氟中毒大鼠骨组织中OPG、RANKL和RANK的表达及丹蓝仙硼疗氟胶囊的拮抗作用

目的观察骨保护素（OPG）、骨保护素配体（RANKL）、细胞核因子κB受体活化因子（RANK）在饮水型氟中毒大鼠骨组织中mRNA表达水平,探讨丹蓝仙硼疗氟胶囊对饮水型氟中毒大＂鼠OPG/RANKL/RANK系统表达的影响。方法以SD大鼠为研究对象,按体重均衡随机分为6组（组内雌雄各半）：对照组、氟中毒组、高剂量药物组、中剂量药物组、低剂量药物组、硼砂治疗组。在饮用水中加入氟化钠使水中氟含量为50 mg/L,复制氟中毒动物模型。提取骨组织总RNA,通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,观察骨组织中OPG、RANKL和RANK mRNA表达的变化。结果氟中毒时,骨组织中的OPG、RANKLmRNA的表达呈上升趋势,RANKmRNA表达呈下降趋势。用药后,骨组织中的OPG、RANKLmRNA的表达呈下降趋势,RANKmRNA表达呈上升趋势。结论过量氟可引起成骨与破骨活动均增强的骨转换增高状态,并可通过改变OPG/RANKL/RANK系统表达提高骨吸收的活性。丹蓝仙硼疗氟胶囊能拮抗过量氟对大鼠骨组织的作用,通过0PG/RANKL/RANK系统影响骨重建。     

