多房棘球绦虫重组抗原研究

应用基因工程技术检测多房棘球绦虫诊断抗原已成为多房棘球蚴病(泡型包虫病)研 究的热点。本文综述了多房棘球绦虫和幼虫抗原基因的克隆、表达、测序,与其它蠕虫基因的比较 及重组抗原用于血清检测的效果和应用前景。     

多房棘球绦虫重组抗原研究

应用基因工程技术检测多房棘球绦虫诊断抗原已成为多房棘球蚴病（泡型包虫病）研究的热点，本综述了多房棘球绦虫和幼虫抗原基因的克隆，表达、测序，与其它蠕虫基因的比较及重组抗原用于血清检测的效果和应用前景。     

快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体;将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能。结果以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9%(52/56)。与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2%(8/87)和3.3%(1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0%(4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0%(174/187)。ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6%(54/56)和92%(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P>0.05)。kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98)。结论以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高。     

多房棘球绦虫原头节蛋白抗原的免疫诊断价值

泡球蚴病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病 ,病原为多房棘球绦虫幼虫。寻找早期诊断抗原 ,建立有效的早期诊断方法以便早期发现及早期治疗仍然是提高泡球蚴病患者存活率的重要手段。目前国外已有商品化的Ｅｍ2 ｐｌｕｓ ＥＬＩＳＡ试剂盒用于泡球蚴病的免疫诊断。该试剂盒对泡球蚴病有较高的敏感性 ,但与囊性包虫病和囊虫病均有较高的交叉反应 ,特异性较差[1 ] 。近年日本学者Ｉｔｏ等经免疫印迹试验提出Ｅｍ16 Ｅｍ18抗原对泡球蚴病具有很高的特异性和敏感性[2 ,3 ] 。但也有与此不同的研究报道[4,5 ] 。本文采用多房棘球绦虫原头节蛋白抗…     

超声在肝多房棘球蚴病诊疗中的应用进展

肝多房棘球蚴病因浸润性缓慢生长,感染者早期症状不明显,就诊时往往已为晚期,预后较差。因此,肝多房棘球蚴病早期诊断尤为重要。随着超声技术不断创新和发展,肝多房棘球蚴病诊断准确率不断提高,而且超声技术在治疗、评估疗效等方面也发挥了重要作用。本文主要就超声技术在肝多房棘球蚴病诊疗中的应用进展进行综述。     

电离辐射多房棘球蚴病理组织学观察

目的重离子对肿瘤放疗比常规放疗更具优势,因为重离子放疗具有极佳的生物效应和剂量一致性。多房棘球蚴病具有肿瘤特性,本研究主要目的是用重离子放疗作为多房棘球蚴病的一种非手术治疗方法。方法通过LD50来评价原头蚴的死亡情况,应用光镜和投射电镜研究多房棘球蚴经X射线和碳离子电离辐射照射后形态结构变化。结果电离辐射使多房棘球蚴细胞质减少,生发层细胞深入到角质层内的绒毛消失。细胞器混乱并聚集,线粒体、高尔基复合体等细胞器大量消失,生发层细胞内出现大液泡。与X线相比,碳离子辐射对多房棘球蚴的抑制作用更为明显。结论多房棘球蚴经电离辐射后细胞结构和超微结构发生巨大变化,提示电离辐射可抑制多房棘球蚴生长。碳离子电离辐射对多房棘球蚴的抑制作用比X线辐射照射更为明显。     

多房棘球蚴病诊断研究进展

多房棘球蚴病是一种危害非常严重的寄生虫病。早期、准确的诊断是保证及时治疗和控制该病发展的前提和依据。本文就多房棘球蚴病的影像学和免疫学诊断方法的研究进展和发展方向作一简要综述。     

多房棘球蚴病的浸润和转移机制研究进展

多房棘球蚴感染宿主肝脏后,可通过多种途径向肝周围或肝外组织浸润和转移,使病情恶化。通过对多房棘球蚴病浸润和转移机制的研究,寻找阻断其浸润和转移的方法,对多房棘球蚴病的治疗和预后具有重要的意义。本文就目前在多房棘球蚴病浸润和转移机制研究方面的概况作一综述。     

