肝部分切除后枯否细胞对机体的保护机制

目的 观察肝部分切除肠源性内毒素血症大鼠肝组织脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)、CD14基因表达及血浆TNF-α产生的变化,探讨枯否细胞保护机体的机制.方法 将72只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)和肝大部分切除组(PH组).测定NC组(0 h)及PH组术后6 h,12 h,24 h,36 h,48 h,72 h,120 h,168 h时血浆内毒素.(ET)、TNF-α浓度,同时用RT PCR方法观察残余肝组织LBP mRNA、CD14 mRNA的表达变化情况.结果 PH组大鼠血浆ET浓度在肝大部分切除后6-72 h显著高于NC组,尤其是12 h、48 h(P<0.01),72 h后与NC组比较无统计学差异.PH组 TNF-α在术后6 h一过性上升后迅速下降,在72 h降到最低,与血浆ET变化无相关.NC组及PH组肝组织均未见LBP mRNA表达.与NC组比较,PH组CD14 mRNA的表达在6-12 h和36-120 h时明显下调(P<0.05),与血浆中ET的变化趋势呈负相关(r=-0.532,P<0.05).结论 肝组织中CD14基因表达的下调和LBP基因的不表达可能是枯否细胞对机体的保护机制之一.     

大鼠肝再生时线粒体通透性转换的变化

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞线粒体膜通透性转换(PT)的变化规律.方法:SD大鼠肝70%部分切除(PH)制作肝再生模型,断头取肝分离线粒体后,通过检测静息态和不同浓度钙离子诱导下线粒体悬液在540 nm处光密度值(D540)变化来观察线粒体PT的时相变化.结果:与对照组比较,大鼠肝再生早期(PH后0～24 h)和后期(PH后120～168 h)都表现为肝线粒体先收缩后肿胀,也即通透性先下降后增高;同时大鼠肝再生早期肝线粒体可明显抵抗钙离子的诱导作用,而PH后24 h和168 h组的大鼠肝线粒体对钙离子的诱导非常敏感.环孢素A(CsA)可阻断钙的诱导作用.结论:大鼠肝再生过程中线粒体PT出现明显规律性改变,这可能与肝再生过程中线粒体氧化磷酸化的变化以及肝再生的启动和终止有关.     

创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因的动态表达及抗菌药物干预效应

目的 探讨创伤弧菌（W）脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因Fas mRNA、细胞色素C（CytC）mRNA、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspases）-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA和Bcl-2 mRNA的动态表达及头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星的干预效应.方法 制作大鼠W脓毒症模型（W组）和W脓毒症抗菌药物干预模型（AA组）,并设正常对照组（NC组）,同时采用RT-PCR法检测各组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达量的动态变化.结果 W组各时点肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达量均较NC组增高.而各时点Bcl-2 mRNA表达量均较NC组下降（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12h时肝组织Bcl-2 mRNA表达量及9h时的Caspase-3 mRNA表达量仍高于NC组（均P〈0.05）;AA组染菌后9、12、16h时的肝组织Fas mRNA、CytC mRNA、Caspase-9 mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,染菌后12、16h时的Bax mRNA表达量均较同时点W组降低（均P〈0.05）,而染菌后9、12、16h时的Bcl-2 mRNA表达量则较同时点W组增高（均P〈0.05）.结论 外源性、内源性凋亡途径均参与了W脓毒症肝细胞损伤过程;促/抗凋亡调节基因（Bax/Bcl-2）表达失衡可促进肝细胞凋亡;而抗菌药物则可有效抑制肝细胞凋亡,从而维持促/抗凋亡调节基因表达的平衡.     

