中晚期胃癌患者中的抗活化蛋白C现象

１９９３年,Ｄａｈｌｂａｃｋ［１］首先发现部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）不因加入活化蛋白Ｃ（ＡＰＣ）而延长的现象,并称之为抗活化蛋白Ｃ现象（ＡＰＣＲ）。ＡＰＣＲ的主要分子生物学基础是ＦＶ基因点突变（ＦＶＬｅｉｄｅｎ）,致ＰＣ作用位点消失,导致高凝状态［...     

脑梗死患者血浆活化蛋白C抵抗、蛋白C和蛋白S活性的测定

活化蛋白Ｃ抵抗 (ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎＣｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＡＰＣＲ)是目前已知的静脉血栓形成的最高危因素[1] ,80 %的ＡＰＣＲ是因子Ｖ (ＦＶ)基因点突变 (即Ｌｅｉｄｅｎ突变 )引起的遗传性ＡＰＣＲ ,另一部分ＡＰＣＲ则是由各种获得性原因导致的无ＦＶ基因突变的获得性ＡＰＣＲ。ＡＰＣＲ与动脉血栓形成的关系目前仍有争论。蛋白Ｃ( ｐｒｏｔｅｉｎＣ ,ＰＣ)、蛋白Ｓ(ｐｒｏｔｅｉｎＳ ,ＰＳ)是机体ＰＣ抗凝系统的重要组成部分 ,它们量或质的缺陷 (包括先天性和获得性 )都将导致机体抗凝功能的减退或丧失 ,与血栓形成…     

凝血因子Ⅴ缺陷:血栓形成与出血转换的分子基础

第Ⅴ因子(FⅤ)是分子量为330KD的单链糖蛋白,与第Ⅷ因子(FⅧ)及铜蓝蛋白之间在结构上有许多相似之处。FⅤ参与凝血过程中凝血酶的生成,促进凝血,同时,活化的蛋白C(APC)通过灭活FⅤ来抑制凝血。FⅤ缺陷根据产生机制不同可导致对APC的抵抗(APCR)引起血栓病或遗传性FⅤ缺乏症,导致出血。目前已证实部分APCR和遗传性FⅤ缺乏症均存在分子缺陷。本文主要对FⅤ的结构、功能、活化蛋白C抵抗及遗传性FⅤ缺乏症研究的最新进展作一综述。     

活化蛋白C抵抗与动脉血栓性疾病的关系

活化蛋白Ｃ（ＡＰＣ）抵抗是一种病理状态,大部分的遗传性活化蛋白Ｃ抵抗的机制是,ＦＶ的基因１６９１位核苷酸发生突变（Ｇ→Ａ）造成５０６位氨基酸位点的Ａｒｇ被Ｇｌｕ取代,造成ＡＰＣ抵抗还存在其它原因,ＡＰＣ抵抗是ＤＶＴ和家族性易栓症的主要原因之一,但它与动脉血栓的关系还不明确,本文试图对ＡＰＣ抵抗与动脉血栓性疾病（ＭＩ和脑卒中）关系的研究新进展作一综述。     

广东人抗活化蛋白C及FV Leiden突变的检测

为了解活化蛋白Ｃ抵抗（ＡＰＣＲ）以及凝血因子Ｖ Ｌｅｉｎｄｅｎ（ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ）突变在广东人群及血栓性疾病患者中发生的情况,用序列特异性引物ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法检测１３０名广东籍正常人ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变,其中５７名正常人用ＡＰＣ－ＡＰＴＴ方法检测了ＡＰＣＲ。结果有３名正常人ＡＰＣＲ阳性。但所有的样本均未发现ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变,ＡＰＣＲ阳性是否与其他未知的基因缺陷有关,有待进一步     

