对氟致L-02细胞DNA损伤和凋亡的影响

目的探讨硒对氟导致的L-02细胞DNA损伤和凋亡的影响。方法采用80μg/ml氟化钠和/或1.73μg/ml亚硒酸钠对培养的L-02细胞进行染毒,24 h后采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测各组L-02细胞DNA损伤情况;用流式细胞术(FCM)检测各组L-02细胞凋亡率。结果氟组L-02细胞DNA损伤率和凋亡率明显高于对照组、硒组和氟硒组(P<0.01);而对照组L-02细胞DNA损伤率和凋亡率与硒组和氟硒组之间无显著性差异(P>0.05)。结论氟可导致L-02细胞DNA损伤,诱导细胞凋亡,适量硒可拮抗氟导致的L-02细胞DNA损伤和细胞凋亡作用。     

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响

[目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。     

氟致L-02细胞脂质过氧化与DNA损伤关系的研究

目的研究氟对L-02细胞脂质过氧化与DNA损伤的影响,并探讨二者之间的关系。方法体外培养的L-02细胞接触不同浓度的氟化钠24 h后,检测L-02细胞脂质过氧化物(LPO)水平、还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及DNA损伤程度。结果各氟染毒组细胞内LPO水平明显高于对照组,而GSH含量则明显低于对照组,并且二者均与氟浓度呈现明显的剂量-效应关系;各氟染毒组L-02细胞DNA损伤程度明显高于对照组。结论氟可导致L-02细胞脂质过氧化和DNA损伤,一定浓度范围内的氟所诱导的L-02细胞脂质过氧化与DNA损伤之间呈现明显的正相关关系。     

p53信号通路与卵巢癌、结肠癌、胃癌分子机制研究

<正>p53抑癌基因自20世纪80年代早期被发现以来,其在细胞凋亡中发挥的作用一直受到广泛关注。人类p53基因位于17p13.1,含有11个外显子,编码含有393个氨基酸,分子质量为53kD的p53蛋白。正常情况下,p53蛋白以四聚体的形式存在,其半衰期较短,在细胞中含量比较低,但在DNA损伤、缺氧、原癌基因激活等应激状态下,其半衰期延长,p53基因表达水平显著增高。p53蛋白增多,经过不同的修饰调节作用不同的细胞通路,发挥其作用。p53基因的突变缺失,丧失了p53对细胞生长的负性调节作用,并在其他原癌基因的作用下被损伤的DNA通过有丝分裂进入子代细胞,随着损伤的不断累积,细胞的生长信号严重失衡,逐步形成肿瘤^[1]。     

纳米二氧化钛对氯化镉所致人胚肝L-02细胞毒性作用的影响

[目的]研究纳米二氧化钛(nano-TiO2)对氯化镉(CdCl2)所致人胚肝细胞毒性作用的影响. [方法]不同浓度的CdCl2(0.001、0.01、0.1 μmol/L)单独或与0.01 mg/L nano-TiO2混合后,分别作用干人胚肝L-02细胞24h,观察各组L-02细胞的DNA损伤水平,以及hMsh2基因(hMsh2)、O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)和DNA依赖蛋白激酶复合物催化亚基(DNA-PKcs)的mRNA表达水平. [结果]与相应剂量的CdCl2单独染毒组比较,nano-TiO2与各浓度的CdCl2混合染毒组L-02细胞的DNA损伤加重(P＜0.05),hMsh2表达水平明显上升(P＜0.05),MGMT表达水平无显著性变化,nano-TiO2与0.01、0.μmol/L的CdCl2混合染毒组DNA-PKcs的基因表达水平明显上升(P＜0.05).[结论]0.01mg/L的nano-TiO2可以加重各浓度CdCl2对L-02细胞的DNA单链损伤,从而使CdCl2对L-02细胞毒性作用增强.     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞DNA损伤的拮抗作用

[目的]研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝L-02细胞株DNA损伤的拮抗作用。[方法]观察5、 10、25 mg/L的LSPC与200 mmol/L乙醇共同作用于L-02肝细胞24 h后,对细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量,DNA损伤修复酶:[切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、O6- 甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)、错配修复hMSH2基因、DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)]表达水平等方面的差异进行比较。[结果]与乙醇组相比,5、10 mg/L的LSPC使细胞的生存率分别由73．14%上升到84．79％和90．52％,细胞SOD、CAT、GSH含量增加(P<0．01),MDA含量减少(P<0．01);有效降低细胞DNA损伤程度(P<0．05)。5 mg/L的 LSPC可显著增加乙醇处理细胞中ERCC1、DNA-PKcs、hMSH2的表达(P<0．01),但对MGMT的表达无影响(P>0．05), 10、25 mg/L的LSPC与乙醇组比较,所有4种DNA损伤修复酶的表达均无明显改变。[结论]适量的LSPC可拮抗乙醇诱导的L-02肝细胞的DNA损伤作用。     

