端粒重复序列结合蛋白质1与2在原发性干燥综合征患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义

目的：端粒重复序列结合蛋白质1（telomeric-repeat binding factor-1,TRF1）和端粒重复序列结合蛋白质2（telomeric-repeat binding factor-2,TRF2）基因表达异常在原发性干燥综合征（primary Sjogren＇s,pSS）发病中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测55例pSS患者和41例健康对照者（healthy control,HC）外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中TRF1和TRF2转录水平,并与临床指标进行相关性分析。结果（1）PBMCs TRF2转录水平在SS组显著高于HC组（0.0047±0.0107vs.0.0026±0.0049,P＝0.001）,而TRF1转录水平在两组表达差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）Spearman相关性分析发现在SS组中TRF2与白细胞计数（WBC）（r＝0.309,P＜0.05）、中性粒细胞计数（GR）（r＝0.312,P＜0.05）、补体3（C3）（r＝0.470,P＜0.05）、抗核抗体（ANA）（r＝0.339,P＜0.05）呈显著正相关,TRF1转录水平与TRF2（r＝1,P＜0.01）、WBC（r＝0.316,P＜0.05）、GR（r＝0.313,P＜0.05）、ANA（r＝0.421, P＜0.05）呈显著正相关。结论 TRF2转录水平在SS患者的增高提示其可能参与了SS患者端粒酶激活和端粒缩短的调节;TRF2、TRF1表达水平与 WBC、GR、C3、ANA 呈显著正相关,提示 TRF2、TRF1可能参与了SS炎症免疫调节,且与SS的发病机制有关。加强端粒保护蛋白在SS等自身免疫性疾病的研究有利于进一步阐明这类疾病的发病机制。     

人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究

为了研究人端粒重复序列结合因子（TRF1）蛋白质在急性白血病（AL）及正常骨髓组织中的表达水平，AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系，定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平，并应用经倍比稀释的TRF1^33-277纯化蛋白质作为定量标准，建立以抗TRF1^33-277单克隆抗体的定量Western blot的方法，而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平；另外，应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性，以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明：20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低，差异具有显著性（P〈0．01）；急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低，但差异无统计学意义（P〉0．05）；化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高，但仍低于正常（P〈0．01）；化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高，差异具有显著性（P〈0．01）；AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人（P〈0．05）和首次缓解者（P〈0．01）；初发未治时，ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者，但差异无统计学意义（P〉0．05）。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关（P〈0．001）。结论：TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低．且与疗效及端粒酶活性相关。     

F-box蛋白4和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2mRNA表达与食管鳞癌发生发展关系研究

目的 检测食管鳞癌组织中F-box蛋白4(FBX4)和端粒重复序列结合因子1相互作用核蛋白2(TIN2)mRNA表达,并分析其与食管鳞癌相关临床指标的关系.方法 收集110例明确诊断的食管鳞癌中心组织及其30例癌旁组织,采用SBYR Green实时荧光定量PCR方法检测FBX4和TIN2基因在食管鳞癌中心组织和癌旁组织mRNA水平的表达,并分析FBX4和TIN2 mRNA表达临床相关指标的关系.结果 FBX4 mRNA在食管鳞癌组织中的相对表达量为0.24±0.43(n=110),而在肿瘤旁组织中为0.40±0.27(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.008);食管鳞癌组织中TIN2 mRNA的相对表达量为1.59±1.19(n=101);肿瘤旁为2.54±1.89(n=30),两者差异具有统计学意义(P=0.000).TIN2 mRNA表达在临床各参数不同分组内均未发现有统计学差异(P>0.05),而FBX4 mRNA表达虽在不同性别、年龄、钡餐分型、临床分期和肿瘤长度中均没有统计学差异(P>0.05),但在不同病理分型中存在统计学差异,即相对于高分化鳞癌,低分化和中分化的鳞癌组织中的FBX4 mRNA表达增加,差异具有统计学意义(P<0.05).FBX4和TIN2在肿瘤组织中的表达呈正相关(r=0.671,P=0.000).结论 FBX4和TIN2 mRNA在食管鳞癌组织中均表现表达增高,且存在直线相关关系,提示FBX4和TIN2可能在食管癌的发生发展中具有重要的临床意义;肿瘤分化程度与FBX4表达相关,而与TIN2不相关,表明肿瘤分化还与FBX4介导的泛素化相关.     