自制肝保护液对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断所致肝细胞损伤的保护作用

目的 探讨自制肝保护液对梗阻性黄疸大鼠门静脉阻断所致肝细胞损伤的作用及对肝细胞MAPKs信号途径的影响.方法 72只Wistar系大鼠完全随机分为4组:A组:胆道再通、门静脉周围游离、切除肝尾状叶,90 min后关腹腔;B组:胆道再通、肝尾状叶分流门静脉、余肝门静脉血流阻断90 min、恢复正常门静脉血流、切除肝尾状叶,关腹;C组:B组+门静脉肝侧灌注4℃乳酸林格氏液;D组:B组+门静脉肝侧灌注4℃自制肝保护液(home-made liver solution,HMLS).术后0、6、24h获取各组大鼠组织标本.采用RT-PCR和Western blot分别测定肝组织A20 mRNA和蛋白表达,测定肝组织中p-JNK、p-ERK、p-p38、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达情况,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数.结果 D组大鼠A20 mRNA和蛋白表达均明显增加(P＜0.05),p-JNK、Bax、Caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05),而p-ERK、Bcl-2蛋白表达明显增加(P＜0.05).C、D组大鼠与B组相比肝细胞凋亡率明显下降(P＜0.05),其中D组下降更明显.结论 自制肝保护液经门静脉在体持续低温灌注肝脏,可以促进A20 mRNA及其蛋白的高表达,由此激活ERK信号转导通路,抑制JNK信号转导通路,反向调节线粒体途径Bcl-2/Bax蛋白平衡的逆转,降低了其下游的凋亡执行蛋白Caspase-3,从而起到抗凋亡、保护肝细胞的作用.     

芬太尼及甲泼尼龙琥珀酸钠对家兔骨骼肌缺血再灌注损伤的保护机制

目的 观察芬太尼及甲泼尼龙琥珀酸钠对家兔断肢再植肢体缺血再灌注损伤的影响。方法 雄性家兔60只,体质量(2.5±0.5)kg。 随机分为4组,每组15只,建立右后肢断肢再植模型。对照组(A组)仅作断肢再植,不给予干预措施;芬太尼组(B组)于术中术后给予芬太尼干预;甲泼尼龙琥珀酸钠组(C组)术中术后给予甲泼尼龙琥珀酸钠干预;芬太尼联合甲泼尼龙琥珀酸钠组(D组)同时给予芬太尼、甲泼尼龙琥珀酸钠给予干预。B、C、D 3组于再灌注后4、24、72h取缺血肢体肌肉组织,观察其Bax和Bcl-2基因表达的变化及24h肌肉组织超微结构的变化。结果 与A组相比,B组4、24h Bax基因及Bcl 2表达无显著变化(P>0.05),72h时Bax基因表达降低,Bcl-2表达增高(P<0.05);C、D组各时间点Bax基因表达降低,Bcl-2表达增高(P<0.05);D组与B、C组相比,Bax基因表达降低,Bcl-2表达增高(P<0.05);电镜下,A组和B组线粒体损伤严重,C组和D组线粒体损伤较A、B两组轻。结论 芬太尼应用对断肢再植的IRI无保护作用,而甲泼尼龙琥珀酸钠具有保护作用,芬太尼联合甲泼尼龙琥珀酸钠两者有协同作用。     

微创颅内血肿清除治疗对兔脑内血肿周围组织的保护作用与Bcl-2、Bax表达变化的关系

目的探讨兔脑内血肿周围组织中Bcl-2、Bax表达及微创血肿清除治疗对其表达变化的影响,探讨微创血肿清除治疗脑保护作用机制.方法采用新鲜未肝素化自体血2次注血法制作脑出血模型,部分脑出血模型用尿激酶在兔脑内血肿局部溶解血肿,血肿形成 6h内抽吸血肿,运用原位杂交技术动态观察脑出血后Bcl-2 、Bax基因表达的变化,以及微创颅内血肿清除治疗对它们的影响.结果两组血肿周围脑组织Bcl-2 mRNA表达都在6h达高峰,以后随时间延长逐渐下降.治疗组较对照组Bcl-2 mRNA表达明显增强;两组比较均有显著性差异(P<0.05).两组Bax mRNA表达高峰在24h,然后逐渐减弱.治疗组较对照组Bax mRNA表达明显减弱;两组比较均有显著性差异(P<0.05).结论微创血肿清除治疗明显增强血肿周围脑组织Bcl-2 mRNA的表达、抑制Bax mRNA的表达,发挥抗凋亡和/或抗坏死作用,减轻脑出血继发性损害.     

