盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态研究

目的研究盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态,确定适宜的采收期。方法对不同采收期不同根茎中薯蓣皂苷元含量及含水量进行分析。结果种根在6月上旬到10月中上旬之间,薯蓣皂苷元含量呈缓慢的上升趋势,10月下旬以后就急剧下降。新生根茎在6月上旬到8月中下旬之间薯蓣皂苷元含量呈上升趋势,然后逐步下降,到10月下旬同样明显下降;生长期内种根与新生根茎含水量变化趋势不同,而且薯蓣皂苷元含量与含水量无相关关系。结论考虑到产量和薯蓣皂苷元含量两方面因素,10月中下旬采收盾叶薯蓣较为适宜。     

盾叶薯蓣四倍体株系抗氧化酶活性及有效成分分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 通过组织培养,对诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系,进行了试管苗抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析.结果 大部分四倍体株系APX活性、SOD和POD比活力高于或相近于二倍体株系.经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元含量有较大差异,大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系.结论 经诱导获得的四倍体株系在抗氧化酶活性及有效成分含量方面与二倍体表现出明显差异,说明多倍体诱导可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

盾叶薯蓣四倍体株系生化指标及有效成分分析

目的:提高盾叶薯蓣药材的品质.方法:对诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系进行了试管苗生化指标及薯蓣皂苷元含量分析.结果:大部分四倍体株系APX、SOD和POD的活力高于或相近于二倍体株系,可溶性蛋白电泳谱带也表明,四倍体株系与对照株系相比具有一定的差异.经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照株系相比薯蓣皂苷元含量有较大差异,大部分四倍体株系薯蓣皂苷元含量都超过了二倍体株系.结论:经诱导获得的四倍体株系在生理生化指标及有效成分含量方面与二倍体表现出明显差异,说明多倍体诱导可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

不同倍性盾叶薯蓣的生理指标和薯蓣皂苷元量的比较研究

目的通过比较盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis人工四倍体植株和普通二倍体植株在抗性相关指标及薯蓣皂苷元量方面的差异,探索药用盾叶薯蓣倍性育种的应用前景。方法以秋水仙素诱导加倍的、经鉴定确认的3个不同株系四倍体盾叶薯蓣为材料,以二倍体原种为对照,采用分光光度法测定叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PPO)活性以及可溶性糖的量;高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶(CAT)活性;采用HPLC法测定根状茎薯蓣皂苷元的量。结果四倍体植株SOD、PPO、CAT的活性以及可溶性糖的量明显高于二倍体;四倍体植株薯蓣皂苷元的量显著高于二倍体,增加幅度最大为二倍体原种的27%。结论人工四倍体植株薯蓣皂苷元量高,其生理指标也显示较强的抗性基础,可望直接利用或作为进一步培育高产、高薯蓣皂苷元量薯蓣新品种的良好育种材料。     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期薯蓣皂苷元含量的差异性研究

目的 揭示盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期中皂苷的积累与分布以及薯蓣皂苷元含量的差异。方法组织化学和高效液相色谱法(HPLC)。结果 皂苷主要分布在基本组织内，有小维管束分布的区域皂苷积累最丰富，薯蓣皂苷元的含量也最高；其次是无维管束分布的区域：有大维管束分布的区域皂苷积累最少，薯蓣皂苷元的含量最低。结论 雄株3个区域的皂苷元含量均明显的高于雌株，雌雄同株其含量界于雄株和雌株之间。     

诱导盾叶薯蓣四倍体的研究初报

诱导盾叶薯蓣四倍体的研究初报王志安(浙江省中药研究所杭州310023)王生君(浙江省杭州市科学技术协会310006)盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis,Wright是一种重要的药源植物,主要有效成分为薯蓣皂素,是合成避孕药等甾体类激素的起始原料,国内外需求量很大,但由于目前盾叶薯蓣的产量和含量较低,单产不高,总产不稳,已严重抑制激素工业的发展。本试验根据倍性育种原理￣[1.2],采用秋水仙碱来进行染色体加倍,从而获得四倍体物种,为进?...     