氟对小鼠成骨细胞增殖与分化及骨保护蛋白和核因子κβ受体活化因子配体mRNA 表达的影响

目的 观察氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、分化、骨保护蛋白(OPG)mRNA及核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 取出生1～2 d昆明小鼠颅盖骨,分离成骨细胞后进行传代培养.按培养液中加入不同浓度氟化钠(NaF)将成骨细胞分为0(对照)、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3 mol/L组,分别在培养72 h或120 h后检测氟对成骨细胞增殖、分化(碱性磷酸酶,ALP)的影响;提取成骨细胞总mRNA,采用RT-PCR方法分析成骨细胞OPG mRNA、RANKL mRNA表达,并进行半定量分析.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 培养72 h后,成骨细胞增殖组间比较差异有统计学意义(F=13.806,P<0.05);与对照组(0.434±0.010)比较,10-7～10-4mol/L组成骨细胞增殖明显增加(0.448±0.010、0.453±0.013、0.454±0.016、0.449±0.018,P均<0.05),10-3 mol/L组成骨细胞增殖降低(0.401±0.009,P<0.05).成骨细胞ALP活性组问比较差异有统计学意义(F=9.021,P<0.05);其中10-7～10-5 mol/L组[(2.447±0.756)×106、(2.603±0.183)×106、(2.687±0.886)×106 U/L]ALP活性明显高于对照组[(1.677±0.682)×106U/L,P<0.05或<0.01];10-4mol/L组[(1.479±0.366)×106 U/L]ALP活性明显低于对照组(P<0.05).OPG mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=11.299,P<0.05);与对照组(11000±0.000)比较,10-7～10-4 mol/L组表达增强(1.058±0.027、1.053 ±0.026、1.088±0.055、1.069±0.008,P<0.05或<0.01),10-3mol/L组表达降低(0.941±0.029,P<0.05).成骨细胞RANKL mRNA表达组间比较差异无统计学意义(F=1.311,P>0.05).RANKL mRNA/OPG mRNA比值,在104～10-5mol/L组逐渐降低,10-4、10-3mol/L组升高,但组间比较差异无统计学意义(F=1.376,P>0.05).结论 氟对小鼠成骨细胞增殖、分化呈双向调节作用,表现为低剂量刺激而高剂量抑制.低剂量染氟可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,抑制骨吸收;而高剂量可能通过降低OPG的表达来促进破骨细胞的分化、成熟,促进骨吸收.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sodium fluoride(NaF) on proliferation, differentiation and the mRNA expression of osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor κβ ligand (RAN KL) of mouse osteoblasts. Methods Osteoblasts were isolated from calvarias of Kunming mice born in 1 - 2 d and cultured. Various concentrations of NaF(0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5, 10-4, 10-3mol/L) were added to the culture medium, the proliferation and activity of alkaline phosphatase(ALP) was determined after 72 h or 120 h. The expression of OPG mRNA and RANKL mRNA was analyzed by semi-quantification RT-PCR. Difference among groups was analyzed by One-Way AN0VA. Difference between two groups was analyzed by LSD-t test. Results There was significant difference in cell proliferation among groups after 72 h(F = 13.806, P < 0.05). Compared with control group(0.434 ± 0.010) , the proliferation was significantly induced in 10-7 - 10-4 mol/L groups treated osteoblasts (0.448 ± 0.010, 0.453 ± 0.013, 0.454 ± 0.016, 0.449 ± 0.018, all P< 0.05), and was significantly suppressed in 10-3 mol/L group(0.401 ± 0.009, P < 0.05). There was statistic difference in the activity of ALP among groups(F = 9.021, P < 0.05). Compared with control group (1.677 ± 0.682), the activity of ALP significantly increased in 10-7 - 10-5 mol/L groups[ (2.447 ± 0.756) × 106, (2603 ± 0.183) × 106, (2.687 ± 0.886) × 106 U/L, P < 0.05 or P < 0.01 ] and significantly decreased in 10-4 mol/L group[ (1.479 ± 0.366) × 106 U/L, P < 0.05 ]. There was significant difference in the expression of OPG mRNA among groups(F = 11.299, P< 0.05). Compared with control group (1.000 ± 0.000), the expression of OPG mRNA was significantly increased in 10-7 - 10-4 mol/L groups( 1.058 ± 0.027, 1.053 ± 0.026, 1.088 ± 0.055, 1.069 ± 0.008, P < 0.05 or P < 0.01) , while significantly decreased in 10-3 mol/L group (0.941 ± 0.029, P< 0.05). There was no difference in RANKL mRNA expression among groups (F= 1.311, P> 0.05). The ratio of RANKL/OPG decreased with increasing doses of fluoride and increased in 10-4, 10-3 mol/L groups, but there was no difference between groups(F = 1.376, P> 0.05). Conclusions A biphasic pattern of proliferation and differentiation has been induced in mouse osteoblasts, which manifests stimulation effect in low doses and suppression in higher doses. Low doses of sodium fluoride suppress differentiation and maturation of osteoblasts by increasing expression of OPG mRNA, while high doses of sodium fluoride enhance differentiation and maturation of osteoblasts by decreasing expression of OPG mRNA.     

川芎嗪对类风湿关节炎模型大鼠关节滑液RANK/RANKL/OPG表达的影响

目的 探讨川芎嗪对类风湿关节炎(RA)大鼠关节滑液核因子κB活化受体(RANK)、RANK配体(RANKL)和骨保护素(OPG)表达的影响,以及在RA骨破坏和炎症过程中的作用机制.方法 建立大鼠佐剂性关节炎模型,并分为5组,模型对照组、阳性对照组、川芎嗪高、低剂量组和正常对照组,造模15 d后,连续给药7 d,应用间接免疫荧光标记、流式细胞术检测关节滑液中RANK/RANKL/OPG表达水平和平均荧光强度.结果 与正常对照组相比,模型组CD3+T细胞OPG表达明显降低,RANK,RANKL升高,差异有显著性(P＜0.05),中性粒细胞和单核细胞上变化不明显;经过川芎嗪高剂量治疗后,CD3+T细胞上OPG表达增强,RANK、RANKL减弱,平均荧光强度降低,差异有显著性(P＜0.05),中性粒细胞和单核细胞治疗前后RANK、RANKL、OPG表达变化不明显;低剂量组各指标变化无统计学意义.结论 高剂量川芎嗪主要通过调节关节滑液中CD3+T细胞上RANK/RANKL/OPG表达起到缓解RA骨损伤和关节炎症的作用.     

