活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.     

survivin和VEGF反义寡核苷酸转染对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞经存活蛋白(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)单独和联合转染后细胞增殖抑制率和凋亡率的改变。方法以脂质体(Lip)为载体,介导不同浓度survivin和VEGFASODN单独和联合转染A549细胞,观察细胞生长状态,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果200、400、600 nmol/L survivin ASODN和5、10、20μmol/L VEGF ASODN均能抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡率,抑制效应呈剂量依赖性;两者联合转染细胞生长抑制率和凋亡率与单独转染差异显著(P<0.01)。结论 survivin ASODN和VEGFASODN联合较单独应用能明显抑制A549细胞生长,促进细胞凋亡。研究结果为NSCLC双靶点治疗提供了实验依据。     

人参多糖体外抑制人非小细胞肺癌A549细胞作用研究

目的探讨人参多糖体外抑制人非小细胞肺癌A549细胞的作用。方法应用MTT法检测药物对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,应用流式细胞技术检测细胞周期变化,Hoechst33258／PI双染色法观察细胞凋亡形态的变化。结果人参多糖在体外可抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期在G2／M期;荧光染色可见,随药物浓度增加细胞凋亡率增加,表现为染色质凝集、细胞核碎裂等典型的细胞凋亡形态变化。结论人参多糖在体外可抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

胡椒碱对人肝癌HepG2细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的 探讨胡椒碱(piperine)对人HpeG2肝癌细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为肝癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的HpeG2细胞,采用MTT比色法检测不同浓度胡椒碱对体外培养的HepG2细胞和新分离的外周血白细胞的增殖抑制作用.Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,采用流式细胞术测定胡椒碱对HepG2细胞的凋亡.结果 胡椒碱对HepG2细胞增殖的抑制率随着浓度的升高而增加,半量抑制浓度(IC50)为15.13±3.21 μmol/L,低于其对外周血白细胞的抑制率(64.52±5.32 μmol/L).Hoechst 33258染色后,胡椒碱处理癌细胞组表现出典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测20 μmol/L的胡椒碱处理HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率由对照组的2.89%上升到了21.76%.结论 胡椒碱具有抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于肝癌治疗的潜在价值.     

地西他滨联合去甲氧柔红霉素对DNMT3A突变阳性AML细胞的增殖和凋亡的影响

[目的]探讨地西他滨(DAC)联合去甲氧柔红霉素(IDA)对伴DNA甲基转移酶3A基因(DNMT3A)突变阳性急性髓系白血病(AML)细胞株OCI-AML3的增殖抑制和促凋亡作用.[方法]使用不同浓度IDA单药或联合低浓度DAC(2 μmol/L)干预OCI-AML3细胞48 h后,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.[结果]相对低浓度的IDA(≤40 nmol/L)对OCI-AML3细胞无显著增殖抑制效应;2 μmol/L DAC联合IDA对OCI-AML3细胞的增殖抑制率显著高于IDA单药(P<0.01);DAC联合IDA能显著提高OCI-AML3细胞的凋亡率(P<0.001).[结论]伴DNMT3A突变的AML细胞对相对低浓度的IDA原发耐药,而DAC可提高其对IDA的敏感性.     

葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对人膀胱癌细胞株BIU87细胞增殖和凋亡的影响。方法 BIU87细胞与50、100、200μg/ml的GSPE共同孵育24h后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果 不同浓度（50、100、200μg/mL）GSPE对BIU87细胞的增殖抑制率分别为(13.0±1.5)%、(31.8±2.1)%和(48.6±1.8)%;凋亡率分别为(8.7±0.7)%、(28.2±1.6)%和(48.5±0.7)%;细胞增殖抑制率和凋亡率均随GSPE浓度的升高而增高（P＜0.01）。结论 葡萄籽提取物原花青素在体外可呈浓度依赖性抑制膀胱癌BIU87细胞增殖并促进其凋亡。     

大蒜素对小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响

目的探讨大蒜素对肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响,为大蒜素治疗肺癌补充理论依据。方法实验分为对照组(正常培养A549细胞)、低剂量组(A549细胞+10μmol/L大蒜素)、中剂量组(A549细胞+30μmol/L大蒜素)和高剂量组(A549细胞+50μmol/L大蒜素)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖情况;采用荧光TUNEL法检测各组细胞凋亡;采用Transwell检测各组细胞迁移能力,采用Western blot技术检测各组细胞Caspase-3、p53和CHOP表达。结果不通浓度大蒜素可有效降低肺癌细胞的增殖、迁移能力,且与剂量呈负相关(P0.05);增加肺癌细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、p53和CHOP的表达,且表达水平与剂量呈正相关(P0.05)。结论大蒜素通过提高肺癌A549细胞Caspase-3、p53和CHOP等凋亡因子的表达诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖和迁移能力,从而发挥其抗肿瘤的作用。     