多房棘球蚴病特异性诊断抗原Em18的基因克隆、表达和血清学评价

目的　克隆从我国四川省分离的多房棘球绦虫Em18抗原基因片段,表达重组抗原,用于多房棘球蚴病(AE)的诊断,并用患者血清对其诊断价值进行评价。　方法　PCR扩增目的基因片段与质粒载体pET28a(+)连接构建表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株表达重组蛋白,用镍次氮基三乙酸琼脂糖树脂(NI NTAagarose)亲和层析纯化重组抗原,酶联免疫吸附测定(ELISA)评价重组抗原的血清学诊断效果。　结果　获得两个高效表达克隆ReEm181和ReEm182。其中ReEm181与预期序列一致,ReEm182为同一序列,但有27bp的核苷酸缺失。两个克隆表达的融合蛋白相对分子质量(Mr)分别为28000和26000。对101例AE、47例细粒棘球蚴病、30例囊尾蚴病、10例肝癌、9例血吸虫病和40名健康人共237份血清进行ELISA检测 ,结果显示,ReEm181和ReEm182重组抗原对AE血清诊断的敏感性为861%和901%、特异性为934%和941%、阳性预期值为906%和919%、阴性预期值为901%和928%、诊断效率分别为903%和924%;对58例AE患者肝脏病灶大小与重组抗原检测血清平均吸光度(A)的相关性比较分析结果表明,抗体反应水平在病程早期有较好的相关性。　结论　Em18重组抗原对AE具有特异性诊断价值     

肝多房棘球蚴病的综合治疗现状和进展

多房棘球蚴病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病。根治性手术切除是目前治疗肝多房棘球蚴病的首选方法，难以根治性切除的晚期肝多房棘球蚴病可行包括姑息性手术联合药物治疗、肝脏移植、单纯药物治疗、射频微波消融术等治疗手段。本文就肝多房棘球蚴病综合治疗现状和进展进行综述。     

细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性

目的 利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白（rAgB）,并分析其免疫反应性。 方法 将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a（+）中,转化大肠埃希菌BL21（DE3）菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱（GST-sepharose 4B）纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹（Western blotting）分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。 结果 PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量（Mr）为40 800,纯化蛋白含量为78.4%。Western blotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%（95/120）和51.1%（23/45）,但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2％（95/120）和81.0%（98/121）,均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103）和特异性（76.9%,30/39）。 结论 重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。     

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P0.05),C、D组间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。     

抗多房棘球绦虫原头节单克隆抗体的制备

ˎ̥,Verdana,Arial'; mso-hansi-font-family: 'ˎ̥,Verdana,Arial'; mso-bidi-font-family: 宋体">目的 制备抗泡球蚴组织单克隆抗体,并鉴定其特异性。 方法 运用泡球蚴组织粗抗原免疫小鼠制备免疫脾细胞,运用淋巴细胞杂交瘤技术将其与小鼠骨髓细胞SP2/0融合。采用ELISA和免疫组化方法筛选抗泡球蚴原头节单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测所获细胞株的染色体数目,采用ELISA和免疫组化法鉴定所获抗体的特异性。 结果 获得了一株能稳定分泌的抗泡球蚴原头节单克隆抗体的杂交瘤细胞株6G2A7F7。染色体数目为98条,为明显的融合细胞核型。所分泌的抗体McAb P325能与泡球蚴中的生发层和原头节特异结合,特别对原头节上的小钩和吸盘表现出很强的结合反应。但与棘球蚴（人源）和水泡带绦虫幼虫（细颈囊尾蚴）组织无特异性结合反应。 结论 制备的杂交瘤细胞能稳定分泌McAb P325,为泡球蚴的细胞分类、免疫组化和抗原研究提供工具和基础。     

猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的： 构建含猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与猪γ 干扰素（ Ｉ Ｆ Ｎ γ） 的融合表达载体。方法： 从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃ Ｃ１ 的质粒中, 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出含酶切位点及接头的ｃ Ｃ１ 和 Ｉ Ｆ Ｎ γｃ Ｄ Ｎ Ａ, 两ｃ Ｄ Ｎ Ａ 经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌 Ｘ Ｌ Ｂｌｕｅ。结果： 经酶切分析, 表明重组载体中含１５ｋｂ 插入片段。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示一５２ ｋ Ｄａ 的诱导产物。结论： 猪 Ｉ Ｆ Ｎ γ和猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合ｃ Ｄ Ｎ Ａ 在大肠杆菌中获得表达。     

血吸虫分子诊断抗原的研究

血吸虫病仍然是我国严重的公共卫生问题之一。诊断抗原一直是血吸虫病诊断研究的热点。随着分子生物学技术的发展,血吸虫病的诊断抗原已由最初采用的粗抗原发展为组分抗原以及由基因重组的方法生产合成的重组抗原。该文综述了近年来血吸虫分子诊断抗原的研究进展。     

旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究

目的 探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用。 方法 应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA（Ts21-LISA）与肌幼虫ES抗原ELISA（ES-LISA）对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫（T1、T2、T3、T4和T7）感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平。将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠（20 μg/只,免疫3次,每次间隔10 d）,末次免疫后10 d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5 d和42 d 后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率。 结果 Ts21-LISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%（18/19）、15.8%（3/19）、9.1%（1/11）和7.7%（1/13）,与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义（χ²=0,P＞0.05;χ²=0.358,P＞0.05）。Ts21重组蛋白与ES抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义（χ²=0.104,P＞0.05）,与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原（χ²=17.069,P＜0.05）。小鼠感染300条旋毛虫后4 周,应用Ts21-LISA检测的血清抗体阳性率为100%（10/10）;小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%（10/10）。Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5 d和42 d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%。 结论 Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应。     

细粒棘球绦虫FABP与Eg95融合基因的表达与抗原性鉴定

目的构建细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白(FABP)和Eg95两个保护性抗原基因的融合基因,并研究其重组蛋白的免疫学特性。方法以细粒棘球绦虫青海绵羊株保护基因FABP和Eg95的cDNA为模板,通过编码4个甘氨酸残基的连接序列,用非对称聚合酶链反应扩增融合基因FABP·Eg95,克隆至表达载体pET28a(+)中,在大肠埃希菌BL21(DB3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。通过Ni-IDA亲和层析获得高纯度目的蛋白,利用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的免疫反应性。结果获得的融合基因FABP·Eg95长约795bp,双酶切和测序鉴定结果均显示pET-28a(+)-FABP-Eg95重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组质粒pET-28a(+)-FABP-Eg95在大肠埃希菌BL21(DB3)中获得高效表达,表达相对分子质量(Mr)约为31000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,经亲和层析获得目的蛋白。Western blotting分析结果显示,重组蛋白与细粒棘球蚴病患者血清有良好的免疫反应性,而不与健康人血清和血吸虫病患者血清反应。结论 FABP·Eg95融合基因构建成功,纯化的重组蛋白具有一定的抗原性。     

甘南藏族自治州动物棘球绦虫感染状况调查

目的：了解甘南藏族自治州动物棘球绦虫及棘球蚴的感染状况,为该地区制定防制策略提供依据。方法：2004年8月耀2007年9月在甘南藏族自治州选择玛曲县和碌曲县的8乡21个自然村为调查点,采用鼠夹、粘鼠板捕捉啮齿类动物进行剖检,收集当地屠宰场绵羊、牦牛的肝、肺和心脏等剖检,进行棘球蚴病原学和病理学检查。对家犬、牧羊犬采用15%槟榔碱溶液驱虫,随机捕杀无主野犬剖检十二指肠成虫感染情况。结果：共捕获啮齿类动物331只,经剖检进行病理学检查和鉴定,4只感染多房棘球蚴,即达乌尔鼠兔（Ochotona daurica）和中华鼢鼠（Myospalax fontanieri）,感染率分别为1.2%（1/87）和2.3%（3/132）;6只喜马拉雅旱獭（Marmota himalayana）、34只西藏鼠兔（Ochotona tibetana）和72只小家鼠（Mus musculus）未感染棘球蚴。剖检绵羊1 021头,其中细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率分别为11.1% （113/1 021）和0.3% （3/1 021）。剖检牦牛634头,其细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率为19.9% （126/634）和0.3%（2/634）。犬的细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的感染率分别为23.0%（17/74）和5.4%（4/74）。牧羊犬、家犬棘球绦虫的检出率为24.6%（15/61）,无主野犬检出率为6/13,未发现两型绦虫的混合感染。结论：甘南藏族自治州动物以细粒棘球绦虫感染为主,有少量多房棘球绦虫感染。     