左归丸对去势骨质疏松大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体/骨保护素的影响

目的探讨左归丸对卵巢摘除大鼠钙磷代谢和细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响。方法 SD雌性大鼠60只,采用去卵巢法制备骨质疏松症大鼠模型,将大鼠分为假手术组,切除卵巢组,左归丸低、中、高剂量组,西药对照组(戊酸雌二醇片),每组10只。造模成功12周后给予药物干预,西药对照组给予戊酸雌二醇片0.09 mg/kg灌胃治疗,左归丸低、中、高剂量组按4.75、9.5、19 g/kg灌胃治疗,假手术组和切除卵巢组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,干预4周后股动脉采血处死大鼠。比色分析法检测血清钙(calcium,Ca)、磷(phosphorus,P)含量;ELISA法检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)和RANKL含量;双能X骨密度仪分析测定大鼠股骨的骨密度(bone mineral density,BMD);AG-IX生物力学万能实验机检测最大载荷和弹性模量,比较各组间差异。结果假手术组,切除卵巢组,西药对照组,左归丸高、中、低剂量组的BMD分别为(0.145±0.004)、(0.116±0.007)、(0.146±0.006)、(0.142±0.004)、(0.134±0.002)、(0.129±0.001)g/cm2;这6组的体质量分别为(173.20±13.92)、(264.10±28.61)、(249.44±26.64)、(243.00±10.25)、(253.45±18.19)、(268.50±22.39)g;这6组的子宫指数分别为(1.62±0.34)、(0.45±0.09)、(0.89±0.22)、(1.03±0.23)、(0.91±0.13)、(0.46±0.07)mg/g;这6组Ca、P含量分别为(2.07±0.07/0.30±0.02)、(0.92±0.08/0.10±0.03)、(1.89±0.11/0.22±0.03)、(1.95±0.13/0.27±0.02)、(1.67±0.10/0.19±0.06)、(1.59±0.15/0.12±0.02)mmol/L;这6组OPG、RANKL和RANK含量分别为(755.00±58.05/5.73±0.27/10.68±0.69)、(493.67±36.77/10.24±0.33/18.62±0.74)、(653.00±56.93/7.37±0.19/12.23±0.76)、(731.00±38.49/6.77±0.65/11.52±0.39)、(704.33±62.92/7.97±0.41/14.69±0.86)、(555.00±97.09/9.31±0.75/15.04±0.52)pg/m L;这6组的最大载荷分别为(142.16±0.10)、(86.26±0.13)、(126.43±0.31)、(119.77±0.74)、(111.96±1.57)、(98.92±1.44)N;这6组弹性模量分别为(19.48±0.24)、(13.10±0.43)、(16.70±0.37)、(16.17±0.15)、(15.99±0.22)、(14.98±0.15)MPa。与假手术组比较,切除卵巢组大鼠的BMD、Ca、P、OPG、最大载荷和弹性模量水平均显著降低,而RANK和RANKL含量均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与切除卵巢组相比,左归丸各剂量干预组和西药对照组大鼠BMD和弹性模量均显著升高,RANK和RANKL含量明显降低,左归丸中、高剂量组和切除卵巢+西药对照组Ca、P、OPG含量和最大载荷显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论左归丸能升高去卵巢大鼠的骨密度,提高骨强度,并改善其力学性能,其机制可能与调节RANKL/OPG水平和Ca、P代谢有关。     

瑞舒伐他汀对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞骨保护素和核因子κB受体活化因子配体的影响