前列腺癌患者内皮素-1 mRNA表达变化的研究

目的 探讨内皮素-1（EOA-1）mRNA表达与前列腺癌发生的关系.方法 住院前列腺癌患者80例,经手术切除的癌组织及相应的癌旁组织Trizo-l法提取总RNA,逆转录cDNA,实时定量PCR检测EDN-1 mRNA表达量,并进行统计学分析.结果 EDN-1 mRNA在80例前列腺癌组织中表达为（3.58±0.15）×10 6,而在癌旁组织中表达为（2.62±0.11）×104,两组相比差异有统计学意义（t=13.27,P＜0.01）.在肿瘤大小上pT1.与pT4xEDN-1 mRNA表达量差异有统计学意义（t=22.52,P＜0.01）.淋巴结转移情况看pN03与pNxxEDN-1 mRNA表达量差异也有统计学意义（t=36.31,P＜0.01）.病理学分级上G1-G2的EDN-1 mRNA表达量比G3 NA的高,两者相比差异有统计学意义（t=33.64,P＜0.01）.结论 EDN-1 mRNA表达与前列腺癌细胞增殖与转移有关.     

宫颈癌组织中NEK2 和circPITX1 的表达水平与放疗敏感度及预后的相关性研究

目的 探讨宫颈癌组织中中心体相关激酶2(never in mitosis geneA related kinase-2,NEK2) 和环状RNA 配对同源结构域基因1(circRNA paired homology domain gene 1,circPITX1) 表达与放疗敏感度及预后的关系。方法 选取2017 年1月～ 2018 年1 月四川大学华西三亚医院接受放疗治疗的82 例宫颈癌患者为研究对象。依据放疗后病灶退缩情况评价放疗疗效,分为放疗抵抗组（n=51）和放疗敏感组（n=31）。应用免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHCS）检测宫颈癌癌组织和癌旁组织中NEK2 蛋白表达。采用荧光实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测circPITX1mRNA 和NEK2mRNA 表达。统计学分析癌组织中circPITX1mRNA 和NEK2 mRNA 与放疗敏感度、临床病理特征的关系。采用 Kaplan-Meier 生存曲线分析宫颈癌患者circPITX1mRNA 和NEK2 mRNA 表达水平与患者生存预后的关系。COX 回归分析宫颈癌患者预后不良的危险因素。结果 宫颈癌癌组织中NEK2 蛋白表达阳性率[85.37%（70/82）] 高于癌旁组织[12.20%（10/82）],差异有统计学意义（χ2=87.857,P ＜ 0.05）。癌组织中circPITX1mRNA（1.92±0.24）,NEK2 mRNA 表达（2.04±0.31）高于癌旁组织（0.81±0.20,0.93±0.27）表达,差异均有统计学意义（t=32.174,24.450,均P ＜ 0.05）。宫颈癌组织中NEK2 mRNA 与circPITX1mRNA 表达呈显著正相关(r=0.618, P ＜ 0.05)。FIGO 分期Ⅲ A～Ⅲ B 期宫颈癌患者NEK2 mRNA（2.54±0.23）,circPITX1mRNA（2.33±0.19）表达明显高于IIB 期患者（1.17±0.40,1.21±0.30）表达,差异均有统计学意义（t=19.730, 20.710,均P ＜ 0.05）。宫颈癌放疗抵抗组NEK2 mRNA（2.39±0.38）,circPITX1mRNA（2.50±0.21）均显著高于放疗敏感组（1.83±0.28,0.97±0.28）,差异有统计学意义（t=7.109, 28.149, 均P ＜ 0.05）。NEK2 mRNA[（48.78%（20/41）] 和circPITX1mRNA[54.76%（23/42）] 高表达组的三年总生存率显著低于NEK2 mRNA[90.24%（37/41）],circPITX1 mRNA 低表达组 [85.00%（34/40）],差异均有统计学意义（χ2=5.118, 4.890, 均P ＜ 0.05）;NEK2 mRNA[（26.10±3.62）个月] 和circPITX1mRNA[（25.87±3.81）个月]高表达组的平均生存时间显著短于NEK2 mRNA（[ 33.25±4.09）个月]和circPITX1mRNA低表达组（[ 32.02±4.02）个月],差异均有统计学意义（t=8.382, 7.140, 均P ＜ 0.05）。FIGO 分期Ⅲ A～Ⅲ B（HR=3.754,95%CI:1.621～ 8.694）,NEK2 mRNA高表达（HR=2.874,95%CI:2.504 ～ 3.497）,circPITX1mRNA 高表达（HR=2.679,95%CI:2.485 ～ 3.184）是宫颈癌患者预后不良的独立危险因素（均P 均＜ 0.05）。结论 NEK2 和circPITX1 在宫颈癌组织中表达升高, 可成为放疗敏感度及预后预测的标志物。     