逆转录病毒载体介导入凝因子因子Ⅷ的体外高效表达

目的建立逆转录病毒载体介导的人凝血子因子Ⅷ（ＦⅧ）体外高效表达体系。方法将－Ｂ区缺失（７６０ａａ－１６３９ａａ）的人ＦⅧｃＤＮＡ（ＦⅧＢＤｃＤＮＡ）克隆至逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸ,构建了重组表达载体ｐＬＮＣ－ＦⅧＢＤ。经ＰＡ３１７细胞包装后,感染多种靶细胞。分别采用一期法、ＥＬＩＳＡ法和ＲＴ－ＰＣＲ检测细胞培养上清中人ＦⅧ的凝血活性（ＦⅧ：Ｃ）和抗原含量（ＦⅧ：Ａｇ）以及细胞中ＦⅧＢＤ ｃＤＮＡ的     

脑血栓患者活化蛋白C抵抗及Fg,AT—Ⅲ和PC的变化

本文对脑血栓患者６０例和健康人３０名研究其血中活化蛋白Ｃ抵抗（ＡＰＣＲ）、纤维 的（Ｆｇ）、抗凝血麦Ⅲ（ＡＴ－Ⅲ）和蛋白Ｃ（ＰＣ）的变化。结果表明,患者Ｆｇ含量、ＡＴ－Ⅲ活性和ＰＣ活性均高于对照组。而其ＡＰＣＲ发生率为８．３％也高于对对照组,表明脑血栓患者可能存在ＡＰＣＲ现象。     

人FⅧ基因高效表达质粒的构建及其在Cos-7细胞中的表达

目的：构建人ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ并观察其在Ｃｏｓ－７细胞中的表达活性。方法：采用缺失大部分Ｂ结构域的人凝血因子ⅧｃＤＮＡ（ＦⅧＤＢ），长度为４．６ｋｂ，将其插入含腺病毒序列表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋ１，构建了ＦⅧ真核表达质粒——ｐＡｄＣＭＶＬｉｎｋＦⅧＤＢ，用脂质体介导法将其转染Ｃｏｓ－７细胞，转染后２４，４８，７２小时分别用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）、ＥＬＩＳＡ法及一期法测定培养细胞中ＦⅧＤＢｍＲＮＡ及ＦⅧ的含量与活性。结果：ＲＴ－ＰＣＲ法可检测到ＦⅧＤＢｃＤＮＡ转录的ｍＲＮＡ，ＥＬＩＳＡ法测得７２小时后ＦⅧ的含量为每２４小时１８ｎｇ／１０６细胞，一期法测得活性为每２４小时０．６Ｕ／１０６细胞，相当于正常人血浆中１００μｇ／ＬＦⅧ所产生的凝血活性的６０％。结论：所构建的ＦⅧ真核表达质粒在Ｃｏｓ－７细胞中具有一定的表达活性。     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的白蛋C及FV Leiden突变的初…

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤ Ｌｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏经值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率     

活化的蛋白C拮抗与血栓形成的分子机制

活化的蛋白Ｃ拮抗（Ａｃｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｔａｉｎ Ｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ,ＡＰＣ－Ｒ）是由于ＡＰＣ无法正常,有效地水解,灭活ＥⅤａ,使得凝血酶原酶复合物,凝血酶生成增加,造成体内高凝状态,目前发现的大部分ＡＰＣ－Ｒ是由于遗传性因素引起,即由于ＦⅤ的单点突变使其对ＡＰＣ的水解产生拮抗而又保留有促凝活性。     

血栓栓塞症患者抗活化的蛋白C的研究

目的 探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）现象在中国人血栓栓塞症发病中的作用。方法 用ＡＰＴＴ法检测ＡＰＣＲ敏感比率（ＡＰＣＲ－ＳＲ）来研究４０例深静脉血栓症（ＤＶＴ）患者、５２例脑血栓形成患者和１００例正常人的ＡＰＣＲ发生率;用多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）来检测ＦＶ Ｌｅｉｄｅｎ突变;用免疫火箭电泳测血浆总蛋白Ｓ和游离蛋白Ｓ。结果 正常人的正常化ＡＰＣＲ－ＳＲ（ｎ－ＡＰＣＲ     