目的观察瑞舒伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)大鼠中心肌细胞骨保护素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)表达的影响。方法 70只雄性SD大鼠中,随机选择58只采用腹主动脉缩窄法制备CHF模型,将存活的48只CHF大鼠随机分为未治疗组、低剂量瑞舒伐他汀组(低剂量组)和高剂量瑞舒伐他汀组(高剂量组),各16只,另12只作为假手术组。于造模4周及给药4周后行超声心动图检查后处死,观察心肌组织病理学变化,测定心肌组织OPG、RANKL mRNA表达。结果给药4周后,与未治疗组和低剂量组比较,高剂量组大鼠左心室收缩末内径明显降低,LVEF、左心室短轴缩短率明显升高(P<0.05)。光镜下,高剂量组心肌损伤程度较未治疗组及低剂量组减轻。与假手术组比较,未治疗组、低剂量组、高剂量组大鼠心肌组织OPG、RANKL mRNA表达明显增加(P<0.01),RANKL/OPG值增高(P<0.01);与未治疗组及低剂量组比较,高剂量组心肌组织RANKL mRNA表达下调(P<0.05),RANKL/OPG值降低(P<0.05)。结论 CHF大鼠心肌细胞OPG、RANKL表达增强。高剂量瑞舒伐他汀可能通过下调RANKL表达抑制心室重构,改善心功能,延缓CHF进展。     

蛇床子素骨靶向药物对体外培养大鼠成骨细胞护骨素、核因子-κB受体活化因子配基表达的影响

目的观察蛇床子素骨靶向药物(NSC-OST)对体外培养的大鼠成骨细胞(OB)护骨素(OPG)及核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达的影响。方法不同浓度的NSC-OST作用于成骨细胞7 d,采用ELISA法检测成骨细胞OPG、RANKL的表达。结果终浓度为10-6mmol/L和10-5mmol/L组促进成骨细胞OPG的表达作用高于空白对照组(P<0.01);10-7、10-6mmol/L和10-5mmol/L组具有抑制大鼠成骨细胞表达RANKL的作用(P<0.01);终浓度为10-6、10-5mmol/L的NSC-OST可显著上调OPG/RANKL的比值(P<0.01)。结论适当浓度的NSC-OST可促进成骨细胞OPG的表达,抑制RANKL分泌,上调OPG/RANKL的比值。     

雷洛昔芬对小鼠成骨细胞中护骨素核因子-κB受体活化因子配体表达的影响

目的 雷洛昔芬对小鼠成骨细胞中护骨素(OPG)、核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)表达的影响. 方法 取出生24 h内的小鼠30只,无菌的条件下取出颅骨,应用酶消化法进行成骨细胞的培养,在培养成骨细胞的培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬(0、1012、1010、109mol/L),应用反转录聚合酶链扩增(RT-PCR)法检测其对OPG/RANKL mRNA的表达及酶联免疫吸附法(ELISA)法检测OPG蛋白分泌的影响. 结果 OPG mRNA在实验组中表达较对照组强,并且不同浓度组间的比较,差异有统计学意义(均为P<0.05),1010.mol/L组较10～mol/L、1012mol/L组的表达明显增强;RANKL mRNA在实验组的表达均较对照组弱,其组间的差异亦有统计学意义(P<0.01).并且随着雷洛营芬浓度的增加,RANKL mRNA的表达明显减弱,呈现明显的浓度依赖性.在试验组小鼠成骨细胞培养液中OPG浓度(10-9mol/L组为3.017±0.459,1010mol/L组为3.981±0.762,1012mol/L组为2.864±0.416)较对照组(2.106±0.316)增高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 雷洛昔芬能促进成骨细胞的中OPG的mRNA的表达及其蛋白的分泌,同时抑制RANKL的mRNA的表达.     

低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响

目的 探讨低钙高氟对大鼠脾组织细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠40只,体质量(118.9±13.5)g.采用2×2×2析因设计,将大鼠按体质量随机分为4组:对照组(常规饲料)、低钙组(低钙饲料)、高氟组(常规饲料+高氟饮水100 mg/L)和低钙高氟组(低钙饲料+高氟饮水100mg/L),每组10只.在喂养4和8个月时各处死5只大鼠,取大鼠脾脏,抽提脾组织中的总RNA,采用RT-PCR方法分析RANKLmRNA的表达.结果 4个月时对照组、低钙组、高氟组、低钙高氟组RANKLmRNA表达分别为0.13±0.05、0.13±0.03、0.17±0.02、0.27±0.05;8个月时分别为0.11±0.01、0.16±0.02、0.16±0.03、0.36±0.07.析因分析显示,低钙、高氟对RANKL mRNA表达有影响(F值分别为40.224、56.679,P均<0.05),作用时间对RANKL mRNA表达无影响(F=2.850,P>0.05);低钙高氟、低钙与作用时间对RANKLmRNA表达存在交互作用(F值分别为7.247、18.789,P均<0.05),高氟与作用时间对RANKL mRNA表达无交互作用(F=1.751,P>0.05).结论 低钙或高氟单独作用或低钙和高氟协同作用促进大鼠脾组织RANKLmRNA表达:低钙促进RANKL mRNA表达与作用时间有关,高氟促进RANKL mRNA表达不受作用时间影响.     

