红色毛癣菌对人角质形成细胞模式识别受体TLR-2,TLR-4,Dectin-1表达及细胞因子分泌的影响

目的研究红色毛癣菌对人角质形成细胞模式识别受体TLR-2,TLR-4,Dectin-1表达及细胞因子分泌的影响,探讨角质形成细胞对红色毛癣菌的免疫应答及其机制。方法红色毛癣菌孢子与人永生化表皮细胞株HaCaT细胞共培养,采用Real time PCR检测共培养后HaCaT细胞TLR-2,TLR-4,Dectin-1mRNA的表达情况;采用流式细胞技术检测共培养后不同时间段HaCaT细胞TLR-2,TLR-4及Dectin-1平均荧光强度;采用蛋白芯片抗体阵列检测共培养上清液中36种不同的细胞因子,趋化因子和急性时相蛋白的表达情况。结果共培养6 h后,TLR-2,TLR-4,Dectin-1mRNA表达上调;共培养量明24显h增后加TL。R结-2,论T L人R角-4,质D形ec成tin细-1胞平对均红荧色光毛强癣度菌增的高免,细疫胞识因别子和I应L-答8,,I在-30一9,定IF程N-度γ,上IL可-6通,IL过-1上3调在红Ha色Ca毛T癣细菌胞刺中激模后式分识泌别受体TLR-2,TLR-4及Dectin-1后分泌多种细胞因子来实现。     

青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及TNF-α的影响

目的 探讨中药成分青心酮（3，4-dihydroxyacetophenone,DHAP）对RAW264．7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4（soluble Toll-like reoeptor 4，sTLR4）mRNA、蛋白表达及TNF-α分泌的影响。方法 建立细胞炎症反应模型，用RT-PCR及Western blot分析sTLR4 mRNA及蛋白水平的改变，用ELISA方法检测TNF-α分泌的变化。结果 RAW264．7细胞炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均下调，该细胞经青心酮处理后在炎症反应时，sTLR4 mRNA及蛋白表达均上调，与未处理组比较，表达明显增加，而TNF-α分泌下降。结论 DHAP预处理能显著上调sTLR4 mRNA及蛋白表达，减少TNF-α分泌，抑制炎症反应。这将为临床治疗感染性休克提供一个新的研究方向。     

重组人生长激素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化碳产生及Toll样受体4表达的影响

目的 研究重组人生长激素(rhGH)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)生成及Toll样受体4(TLR4)表达的影响以探讨rhGH的免疫调节作用.方法 采用Griess反应、中性红吞噬实验及RT-PCR法分别测定不同剂量(1、3、25和100μg/L)rhGH作用的小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、吞噬功能及TLR4的表达.结果 结果显示3μg/L rhGH可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量及TLR4的表达,增强巨噬细胞吞噬中性红能力.结论 rhGH对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产生及TLR4表达有显著的调节作用,这种调节作用呈现剂量相关性,为rhGH的合理应用提供一定的实验基础.     

胸腺肽α1对THP-1细胞Toll样受体2和MyD88以及TNF-α表达的影响

目的:观察人THP-1细胞与胸腺肽α1(Tα1)孵育后,予细菌脂蛋白(BLP)刺激后,Toll样受体2(TLR2)、髓系分化因子88(MyD88)蛋白的表达及细胞因子TNF-α的变化。方法:实验采用人THP-1细胞系进行细胞培养,分为4组:对照组为THP-1细胞不加任何刺激;BLP组以1000ng/mlBLP刺激2h;Tα1组为THP-1细胞加1000ng/mlTα1孵育24h,不加BLP刺激;Tα1 BLP组为THP-1细胞加1000ng/mlTα1孵育24h后再加1000ng/mlBLP刺激2h。以Westernblot分析TLR2、MyD88蛋白含量。ELISA法测定TNF-α。结果:与对照组相比,BLP组和Tα1 BLP组的TNF-α均显著增加,而Tα1组无显著改变;在TLR2和MyD88的表达上,Tα1组和Tα1 BLP组均高于对照组和BLP组。结论:胸腺肽α1可增加THP-1细胞TLR2、MyD88蛋白的表达,其对免疫细胞的影响与BLP诱发炎症反应的途径不完全一致。     