端粒保护蛋白复合体在原发性痛风性关节炎患者转录水平的变化及其意义

目的探讨端粒保护蛋白在痛风性关节炎（GA）炎症及免疫中可能的作用。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测42例GA患者（GA组）及38名健康体检者（NC组）外周血单个核细胞端粒保护蛋白复合体（TRF1、TRF2、TPP1、POT1、TIN2和hRAP1）、NLRP3炎性体（NLRP3、ASC和Caspasel）及凋亡相关蛋白（BCL2和BAX）mRNA水平,并且与GA患者临床指标进行相关性分析。结果TPP1、POT1及TIN2mRNA在GA组的表达显著低于NC组（P均〈0．05）,TRF1、TRF2显著高于NC组（P均〈0．05）;炎性体成分ASCmRNA在GA组显著高于NC组（P〈0．01）,NLRP3、CaspaselmRNA则低于NC组（P均〈0．05）;hRAP1、BCL2及BAXmRNA在两组表达的差异均无统计学意义（P均〉0．05）。GA患者TRF1mRNA与ASC,TPP1mRNA与ASC,TIN2mRNA与中性粒细胞计数,TRF2mRNA与GLOB,NLRP3mRNA与BCL2、BAXmRNA均呈正相关（P均〈0．05）;而TPP1mRNA与NLRP3、BCL2、BAXmRNA,TRF2mRNA与NLRP3mR-NA,POT1mRNA与uA、apoA1,TIN2 mRNA与apoA1,TRF2mRNA与apoA1均呈负相关（P均〈0．05）;其余临床及实验室指标间均无相关性（P均〉0．05）。结论端粒保护蛋白相关成分的异常表达可能参与了痛风免疫、炎症及代谢过程。TPP1、TIN2、TRF1和TRF2同时参与了痛风炎症与免疫调节,且相互影响、相互制约;TPP1与NLRR3可能同时参与了痛风促凋亡与抗凋亡平衡的调节;POT1、TIN2和TRF2则可能在痛风患者的尿酸及脂代谢中发挥作用。     

抗人端粒重复序列结合因子(TRF133-277)单克隆抗体的制备及生物学特性初步鉴定

目的 制备抗人端粒重复序列结合因子片段（TRF1^33-277）单克隆抗体（单抗），探讨其生物学特性。方法 以GST－TRF1^33-277融合蛋白为抗原，经细胞融合及ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞，对其进行染色体核型分析，将此单抗作为探针用于Western blot和免疫组化检测标本。结果 获得1个抗TRF1蛋白的杂交瘤细胞株。以抗TRF1^33-277单抗作Western blot检测正常人及急性白血病患者骨髓，大肠癌组织及近旁正常粘膜组织提取蛋白。在相对分子质量60000处有一特异性条带，与阳性对照纯化TRF1蛋白相一致，免疫组化显示该抗体在上皮细胞及骨髓造血细胞胞浆中阳性着色。结论 制备了具有高度特异性的抗TRF1^33-277单抗，建立了Western blot和免疫组化检测组织表达TRF1蛋白的方法。     

miR-1在淮安地区食管癌患者癌组织中的表达特征及其临床意义

目的探讨miR-1在淮安地区食管癌中的表达特征及其临床意义。方法采用荧光定量PCR技术检测34例食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-1相对表达水平,并分析其与肿瘤发生部位、肿瘤分期的关系。结果 (1)淮安地区食管癌患者癌组织及癌旁组织中的miR-1相对表达量分别为(0.048 4±0.013 1)、(0.136 9±0.025 7),癌组织明显低于癌旁组织(t=3.065,P0.01);(2)食管鳞状细胞癌中miR-1表达水平与TNM分期有关,随Ⅰ、Ⅱ期呈逐渐下降的趋势,Ⅱ期患者癌旁组织中miR-1水平显著低于Ⅰ期患者(t=2.422,P0.05);(3)食管癌miR-1表达水平与发生部位有关,食管上段及中段癌组织miR-1表达水平均显著低于癌旁组织(t=-2.522,P0.05;t=-2.931,P0.01),而食管下段癌组织与癌旁组织中miR-1表达水平差异无统计学意义(t=2.251,P0.05)。结论 miR-1参与淮安地区食管患者食管癌的发生机制。     