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。     

RANK RANKL和骨保护素在类风湿关节炎患者外周血和滑液中表达的研究

目的研究骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)在类风湿关节炎(RA)患者外周血和滑液中的表达,探讨RANKL、RANK和OPG在RA骨破坏中的意义。方法收集活动期RA患者治疗前后外周血、滑液和健康对照,以间接免疫荧光标记,流式细胞术检测RANK、RANKL和OPG在外周血和滑液中CD3+T淋巴细胞、中性粒细胞和CD14+单核细胞的表达率及平均荧光强度。结果①RA组治疗前后外周血RANK、RANKL和OPG在CD3+T淋巴细胞、中性粒细胞和CD14+单核细胞上的表达率差异无统计学意义(P>0.01);RANK的表达强度治疗后高于治疗前(P<0.01)。②RA组外周血CD3+T淋巴细胞上RANKL及RANK的表达率和表达强度明显低于滑液,OPG的表达则高于滑液(P<0.01),RANKL/OPG比率明显增高(P<0.01)。结论RANK表达强度的改变提示其可能与RA炎症的发展和转归有关,而活化的CD3+T淋巴细胞可能通过上调RANK、RANKL的表达,下调OPG表达参与RA破骨细胞的分化和骨损伤的调节机制。     

金雀异黄素对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞骨保护素／细胞核因子κB受体活化因子／细胞核因子κB受体活化因子配体通路的影响

目的研究金雀异黄素（genistein,Gen）对人类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast—like synoviocytes,FLS）骨保护素（osteoprotegerin,OPG）／细胞核因子KB受体活化因子（receptor—activator of nuclear factor kappa bata,RANK）／细胞核因子KB受体活化因子配体（receptor—activator of nuclear factor kappa bata ligand,RANKL）通路的影响及机制。方法培养人RA—FLS,并分为对照组（RA—FLS细胞）、TNF—α组（RA—FLS细胞＋TNF-α 10ng／ml）、TNF—α＋Gen组（RA—FLS细胞＋TNF—α 10ng／ml＋Gen 50μM）、Gen组（RA—FLS细胞＋Gen 50μM）。应用免疫印迹检测Gen作用RA—FLS的RANK、RANKL、OPG、雌激素受体（estrogen receptora,ERa）表达情况,免疫荧光检测ERα细胞内分布情况。结果Gen组、TNF-α组及TNF—α＋Gen组细胞内RANK蛋白表达量较对照组无明显差异（P〉0．05）,但OPG及RANKL蛋白表达明显高于对照组（均P〈0．05）。Gen组OPG／RANKL较对照组增高（P〈0．05）。Gen组、TNF-α组及TNF-α＋Gen组细胞内ERa蛋白表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫荧光结果显示核内ERα表达量增加。结论Gen可能通过与雌激素受体结合,转入核内发挥免疫调节作用,从而调节0PG／RANKI／RANK通路,发挥抑制骨破坏的作用。Gen可以上调人RA—FLS中OPG及RANKL,且对OPG的上调作用更强。     