龈下菌斑诱导的耐受对人巨噬细胞分泌TNF-α和IL-10的影响及机制

目的:观察龈下菌斑诱导的耐受对人巨噬细胞分泌炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和抗炎因子白介素-10(inter leukin 10,IL-10)的影响,以及与Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2?TLR4的关系?方法:采集中?重度慢性牙周炎患者及健康人的龈下菌斑,分别重复刺激,诱导人巨噬细胞产生耐受?采用ELISA 技术检测TNF-α和IL-10表达水平的变化,采用流式细胞技术检测TLR2?TLR4表达水平的改变?结果:2种菌斑第1次刺激巨噬细胞后,TNF-α和IL-10水平均较刺激前明显增高(P < 0.05)?2种菌斑重复刺激后,TNF-α分泌水平均较第1次刺激后明显降低(P < 0.05),IL-10水平均与第1次刺激后无明显差别(P > 0.05)?尽管2种菌斑第1次刺激后,TLR2?TLR4表达水平均较刺激前明显升高(P < 0.05),2种菌斑重复刺激后,TLR2?TLR4表达水平均与第1次刺激后无明显差别(P > 0.05)?结论:龈下菌斑诱导的耐受能够抑制TNF-α的分泌,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应,但这种改变与TLR2?TLR4表达水平无关?     

Toll样受体4及其调控的信号通路关键因子在HIV合并马尔尼菲篮状菌感染患者单核巨噬细胞中的表达水平及临床意义

目的 探讨Toll样受体（TLR）4及其调控的信号通路关键因子在HIV合并马尔尼菲篮状菌（T.marneffei）感染患者外周血单核巨噬细胞的表达水平及临床意义。方法 将35例HIV感染者按是否合并T.marneffei感染分为合并T.marneffei感染组（15例）和单纯HIV感染组（20例）。收集两组患者的临床资料,并应用流式细胞术检测两组患者外周血单核巨噬细胞中TLR2、TLR4、TLR9的蛋白表达水平,TLR4信号通路中间因子TANK结合激酶1（TBK1）、髓样分化因子88（MyD88）、干扰素调节因子7（IRF7）的蛋白表达水平,以及下游炎症因子白细胞介素6（IL-6）、γ干扰素的蛋白表达水平。比较合并T.marneffei感染组和单纯HIV感染组间,以及CD4⁺T淋巴细胞计数<200个/μL和CD4⁺T淋巴细胞计数<100个/μL患者中合并T.marneffei感染组和单纯HIV感染组间上述指标的差异。结果 合并T.marneffei感染组的CD4⁺T淋巴细胞计数低于单纯HIV感染组,TLR4、...     

脂多糖结合蛋白多抗对大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性及Toll样受体4表达的影响

目的观察脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)多抗对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,φAM)内毒素(lipopolysaccharide,LPS)耐受性与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的影响,研究二者之间的联系.方法将从32只Wistar雄性大鼠分离所得φPAM,按随机数字法等分为正常对照组(A)、LPS单次刺激组(B)、LPS二次重复刺激组(C)和LPS二次重复刺激 LBP多抗组.运用ELISA和RT-PCR方法分别检测各组大鼠φAM分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及TLR4 mRNA表达的变化,Western blot检测TLR4蛋白表达的变化.结果大鼠φAMTNF-α分泌和TLR4 mRNA表达及TLR4的蛋白表达水平,A组分别为:(0.45±0.01),(0.77±0.06),(51.03±1.19)μg/L,B组分别为:(0.76±0.03),(1.55±0.25),(122.72±1.75)μg/L,B组与A组比较显著增加,P＜0.01;C组分别为:(0.49±0.05),(1.13±0.07),(85.35±0.68)μg/L,C组与B组比较,明显减少,P＜0.05.D组分别为:(0.28±0.07),(0.78±0.17),(61.06±1.36)μg/L,D组与C、B组比较,明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论LPS重复刺激可使大鼠φAM对LPS产生耐受性;LPS耐受性的产生与TLR4表达下降相关;LBP多抗通过降低TLR4表达,提高大鼠φAM对LPS耐受性,此乃LBP抗体可用于治疗LPS所致急性肺损伤的部分分子生物学理论基础.     