日本血吸虫不同阶段抗原免疫抑制过敏性哮喘小鼠气道炎症的实验观察

目的 观察日本血吸虫不同生活史阶段抗原对过敏性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 雌性BALB/c小鼠48只,随机均分8组,A组为健康对照组;B组为哮喘模型组,以鸡卵白蛋白（OVA）抗原腹腔注射致敏,OVA滴鼻诱发哮喘;C、D和E组小鼠分别用可溶性虫卵抗原（SEA）、可溶性成虫抗原（SWA）和童虫抗原（SSA）经腹部皮下免疫,共4次,每次间隔1周,末次免疫后1周再按B组方法诱发哮喘;F、G和H组分别用SEA、SWA和SSA免疫接种小鼠（免疫方法及剂量分别同C、D、E组）,末次免疫后1周用等量生理盐水代替OVA处理小鼠,不诱发哮喘。诱发哮喘后48 h剖杀各组小鼠,观察各组小鼠肺组织的病理变化和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的相关细胞成分及细胞因子的变化。 结果 A组小鼠气道肺组织无明显炎症变化;B组小鼠气道肺组织可见明显的炎性细胞,尤其是嗜酸粒细胞的浸润;C、D和E组小鼠气道肺组织炎症明显轻于B组小鼠。B组小鼠BALF中白细胞总数［（98.4±16.1）×10⁴/ml］、嗜酸粒细胞百分数[（17.6±4.3）×10⁴/ml]和白细胞介素-5(IL-5)水平［（197.9±36.5）pg/ml］均明显高于A组［分别为（8.2±1.1）×10⁴/ml、（0.02±0.01）×10⁴/ml和（12.3±7.4）pg/ml］,而IL-10和γ干扰素(IFN-γ)水平明显低于A组。C、D和E组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸粒细胞百分数和IL-5水平均明显低于B组,而IL-10,IFN-γ水平则明显高于B组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 日本血吸虫不同抗原免疫后能有效调节过敏性哮喘小鼠的细胞因子平衡,同时对哮喘小鼠嗜酸粒细胞在肺组织中的浸润及肺组织炎症都有一定的抑制作用。     

旋毛虫病的诊断与治疗

旋毛虫病无特异性的症状和体征, 临床诊断较困难, 所以流行病学资料非常重要, 患者常有食生或半生肉类史, 在该病暴发时期, 同批患者往往能追溯到聚餐史。 在肠道期可出现腹痛、 腹泻伴全身不适等症状。发热、 眼睑或面部水肿、 肌肉疼痛是急性期的主要表现, 重症患者可并发心肌炎、 肺炎及脑炎等。多数患者感染后2～5周外周血中嗜酸粒细胞增多。应用肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原和合成的泰威糖(tyvelose, 3,6-双脱氧己糖)抗原ELISA检测旋毛虫抗体IgG, 具有较高的特异性和敏感性, 是初步诊断旋毛虫感染的首选血清学方法, ELISA阳性者需经蛋白质印迹分析确认。旋毛虫病的确诊主要依靠肌肉活检发现旋毛虫幼虫。阿苯达唑是治疗旋毛虫病的首选药物, 剂量为20～30 mg/(kg·d), 分2次口服, 疗程5～7 d。糖皮质激素可延长旋毛虫感染的肠道期和增加肌肉虫荷, 一般仅用于重症患者且需与阿苯达唑联合应用。