TGF-β1和VEGF在肝纤维化大鼠肝部分切除术后肝组织中的表达变化

目的:探讨TGF-β和VEGF在肝纤维化大鼠肝部分切除后肝组织中的表达变化.方法:30只SD大鼠,随机分为正常组、对照组和实验组.正常组腹部皮下注射生理盐水;对照组和实验组腹部皮下多点注射500 mL/L CCl4>花生油溶液,建立肝纤维化模型;实验组造模成功1 wk后行肝部分切除术,分别于术后12,24,72 h处死大鼠取材.HE染色光镜下观察正常组和对照肝组织的结构改变,Masson染色光镜下观察正常组和对照肝组织胶原纤维的增生情况,免疫组织化学法及图像分析技术榆测各组肝组织中TGF-β1>,VEGF的表达.结果:①TGF-β1>表达的A值:与对照组相比,术后72 h显著高于对照组和实验组术后12,24 h(P<0.01).②VEGF表达的A值:与对照组A值相比,实验组术后12,24 h值明显升高(P<0.05),术后72 h显著升高(P<0.01).结论:TGF-β1>在肝再生早期调节肝细胞再生的作用并不明显,主要从肝再生中晚期开始发挥调节肝细胞再生的作用;VEGF在肝再生早期就参与了肝再生过程,中晚期参与肝再生过程的作用更加明显.     

BMP-4在肝大部切除大鼠肝再生过程中的作用

目的通过外源性Noggin的干预,探讨BMP-4在肝大部切除大鼠肝再生过程中的作用.方法??将80只健康雄性Wistar大鼠随机分为四组,取8只作为正常对照组(NC)即0h组,余72只建立肝大部切除(partial?hepatectomy,PH)模型,并随机分为生理盐水组(NS,n=24)、 Noggin低剂量组(NL,n=24)?和Noggin高剂量组(NH,n=24),检测模型鼠各组在PH后12h、48h、72h肝再生率及再生肝组织中BMP-4的表达.结果??三组模型鼠肝再生率在PH术后12~72h间均呈逐渐增高的趋势,NS组与NL组和NH组在12h时间点组间差异有统计学意义(F=18.976,P<0.01),而NL组和NH组组间差异无统计学意义;48h、72h时间点三组间差异均无统计学意义. BMP-4的表达在12h时间点有所降低,三组间差异有统计学意义(F=251.423,P<0.01);在48h时间点降至最低后开始回升,三组间差异有统计学意义(F=241.995,P<0.01);72h时间点BMP-4的表达增多但仍小于正常对照组的表达,三组间差异有统计学意义(F=318.637, P<0.01).结论??BMP-4的表达在外源性Noggin模型大鼠肝再生过程中的某一时间点急剧下降后逐渐回升,BMP-4在肝再生过程中起调节作用,可能参与肝非实质细胞、肝索形成及完成肝脏塑形的过程     

参麦注射液对脑出血大鼠血肿周围组织Bax、Bcl-2基因表达的干预

目的 观察大鼠脑出血灶周围组织Bax mRNA(Bax基因)、Bcl-2 mRNA(Bcl-2基因)表达的变化规律及参麦注射液的干预影响。方法 立体定位于大鼠苍白球内注射Ⅶ型胶原酶，诱导大鼠脑出血。采用半定量逆转录酶聚合使反应(D-H8)，检到脑出血后12h、1d、2d、4d、7d参麦组与各对照组血肿周围组织的Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。结果 脑出血后12-24h，模型组Bcl mRNA表达显著上调，12h达到高峰，2d后逐渐减弱，7d时仍高于假手术组水平；模型组Bcl-2 mRNAl2h时明显升高，1d时达到高峰，2d时降至假手术组水平；参麦组脑出血后1-2d时Bax mRNA表达低于模型组，但12h-4d 4个时间点Bcl-2 mRNA表达均高于模型组(P＜0．05)。结论 脑出血后，Bax、Bcl-2基因表达均有上调，与脑出血灶周围组织损伤有一定关系，参麦注射液可以上调Bcl-2 mRNA的表达，下调Bax mRNA的表达。     