TLR4对人牙周膜细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响

目的观察在内毒素脂多糖(LPS)刺激下,Toll样受体4(TLR4)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLC)分泌白细胞介素(IL)中的IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法选用100ng/mL、1μg/mL和10μg/mL大肠杆菌LPS分别刺激HPDLC,双抗体夹心法检测刺激后6、12、24、48h时,HPDLC分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。运用不同滴度anti-TLR4单克隆抗体预先处理HPDLC,观察1μg/mLLPS刺激下其分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果LPS刺激HPDLC6h后,即可检测到IL-1β、IL-6和TNF-α,24h达到顶峰,然后逐渐下降,各LPS浓度组规律基本一致;anti-TLR4单克隆抗体预先处理的HPDLC,在1μg/mLLPS刺激下,其产生IL-1β、IL-6和TNF-α的水平明显下降(P<0.05),且与anti-TLR4单克隆抗体滴度呈量效关系。结论TLR4参与了HPDLC的炎症反应过程;anti-TLR4单克隆抗体能有效抑制LPS刺激后HPDLC分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的能力。     

TLR4对人牙周膜细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响

目的 观察在内毒素脂多糖(LPS)刺激下,Toll样受体4 (TLR4)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLC)分泌白细胞介素(IL)中的IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 选用100 ng/mL、1 μg/mL和10 μg/mL大肠杆菌LPS分别刺激HPDLC,双抗体夹心法检测刺激后 6、12、24、48 h时,HPDLC分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平.运用不同滴度anti-TLR4单克隆抗体预先处理HPDLC,观察1 μg/mL LPS刺激下其分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化.结果 LPS刺激HPDLC 6 h后,即可检测到IL-1β、IL-6和TNF-α,24 h达到顶峰,然后逐渐下降,各LPS浓度组规律基本一致;anti-TLR4单克隆抗体预先处理的HPDLC,在1 μg/mL LPS刺激下,其产生IL-1β、IL-6和TNF-α的水平明显下降(P＜0.05),且与anti-TLR4单克隆抗体滴度呈量效关系.结论 TLR4参与了HPDLC的炎症反应过程;anti-TLR4单克隆抗体能有效抑制LPS刺激后HPDLC分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的能力.     

金欣口服液对RSV感染细胞TLR4及TNF-α表达的影响

目的 研究开肺化痰清热止咳中药金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的Hep-2细胞TLR4及该通路下游细胞因子TNF-α表达的影响.方法 制备血行药物成分溶液,作用于RSV感染的Hep-2细胞,通过RT-qPCR、免疫荧光标记结合激光共聚焦技术及ELISA法,分别观察分析细胞TLR4 mRNA、蛋白和相关细胞因子的表达水平,分析药物作用机制.结果 与病毒对照组比较,金欣口服液作用于RSV感染的Hep-2细胞后,TLR4 mRNA及蛋白表达显著降低,TNF-α表达显著降低,细胞病变程度减轻.结论 金欣口服液含药血清可以通过下调TLR4和TNF-α表达水平减轻感染RSV后Hep-2细胞的病变程度.     

免疫抑制剂对酵母聚糖诱导巨噬细胞Dectin-1、Toll样受体2及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的  研究霉酚酸酯和环孢素A对酵母聚糖（Zymosan A）诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞模式识别受体Dectin-1、Toll样受体2（TLR2）表达及细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放的影响。方法  体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予不同浓度的霉酚酸酯、环孢素A预处理细胞24 h,再利用100μg/ml Zymosan A单独刺激细胞,逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测细胞Dectin-1、TLR2 mRNA和蛋白水平的变化,酶联免疫吸附试验检测上清液中TNF-α浓度的变化。结果  Zymosan A单独作用巨噬细胞Dectin-1、TLR2 mRNA和蛋白水平明显上调,TNF-α浓度升高（P <0.05）。Zymosan A作用于霉酚酸酯或环孢素A预处理24 h的巨噬细胞Dectin-1、TLR2 mRNA和蛋白水平较Zymosan A单独作用组明显下调,TNF-α分泌量减少（P <0.05）。结论  霉酚酸酯和环孢素A抑制巨噬细胞Dectin-1和TLR2的转录和翻译,并下调TNF-α的释放,降低机体对真菌病原体的清除能力,这可能是应用霉酚酸酯和环孢素A引起难控性真菌感染的机制之一。

