纳洛酮对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的干预效应

背景隔-海马区的胆碱能神经通路是空间学习记忆的重要部位,此区神经元中又富含阿片受体.有研究表明阿片类受体拮抗剂纳洛酮能够解除内侧隔区域及海马部位阿片肽对胆碱能神经元活性的抑制,促进突触间隙乙酰胆碱释放,改善空间记忆损害.目的观察阿片类受体拮抗剂纳洛酮对M胆碱能受体阻滞剂东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的干预作用.设计以实验动物为观察对象的随机对照实验.单位佛山市顺德区伍仲珮纪念医院老年科.材料实验于2003-04在汕头大学医学院动物实验中心完成.清洁级SD大鼠21只,随机分成3组,正常组、东莨菪碱组和纳洛酮治疗组(东莨菪碱+纳洛酮),每组7只.自制水迷宫为圆形橡胶水池,直径2 m,高55 cm,水深30 cm,水温20～22℃,在水池东南象限中央放置-圆柱形平台,平台直径12 cm,距水面1.5 cm,此平台为大鼠唯一可逃生之地.池水表面均匀覆以白色聚乙烯碎屑,房内设施如灯管、窗户及桌子等固定,可作为水池外参照目标,水池四壁任意挂置醒目标志数个,可作池内参照目标.方法各组大鼠均于实验前30min腹腔给药,东莨菪碱组(0.4mg/kg),纳洛酮治疗组(3 mg/kg),正常对照组参照东莨菪碱组剂量予等体积生理盐水.然后采用自制水迷宫延缓性匹配任务试验记录每只大鼠前后两次实验逃避潜伏期的时间.于水迷宫测试后迅即处死大鼠,取其左侧大脑组织,常规处理切片.定量测定各组大鼠脑海马和前额叶皮质胆碱乙酰转移酶的表达,采用免疫组化及图像分析技术.同时各组大鼠2只取右侧大脑组织,迅速游离海马,观察大鼠脑海马CA1区的改变,采用电子显微镜技术.所有数据用x±s表示,每组延缓性匹配作业前后两次逃避潜伏期比较采用配对资料t检验;各组间均数比较采用方差分析.以P＜0.05为显著性差异.主要观察指标①各组大鼠前后两次逃避潜伏期结果.②胆碱乙酰转移酶在海马CA1,CA3及前额叶的表达情况.③大鼠海马CA1区超微结构的变化结果21只大鼠全部进入结果分析.①逃避潜伏期的差异前后2次正常组差异有极显著性[(46.4±17.7),(13.4±8.2)s,t=7.32,P＜0.01],东莨菪碱组差异不显著[(23.6±14.3),(18.1±9.8)s,t=1.01,P＞0.05],纳洛酮治疗组差异显著[(27.9±14.3),(9.0±3.8)s,t=3.19,P＜0.05].②胆碱乙酰转移酶的表达正常组、东莨菪碱组、纳洛酮治疗组大鼠的脑海马CA1、CA3区锥体细胞和前额叶皮质神经元的表达无差别(P＞0.05).③大鼠脑海马CA1区超微结构的变化正常组、东莨菪碱组、纳洛酮治疗组大鼠的脑海马CA1区锥体细胞胞体超微结构正常,但神经元突触超微结构发生改变,东莨菪碱组改变明显,突触囊泡明显大小不一,在突触前膜处聚集明显,密度增加,远距离处囊泡大而稀疏分布,突触前后膜模糊,融合,突触间隙不清,突触后致密物质不均、模糊,边界朦胧.结论东莨菪碱组逃避潜伏期观察说明该药能损害大鼠空间工作记忆;纳洛酮能够,促进神经元突触囊泡乙酰胆碱向突触间隙大量释放,增加突触后致密物质密度,解除内侧隔区域及海马部位阿片肽对胆碱能神经元无活性的抑制,具有改善空间记忆损害的作用.     