慢性氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα的变化

目的探讨氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα的变化及它们之间的关系。方法通过低钙与含氟饮食建立氟中毒大鼠模型,采用Elisa法测定氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα表达。结果氟摄入可以提高血清OPG、IL-1β和TNFα水平;低钙饮食提高血清OPG水平,不影响IL-1β和TNFα水平;低钙与氟摄入协同能提高血清RANKL水平。结论慢性氟中毒大鼠血清中OPG、RANKL、IL-1β和TNFα发生了变化;OPG升高是主要的,可以反应机体内破骨或协同破骨因素总的变化程度。     

木犀草素调控OPG对牙周炎大鼠干预效果及作用机制

目的 分析木犀草素调控骨保护素(OPG)对牙周炎大鼠干预效果及作用机制。方法 选取60只SPF级8～10周龄雄性SD大鼠，15只作为对照组，其余45只建立牙周炎模型，之后将45只大鼠随机分为模型组、木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组。建模成功后开始灌胃，模型组给予10 ml/kg生理盐水进行灌胃，木犀草素低剂量组给予50 mg/kg木犀草素进行灌胃，木犀草素高剂量组给予100 mg/kg木犀草素进行灌胃。观察每组OPG表达量、牙槽骨吸收情况、破骨细胞数及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/白细胞介素(IL)-1β通路蛋白表达量。结果 与对照组相比，模型组、木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组OPG、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)表达量明显降低，骨小梁分离度(Tb.Sp)、CEJ-ABC、破骨细胞数、RANKL表达量、NLRP3、IL-1β表达量显著升高(P<0.05);与模型组相比，木犀草素低剂量组、木犀草素高剂量组OPG、Tb.N、Tb.Th表达量明显升高，Tb.Sp、CEJ-ABC、破骨细胞数、RANK...     

OPG/RANKL/RANK信号通路在非酒精性脂肪性肝病进展中的作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已成为全球范围内最常见的肝脏疾病,在现有基础上更好诊断、治疗NAFLD也愈发迫切。骨保护素(OPG)/NF-κB受体活化因子(RANKL)/NF-κB受体活化因子受体(RANK)信号通路是参与骨代谢平衡的重要信号通路。分别介绍了OPG、RANKL、RANK及OPG/RANKL/RANK系统,简述了OPG/RANKL/RANK信号通路通过激活NF-κB调节炎症因子生成,促使NAFLD发展的研究现状。指出OPG/RANKL/RANK系统可作为NAFLD治疗的潜在新靶点。     

补肾活血颗粒对骨质疏松大鼠骨组织中OPG/RANKLmRNA及蛋白表达的影响

目的探讨补肾活血颗粒对骨质疏松(OP)大鼠骨组织中骨保护蛋白/核因子-β受体活化因子配体(OPG/RANKL)mRNA及蛋白表达的影响。方法采用卵巢摘除法建立SD大鼠OP模型。分别给予生理盐水(模型组)、50 mg/kg补肾活血颗粒(低剂量组)、100 mg/kg补肾活血颗粒(中剂量组)、200 mg/kg补肾活血颗粒(高剂量组)、30μg/kg 17β-雌二醇(雌激素组)干预治疗12 w,设立假手术组为对照。比较各组骨密度(BMD)、骨组织中OPG/RANKL mRNA及蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠BMD、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达显著减低(P0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组及雌激素组BMD、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达明显提高(P0.05)。高剂量组BMD、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达显著高于低、中剂量组及雌激素组(P0.05)。结论补肾活血颗粒可有效改善OP大鼠骨密度,调节OPG/RANKL可能是其作用机制。     

OPG/RANK/RANKL系统与骨折和类风湿性关节炎

骨保护素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)和RANK配体(RANKL)是偶联成骨细胞、基质细胞和破骨细胞分化、活化及生物活性的3种主要细胞因子,其形成的局部调节体系在骨代谢中起十分重要的作用。本文简要介绍了OPG/RANK/RANKL系统及该系统在骨质疏松性骨折发生中的作用,RANKL/OPG比值与骨折的关系,OPG和RANKL对骨折愈合的作用,血清OPG或RAN-KL水平与骨折的联系,OPG基因多态性与骨折关系的研究结果。另外还介绍其在类风湿性关节炎发病机制中的作用,OPG/RANK/RANKL与滑膜组织的联系,OPG治疗的相关实验进展。     