     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。     

持续泵注盐酸右美托咪定对腹腔镜下结、直肠癌根治术患者围手术期动态肺顺应性和外周血中Toll 样受体2 和4 表达的影响

目的 评价盐酸右美托咪定对腹腔镜下结、直肠癌根治术患者围手术期动态肺顺应性（Cdyn）和外周血中Toll 样受体2（TLR-2）和（TLR-4）表达的影响。方法 选取2015 年7 月-2016 年6 月在中国医科大学附属盛京医院择期全身麻醉下行腹腔镜结、直肠癌根治术患者20 例,ASA 分级I 或Ⅱ级,年龄33 ～ 68 岁,体重指数（BMI）<30 kg/m2,采用随机数字表法分为两组：对照组（C 组10 例）和盐酸右美托咪定组（D 组10 例）。手术开始时,D 组盐酸右美托咪定以0.4 μg/（kg·h）的速率持续泵注至手术结束前30 min ;C 组静脉输注等容量生理盐水。记录麻醉诱导前（T0）、手术开始后30 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）、拔管时（T6）和拔管后3 min（T7）的平均动脉压（MAP）和心率（HR）;记录插管后5 min（T1）、手术开始后30 min（T2）、60 min（T3）、90 min（T4）、手术结束前30 min（T5）、拔管时（T6）和拔管后3 min（T7）的气道压（Paw）和Cdyn;分别于麻醉诱导前（T0）、手术开始90 min（T4）、拔管后3 min（T7）和术后1 d（T8）采集上肢静脉血,检测外周血中TLR-2、TLR-4 及肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。结果 与C 组比较,D 组瑞芬太尼用量减少（P <0.05）;与C 组比较,D 组T7 时刻MAP、HR 均下降（P <0.05）;与C 组比较,D 组T3、4 时Cdyn 升高（P <0.05）;与C 组比较,D 组T4、T7 及T8 时静脉血中TLR-2 和TLR-4 的浓度下调（P <0.05）;与C 组比较,D 组T4、T7 及T8 时血清中TNF-α 中的浓度降低（P <0.05）;两组睁眼时间、拔管时间差异均无统计学意义（P >0.05）。结论 持续泵注0.4μg/（kg·h）盐酸右美托咪定有助于稳定血流动力学,缓解炎症性应激反应,维持术中各项指标相对稳定, 对手术患者有一定的肺保护作用。     

楮实子对肝星状细胞增殖、凋亡及TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的探究楮实子对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路的影响。 方法体外培养大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),正常培养细胞作为空白组;使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞24 h后,分别添加不同质量浓度(0、1、5、10 g/L)的楮实子培养细胞,依次作为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法检测楮实子对HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响;ELISA法检测HSC-T6细胞上清液中TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blotting法检测HSC-T6细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达。 结果楮实子可抑制活化的HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,且呈质量浓度依赖性(P＜0.05);楮实子可降低活化的HSC-T6细胞上清液中TNF-α、IL-6水平,下调细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白水平,并均呈质量浓度依赖性(P＜0.05)。 结论楮实子可抑制HSC-T6细胞增殖,促进HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路激活有关。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞脂质蓄积、亲脂素与过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达及蛋白激酶Cα活性的影响

目的:以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对细胞内脂质蓄积、亲脂素(adipophilin)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及蛋白激酶Cα(PKCα)活性的影响.方法:用0、10、20、40、80 mg/L oxLDL与THP-1巨噬细胞共孵育24 h,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况;半定量RT-PCR和Western blot检测adipophilin、PPARγ和PKCα表达的变化情况;PepTag非放射性蛋白激酶检测法对荷脂细胞胞膜PKCα活性进行定量检测.结果:随着oxLDL浓度的增加,THP-1巨噬细胞内脂滴增加变大,胆固醇酯/总胆固醇比值升高,adipophilin、PPARγ和PKCα表达增强(与0 mg/L oxLDL处理组比较,P均<0.05),胞膜PKCα活性由(0.07±0.01)kU/L增至(0.14±0.02)kU/L(P<0.05).结论:oxLDL可增强巨噬细胞PKCα活性,上调PKCα、PPARγ和adipophilin的表达,促进THP-1巨噬细胞中脂质的蓄积;oxLDL、PKCα、PPARγ和adipophilin之间可能存在着某种调控机制.