新藤黄酸对人肺癌细胞株A549的增值和凋亡的影响

目的探讨新藤黄酸(GNA)对人肺癌细胞株A549的增值和凋亡的影响及其调控的可能机制。方法用不同浓度的GNA处理A549细胞,分为对照组和GNA组(GNA浓度分别为0.5、1.5、2.0mg/L),采用MTT、细胞划痕、Hoechst染色法观察细胞的增殖、迁移和凋亡状况;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3、caspase9、p53和NF-κB的表达变化。结果 GNA能明显抑制细胞的体外增殖和迁移且呈剂量依赖性;Hoechst染色显示GNA能诱导细胞凋亡,且随着浓度的升高凋亡现象越来越明显;Western blot显示GNA能上调促进凋亡的蛋白caspase3、caspase9、p53和下调NF-κB的表达(P0.05)。结论 GNA能明显抑制人肺癌细胞株A549的增殖和迁移并诱导凋亡。     

曲古抑菌素A对人胆管上皮癌细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶抑制荆曲古押茵素A对体外培养的人胆管上皮癌细胞增殖及凋亡的影响.[方法]采用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力,采用TUNEL染色法观察细胞凋亡指数.[结果]曲古抑菌素A抑制胆管癌QBC939细胞的生长,促进其凋亡发生,且呈剂量依赖性.[结论]曲古抑菌素A可以有效地抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖并诱导其凋亡.     

罗格列酮对体外培养大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及GW9662的干预作用

[目的]观察罗格列酮时血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及探讨其可能机制.[方法]采用罗格列酮处理及处理前GW9662干预体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(AVSMCs),用流式细胞学法检测细胞凋亡率,原位凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡.[结果]罗格列酮对大鼠VSMCs凋亡诱导存在时阃依赖和浓度依赖:随着罗格列酮诱导时间的增加,细胞凋亡率逐渐增加,24h细胞凋亡率最高,超过24 h凋亡率没有继续增加;随着罗格列酮浓度的增加,细胞凋亡率运浙增加,100 μmol/L时细胞凋亡率最高,超过100 μmol/L细胞凋亡率不再增加.并且GW9662可逆转罗格列酮对AVSMCs凋亡的诱导.[结论]罗格列酮可能通过与PPAR-r结合并使PPAR-r激活诱导AVSMCs凋亡.     

咖啡因对棕榈酸作用下β细胞增殖和凋亡影响

目的观察咖啡因对游离脂肪酸棕榈酸作用下体外培养的β细胞增殖和凋亡的影响。方法根据不同浓度咖啡因(1、10、25μmol/L)和游离脂肪酸棕榈酸(500μmol/L)同时作用于体外培养胰岛β细胞分为5组:空白组(不含游离脂肪酸)、咖啡因1μmol/L组(含咖啡因1μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因10μmol/L组(咖啡因10μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因25μmol/L组(咖啡因25μmol/L+棕榈酸500μmol/L)和PA组(500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法反映细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡并计算凋亡率。结果 PA组细胞培养48小时、72小时、96小时于490nm光密度值分别为0.144±0.011、0.184±0.026、0.261±0.033,明显低于空白组(P<0.05)。咖啡因10μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.274±0.031、0.452±0.039;咖啡因25μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.280±0.049、0.463±0.051,显著高于PA组(P<0.05)。培养96小时PA组细胞凋亡率(40.55±20.33)%,较空白组(6.68±1.09)%明显升高(P<0.05)。咖啡因10μmol/L和25μmol/L组细胞凋亡率分别为(19.12±10.56)%和(20.97±9.75)%,较PA组明显下降(P<0.05)。结论游离脂肪酸棕榈酸导致体外培养β细胞增殖活性显著受抑、细胞凋亡增加。在一定浓度范围内,咖啡因可能改善棕榈酸诱导的胰岛β细胞增殖受抑和细胞凋亡。     

