HPLC法测定杜仲雄花和杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷

目的 建立同时测定杜仲雄花及其制剂杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸和京尼平苷的方法。方法 采用反相高效液相色谱法。色谱条件为迪马公司Diamonsil^TM C₁₈色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm）,甲醇-水-冰醋酸（15∶85∶1.5)为流动相,体积流量为1 mL/min,柱温为25~27 ℃,检测波长为237 nm,灵敏度为0.100 0 AUFS。结果 京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷进样量与色谱峰面积线性关系良好。结论 该方法简便、准确,可用于杜仲雄花及杜仲雄花茶中京尼平苷酸、绿原酸及京尼平苷的测定。     

京尼平苷通过AMPK/mTOR通路抑制帕金森模型氧化应激及细胞凋亡的机制研究

目的 探究京尼平苷(geniposide, GP)通过AMP依赖的蛋白激酶［Adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase, AMPK］/哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对1-甲基4-苯基-四氢吡啶离子(1-methyl-4-phenyl 1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPP+)诱导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞获得的帕金森细胞模型细胞凋亡及氧化应激损伤的影响。 方法 以SH-SY5Y细胞为研究对象,按照处理方法将其分为Control组(正常培养)、MPP+组(在Control组基础上添加1 mmol/L MPP+)、GP组(在Control组基础上添加100 μmol/L GP)、MPP++GP组(在MPP+组基础上添加100 μmol/L GP)。使用丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的酶联免疫吸附测定试剂盒、流式细胞术及Western blot法检测各组细胞氧化应激损伤、细胞凋亡及AMPK、mTOR、LC3蛋白相关表达水平的差异。应用AMPK激活剂、mTOR抑制剂处理后,再次使用Western blot检测MPP+组及MPP++GP组细胞上述蛋白表达水平的变化。 结果 相较于Control组,MPP+组细胞凋亡率、LDH活性、MAD含量、AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增加,SOD活性及mTOR磷酸化水平明显降低(P＜0.01)。相较与MPP+组,MPP++GP组细胞凋亡率、LDH活性、MAD含量、AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显降低,SOD活性及mTOR磷酸化水平明显增加(P＜0.01)。而添加AMPK激活剂或mTOR抑制剂后,MPP+组及MPP++GP组细胞AMPK磷酸化水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高,mTOR磷酸化水平明显降低(P＜0.05)。 结论 GP部分通过调控AMPK/mTOR信号通路抑制MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡、氧化应激损伤及自噬。     

HPLC法测定黄芩总黄酮部位3种成分的含量

目的 建立黄芩总黄酮部位3种成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的HPLC含量测定方法.方法 采用HPLC法,Waters-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水-磷酸(47∶ 53∶ 0.2)为流动相,等度洗脱,流速0.6 mL/min,检测波长280 nm,柱温为室温(24℃).结果 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素平均回收率分别为99.70%、100.06%和100.85%,RSD分别为2.47%、3.27%、2.66%.结论 3批样品测定结果表明,该方法简便、准确,可用于黄芩总黄酮部位3种成分的含量测定.     

HPLC-MS法同时测定扶正平消胶囊中龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸、哈巴俄苷的含量

目的建立扶正平消胶囊中4种成分含量的高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)测定方法。方法色谱条件:Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱程序为0 min(A∶B=15∶85);30 min(A∶B=40∶60)。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),负离子电离,选择性离子监测(SIM)模式。结果龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸和哈巴俄苷的定量限分别为5.73、6.37、6.50和6.46 ng/ml,检测限分别为0.46、0.32、0.33和0.32 ng/ml;在相应的线性范围内,r>0.999 0;待测物与内标的峰面积之比的日内精密度和日间精密度均小于2%,平均回收率为98%～102%。结论所建立的HPLC-MS方法可同时测定扶正平消胶囊中龙胆苦苷、甘草苷、迷迭香酸和哈巴俄苷的含量,快速、简便,实用性强。     

HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷

目的 HPLC法同时测定杜仲皮中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷4种有效成分的量,为更好控制杜仲皮质量提供依据。方法 采用Kromasil C₁₈柱（200 mm×4.6 mm,5 μm）,乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）梯度洗脱,0～7 min,7% A;7～35 min,14% A;35～45 min,15% A。体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温30 ℃。结果 在该色谱条件下,京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷分别在0.102 5～0.512 5（r＝0.999 9）、0.092 5～0.462 5（r＝0.999 9）、0.120 0～0.600 0（r＝0.999 6）、0.090 0～0.450 0 μg/mL（r＝0.999 8）内与色谱峰峰面积呈现良好的线性关系,加样回收率分别为98.97%、98.71%、98.20%、100.44%,RSD分别为1.54%、1.30%、0.76%、1.13%。结论 该分析方法快速准确、重现性好,可为杜仲药材的质量控制与标准的完善提供可靠的检测依据。     

芩术四物汤中黄芩苷和芍药苷的含量测定

目的:建立芩术四物汤中黄芩苷、芍药苷的含量测定方法,控制其质量。方法:采用Dia-monsil C18(250 mm×4.6 mm,5 m)色谱柱;流动相分别为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),乙腈-水-磷酸(14∶86∶0.1);检测波长为280 nm及230 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃。结果:复方中黄芩苷在0.03147～1.007 mg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=3E-08X-0.0037(r=0.9999),平均回收率为98.17%,RSD%=1.14%。芍药苷在0.03116～0.997 mg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=8E-0.8X+0.0011(r=0.9999),平均回收率为97.83%,RSD%=1.24%。结论:该方法简便、快速、准确、重复性好,为芩术四物汤的质量控制提供了理论依据。     

双波长薄层扫描法测定痹通宁冲剂中黄芪甲苷的含量

痹通宁冲剂是由黄芪、丹参、当归等 8味中药材精制而成。具有益气、活血、化瘀之功效。为保证该产品质量 ,以君药黄芪中主要有效成分黄芪甲苷为质控指标 ,采用双波长薄层扫描法测定该方中黄芪甲苷的含量 ,结果满意。1　仪器与试药岛津 CS- 930薄层扫描仪 (日本 ) ;硅胶 G(青岛海洋化工厂 ) ;黄芪甲苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ) ;痹通宁冲剂 (本厂研究室提供 ) ;其它试剂均为 AR级。2　实验条件2 .1　薄层层析条件 :硅胶 G板 ,展开剂 :醋酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水 (6∶ 1∶ 1∶ 1 ) ;显色剂 :1 0 %硫酸乙醇液 (1 0 5℃烘约 1 0 min)…     

HPLC法测定竹叶胶囊中4种黄酮类成分含量研究

目的 :为控制竹叶胶囊的质量,保证药物安全有效,对竹叶胶囊中异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷4种黄酮类成分进行了含量测定方法研究。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为迪马C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为四氢呋喃∶乙腈∶0.2%磷酸水溶液(66∶22∶12,V/V),流速1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长330 nm。结果:异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷分别在0.08~0.65μg、0.05~0.39μg、0.08~0.63μg、0.03~0.27μg的范围内与峰面积积分值成良好的线性关系;平均加样回收率分别为98.8%、98.7%、99.8%、98.3%,RSD%分别为1.9%、1.9%、2.6%、2.6%。结论:建立的含量测定方法简便、准确、灵敏,可用于竹叶胶囊中异荭草苷、荭草苷、异牡荆苷、牡荆苷4种黄酮类成分的含量测定。     

高速逆流色谱法分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷

目的:建立高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的方法。方法:黄芪粗提物分别采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶10∶2∶10)、乙酸乙酯-乙醇-正丁醇-水(30∶10∶6∶50)两相溶剂系统进行HSCCC分离纯化,下相为流动相,流速分别为2.5 m L·min~(-1)、2.0 mL·min~(-1),转速900 r·min~(-1),检测波长254 nm,所得产物采用高效液相进行纯度测定。结果:300 mg黄芪粗提物分离得到毛蕊异黄酮苷(20 mg)、芒柄花苷(25 mg),两个化合物经高效液相色谱法(HPLC)分析,纯度均大于95%。结论:高速逆流色谱法是一种高效分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的方法。     