双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响

[目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。     

亚砷酸钠对L-02肝细胞的氧化损伤作用

[目的]探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的人肝细胞株(L-02)的氧化损伤作用. [方法]用不同浓度NaAsO2(50,100,150 μmol/L)染毒L-02肝细胞24 h,MTT法检测NaAsO2对L-02肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测L-02肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;钼酸铵法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)法检测DNA损伤. [结果]NaAsO2作用L-02肝细胞24h后,50、100、150 μmol/L浓度NaAsO2组的L-02肝细胞存活率和CAT活性与对照组相比显著降低(P<0.01).且呈剂量-反应关系;100、150μmol/L浓度NaAsO2组ROS生成量显著增多(P<0.01);50 μmol/L的NaAsO2即可引起出现彗星现象的细胞数明显高于对照组,拖尾细胞阳性率明显升高(P<0.01),且呈剂量-反应关系. [结论]NaAsO2对L-02肝细胞的生长具有明显的抑制作用,可引起L-02肝细胞内ROS增多和CAT活性降低,引起细胞DNA损伤.     

1例重症急性胰腺炎合并横纹肌溶解症的早期肠内营养管理

<正>横纹肌溶解症(rhabdomyolysis,RM)是指各种原因导致横纹肌损伤而引起细胞的溶解,横纹肌损伤释放大量肌红蛋白、肌酸激酶等进入循环系统,引起代谢紊乱,甚至可导致急性肾损伤等器官功能障碍综合征^[1]。主要临床表现为肌无力、肌痛、尿色深三联征等^[2],RM病人病情危重,常因病情发展、治疗等导致肠功能紊乱^[3]。肠内营养(enteral nutrition, EN)可保护肠黏膜屏障功能防止细菌入血损伤肾脏,同时可扩张肾血管、提高肾血流灌注,避免肾脏进一步损伤,改善RM病人预后^[4],并且早期功能锻炼有利于营养物质吸收利用,提高肌力,改善生活自理能力,降低其他并发症发生率^[5]。     

氟对人胚肝细胞P53表达的影响

[目的]探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)P53表达的影响。[方法]对体外培养的人胚肝细胞染毒氟化钠40、80、160μg/ml24h后,分别采用MTT试验、蛋白印迹技术(Westernblot)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测人胚肝细胞存活率、P53蛋白和mRNA水平。[结果]高浓度氟组细胞存活率显著低于对照组(P<0.01);中、高浓度氟组细胞P53蛋白水平均显著高于对照组(P<0.01),且随氟浓度增加而升高;低浓度氟组与对照组差异没有显著性(P>0.05);各氟染毒组P53mRNA的表达量均显著高于对照组(P<0.01),低、中浓度氟组P53mRNA表达量随染氟浓度的增高而增加;高浓度氟组的P53mRNA表达量虽然与对照组有显著性差异(P<0.01),但相对于中浓度氟组来说,已呈现出下降的趋势,与低浓度氟组水平相当。[结论]高氟可使人胚肝细胞的存活率下降,并诱导P53表达,但P53mRNA和P53蛋白的变化趋势并不完全一致。     

PC-B2对AFB1致肝细胞DNA损伤及修复影响

目的 探讨原花青素B2（PC-B2）对黄曲霉毒素B₁（AFB₁）所致人胚胎肝细胞（L-02）DNA损伤及修复基因表达影响。方法 取对数期生长良好的L-02细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、PC-B2处理组（3、10、30 μg/mL）、AFB₁染毒组（10、20、30、40 μg/mL）和PC-B2干预组（3、10、30 μg/mL PC-B2+30 μg/mL AFB₁）,利用噻唑蓝法、酶联免疫吸附法和荧光定量PCR技术分别测定细胞增殖活力、细胞上清液8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量及细胞hOGG1基因表达水平。结果 AFB₁可明显抑制L-02细胞增殖活力（P < 0.05）,呈剂量-效应关系;与溶剂对照组比较,30 μg/mL AFB₁组细胞活力[（69.9±2.46）%]明显降低（P < 0.05）,细胞上清中8-OHdG含量[（2.779±0.089）ng/mL]明显升高（P < 0.05）;与30 μg/mL AFB₁组比较,3、10、30 μg/mL PC-B2干预组细胞活力[分别为（70.6±2.67）%、（69.7±1.94）%、（82.4±1.58）%]明显升高（P < 0.05）,细胞上清中8-OHdG 含量[分别为（2.550±0.078）、（2.376±0.109）、（1.873±0.065）ng/mL]明显降低（P < 0.05）;与溶剂对照组比较,30 μg/mL AFB₁组L-02细胞hOGG1基因表达减少（P < 0.05）;与30 μg/mL AFB₁组比较,PC-B2干预组L-02细胞hOGG1表达明显升高。结论 PC-B2可提高肝细胞增殖活力,抑制AFB₁所致肝细胞DNA损伤,其机制可能与调控修复基因hOGG1表达有关。     