17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞的影响及细胞内活性氧的研究

目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-DMAG）对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞凋亡的影响及其细胞内活性氧（ROS）的变化.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增殖影响;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率;酶标仪检测细胞内ROS的变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖.0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.5μmol/L作用于HT-29细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为（22.17±1.15）％、（28.45±1.16）％、（35.04±1.58）％和（46.85±2.44）％,作用48 h后,细胞增殖抑制率分别为（27.55±0.65）％、（33.33±1.23）％、（46.20±4.76）％和（55.45±4.47）％,作用72h,细胞增殖抑制率分别为（39.19±1.74）％、（44.29±2.00）％、（50.66±2.17）％和（58.84±3.18）％.正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率（早期＋晚期）为（2.72±0.57）％,0.25 μmol/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24h后细胞总凋亡率分别为（5.38±0.46）％、（6.88±0.52）％、（10.44±0.32）％与（17.87 ±4.66）％,17-DMAG作用HT-29细胞24h的凋亡率与对照组细胞凋亡率相比差异有统计学意义（P＜0.05）.0.25 μmoL/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5 μmol/L 17-DMAG作用HT-29细胞12 h与24h,其活性氧水平均较对照组有不同程度的上升,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖,诱导其凋亡,可能部分与细胞内的ROS升高有关.     

反义抑制C-myc蛋白表达对人胆管癌细胞株体外增殖的影晌

【目的】探讨反义抑制C-myc蛋白的表达对人胆管癌细胞QBC939体外增殖的影响。【方法】采用常规方法培养QBC939细胞，合成C-mycASODN及Ns0DN，并将其转染QBC939细胞；用Western-blot法检测转染AS（）DN组（转染组）、转染NSODN组（无义组）及空白对照组细胞中c-myc蛋白的表达；通过四甲基噻唑蓝（MTT）实验检测各组细胞在体外的存活率。【结果】无义组与空白对照组灰度值比较无显著性差异（P〉0．05）；转染组的灰度值显著低于空白对照组（P〈0．01）；转染不同浓度（Mmol／L）的cmycASODN后，各组细胞的存活率分别为：0．5组为79．6％、1．0组为75．0％、2．0组为70．9％、4．0组为59．1％、8．0组为47．3％，均显著低于空白对照组（P〈0．01）。【结论】反义抑制c-myc蛋白的表达后，人胆管癌细胞在体外的增殖受到了抑制，且其抑制作用随着c-mycASODN浓度的增加而增强。     

阻断STAT3信号转导通路抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭转移的体外研究

【目的】观察JAK2激酶特异性抑制剂AG490对非小细胞肺癌A549细胞侵袭的影响,探讨通过药物阻断STAT3信号转导通路在治疗非小细胞肺癌中的作用。【方法】应用AG490处理非小细胞肺癌A549细胞。噻唑蓝法检测各组细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率;利用B0yden小室体外侵袭模型检测A549细胞体外粘附和侵袭力;Westernblot检测STAT3信号转导通路成员的表达。【结果】AG490明显抑制非小细胞肺癌细胞增殖和细胞克隆形成（P〈0．05）,降低细胞粘附力和体外侵袭力（P〈0．05）,并可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化,使STAT3、CyclinE1蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]STAT3信号转导通路参与癌细胞侵袭调控,阻断STAT3通路活化可以抑制非小细胞肺癌细胞侵袭。     

非诺贝特对C-反应蛋白诱导的外周血内皮祖细胞损伤的保护作用

【目的】研究非诺贝特对C反应蛋白（CRP）诱导的内皮祖细胞（EPCs）损伤的保护作用。【方法】随机将分离培养的EPCs细胞分为5组：A组：对照组,B组：CRP组（5 μg／mL）,C1—3组：CRP（5μg／mL）＋非诺贝特不同浓度组（5、10、50 μmol／L）。预先加入非诺贝特作用4h,再加入5 μg／mLCRP,继续培养7d后观察EPCs的细胞集落形成单位数,用趋化试验检测细胞的趋化能力,用MTT法检测细胞的增殖活性,用硝酸还原酶法测定N0的含量,SA—p半乳糖苷酶染色,检测细胞衰老并计数每组衰老细胞数。【结果】①加入（10、50／μmol／L）非诺贝特后,EPCs细胞增殖活性较CRP组明显增强,差异有统计学意义（P〈0．05）;细胞的集落数量较CRP组明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）;加入（50／μm01／L）非诺贝特后,细胞的趋化活性较CRP组明显增强,差异有统计学意义。②随着作用浓度的增加,CRP加速细胞衰老,和对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）,而加入（10 μmol／L）非诺贝特后,细胞衰老数量明显减少,与（5μg／mL）CRP组比较,差异有统计学意义（P〈O．05）。③CRP抑制EPCs分泌N0,随着非诺贝特浓度的增加,N0分泌水平逐渐增加,与（5 μg／mL）CRP组比较差异有统计学意义（P〈0．05和P〈O．01）。【结论】非诺贝特能有效拮抗CRP对EPCs的损伤作用,起到保护内皮功能的作用。     