IL-6和PIAS3与肝硬化大鼠肝部分切除后肝再生的关系

目的研究IL-6和PIAS3在肝硬化大鼠肝部分切除后的变化规律与肝脏再生的关系。方法实验分为肝硬化切除组(E组)和正常肝切除组(C组),观察比较术后0、1、2、4、12、24、48、72 h肝再生率、增殖细胞核抗原(PCNA)及肝组织IL-6 mR-NA、PIAS3 mRNA的表达。结果术后72 h E组肝再生率明显低于C组(P<0.05);E组PCNA的表达在12 h前均高于C组,呈缓慢上升趋势,于48 h达高峰,但远低于C组;E组IL-6 mRNA水平缓慢升高,峰值延迟,且远低于C组峰值;C组PIAS3 mR-NA的水平于术后4 h开始下降,而E组于术后12 h开始下降,且E组术后0~12 h均高于C组(P<0.05)。结论硬化肝脏部分切除术后肝再生障碍机制与IL-6和PIAS3表达失衡有关。     

白细胞介素-10对实验性肝纤维化大鼠Bax/Bcl-2表达的影响

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）对实验性肝纤维化大鼠Bax／Bcl-2表达的影响及外源性IL-10对肝纤维化的治疗及可能机制。方法47只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（N组，6只）和CCl4组（Z组，41只）。至造模第9周，Z组随机分为模型组（M组，9只），自然恢复组（R组，9只）和IL-10治疗组（T组，9只）；于12周末处死各组动物。免疫组织化学法和RT—PCR法检测各组大鼠肝脏Bax／Bcl-2的表达。结果成功建立肝纤维化模型。T组肝细胞变性及坏死程度较M组减轻；R组肝脏炎症活动度较M组有所缓解，但肝纤维化程度未见明显改善。免疫组织化学提示，Bax主要表达在肝细胞质内，Bcl-2主要表达在汇管区及纤维间隔区。组织蛋白及mRNA表达检测均显示，M组Bax较N组增高（P〈0．01），Bcl-2表达亦显著增高；R组Bax表达较M组降低（P〈0．01），但Bcl-2表达则较M组显著升高；T组Bax／Bcl-2均较R组显著降低。结论肝纤维化过程肝脏Bax／Bcl-2表达增强．外源性IL-10可以减轻CCl4诱导的肝脏纤维化，IL-10抗纤维化作用可能是通过减少肝细胞表达Bax、抑制肌成纤维细胞样细胞表达Bcl-2实现的。     

细胞凋亡和Bcl-2、Bax基因在兔肺缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨细胞凋亡在兔肺缺血再灌注损伤中的作用以及Bcl-2和Bax基因的调控.方法:健康日本大耳白兔48只,随机分为对照组与肺缺血再灌注损伤1 h、3 h和5 h组.复制在体肺缺血再灌注损伤模型.采用TUNEL法观测肺组织细胞凋亡;予免疫组化及原位杂交技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax蛋白和基因表达.结果:随着再灌注时间的延长,凋亡指数(AI)及Bax蛋白、BaxmRNA水平进行性升高;Bcl-2蛋白及Bcl-2mRNA先升高而后下降(均P＜0.01).凋亡指数(AI)与Bax蛋白及Bax mRNA之间均呈显著正相关(r分别=0.926,0.933;均P＜0.01),而与Bcl-2蛋白/Bax蛋白及Bcl-2mRNA/BaxmRNA的比值呈显著负相关(r分别=-0.836,-0.879;均P＜0.01).结论:肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,Bcl-2/Bax的比值下降是促进凋亡的重要因素.     