纳洛酮与加兰他敏对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的干预效果：最佳量效比较

目的：比较量效最佳条件下给予纳洛酮与加兰他敏对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的作用。方法：实验于2003-04在汕头大学医学院动物实验中心完成。28只大鼠随机分成4组，每组7只。正常对照组、东莨菪碱组、纳洛酮治疗组(东莨菪碱+纳洛酮)和加兰他敏治疗组(东莨菪碱+加兰他敏)。东莨菪碱以0．4mg／kg、纳洛酮以3mg／kg、加兰他敏以2mg／kg给药(前3组给药剂量均为最佳量效关系剂量)，正常对照组予生理盐水2，0mL，均在实验前30～40min腹腔给药。采用水迷宫延缓性匹配作业，开始进行空间工作记忆训练(隐匿平台任意放置池中某一位置，大鼠在任一位置面壁放入水池，其逃避潜伏期仍以60s为限，此过程为实验1，找到平台后，允许其逗留10s，作为工作记忆，然后将其再从同一位置面壁放入水池，大鼠会利用工作记忆第二次找到平台，此过程为实验2)。记录比较每只大鼠两次实验逃避潜伏期的时间，评估不同药物对大鼠空间工作记忆能力的影响。结果：各实验组大鼠无脱失，均纳入分析。在两次实验逃避潜伏期比较中：正常组实验2较实验1减少[(13，4&;#177;8．2)，(46．4&;#177;17．7)s，P&;lt;0．01]；纳洛酮治疗组实验2较实验1减少[(9.0&;#177;3．8)，(27．9&;#177;14，3)s，P&;lt;0．05]；东莨菪碱组和加兰他敏治疗组实验2较实验1变化不大[(18．1&;#177;9．8)，(23．6&;#177;14．3)s；(12，0&;#177;9，0)，(25．4&;#177;24，3)s，P&;gt;0．05]。结论：在药效关系最佳剂量条件下，东莨菪碱能损害大鼠空间工作记忆，纳洛酮能够改善这种损害，而加兰他敏对此无改善作用。     

纳洛酮与加兰他敏对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的干预效果最佳量效比较

目的比较量效最佳条件下给予纳洛酮与加兰他敏对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的作用.方法实验于2003-04在汕头大学医学院动物实验中心完成.28只大鼠随机分成4组,每组7只.正常对照组、东莨菪碱组、纳洛酮治疗组(东莨菪碱+纳洛酮)和加兰他敏治疗组(东莨菪碱+加兰他敏).东莨菪碱以0.4 mg/kg、纳洛酮以3 mg/kg、加兰他敏以2 mg/kg给药(前3组给药剂量均为最佳量效关系剂量),正常对照组予生理盐水2.0 mL,均在实验前30～40 min腹腔给药.采用水迷宫延缓性匹配作业,开始进行空间工作记忆训练(隐匿平台任意放置池中某一位置,大鼠在任一位置面壁放入水池,其逃避潜伏期仍以60 s为限,此过程为实验1,找到平台后,允许其逗留10 s,作为工作记忆,然后将其再从同一位置面壁放入水池,大鼠会利用工作记忆第二次找到平台,此过程为实验2).记录比较每只大鼠两次实验逃避潜伏期的时间,评估不同药物对大鼠空间工作记忆能力的影响.结果各实验组大鼠无脱失,均纳入分析.在两次实验逃避潜伏期比较中正常组实验2较实验1减少[(13.4±8.2),(46.4±17.7)8,P＜0.01];纳洛酮治疗组实验2较实验1减少[(9.0±3.8),(27.9±14.3)s,P＜0.05];东莨菪碱组和加兰他敏治疗组实验2较实验1变化不大[(18.1±9.8),(23.6±14.3)s;(12.0±9.0),(25.4±24.3)s,P＞0.05].结论在药效关系最佳剂量条件下,东莨菪碱能损害大鼠空间工作记忆,纳洛酮能够改善这种损害,而加兰他敏对此无改善作用.     

银杏叶提取物对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的影响

目的探讨银杏叶提取物对东莨菪碱所致大鼠空间工作记忆障碍的影响。方法将大鼠随机分成三组：正常组，东莨菪碱组和银杏叶治疗组，水迷宫试验，东莨菪碱组按0．4mg／kg腹腔注射，以后每天注射等体积生理盐水，连用1周。正常对照组每天注射与东莨菪碱等体积的生理盐水，连用1周。银杏叶治疗组按10mg／kg腹腔注射，每天1次，连用1周。1周后进行Morris水迷宫试验，观察3组大鼠平台逃避潜伏期，并与试验后第一天比较。结果两次逃避潜伏期在正常组差异有统计学意义（46．4±17．1，13．4±8．2，P〈0．001），东莨菪碱组无统计学意义（23．6±14．3，18．1±9．8，P〉0．05）。银杏叶组差异有统计学意义（27．9±14．3，9．0±3．8，P〈0．05）。结论M型胆碱能受体阻滞剂东莨菪碱能损害大鼠空间工作记忆，银杏叶提取物能改善这种损害，说明银杏叶提取物是通过影响胆碱能系统来发挥其促智作用的。     