静脉及心脑血栓性疾病抗活化的蛋白C的研究

为探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）及其基因型在中国人血栓性疾病的发病情况，用活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）以加和不加活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）的比值（ＡＰＣ－ＳＲ）检测ＡＰＣＲ；用多聚酶链反应扩增因子Ⅴ第１０外显子（包含５０６位密码子）的２２０ｂｐ片段，再用限制性内切酶ＭｎｌⅠ消化检测其基因型。共检测了４６例静脉血栓和下肢动脉血栓，５８例心、脑梗塞，７４例冠心病及４０名正常人的ＡＰＣＲ及其基因型。结果表明血栓性疾病患者与正常人的ＡＰＣＲ无明显差异，亦没有发现与ＡＰＣＲ相关的基因型，提示ＡＰＣＲ很可能不是中国人血栓性疾病常见相关病因     

变性梯度凝胶电泳检测到一种新的凝血因子Ⅷ基因突变

凝血因子Ⅷ基因的第８号和第１４号外显子的３′端编码ＦⅧ的重要功能区，涉及凝血酶的激活、蛋白Ｃ的降解灭活及与ｖＷＦ结合。应用ＰＣＲ和变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃ－ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ）技术，研究了２８例血友病甲患者ＦⅧ基因的这两个外显子，发现一例轻型血友病甲患者ＦⅧ基因第８号外显子的ＤＧＧＥ行为发生了改变，经双脱氧链终止法测序证实，该外显子发生了单个碱基的置换：Ｔ（ＧＡＴ）→Ｇ（ＧＡＧ），导致Ａｓｐ３４９Ｇｌｕ。     

遗传性第Ⅴ因子缺乏症血小板第Ⅴ因子活性分析

凝血第 Ｖ因子（ＦＶ）是分子质量为 ３３０ｕ的单链糖蛋白，正常人约７５％存在于血浆中，其余的２５％存在于血小板α颗粒中。活化的第Ｖ因子（ＦＶａ）作为辅因子，与活化的第Ｘ因子（ＦＸａ）、钙离子及磷脂共同构成凝血酶原酶复合物，参与凝血酶原的活化，是一种重要的凝血因子［１］。遗传性 ＦＶ缺乏症是一种罕见的常染色体隐性遗传性出血性疾病，近年发现，其出血症状的严重性与血浆中ＦＶ水平并不平行，而与血小板中 ＦＶ活性高低有更密切的关系［１］。有关血小板中ＦＶ的测定，国内尚未见报道。我们采用发色底物法，对一个遗传性…     

抗活化的蛋白C是引起静脉血栓形成的一个重要原因

抗活化的蛋白Ｃ是引起静脉血栓形成的一个重要原因王钦红综述王鸿利邵慧珍审校近年研究指出，一种由凝血因子（ｆａｃｔｏｒⅤ，ＦⅤ）缺陷所致的蛋白Ｃ（ＰＣ）抗凝途径中抗活化蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）现象是迄今为止引起静脉血栓（ｖｅｎｏｕｓｔｈｒｏｍ－ｂｏｓｉｓ，ＶＴ...     

APC抵抗与静脉血栓形成

运用ＡＰＣ－ＡＰＴＴ试验发现了ＡＰＣ抵抗现象，正常ＦＶ可纠正ＡＰＣ抵抗。ＦＶ基因１６９１位Ｇ→Ａ错义突变致使其氨基酸序列上Ａｒｇ→Ｇｌｎ，是ＡＰＣ裂解位点消失从而引起ＡＰＣ抵抗的分子生物学基础，ＡＰＣ抵抗是迄今为止导致静脉血栓形成最重要的原因（４０％￣６０％），当伴有其它因素如蛋白Ｃ、蛋白Ｓ或抗凝血酶－Ⅲ缺陷或者口服避孕剂、妊娠等时，ＡＰＣ抵抗可显著提高静脉血栓形成的发生率。     