慢性低O2高CO2对大鼠海马Bcl-2、Bax基因表达和细胞凋亡的影响

目的：探讨慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞凋亡的诱发作用及对Bcl-2、Bax基因表达的影响。方法：雄性SD大鼠50只,随机均分成5组：正常对照组（NC）、低O2高CO21周组（1HH）、2周组（2HH）、3周组（3HH）和4周组（4HH）。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡;以RT-PCR检测海马Bcl-2mRNA和BaxmRNA的表达。结果：随着低O2高CO2时间延长,凋亡指数（AI）及BaxmRNA水平进行性升高;Bcl-2mRNA先升高后下降（均P〈0.01）。AI与BaxmRNA之间呈显著正相关（r=0.814,P〈0.01）,而与Bcl-2mRNA/BaxmRNA比值之间呈显著负相关（r=-0.405,P〈0.01）。结论：慢性低O2高CO2可以诱发大鼠海马神经细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值下降是促进凋亡的重要因素。     

缺血预处理影响兔肝缺血再灌注时细胞凋亡及调控基因Bcl-2／Bax表达的研究

摘要目的：探讨缺血预处理对肝脏细胞凋亡的影响以及与调控基因Bcl-2／Bax蛋白表达的关系。方法：90只新西兰兔被随机分为4组：假手术（SO）组、缺血再灌注（IR）组,缺血预处理（IP）组。IR和IP组进行60min的全肝缺血后恢复灌注。而IP组在缺血前采用5min缺血及5min再灌注的方法进行缺血预处理。两组又根据再灌注后处死动物,标本采集时间点分为4个亚组（IR3h,IR12h,IR24h,IR48h和IP3h,IR12h,IR24h,IR48h）,SO组于手术后24h采取肝标本。所有标本进行HE染色后光镜镜检,TUNEL法检测细胞凋亡及免疫组化检测Bcl-2／Bax基因表达水平。结果：HE染色证实,经预处理后肝脏组织损伤明显较IR组减轻。IR组和IP组与SO组比较,细胞凋亡指数（AI）差异有显著统计学意义（P〈0．01）;IP组中IP3h,IR12h,IR24h较同时间段IR组细胞凋亡指数差异有显著性降低（P〈0．05）;IP48h与IR48h相比,凋亡指数无统计学意义（P〉0．05）。Bcl-2蛋白表达：IP组与IR组及SO组比较,差异有显著统计学意R（P〈0．05）;IR组与SO组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。Bax蛋白表达：IR组和Ip组与SO组比较,差异有显著性增高（P〈0．05）;IP组与IR组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：缺血预处理可能通过激活Bcl-2蛋白的表达,改变Bcl-2／Bax表达比例从而抑制肝细胞凋亡。     

复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的:观察复方菝葜颗粒(compound rhizoma smilacinus granule,CRSG)对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响,探讨CRSG抑制非小细胞肺癌的作用机制.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为两组,每组15只.一组灌服复方菝葜颗粒,2次/d;另一组灌服等剂量的蒸馏水,第6次灌胃后的2 h提取血清.A549细胞株随机分为中药实验组、西药对照组、正常对照组,分别加入10%的含药血清、顺铂3 μg/mL和10% SD大鼠血清,培养48h后收集细胞,RT-PCR测定Bcl-2和Bax mRNA的表达水平.结果:各组细胞培养48 h后中药实验组、西药对照组细胞Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调, Bcl-2/Bax比值则显著降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论:非小细胞肺癌A549细胞存在Bcl-2 mRNA高表达、Bax mRNA低表达,复方菝葜颗粒干预后可使Bax mRNA表达量显著增加,Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2/Bax比例显著降低,这可能是其对非小细胞肺癌发挥抑瘤作用的分子机制之一.     

大鼠肝脏缺血再灌注合并肝部分切除诱导肝再生模型中EGFR及CyclinD1的表达

目的 观察大鼠肝脏缺血再灌注合并肝再生诱导模型中EGFR及CyclinD1的表达情况。方法 采用预先保留门静脉转流肝叶（约占全肝70％）,阻断部分肝叶（约占全肝30％）血供,到预定观察终点后重新开放血供灌注缺血肝叶,同时切除门静脉转流肝叶（70％肝切除）模型,通过RT－PCR和免疫组化法分析EGFR及CyclinD1大鼠肝脏缺血再灌注对肝细胞再生功能影响过程中的变化。结果 大鼠术后12、24hCyclinD1mRNA及此后相应的蛋白表达水平随着缺血时间的延长而显著降低。术后12h内EGFR蛋白表达水平随着缺血时间的延长而显著降低。结论 术后EGFR以及CyclinD1表达降低可能是肝脏缺血再灌注影响大鼠肝再生的原因之一。