加压提取法制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元

目的建立加压提取法制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元。方法单因素试验优化乙醇体积分数、提取温度、料液比、提取时间,在优化条件下制备薯蓣皂苷元,并与直接酸水解法、索氏抽提-常压酸水解法、双相联合酸水解法进行比较。结果最佳条件为将药材粉末与20倍量60%乙醇混合后在130℃下加压提取2.0 h,提取液减压回收乙醇,进行加压双相酸水解,薯蓣皂苷元得率达3.56%,高于3种传统提取方法(2.48%、2.96%、3.37%)。结论该方法简便环保,得率更高,可用于制备盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元。     

盾叶薯蓣辐射株系抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质.方法 通过组织培养,对辐射诱变获得的盾叶薯蓣株系进行了抗氧化酶活性及薯蓣皂苷元含量分析.结果 经诱变获得的株系SOD、POD比活力和APX活性与对照株系相比差异很大,大部分辐射诱变株系薯蓣皂苷元含量都超过了对照株系,但试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元含量相关性不明显.结论 经诱导获得的辐射诱变株系在清除活性氧能力及有效成分含量方面与对照表现出明显差异,说明辐射诱变可以作为盾叶薯蓣优良品种选育的途径.     

氮磷钾对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的:研究大田条件下N、P、K肥料不同配比对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量的影响.方法:采用肥料单因素正交试验,SPSS11.5统计软件包统计分析.结果:N、P、K可不同程度提高盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量,其中N、K对产量影响达到极显著水平(P＜0.01),P肥达到显著水平(P＜0.05),N、P、K单施对含量影响未达到显著水平(P＞0.05);3种肥料配施以N肥对薯蓣皂苷元含量影响达到显著水平(P＜0.05).表明肥料对薯蓣皂苷元含量影响的顺序为N＞K＞P,对根茎产量影响的顺序为K＞N＞P,综合最优组合为N2K1P2.结论:适当配比的N、P、K肥料可以同时提高盾叶薯蓣根茎产量与薯蓣皂苷元含量.     

盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元方法的研究进展

传统工业广泛采用直接酸水解盾叶薯蓣根茎制备薯蓣皂苷元,该方法大量使用无机酸催化剂,废水排放量大,环境污染严重。因此,探寻清洁、高效的制备方法和工艺成为实现薯蓣皂苷元工业生产可持续发展的必然选择。故笔者综述并分析了近10年来酶水解、微生物转化及改进酸水解等方法在盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元中的研究进展及存在问题,并展望了其应用前景。酶水解反应条件温和,但薯蓣皂苷元产率低、经济成本高、活性酶纯化过程复杂。微生物特异性好,转化效率高、转化过程清洁环保,但转化周期长,代谢产物复杂。改进酸水解法中,双相酸水解工艺优势在于酸使用量减少,磺酸功能化离子液体催化优势在于可代替无机酸,循环性能良好,但二者均无法避免废液排放,固体酸催化剂无腐蚀性,易回收,但需使用乙醇作为反应溶剂具有一定安全隐患,且催化剂制备过程繁琐。综上所述,探索清洁高效的转化方法是盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元的重要发展趋势。对于酶水解法,应深入探寻生物转化过程中的关键糖苷水解酶,充分阐明酶解皂苷的转化路径及酶特异性,着力提高酶水解效率;对于微生物转化法,以选育高效转化菌株为基础,优化稳定的转化体系和转化过程,加快推动微生物转化的工业应用进程,深入探究生物转化机制,充分阐明特异性关键水解酶及其催化特性,着力提高生物转化效率;对于改进酸水解法,探索使用结构简单、性能稳定、可生物降解的新型酸催化体系,有效解决环境污染及生产安全问题。     

不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量分析

目的 探讨离体培养中诱导材料对盾叶薯蓣再生植株中薯蓣皂苷元含量的影响.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对不同材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行分析.结果 薯蓣皂苷元含量高的材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量一般也较高;相同材料诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显.结论 盾叶薯蓣具有一定的遗传稳定性,要获得薯蓣皂苷元含量不低于2%的皂苷工业原料,选择薯蓣皂苷元含量高的种质引种和培育优良品种是十分重要的.     

阶梯生物催化协同提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的研究

目的利用阶梯生物催化协同提高提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的收率和质量。方法通过正交试验对阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元工艺进行研究,确定该工艺最佳条件;用红外光谱和HPLC谱对皂苷元产品进行定性和定量测定;以产品的收率和熔点为考察标准,比较阶梯生物催化法与直接酸水解法、自然发酵法以及酶解法的优劣。结果利用阶梯生物催化法,当纤维素酶和果胶酶复合酶制剂、淀粉酶以及糖化酶按顺序依次加入时,能够将植物中98%的薯蓣皂苷元提取出来,其产品的红外谱图与对照品谱图相吻合,经HPLC谱测定薯蓣皂苷元质量分数95%以上。结论利用阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元与其他3种工艺相比,能耗降低,皂苷元收率和质量均提高。     

盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析

以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析。结果表明,诱导愈伤组织的最适培养基为MS+BA2.0mg·L-1+2,4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的最适培养基为MS+BA0.1mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为MS/2+IAA0.2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显。     

盾叶薯蓣中甾体皂苷的研究

目的 研究盾叶薯蓣中甾体皂苷的组成.方法 用溶剂法提取,色谱法分离盾叶薯蓣中的甾体皂苷.用核磁共振法鉴定其结构.结果 从盾叶薯蓣的正丁醇萃取相中分离到8个甾体皂苷,经1H.NMR、13C-NMR、135DEPT测定分析,其结构分别为原薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L-吡哺鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(1)、原薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-吡喃鼠李糖基(1-2)-α-吡喃葡萄糖基(Ⅱ)、原薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡哺鼠李糖基(1-2)-p-β-D-吡喃葡萄糖基(Ⅲ)、22α-甲氧基-原薯蓣皂苷元-3-O-β-D)-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L一吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基(Ⅳ)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-3)-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-薯蓣皂苷元(V)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)一[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基一薯蓣皂苷元(Ⅵ)、3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖基一薯蓣皂苷元(Ⅶ)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1-4),[α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)]-β-D-吡喃葡萄糖基-薯蓣皂苷元(Ⅷ).结论 盾叶薯蓣的正丁醇萃取相部分主要含有两类甾体皂苷,其苷元分别为原薯蓣皂苷元和薯蓣皂苷元.     

聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶催化酸水解盾叶薯蓣薯蓣皂苷元的研究

目的提高纤维素酶在催化过程中的稳定性，并考察聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在盾叶薯蓣薯蓣皂苷转化为薯蓣皂苷元过程中的可行性。方法采用聚氧乙烯-马来酸酐共聚物对纤维素酶进行化学改性，并以相对酶活考察改性酶的稳定性。以薯蓣皂苷元的提取率和熔点为指标，比较了纤维素酶和改性酶的辅助催化作用。对改性酶催化所得薯蓣皂苷元产品进行元素分析和HPLC分析。结果改性酶在高温下的活力衰减速率减小，在50℃pH4．8的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中放置100min，保持了初始酶活的69．4％。改性酶辅助催化盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的转化时，较未改性酶的效果好，所得薯蓣皂苷元产品提取率为97．6％以上，为白色或乳白色，熔点为200-203℃，元素分析结果为H：77．96％，O：10．11％，HPLC法测定的质量分数高达96．03％。结论聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在较高温度下能够保持较高的催化活性，可以更有效地促进盾叶薯蓣薯蓣皂苷向薯蓣皂苷元的转化．     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷提取及检测条件的优化

目的:准确、快速测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量。方法:以薯蓣皂苷含量为评价指标,采用高效液相色谱法对薯蓣皂苷的检测条件进行了优化;同时,运用3因素3水平的正交实验,对薯蓣皂苷的提取条件进行了研究。结果:优化后的检测条件为:C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,乙腈-水(45∶55),进样量20μL,流速1.0mL.min-1,检测波长210nm。最优提取条件为药材称取量2g,用80%乙醇超声提取40min。结论:优化后的提取及检测条件能快速准确测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量。     

铁、锰、锌肥对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元的影响

目的大田条件下,研究铁、锰、锌肥对盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元量及根茎产量的影响。方法采用单因素施肥法,HPLC法测定薯蓣皂苷元的量,数据采用SPSS13.0软件包分析。结果 3种微肥使盾叶薯蓣根茎产量与薯蓣皂苷元量均有不同程度的增加,对薯蓣皂苷元量的影响为锰肥>锌肥>铁肥,对根茎产量的影响为铁肥>锰肥>锌肥。结论施用适当浓度的锰肥,对盾叶薯蓣的优质、高产栽培,具有重要的实践意义。     

反相高效液相色谱法测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的含量

目的：探讨盾叶薯蓣中薯蓣皂苷含量测定的方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DIKMAC18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈-水（52：48）,流速为1．0mL·min^-1,检测波长为203．0nm,柱温为30℃。结果：薯蓣皂苷在0．40-4．01μg范围内线性关系良好,相关系数r=0．9997（n=7）。平均回收率为101．65％,RSD为2．29％（n=6）。结论：该方法简便、准确、快速、灵敏、重现性好,可以作为盾叶著蓣的质量控制方法。