一例凝血因子Ⅷ B区错义突变导致重型血友病A

目的：检测一例重型血友病Ａ患者（ＳＨ９）的基因突变。方法：用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和ＤＮＡ测序检测因子Ⅷ基因突变。先用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ排除内含子２２倒位，然后应用ＰＣＲ对凝血因子Ⅷ基因进行扩增。扩增范围包括所有外显子及其侧翼内含子序列。结果：片段１４２在ＤＧＧＥ中泳动异常。ＤＮＡ测序证实Ｃ２５３５Ａ导致Ｂ区错义突变８２６Ａｓｐ（ＧＡＣ）→Ｇｌｕ（ＧＡＡ）。结论：该突变可能是导致重型血友病Ａ的原因，但有待进一步研究证实。     

上海地区深静脉血栓形成患者抗活化的蛋白C及FⅤLeiden突变的初步调查

应用抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）试验、多聚酶链反应－限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析及ＤＮＡ序列分析对上海地区深静脉血栓形成（ＤＶＴ）患者ＡＰＣＲ及ＦⅤＬｅｉｄｅｎ突变进行调查。正常人群正常ＡＰＣＲ敏感比值（ｎ－ＡＰＣ－ＳＲ）的５％百分位数为０．７５，在被调查的３１例ＤＶＴ患者中有５例患者的ｎ－ＡＰＣ－Ｒ低于此值，ＤＶＴ患者ＡＰＣＲ的发生率为１６％，且ＤＶＴ患者与正常人的ＡＰＣＲ发生率有显著差异（Ｐ＜０．０５）。用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检查了１４１例排除ＤＶＴ的个体和３５例ＤＶＴ患者的Ｌｅｉｄｅｎ突变情况，发现所有样本的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ均显示了同样的代表野生型基因型的电泳条带，未发现Ｌｅｉｄｅｎ型突变。ＡＰＣＲ试验阳性的２例ＤＶＴ患者之多聚酶链反应（ＰＣＲ）产物测序结果进一步证实了实验中ＰＣＲ反应和ＭｎｌＩ酶切反应的特异性。结果说明ＡＰＣＲ现象可能是中国人群ＤＶＴ发病的一个危险因素；但我们与西方调查者实验结果的差别，说明在不同种族中，ＤＶＴ的致病机制可能不同     

改良凝胶吸附法制备的凝血酶原复合物

采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ凝胶从人血浆中吸附制备经Ｓ／Ｄ病毒灭活处理后的ＰＣＣ制品，ＤＥＡＥ洗脱液经Ｓ／Ｄ处理（０．３％磷酸三丁脂和１％Ｔｗｅｎ８０，６～８ｈ，２４℃）后，使所加入具有感染剂量（＞１０６）的标志病毒ＶＳＶ、Ｓｉｎｄｂｉｓ、ＨＩＶ均被有效灭活；ＰＣＣ制品中Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子的比活性（Ｕ／ｍｇ）分别为０．７９９±０．３４９、０．３４３±０．２５２、０．７４７±０．３４８、０．５８０±０．１９９（ｎ＝７），均比传统ＰＣＣ提高１．５～２．５倍（其中ＦⅨ∶Ｃ的比活性提高有显著性，ｔ＝３．１０５，Ｐ＜０．０１），同时也优于国内同类制品（ｔ＝２．３６０，Ｐ＜０．０５），对其杂蛋白（ＡＴ－Ⅲ、Ｆｎ、ＰＫＡ、Ｐｌｇ、ⅧＲ∶Ａｇ抗Ａ、抗Ｂ凝集素）的分析也反映出ＰＣＣ纯度有所提高。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＩＥ、ＣＩＥ电泳图谱及ＨＰＬＣ层析图谱证实上述结果，ＰＣＣ中ＴＮＢＰ残留量≤１０μｇ／ｍｌ，Ｔｗｅｅｎ８０残留量≤１００μｇ／ｍｌ，均在安全范围内。     

新疆维吾尔族正常人群抗活化的蛋白C发生率的调查

新疆维吾尔族正常人群抗活化的蛋白Ｃ发生率的调查马艳张庆华近年来，人体血液抗凝系统中活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）抗凝血的作用愈未愈受到重视，Ｄａｈｌｂｃｋ等研究发现４０％～５０％的血栓形成家族中由于存在因子Ⅴ结构的缺陷导致抗ＡＰＣ现象（ＡＰＣＲ），易发生血栓...