益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆获得障碍大鼠的干预效应

目的：观察益智仁水提取物对东莨菪碱所致大鼠记忆获得障碍的改善效果。方法：实验于2005—03／04在大连大学医学院动物室和神经科学实验室完成。选择健康成年Sprague—Dawley纯种大鼠50只，在温度为（22&;#177;3）℃的环境中适应两天后，随机数字表法分成对照组、模型组、益智仁低剂量组（120mg／kg）、益智仁中剂量组（240mg／kg）、益智仁高剂量组（480mg／kg）．每组10只，雌雄各半。益智仁低、中、高剂量组，每天分别灌胃120mg／kg、240mg／kg、480mg／kg益智仁水提取物，对照组和模型组灌胃等量的生理盐水，连续给药21d。末次给药后1h采用Y迷宫进行学习记忆行为训练，训练前15min模型组及益智仁低、中、高剂量组腹腔注射东莨菪碱1mg／kg，对照组腹腔注射等体积生理盐水，每只动物每天训练20次，连续训练7d，以正确反应率达到90％作为学会的标准，并记录各组的训练次数（达到学会标准所需的次数）。行为实验结束后，立即麻醉后断头处死大鼠，在冰块上快速分离双侧海马，准确称重，按重量体积比加9倍生理盐水制成10％脑组织匀浆，2000r／min离心10min，采用乙酰胆碱酯酶测定试剂盒测定乙酰胆碱酯酶活性，采用双缩脲蛋白测定试剂盒测定海马脑蛋白含量，主要观察Y迷宫行为实验各组大鼠达标所需的训练次数、海马乙酰胆碱酯酶活力及海马脑蛋白含量。数据以x^-&;#177;s表示，组间比较采用t检验。结果：各实验组大鼠全部进入结果分析。①益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠学习记忆能力的影响：益智仁低、中、高剂量组达标所需训练次数显著低于模型组[（58．6&;#177;15．0，55．0&;#177;13．8，67．6&;#177;8．7）次，（136．3&;#177;16．8）次，（P〈0．01）]，模型组大鼠达标所需训练次数显著高于对照组（P〈0．01）。②益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠海马乙酰胆碱酯酶活力的影响：益智仁低剂量组和中剂量组海马乙酰胆碱酯酶活力显著低于模型组[（28．5&;#177;9.3，22．2&;#177;7．2）μkat／g，（47．2&;#177;18．8）μkat／g，（P〈0．05）]；模型组海马乙酰胆碱酯酶活力显著高于对照组（P〈0．05）。③益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠海马脑蛋白含量的影响：与模型组相比，益智仁低剂量组、中剂量组脑蛋白含量显著增高（P〈0．05）；与对照组相比，模型组大鼠海马脑蛋白含量显著降低（P〈0．05）。结论：益智仁水提取物抑制乙酰胆碱酯酶活性，减少乙酰胆碱分解，提高海马脑蛋白含量，对东莨菪碱所致记忆获得障碍具有显著的改善作用。     

益智复方对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型的影响

目的 探讨益智复方对学习记忆障碍模型的影响。方法 对SD大鼠给予不同剂量的益智复方灌胃给药，每天2次连续8d，第8天腹腔注射氢溴酸东莨菪碱造成动物短暂性学习记忆紊乱，分别采用M0RRIS水迷宫及穿棱箱避暗实验来测定大鼠的学习记忆变化。结果 与模型组相比较，大鼠益智复方组M0RRIS水迷宫寻找平台时间显缩短，避暗实验潜伏期显增加，错误数显减少。结论 益智复方具有抗衰老及改善学习记忆的作用，对老年性痴呆有较好的治疗应用前景。     