HPV E6/E7在自噬调控中的作用机制研究进展

<正>自噬在病毒感染的反应中调节细胞命运^[1],在维持细胞稳态和功能中发挥关键作用^[2]。大量证据表明,自噬不仅对氧化应激、DNA损伤、缺氧、营养缺乏、内质网应激以及外源生物或药物的暴露做出一系列适应性反应,以维持体内平衡,而且还参与了人类疾病的发展,包括癌症、脑卒中、神经退行性疾病等^[3-5]。在鳞状细胞癌癌变发生早期,人乳头瘤病毒E6/E7蛋白(human papillomavirus E6/E7 protein,HPV E6/E7)可抑制自噬,     

介入放射学工作者血细胞效应分析

电离辐射可导致机体造血系统损伤^[1,2],急性照射或长期小剂量照射后,血细胞损伤效应出现得早而且明显^[3]。     

大豆异黄酮与乳腺癌关系研究进展

大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次生代谢产物.由于大豆异黄酮与雌激素分子结构相似,在不同的体内激素条件下既可表现为弱雌激素活性(约相当于雌二醇效果的1/102~1/105),又可表现为抗雌激素活性,因此,又称其为女性雌激素水平调节器(SERMs),并被广泛用于预防和治疗女性更年期综合征^[1].同时大豆异黄酮还可减少人氧化DNA损伤,对氧化损伤的血管内皮细胞具有保护作用;也可抑制肿瘤血管生成以及酪氨酸蛋白激酶活活性^[2].根据国际癌症研究中心(IARC)的统计,全世界每年新增100多万女性乳腺癌患者^[3].     

低剂量131I内照射诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤的适应性反应

目的 研究低剂量¹³¹I内照射诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤的适应性反应。方法 用琼脂糖凝胶电泳和灰度值测定的方法确定低剂量¹³¹I(D1)和对小鼠胸腺细胞DNA具有明显损伤作用的¹³¹I剂量(D2),然后比较D1+D2组与D2组小鼠胸腺细胞DNA损伤的差异,D1、D2间隔为12 h。结果 根据DNA琼脂糖凝胶电泳和灰度值测定结果,发现D2组随着¹³¹I剂量的增加梯形条带清晰度和灰度值依次增加,最大损伤剂量D2是10⁶ Bq/g;D1+D2组DNA琼脂糖凝胶电泳梯形条带清晰度和灰度值比D2组明显下降,其中(10²+10⁶)Bq/g剂量组与(10³+10⁶)Bq/g剂量组DNA琼脂糖凝胶电泳梯形条带清晰度与灰度值10⁶ Bq/g剂量组比较下降最明显。结论 低剂量¹³¹I内照射能够诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤的适应性反应。     

血清标志物与免疫检查点抑制剂相关心脏毒性的研究进展

<正>自从伊匹单抗(CTLA-4抗体)^[1]用于治疗黑色素瘤以来，越来越多的免疫检查点抑制剂(ICIs)^[2]进入临床并改变了肿瘤的治疗方式。它们的作用靶点是免疫检查点，包括程序性死亡受体1(PD-1)、程序性死亡受体配体1(PD-L1)以及细胞毒性T细胞抗原4(CTLA-4)。而肿瘤细胞通过高表达免疫检查点的配体来逃避免疫反应，从而不受抑制地增殖^[3]。ICIs则可以对信号通路进行阻断，重新激活抗肿瘤免疫反应^[4]。然而这些信号通路在调节自身免疫反应过程中起重要作用^[5]，阻断后可导致各种器官发生免疫检查点抑制剂相关不良事件(ir AE)^[6]。     