尿多酸肽联合亚砷酸对K562细胞凋亡及细胞增殖的影响

【目的】观察尿多酸肽（cDA-2）、亚砷酸、CDA_2与亚砷酸联合体外诱导慢性髓细胞白血病细胞（K562）株凋亡、抑制增殖的作用;探讨CDA-2与亚砷酸联合对诱导K562细胞凋亡及抑制增殖的协同作用。【方法】不同浓度的CDA-2、亚砷酸及二者联合处理K562细胞株,通过MTT比色法检测K562细胞细胞生长率,计算IC50值;应用倒置相差显微镜、A0荧光染色观察细胞凋亡及形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡。【结果】①MTT结果显示,在一定的范围内,K562细胞的生长率存在剂量及时间依赖性降低,CDA-2作用K562细胞24h、48h、72h的IC50值分别为75mg／L、59mg／L和37mg／L,亚砷酸作用K562细胞24h、48h、72h的IC50值分别为11．55μmol／L、6．14gmol／L及5．18μmol／L;②荧光染色结果显示,与未加药的对照组相比,二者单药均可促进细胞凋亡,二者联合后凋亡作用更加显著;③流式细胞术显示,cDA-262．5mg／L处理K562细胞24h早期凋亡细胞为（1．77±0．49）％,亚砷酸4umol／L处理K562细胞24h早期凋亡细胞为（1．33±0．58）％,而相同浓度的二者联合用药作用于K562细胞24h早期凋亡细胞为（11．03±0．7）％（P〈0．05）,按照预计效应公式得出,两药联合存在协同作用,且协同作用于24h,两药最低浓度联合时已开始,随着两药浓度的增加,协同作用逐渐增大。【结论】CDA-2、亚砷酸单药及二者联合均可抑制K562细胞株增殖并促进凋亡,二者具有协同作用。     

氧化苦参碱干预人体骨肉瘤细胞增殖周期 诱导其凋亡的作用

目的研究氧化苦参碱对人体骨肉瘤细胞（MG-63）凋亡的影响。方法在培养液体中加入不同浓度的氧化苦参碱（Oxymatrine,OM）进行不同时间长度的诱导,以流式细胞术法检测人体骨肉瘤细胞（MG-63）增殖、周期及凋亡情况。结果1～50μmol／L氧化苦参碱均能抑制骨肉瘤细胞增殖,同时能够阻滞MG-63细胞进入S和G2／M期,使细胞停滞于G0／G1期,与空白对照组比较,差异有统计学意义,且氧化苦参碱高剂量组最明显（P〈0．05）。5、10、50μmol／L氧化苦参碱作用细胞96h后的凋亡率分别为（10．96±0．41）％、（20．74±1．09）％、（27．05±2．00）％,与对照组（4．66±1．26）％比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。氧化苦参碱浓度越高,抑制作用越明显,呈明显的剂量依赖效应。50¨mol／L氧化苦参碱作用于细胞48h、72h、96h后的凋亡率分别为（6．65±1．49）％、（14．82±5．79）％、（27．05±2．00）％,与对照组各时间点（4．01±0．86）％、（4．31±0．68）％、（4．66±1．26）％比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。氧化苦参碱作用时间越长,抑制作用也越明显,呈明显的时间依赖效应。结论氧化苦参碱可通过时间依赖性和剂量依赖性方式,促使细胞G2／M期阻滞和抑制细胞有丝分裂,从而诱导人体骨肉瘤细胞凋亡。     

Zebularine对K562细胞的增殖及凋亡的影响

[目的]探讨药物zebularine对白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响.[方法]选择白血病细胞株K562,试验分为对照组(未加入zebularine组)、实验组 (zebularine终浓度分别为 250 μM,500 μM)组3个组.MTT试剂盒检测12 h、24 h、36 h、48 h和 72 h后K562细胞...     

辛伐他汀对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测不同浓度SIM作用不同时间对SHI-1细胞生长的抑制作用;实验分为阴性对照及辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20μmol/L),处理48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;半定量RT-PCR法检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达;Western blot法检测caspase-3、BCL-2蛋白表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。与对照组相比,辛伐他汀处理SHI-1细胞48小时后,各浓度组S期细胞百分比明显增多,5μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞能明显阻滞细胞周期进程,但不能诱导细胞凋亡。细胞中BCL-2mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而下降,caspase-3mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而增高(p<0.05)。SHI-1细胞中BCL-2蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而降低,caspase-3蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而增加(p<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调BCL-2和上调caspase-3表达有关。