炮制时间对杜仲指标成分含量及药代动力学影响研究

[目的]建立液相色谱-质谱/质谱联用法(LC-MS/MS)应用于同时测定不同炮制时间杜仲中主要成分京尼平苷(GP)、京尼平苷酸(GPA)、桃叶珊瑚苷(AU)、松脂醇二葡萄糖苷(SG)的定量分析方法,研究不同炮制时间对杜仲中4个指标成分在大鼠体内药代动力学行为的影响。[方法]按照杜仲的药典盐炮制方法炮制,分别于0、1、2、4 h取样。以马钱子素(MS)为内标,应用LC-MS/MS建立的方法测定不同炮制时间杜仲中4个目标成分含量及药代动力学入血成分含量。[结果]各目标成分在测定范围内呈良好线性关系;杜仲炮制时间宜控制在2 h较为合理。[结论]本研究从体内暴露角度描述了炮制对目标成分的影响,研究结果对杜仲的炮制和临床应用具有指导意义。     

液质联用法测定金樱子中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的：建立金樱子中熊果酸和齐墩果酸含量测定方法。方法：采用液质联用（LC-MS/MS）法,色谱柱Diamonsil C18（2）（250 mm×2.1 mm,3μm）,流动相甲醇-甲酸水（87∶13）,流速0.25 ml.min-1。柱温30℃,质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性离子流模式（负离子）。结果：熊果酸和齐墩果酸的平均样回收率分别为为98.1%和97.6%,RSD分别为2.7%和2.9%。结论：该方法快速简便,灵敏度高,重现性好。可用于金樱子的质量控制。     

高效液相色谱法测定甘草黄酮阿魏酸乳膏中阿魏酸含量

目的建立甘草黄酮阿魏酸乳膏中阿魏酸含量的测定方法。方法采用KromasilC18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相为乙腈-0．3％冰醋酸（25：75）;流速为1．0ml／min;柱温25℃;检测波长320nm;进样量20μl。结果阿魏酸浓度为2．26-36．16μg／ml时与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9998）,平均加样回收率为97．50％,RSD为1．73％（n=6）。结论本方法准确、简便、重现性好,可作为该品种中阿魏酸的定量检测方法。     

高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸含量

目的建立高效液相色谱法测定叶酸片中叶酸含量的方法。方法采用Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,以甲醇-水-冰乙酸（40：60：0.1）为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm。结果叶酸在20.08～180.72μg/ml范围内有良好的线性关系（r=0.9999）,样品平均加样回收率为100.5%,RSD为1.2%。结论本方法快速,可靠,有良好的精密度和准确度,适应于叶酸片的质量控制。     

HPLC法测定广东紫珠干浸膏中咖啡酸的含量

目的:建立HPLC法测定广东紫珠干浸膏中咖啡酸的含量.方法:采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.5％磷酸(18:82)为流动相,检测流速为1.0 mL·min-1,波长323 nm,柱温30℃.结果:咖啡酸的进样量在0.04～0.80μg(R2=0.9953)范...     

Labrasol对灯盏花素角膜透过率的影响*

[目的]优化暑热宁合剂中绿原酸的高效液相色谱法测定条件。[方法]色谱柱:Xterra188 Waters RPC18;检测器:Waters2998;工作站:Waters Empower;流动相:乙腈-0.4%磷酸(10∶90);流速:1 mL/min;检测波长:327 nm。[结果]该条件下可使暑热宁合剂中主要成分绿原酸达到较好的分离。[结论]高效液相色谱(HPLC)实现该样品的简便、准确、快速、经济实用的分析。     

HPLC法测定六味抗感颗粒中绿原酸的含量

目的:建立六味抗感颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Alltima C18,5μm,4.6 mm×250 mm,流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(13:87),检测波长为327 nm,柱温为30℃。结果:绿原酸进样量在0.400 8~4.0080μg(r=0.999 8)的范围内线性关系良好,平均回收率为98.9%,(RSD=1.76%,n=6)。结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于六味抗感颗粒的质量控制。     