益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆获得障碍大鼠的干预效应

目的:观察益智仁水提取物对东莨菪碱所致大鼠记忆获得障碍的改善效果。方法:实验于2005-03/04在大连大学医学院动物室和神经科学实验室完成。选择健康成年Sprague-Dawley纯种大鼠50只,在温度为(22±3)℃的环境中适应两天后,随机数字表法分成对照组、模型组、益智仁低剂量组(120mg/kg)、益智仁中剂量组(240mg/kg)、益智仁高剂量组(480mg/kg),每组10只,雌雄各半。益智仁低、中、高剂量组,每天分别灌胃120mg/kg、240mg/kg、480mg/kg益智仁水提取物,对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,连续给药21d。末次给药后1h采用Y迷宫进行学习记忆行为训练,训练前15min模型组及益智仁低、中、高剂量组腹腔注射东莨菪碱1mg/kg,对照组腹腔注射等体积生理盐水,每只动物每天训练20次,连续训练7d,以正确反应率达到90%作为学会的标准,并记录各组的训练次数(达到学会标准所需的次数)。行为实验结束后,立即麻醉后断头处死大鼠,在冰块上快速分离双侧海马,准确称重,按重量体积比加9倍生理盐水制成10%脑组织匀浆,2000r/min离心10min,采用乙酰胆碱酯酶测定试剂盒测定乙酰胆碱酯酶活性,采用双缩脲蛋白测定试剂盒测定海马脑蛋白含量,主要观察Y迷宫行为实验各组大鼠达标所需的训练次数、海马乙酰胆碱酯酶活力及海马脑蛋白含量。数据以x±s表示,组间比较采用t检验。结果:各实验组大鼠全部进入结果分析。①益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠学习记忆能力的影响:益智仁低、中、高剂量组达标所需训练次数显著低于模型组(58.6±15.0,55.0±13.8,67.6±8.7)次,(136.3±16.8)次,(P<0.01),模型组大鼠达标所需训练次数显著高于对照组(P<0.01)。②益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠海马乙酰胆碱酯酶活力的影响:益智仁低剂量组和中剂量组海马乙酰胆碱酯酶活力显著低于模型组(28.5±9.3,22.2±7.2)μkat/g,(47.2±18.8)μkat/g,(P<0.05);模型组海马乙酰胆碱酯酶活力显著高于对照组(P<0.05)。③益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆障碍大鼠海马脑蛋白含量的影响:与模型组相比,益智仁低剂量组、中剂量组脑蛋白含量显著增高(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠海马脑蛋白含量显著降低(P<0.05)。结论:益智仁水提取物抑制乙酰胆碱酯酶活性,减少乙酰胆碱分解,提高海马脑蛋白含量,对东莨菪碱所致记忆获得障碍具有显著的改善作用。     

血管性痴呆大鼠行为学及海马胆碱能神经元的变化

目的：研究血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元及行为的变化。方法：将大鼠随机分成手术组及对照组，手术组制作血管性痴呆大鼠模型，30d后用Morris水迷宫检测两组大鼠空间记忆能力及免疫组织化学染色检测海马CA1区胆碱能神经元数目的变化。结果：手术组大鼠空间记忆能力明显下降，海马CA1区胆碱能数目较对照组明显减少。结论：血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元减少，空间记忆能力下降。     

衰老与海马CA1区锥体细胞退行性变及自由基和空间记忆的关系

目的：研究衰老大鼠记忆行为、自由基含量和CA1区细胞超微结构的特征以及衰老所致记忆减退的神经生物学机制。方法：雄性SD大鼠40只，青年和老年组各20只。应用Morris水迷宫测量大鼠空间记忆水平，分光光度计测量海马组织蛋白质的含量；巴比妥酸还原法测定海马脂质过氧化物含量；透射电镜观察海马CA1区锥体细胞的形态；体视学分析细胞内粗面内质网和线粒体的面数密度。结果：较之青年大鼠，衰老大鼠寻找平台的潜伏期延长(38与12s，t=8．04，P&;lt;O．01)；跨平台次数的百分比减少(50％与82％，t=10．17，P&;lt;O．05)。海马脂质过氧化物(146．2与178．4nmol／g，t=5．61．P&;lt;O．01)、组织总蛋白(127．9与168．8μg比较，t=8．25，P&;lt;O．01)和非水溶性蛋白(21．1与34．3μg比较，t=9．53，P&;lt;O．01)的含量增高；海马CA1区250μm锥体细胞的数量(51．9与40．7个比较，t=6．55．P&;lt;O．01)、核仁体积(5．34与4．02μm^3，t=7．71，P&;lt;O．01)、粗面内质网面密度(1．47与O．94μm^2／μm^3，t=6．55，P&;lt;O．01)减少。结论：海马CA1区锥体细胞的退行性变化是衰老致记忆减退的原因之一，而过量的脂质过氧化物可能是导致锥体细胞变性的原因。     

Prefrontal cortex and mediodorsal thalamus reduced connectivity is associated with spatial working memory impairment in rats with inflammatory pain