99Tc-亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠核因子-κB受体活化因子配体/骨保护素系统的影响

目的 探讨锝[99Tc]-亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP)对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素系统的作用.方法 建立CIA大鼠关节炎模型,分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组和99Tc-MDP组,观察膝关节病理变化并评分;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清RANKL、骨保护素浓度;Western blot法检测滑膜RANKL和骨保护素表达.采用重复测量的方差分析和单因素方差分析进行统计学处理.结果 甲氨蝶呤组血清RANKL/骨保护素比值[给药后1周(1.076±0.016)、给药后2周(1.140±0.005)、给药后3周(1.155±0.023)],关节病理评分[滑膜(1.8±0.5)、软骨(1.9±0.6)、骨(1.8±0.5)],滑膜RANKL/骨保护素比值(1.156±0.014)明显低于模型组(1.269±0.025、1.296±0.015、1.340±0.011),(2.9±0.4、2.6±0.5、2.6±0.5),(1.340±0.013)(P＜0.01);99Tc-MDP组(1.035±0.034、0.986±0.019、0.991±0.020),(1.5±0.5、1.4±0.5、1.2±0.5),(0.098±0.026)明显低于甲氨蝶呤组(P＜0.01).结论 99Tc-MDP可能通过降低RANKL/骨保护素比值起延缓关节破坏的作用,其起效时间明显早于甲氨蝶呤.     

氟对大鼠成骨细胞骨保护蛋白表达的影响

目的 观察氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)mRNA和蛋白表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,按染氟剂量分为0(对照)、1、2、4 mg/L组.分别在染氟48、72 h后提取RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测OPG mRNA表达;采用酶连免疫吸附实验(ELISA)法检测培养液上清中的OPG蛋白表达.结果 大鼠乳鼠成骨细胞在体外染氟培养48、72 h,OPG mRNA表达组间比较差异均有统计学意义(F值分别为333.48、808.34,P<0.05).在染氟48 h,1、2、4 mg/L组OPGmRNA表达(0.810±0.043、0.819±0.031、0.870±0.044)与对照组(0.800±0.040)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);在染氟72 h,1、2、4 mg/L组(0.933±0.047、1.031±0.051、1.240±0.062)高于对照组(0.805±0.020),差异均有统计学意义(P<0.05);OPGmRNA表达,72 h均高于48 h,染氟剂量和染氟时间有交互作用(F=204.16,P<0.05).在染氟培养48、72 h,OPG蛋白表达组间比较差异均有统计学意义(F值分别为7.49、41.31,P<0.05);组间两两比较,仅4 mg/L组(0.228±0.014、0.277±0.048)与对照组(0.205±0.012、0.229±0.010)比较,差异有统计学意义(P<0.05);OPG蛋白表达虽然72 h均高于48 h,但染氟剂量和染氟时间无交互作用(F=1.21,P>0.05).结论 氟可促进成骨细胞OPG mRNA和蛋白表达,这种作用与染氟的剂量以及作用时间有关.     

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。     

白三烯B4对骨髓细胞及成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响

目的观察不同浓度白三烯B4(LTB4)干预后大鼠骨髓细胞及成骨细胞过氧化物酶体增生物激活受体γ2(PPARγ2)及骨代谢相关基因核因子-KB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、核因子-KB活化受体(RANK)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)mRNA表达水平的变化,探讨PPARγ2内源性配体LTB4在骨代谢中的作用。方法体外培养大鼠骨髓细胞及成骨细胞,分别加入不同浓度LTB4(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)干预24 h,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测骨髓细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平及成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表达水平,比较不同浓度LTB4对上述基因表达的影响。结果 (1)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调骨髓细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2、RANK、TRAP mRNA的表达水平,组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);(2)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调成骨细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制骨髓细胞及成骨细胞成骨标记物基因的表达,促进骨髓细胞破骨标记物基因的表达,从而参与与增龄相关的骨质疏松的发病过程。