甘草次酸类化合物的制备和抗肿瘤活性研究

目的制备18α-和18β-甘草次酸类复合物,并对体外抗癌活性进行研究。方法以18β-甘草次酸(Ⅰ)为起点,进行构型转化得到其光学异构体18α-甘草次酸(Ⅱ),再经C30-位羧基的甲酯化分别得到18β-甘草次酸甲酯(Ⅲ)和18-α-甘草次酸甲酯(Ⅳ),并与环磷酰胺的抗癌活性体内代谢产物——二氯磷酰氮芥偶联而得2个抗癌复合物18β-甘甲磷氮芥(Ⅴ)和18α-甘甲磷氮芥(Ⅵ);用四大光谱法(NMR、MS、IR、UV)对各化合物的化学结构进行鉴定分析;利用人类肝癌细胞株BEL-7402为体外实验模型,用MTT法观察各化合物对人肝癌细胞增殖的抑制活性;抗肿瘤药物顺铂作为阳性对照物。结果对化合物的合成工艺进行优化;18α-甘草次酸的构象转化得率为45%;目标化合物18β-甘甲磷氮芥(Ⅴ)和18α-甘甲磷氮芥(Ⅵ)的产率分别为35%和25%。所制备的甘草次酸衍生物中,化合物Ⅱ和Ⅵ对BEL-7402肿瘤细胞的增殖显示明显强的抑制活性,浓度在5～500μg/mL范围内,对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为2.6%～86%及1.3%～50.1%;在相同条件下,对照物顺铂的抑制率为20.0%～73.41%。结论目标化合物的制备中磷酰酯化反应的条件控制(无水、物料比1∶1.25,温度65℃和反应时间3～4h)是合成关键;化合物Ⅱ和Ⅵ在中高浓度时,与顺铂具有较类似的抑制肝癌细胞增殖活性。甘草次酸类化合物的构型转化及与抗癌基团偶联可能提高其抗癌潜力。     

HPLC法测定银黄含片中绿原酸的含量

目的 :对银黄含片中的绿原酸含量测定方法进行改进。方法 :采用高效液相色谱法 ,C18柱 (4 .6mm×2 0 0mm ,5 μm) ,流动相 :乙腈 -水 -磷酸 (10∶90∶0 .1) ,检测波长 :32 7nm ,流速 :1mL/min。结果 :绿原酸的平均回收率为10 0 .88% ,RSD =0 .5 6 % (n =5 )。结论 :该方法灵敏、专属性好、重现性好。     

HPLC法对不同蒲地蓝消炎制剂中绿原酸和咖啡酸含量的测定

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定蒲地蓝消炎片、蒲地蓝消炎胶囊和蒲地蓝消炎口服液中绿原酸和咖啡酸的含量。方法以75%甲醇为溶剂,采用超声法提取上述3种不同蒲地蓝剂型中绿原酸和咖啡酸;使用高效液相色谱法测定其含量,色谱柱为waters SunfireTMC18(5μm,4.6×150 mm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(9∶91),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为327 nm,柱温为室温。结果绿原酸的检测浓度在14.7～3750.0 ng.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r2=0.9974),平均回收率为101.6%,RSD=1.3%;咖啡酸在68.4～4376.0 ng.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r2=0.9984),平均回收率为101.1%,RSD=1.3%。结论本法灵敏、简便、准确,可用于不同剂型蒲地蓝消炎制剂中绿原酸和咖啡酸含量测定和质量控制;不同剂型蒲地蓝消炎制剂中绿原酸和咖啡酸含量不一致,应该尽快建立其质量标准。     

泽兰中齐墩果酸和熊果酸的提取、分离

[目的]:从泽兰中提取、分离齐墩果酸和熊果酸。[方法]用溶剂提取和柱层析法。[结果]分离出齐墩果酸和熊果酸。[结论]本方法快速、简便。