The medial prefrontal cortex (mPFC) and the mediodorsal thalamus (MD) form interconnected neural circuits that are important for spatial cognition and memory, but it is not known whether the functional connectivity between these areas is affected by the onset of an animal model of inflammatory pain. To address this issue, we implanted 2 multichannel arrays of electrodes in the mPFC and MD of adult rats and recorded local field potential activity during a food-reinforced spatial working memory task. Recordings were performed for 3 weeks, before and after the establishment of the pain model. Our results show that inflammatory pain caused an impairment of spatial working memory performance that is associated with changes in the activity of the mPFC–MD circuit; an analysis of partial directed coherence between the areas revealed a global decrease in the connectivity of the circuit. This decrease was observed over a wide frequency range in both the frontothalamic and thalamofrontal directions of the circuit, but was more evident from MD to mPFC. In addition, spectral analysis revealed significant oscillations of power across frequency bands, namely with a strong theta component that oscillated after the onset of the painful condition. Finally, our data revealed that chronic pain induces an increase in theta/gamma phase coherence and a higher level of mPFC–MD coherence, which is partially conserved across frequency bands. The present results demonstrate that functional disturbances in mPFC–MD connectivity are a relevant cause of deficits in pain-related working memory.     

应激对大鼠空间记忆发育的影响

目的研究应激刺激对发育期大鼠空间记忆发育的影响. 方法采用发育期 Wistar大鼠 22只,按随机抽签法分为应激 1组 (30 V)、应激 2组 (45 V)、对照组.电刺激大鼠 10次 /d,连续 1周;采用血清放免法检测生长激素含量变化;通过 Morris水迷宫检测应激对大鼠空间记忆能力的影响. 结果应激 2组水迷宫空间学习记忆逃逸时间较应激 1组 [训练第 1～ 5天应激 1, 2组分别为( 23.61± 16.06) ,(14.19± 5.01) s],较对照组 [训练第 1～ 5天为( 26.86± 9.89) s],差异有显著性意义( t=2.35～ 3.02,P< 0.05) ; 应激 2组的生长激素 [(2.24± 0.49) μ g/L]含量偏低 ,应激 1组的生长激素含量 [(3.26± 0.82) μ g/L]有明显增高趋势 (t=2.83,P< 0.05). 结论应激刺激可提高幼年大鼠空间记忆能力的发育;达到 45 V应激刺激可以影响幼年大鼠的体格发育 ,而 30 V应激刺激则不会妨碍甚至可以促进幼年大鼠的体格发育.     

脑源性神经营养因子对改善东莨菪碱致学习记忆障碍的实验研究

目的：探讨脑源性神经营养因子对中枢神经系统高级机能活动的作用机理,为临床应用脑源性神经营养因子治疗学习记忆障碍疾病提供实验依据。方法：以小鼠为实验对象,采用学习记忆行为训练和生化测定的方法,观察脑源性神经营养因子对东莨菪碱致学习记忆障碍、海马脑区蛋白质含量的影响。结果：脑源性神经营养因子能显著地改善东莨菪碱所致的学习记忆障碍,使东莨菪碱实验小鼠海马脑区的蛋白质含量显著增加。结论：脑源性神经营养因子对东莨菪碱所致的小鼠学习记忆障碍的改善与康复均具有明显作用。     

Interference resolution in spatial working memory

Anterior cingulate and lateral inferior prefrontal cortex (PFC) are considered important for conflict monitoring and interference resolution in many verbal tasks. We studied interference resolution in a spatial working memory task using event-related fMRI. The task required participants to ignore two locations from a set of four initially held in working memory and to remember the remaining two locations as the target set for a subsequent recognition test. Familiarity of nontarget probes was manipulated by drawing the probe from either the ignored locations [high familiarity (HF)] or locations not used in the present trial [low familiarity (LF)]. Precentral sulcus (PrCS) and superior parietal lobe (SPL), two regions commonly associated with motor planning and spatial attention, showed heightened activity in response to increased level of interference from nontargets of high familiarity. Our finding suggests that interference resolution in the spatial domain may involve a different subset of the working memory system from that in the verbal domain.     

工作记忆与Alzheimer病工作记忆障碍的功能磁共振成像研究

工作记忆属于短时记忆的一种,在人类记忆过程中起重要作用.老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)是一种以记忆缺陷为主要临床表现的脑变性疾病.本文就功能磁共振成像在工作记忆及AD工作记忆缺陷方面的研究进展进行综述.