Y-盒结合蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的：检测Y-盒结合蛋白1（YB-1）在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达,探讨其与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集河北大学附属医院2012年9月至11月期间手术切除的乳腺癌组织（均为术后石蜡病理确诊为浸润性导管癌）标本30例,癌旁正常乳腺组织标本10例。应用免疫组织化学染色的方法检测组织中 YB-1的表达。结果免疫组化结果显示,YB-1在癌旁正常乳腺组织细胞中无表达或低表达;在乳腺癌组织中高表达,阳性表达率为80%,与癌旁正常乳腺组织相比差异有统计学意义（P＜0.05）。YB-1在Ⅰ期乳腺癌组织中的免疫组化评分显著低于Ⅱ期乳腺癌组织（2.6±1.511 vs.4.2±1.182, P＜0.05）。YB-1在无腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织中的表达显著低于伴腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织（2.8±1.15 vs.5.1±0.74,P＜0.05）。结论 YB-1乳腺癌中表达上调与乳腺癌临床分期及淋巴结转移有关。     

食管鳞状细胞癌组织中VRK1及BANF1的表达及其意义

目的探讨牛痘病毒相关性激酶1(VRK1)及屏障自整合因子1(BANF1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其意义。方法免疫组化染色法检测120例ESCC患者癌组织及配对的癌旁组织中VRK1和BANF1蛋白的表达水平;RT-q PCR法检测VRK1和BANF1 mRNA在ESCC癌组织和配对的癌旁组织中的表达水平;并分析其与ESCC患者临床病理参数间的关系。结果免疫组化染色结果表明,VRK1和BANF1蛋白在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ2分别为70.815,60.286,P均0.05),且两者的表达水平与TNM分期和分化程度差异均有统计学意义(P均0.05),而与不同性别、年龄和有无淋巴结转移的差异无统计学意义(P均0.05)。RT-q PCR结果显示,VRK1和BANF1 mRNA在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(0.88±0.09 vs 0.59±0.08,0.78±0.08 vs 0.41±0.05),差异均有统计学意义(t分别为1.95,1.99,P均0.05)。结论 VRK1和BANF1在ESCC患者组织中呈过表达,且与ESCC的发生、发展有关。     

获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞TRF1、TRF2、RAP1 mRNA表达研究

本研究检测获得性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞的TRF1、TRF2、RAP1基因表达水平,探讨其与获得性再生障碍性贫血发病的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测40例获得性再生障碍性贫血患者和20例正常对照组外周血单个核细胞中TRF1、TRF2、RAP1的基因表达情况。结果表明,获得性再生障碍性贫血患者的TRF1和RAP1 mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P<0.05);TRF2 mRNA表达水平较正常对照组明显降低(P<0.01),并且TRF2与RAP1具有相关性(r=0.522,P=0.001)。结论:TRF1、TRF2、RAP1可能参与了获得性再生障碍性贫血的发病过程。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓中端粒保护蛋白TIN2和POT1的mRNA表达

本研究旨在探讨端粒保护蛋白TIN2、POT1的mRNA表达与骨髓增生异常综合征（MDS）发病的关系。采用实时荧光定量PCR方法检测51例初发MDS患者和10例正常人端粒保护蛋白TIN2和POT1的mRNA表达情况。结果表明,WHO分组中RA／RARs／RCMD／MDS-U、RAEB-1及RAEB-2组TIN2mRNA的表达量均高于正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）;RA／RARS／RCMD／MDS-U、RAEB-1及RAEB-2组POT1mRNA的表达量均低于正常对照组,差异有显著性（P〈0．05）。IPSS分组中,TIN2mRNA的表达量在高危组、中危-2及中危-1均高于对照组,差异有显著性（P〈0．05）,低危组与对照组间差异没有显著性;POT1mRNA的表达量在高危组、中危-2及中危-1均低于对照组,差异有显著性（P〈0．05）,低危组与对照组间差异没有显著性。MDS中正常染色体核型患者TIN2mRAN的表达量低于异常染色体核型的患者,与对照组相比差异没有显著性;MDS中正常染色体核型患者POT1mRAN的表达量高于异常染色体核型的患者,与对照组相比差异没有显著性。结论：TIN2、POTI mRNA的表达异常可能参与MDS患者端粒动力学的调节,引起MDS患者端粒长度的改变,进而导致疾病的发生。     