滴滴涕与纳米二氧化钛对人胚肝细胞DNA损伤作用的协同效应

[目的]观察滴滴涕（DDT）及纳米二氧化钛（nano-TiO2）单独及联合体外染毒对人胚肝细胞株（L-02）内活性氧（ROS）含量及DNA损伤的影响。[方法]生长良好的L-02细胞,分别加入0.001、0.01、0.1μmol/L的DDT,0.01、0.1、1μg/mL的nano-TiO2,以及上述各浓度的DDT和nano-TiO2联合剂量,染毒时间均为24 h;运用DCFH-DA作为荧光探针,采用流式细胞检测技术检测DDT与nano-TiO2联合作用下L-02细胞内ROS含量,运用碱性和中性两种彗星试验检测各组DNA断裂损伤程度。[结果]0.01μmol/L以上浓度组DDT单独作用24 h引起ROS升高（P〈0.05）和DNA损伤增加（P〈0.05）;各浓度nano-TiO2单独染毒均不能引起DNA损伤增加（P〉0.05）,但1μg/mL单独染毒可引起ROS升高（P〈0.05）。各剂量组单独染毒24 h后均无明显的DNA双链损伤（P〉0.05）,但可导致DNA单链断裂损伤。析因分析结合反应曲面模型显示两种受试物联合染毒可协同增加ROS水平与DNA损伤作用（P〈0.05）。[结论]DDT和nano-TiO2联合作用可协同增加各自对DNA单链断裂水平的影响,诱导产生ROS导致DNA损伤是DDT和nano-TiO2引起机体损伤的主要机制之一。     

HBV母婴传播胎盘细胞感染体外模型建立

目的 研究胎盘滋养层细胞系Bewo被乙型肝炎病毒(HBV)感染的可能性,为HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究建立合适的体外模型.方法 高浓度HBV DNA阳性血清与Bewo细胞共培养,荧光定量PCR法检测培养上清中HBV DNA含量;免疫组织化学技术检测细胞爬片Bewo细胞中HBsAg的表达.结果 HBV DNA阳性血清与Bewo共培养1 d后及时清洗细胞,更换培养液后1,2,3 d,细胞培养上清液中HBV DNA含量为4.67×10³,2.22×10⁴,3.63×10³;HBV DNA阳性血清与Bewo共培养2 d后及时清洗细胞,更换培养液后1,2,3 d,细胞培养上清液中HBV DNA含量为3.21×10⁴,3.99×10⁴,5.77×10⁴.免疫组织化学技术检测细胞爬片Bewo细胞中HBsAg呈阳性表达.HBV DNA阳性血清与Bewo共培养对细胞形态无明显影响.结论 胎盘滋养层细胞系Bewo与HBVDNA阳性血清共孵育可被HBV直接感染,该细胞系可用于进行胎盘HBV感染机制的研究.     

慢性砷暴露对大鼠动情周期影响

环境雌激素因其对动物内分泌系统的干扰作用而引起人们广泛关注.它可以导致生殖毒性^[1]、出生缺陷、发育异常和代谢紊乱,对人体多个系统具有毒性效应,并可引发恶性肿瘤.有文献报道砷是内分泌干扰物^[2-3],体外细胞实验证实低剂量三氧化二砷具有雌激素样效应^[4].本研究通过观察不同剂量慢性砷暴露对雌性大鼠动情期及动情周期影响,进一步探讨砷的雌激素样效应.     

双酚A及纳米二氧化钛对人胚肝L-02细胞内活性氧含量及DNA损伤的联合作用

[目的]观察双酚A（BPA）、纳米二氧化钛（nano-TiO2）单独及联合作用对人胚肝L-02细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量及DNA损伤的影响。[方法]生长良好的L-02细胞，分别单独加入0．1、1、10μmol／L的BPA，1、5、10mg／L的nano-TiO2，以及上述各浓度的BPA和nano-TiO2混合染毒24h；采用流式细胞仪检测各组L-02细胞内ROS含量，采用彗星试验观察各组DNA断裂损伤程度。[结果]10μmol／L BPA单独染毒组，1mg／L nano-TiO2与1、10μmol／L BPA，以及5、10mg／L的nano-TiO2分别与0．1、1、10μmol／L BPA联合作用于L-02细胞后，均可引起ROS含量升高，DNA断裂损伤加重，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001）；而nano-TiO2单独染毒组对于L-02细胞ROS的升高、DNA损伤作用与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。析因分析结果显示两种受试物混合染毒存在协同作用。[结论]BPA和nano-TiO2联合作用可增加各自对L-02细胞内ROS水平和DNA损伤断裂水平的影响，对细胞的损伤作用增大。