Tiam-1和PTEN在胃癌组织中表达的相关性及意义

目的探讨胃癌组织中Tiam-1和PTEN蛋白表达的相关性及临床病理意义。方法应用免疫组织化学法检测57例胃癌患者手术切除的胃癌及其癌旁组织中Tiam-1和PTEN的蛋白表达水平。结果 Tiam-1蛋白在胃癌组织中表达阳性率（77.2%）高于癌旁组织（7.0%）（χ2=57.576,P=0.000）;PTEN蛋白在胃癌组织中表达阳性率（64.9%）低于癌旁组织（98.2%）（χ2=21.072,P=0.000）;Tiam-1表达水平与胃癌组织分化程度低、TNM分期高以及淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）;PTEN表达水平与胃癌组织分化程度低、TNM分期高及淋巴结转移呈负相关（P〈0.05）;二者表达与年龄、性别及肿瘤直径均无相关性（P〉0.05）;Tiam-1与PTEN的表达呈明显负相关（r=-0.312,P=0.018）。结论联合检测Tiam-1和PTEN对胃癌侵袭、转移及预后评估有一定价值。     

核小体结合蛋白1在膀胱癌中的表达和意义

目的通过检测核小体结合蛋白1（NSBP1）在膀胱癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其与膀胱癌发生、发展的关系。方法采用逆转录PCR检测NSPB1在20例膀胱癌组织和正常黏膜组织中RNA水平的表达差异,采用免疫组织化学染色方法检测NSBP1在80例膀胱癌组织和正常黏膜组织中的表达差异,采用Western blot方法检测NSBP1在20例膀胱癌组织和正常黏膜组织中的蛋白表达差异。用配对t检验比较两种组织的逆转录PCR和Western blot的结果,用卡方检验比较两种组织免疫组织化学染色阳性率的差异。用Spearman相关性分析验证免疫组织化学结果与膀胱癌病理分期和组织学分级之间的关系。结果在膀胱癌组织和正常黏膜组织中,NSBP1的mRNA平均相对表达量分别为0.555±0.146和0.411±0.111（t=5.647,P〈0.01）。膀胱癌组织的免疫组织化学染色的阳性率、弱阳性率和阴性率分别为58.8%（47/80）、26.2%（21/80）和15.0%（12/80）,正常膀胱黏膜组织染色均为阴性,两种组织的染色阳性率存在明显差异（χ^2=66.55,P〈0.01）。Western blot提示两种组织中NSBP1蛋白的相对表达量分别为0.127±0.044和0.089±0.019（t=5.615,P〈0.01）。Spearman相关性分析显示NSBP1的表达与膀胱癌的病理分期及组织学分级存在正相关（P〈0.01）。结论NSBP1在膀胱癌中高表达,其表达与膀胱癌的病理分期、组织学分级呈正相关,可能参与了膀胱癌的发生与发展过程。     

HIF-1α与COX-2在银屑病皮损中的表达及相关性研究

目的检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和环氧合酶-2(COX-2)在寻常型银屑病皮损及正常人皮肤组织中的表达水平,探讨HIF-1α和COX-2在银屑病发病机制中的作用。方法收集30例寻常型银屑病和20例正常人的临床资料以及皮损和皮肤组织。(1)用半定量RT-PCR检测银屑病皮损和正常皮肤组织中HIF-1α和COX-2 m RNA表达情况;(2)用Western blot检测银屑病皮损和正常皮肤组织中HIF-1α和COX-2蛋白表达情况。结果 HIF-1α和COX-2 m RNA相对表达量在寻常型银屑病组(1.32±0.04和1.21±0.04)的表达显著高于正常对照组(0.49±0.03和0.31±0.03),两组相比差异有统计学意义(P<0.05);且HIF-1αm RNA相对表达量与COX-2 m RNA相对表达量呈正相关(r=0.664,P<0.05);HIF-1α和COX-2蛋白在寻常型银屑病组(0.76±0.03和0.62±0.03)的表达显著高于正常对照组(0.44±0.05和0.28±0.06),两组相比差异均有统计学意义(P<0.05);且HIF-1α蛋白表达量与COX-2蛋白表达量呈正相关(r=0.601,P<0.05)。结论 HIF-1α和COX-2在银屑病皮损中异常高表达且呈正相关,可能在银屑病的发生发展过程中起着重要作用。